Setor 02. Neurofarmacologia 02.001 EFEITO DA MICROINJEÇÃO NO NÚCLEO MEDIANO DA RAFE DE LIGANTES DE RECEPTORES 5-HT1A E DA 1,3,7-TRIHIDROXI-2-(3-METILBUT-2-ENIL)-XANTONA OBTIDA DA KIELMEYERA CORIACEA EM RATOS SUBMETIDOS A TESTES COMPORTAMENTAIS Sela, V. R.1; Obici, S.1; Hattanda, I.1; Villa Nova, M.1; Ofuchi, A. S.1; Cortez, D. A. G.1; Audi, E. A.1 - 1UEM - Farmácia e Farmacologia Introdução: Neurônios serotoninérgicos que se originam do núcleo mediano da rafe (NMR) estão envolvidos na etiologia e tratamento da depressão (DEAKIN. J. Psychopharmacol.; 5: 305, 1991). Auto-receptores inibitórios 5-HT1A localizados no NMR, regulam a taxa de disparos neuronais, controlando a atividade serotoninérgica cerebral. Resultados anteriores obtidos em nosso laboratório mostraram que a administração crônica do extrato hidroetanólico (EH) e da fração diclorometano (DcM) de caule de Kilmeyera coriacea reduzem o tempo de imobilidade (TI) no teste do nado forçado (TNF) e interagem com ligantes de receptores 5-HT1A, sugerindo envolvimento da neurotransmissão serotoninérgica neste efeito (GOULART. Pharmac. Biol.; 45: 1, 2007; MARTINS. Indian J. Pharmacol.; 38: 427, 2006). Estudos fitoquímicos revelaram a presença da 1,3,7-trihidroxi-2-(3-metilbut-2-enil)-xantona (XT) nos EH e DcM de caule de K. coriacea, sugerindo que esta possa ser a responsável pelo efeito observado no TNF (CORTEZ. Phytochem. ; 47: 1367, 1998). O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da microinjeção intra-NMR de ligantes 5-HT1A (8-OHDPAT e Way100635) e da XT, bem como a interação da XT com estes ligantes, em ratos submetidos ao TNF e teste do campo aberto (TCA). Métodos: Ratos Wistar machos (55 dias), tratados intra-NMR com 8-OHDPAT (0,2; 0,4; 0,6; 1,2; 2,5; 5,0µg), Way100635 (0,1; 0,2; 0,4; 1,2; 2,5; 5,0µg) ou XT (0,1; 0,2; 0,3ng) foram submetidos ao TNF e ao TCA (ANOVA de uma via seguida do teste de Dunnet). Também foram realizados os tratamentos associados de Way100635 (2,5 ou 5,0µg) e 8-OHDPAT (5,0 µg), de Way100635 (2,5 ou 5,0µg) e XT (0,2 ng) e de 8-OHDPAT (5,0µg) e XT (0,3ng), em ratos submetidos aos mesmos testes comportamentais (ANOVA de duas vias seguida do teste de Tukey). Resultados: O 8-OHDPAT (5,0µg) aumentou [F(6,69)= 3,721; p<0,01], enquanto o Way100635 (2,5µg) [F(6,63)= 3,910; p<0,01] e XT (0,3ng) [F(3,38)= 9,463; p<0,001] reduziram o TI no TNF, quando comparados ao controle (p<0,05). Houve interação significativa entre o Way100635 (5,0µg) e 8-OHDPAT (5,0µg) [F(1,41)= 6,041; p<0,05] e entre o Way100635 (5,0µg) e a XT (0,2ng) [F(1,35)= 5,759; p<0,05] onde, o Way100635 (5,0µg) reverteu o aumento no TI produzido pelo 8-OHDPAT (5,0µg) (p<0,05), e facilitou o aparecimento do efeito da dose inefetiva (0,2ng) da XT (p<0,05). Não houve alteração na atividade locomotora no TCA para nenhum dos tratamentos realizados. Discussão: O TNF foi sensível em detectar alterações no TI para a microinjeção intra-NMR dos ligantes 5-HT1A e da XT. O Way100635 reverteu o aumento no TI produzido pelo 8-OHDPAT, mostrando a participação de receptores 5-HT1A. A XT reduziu o TI de forma semelhante ao Way100635, e ainda, houve interação entre eles, mostrando envolvimento dos neurônios serotoninérgicos do NMR, através dos receptores 5-HT1A, no efeito da XT, e sugerindo que poderá ser um protótipo de droga a ser utilizada em tratamentos de depressão. Capes/Fundação Araucária

02.002 CHANGES IN NOREPINEPHRINE CONCENTRATION IN ADRENAL GLAND OF THE RATS SUBMITTED TO ACUTE SWIMMING STRESS Sanchez, A.1; Pereira, O. C. M.2; Menezes, M. L.3 - 1UFMS - Três Lagoas - Enfermagem e Biotecnologia aplicada à Saúde; 2UNESP - IB - Botucatu - Farmacologia; 3UNESP - IQ - Araraquara - Química Analítica Introduction: Catecholamines act as neurotransmitters and hormones. Studies conducted to understand the synthesis and metabolism of these monoamines during stress have been the main concern of many authors. This work proposes to investigate the time course of changes in norepinephrine concentration in adrenal gland obtained from rats submitted to acute swimming stress. Materials and methods: Adult male Wistar rats (about 3 months old, average weight 250–300 g) were divided into five experimental groups. The animals were submitted to swimming stress during 5, 15, 30, and 50 min, respectively (1). Immediately after the ending of the swimming sessions the animals were given an i.p. injection of sodium pentobarbital (50 mg kg−1). The adrenal gland of control and stressed rats were removed, separated from the surround tissue and individually set up in perchloric acid (100 mg tissue/10 ml perchloric). Determination of adrenal gland catecholamines concentrations was performed by high-performance liquid chromatography (2, 3).The means ± S.E.M. of norepinephrine concentrations were calculated and compared previously by analysis of variance. Tukey’s Kramer test was made for further comparisons between pairs of means. Results: The norepinephrine concentrations in adrenal gland increased significantly after the immobilization session in all stressed groups as compared to control group (Table 1). Table 1- Norepinephrine concentration (pg/mg) in adrenal gland from rats submitted to acute swimming stress during 5, 15, 30, and 50 minutes.

Experimental group Norepinephrine (106 pg/mg)

Control 0,50±0,05 Swimming stress 5 min 0,98±0,06* Swimming stress 15 min 0,83±0,07* Swimming stress 30 min 1,32±0,14*** Swimming stress 50 min 1,00±0,18* Values expressed as mean ± S.E.M. of five animals per group (Tukey-Kramer). P < 0.05 in relation to the control group. Discussion: We suggested that the swimming stress provoke increase in the biosynthesis of catecholamines in the adrenal gland from rats. In conclusion, our studies suggest an effective participation of the adrenal glands to maintain the homeostasis of organism to the stressful conditions. References: 1. Sanchez, A., Pharmacological Research, v. 46, p.55, 2002, 2. Sanchez, A., Salusvita, v. 20, p. 73, 2001. 3. Bergquist, J., J. Neurosci Meth, v. 113, p. 1, 2002. Supported by: FAPESP

02.003 BED NUCLEUS OF THE STRIA TERMINALIS MODULATES THE CARDIOVASCULAR RESPONSES TO ACUTE RESTRAINT STRESS. Crestani, C. C.1; Alves, F. H. F.1; Tavares, R. F.1; Correa, F. M. A.1 - 1FMRP - USP - Farmacologia Introduction: The baroreflex has been reported to be inhibited during different stressfull stimuli such as restraint, thus allowing concomitant blood pressure and heart rate increases to occur. Previous studies from our laboratory concluded that noradrenergic and glutamatergic neurotransmission in the bed nucleus of the stria terminalis (BST) have tonic inhibitory influence on baroreflex. Consequently, the BST could be involved in the modulation of cardiovascular responses to stress. In the present study we evaluated the involvement of BST synapses in the cardiovascular responses observed during acute restraint stress. Methods: Male Wistar rats had guide cannulas bilaterally implanted in the BST for drugs injection. Polyethylene catheter was implanted in the femoral artery for mean arterial pressure (MAP) and heart rate (HR) recording using a computerized acquisition system. The restraint stress was realized putting the animals in a small plastic cylindrical restraining tube (diameter= 6.5 cm and length=15 cm) during 60 min. Acute and reversible BST synapses ablation was accomplished by local injection of cobalt (as CoCl2) as calcium channel inhibitor, 10 min before the animals were submitted to acute restraint. Results: Acute restraint (n=6) caused significant increases in MAP (before restraint: 92±4 and restraint: 107±6 mmHg, t=3, p<0.05) and HR (before restraint: 345±11 and restraint: 410±12 bpm, t=5, p<0.005). Administration of vehicle in the BST did not affect MAP (∆ MAP: 15±2 vs 16±3 mmHg, t=0.2, p>0.05) and HR (∆HR: 72±8 vs 69±6 bpm, t=0.6, p>0.05) to acute restraint. However, microinjection of CoCl2 in the BST significantly potentialized the tachycardiac response observed during acute restraint (∆ HR: 64±4 vs 144±6 bpm, t=12, p<0.0001), but did not affect the pressor response (∆ MAP: 16±3 vs 18±3 mmHg, t=0.1, p>0.05). Discussion: The present results suggest that synapses in the BST modulate the cardiac response to acute restraint without affecting the pressor response. Further experiments need be realized to clarify which BST neurotransmissor is involved in the modulation of the cardiac response to acute restraint. Supported by: FAPESP, CNPq and FAEPA.

02.004 PLASMATIC NOREPINEPHRINE IN ACUTE SWIMMING STRESS Sanchez, A.1; Pereira, O. C. M.2; Casarini, D. E.3; Menezes, M. L.4 - 1UFMS - Três Lagoas - Enfermagem e Biotecnologia aplicada à Saúde; 2UNESP - IB - Botucatu - Farmacologia; 3UNIFESP - EPM - Medicina; 4UNESP - IQ - Araraquara - Química Analítica Introduction: Catecholamines act as neurotransmitters and hormones. Studies conducted to understand the synthesis and metabolism of these monoamines during stress have been the main concern of many authors. On the basis of these considerations, the aim of this study was to investigate the time course of changes norepinephrine concentration in plasma obtained from rats submitted to different times of exposure to acute swimming stress. Materials and methods: Adult male Wistar rats (about 3 months old, average weight 250–300 g) were divided into five experimental groups. The animals were submitted to swimming stress during 5, 15, 30, and 50 min, respectively (1). Immediately after the ending of the swimming sessions the animals were killed by decapitation and the trunk blood collected. Blood samples (5.0-6.0 ml) were collected into heparinized vials. The blood was centrifuged (2,000 rpm for 20 min at 2°C). The supernatant was stored at -190°C for the catecholamine measurements. Determination of plasma norepinephrine concentration was performed by high performance chromatography coupled with electrochemical detector as described previously (2). Samples were measured always in duplicate. Data are reported as pg.ml-1 plasma. The means ± S.E.M. of norepinephrine concentrations were calculated and compared previously by analysis of variance. Tukey’s Kramer test was made for further comparisons between pairs of means. Results: The norepinephrine concentrations in plasma decreased significantly after the swimming session in all stressed groups as compared to control group (Table 1). Table 1- Norepinephrine concentration (pg.ml-1) in plasma from rats submitted to acute swimming stress during 5, 15, 30, and 50 minutes. Experimental group NorepinephrineControl 3156,96±261,88 swimming stress 5 min 1398,26±130,81*** swimming stress 15 min 586,73±57,52*** swimming stress 30 min 1420,95±121,88*** swimming stress 50 min 517,19±31,14*** Values expressed as mean + S.E.M. of 5 animals/group. ANOVA (Tukey-Kramer). Discussion: The pharmacological results support the hypothesis that the plasmatic norepinephrine plays a physiological role in responses to stressful situation. Several lines of evidence also indicate increase in catecholamine levels of biosynthesis in the adrenal medulla of laboratory rats following sessions of stress (3). These alterations induce to the adaptation to stress situations and a mechanism possible involved in this phenomenon could be the increase of the catecholamines metabolism in plasma during stress. References: 1. Sanchez, A., Pharmacological Research, v. 46, p.55, 2002, 2. Naffah-Mazzacoratti M.G., Arquivos Brasileiros de Endocrinologia e metabologia. v. 36, p. 119, 1992, 3. Sanchez, A., Pharmacological Research, v. 48, p.607, 2003. Supported by: Fapesp

02.005 EFFECT OF (-)-MENTHOL ON FORCED SWIMMING TEST INDUCED IMMOBILITY IN MICE AND ITS INTERACTION WITH SCH23390 Vasconcelos, P. F.1; Moura, B. A.1; Silva, M. I. G.1; Neto, M. R. A.1; Falcão do Amaral, J.1; De Sousa, D. P.2; Vasconcelos, S. M. M.1; Sousa, F. C. F.1 - 1UFC - Fisiologia e Farmacologia; 2UFPB - LTF (-)-Menthol is a volatile compund present in the essential oils of various mint especies, as Mentha piperita and Mentha arvensis. Most (-)-menthol is obtained by freezing peppermint and cornmint oils, but it is also produced synthetically. (-)-Menthol is a cyclic terpene alcohol with three asymmetric carbon atoms. Among the optical isomers, (-)-menthol is the one that occurs most widely in nature and it is endowed with the peculiar property to be a fragrance and flavour compound. The aim of the present study is to evaluate antidepressant-like effects of (-)-menthol in forced swimming test, and to investigate whether antidepressant-like effects of (-)-menthol involves dopaminergic receptors (D1-like) . The animals (male Swiss mice 25-30g) were divided in six groups: Control (0.2% Tween 80 in distilled water ), menthol 25 and 50mg/Kg, SCH23390 (15μg/Kg), a dopaminergic antagonist (D1-like), SCH23390 + menthol 50 and imipramine 10 mg/Kg. Animals were treated in accordance with the current law and the NIH Guide for Care and Use of Laboratory Animals. Menthol was emulsified with 0.2% Tween 80 and dissolved in distilled water, SCH23390 was dissolved in distilled water. All drugs were administered intraperitoneally 30 minutes before the experiment, in SCH23390 + menthol 50 group, SCH23390 was administered 30 minutes before menthol 50. Results showed that (-)-menthol reduced significantly the immobility time, in seconds (sec), as compared to control (control: 86.56±6.74sec; menthol 25: 69.75±4.37sec, menthol 50: 35.75±3.70sec; p>0.01), SCH23390 was not able to revert the effect of menthol 50 (SCH23390: 109.20±11.06sec; SCH23390 + menthol 50: 15.56±5.90sec). Imipramine, a tricyclic antidepressant, reduced significantly the immobility time as compared to control (IMI 10: 31.00±4.76sec). Results showed that the antidepressive-like activitie of (-)-menthol probably is not linked to D1 dopaminergic receptors. Supported by: Capes e CNPq

02.006 ETANOL E ESTRESSE: ENVOLVIMENTO DA ENZIMA ÓXIDO NÍTRICO SINTASE NEURONAL (NNOS) Rocha, J. B. S.1; Carrara-Nascimento, P. F.1; Soares, S. L.1; Rueda, A. V. L.1; Munhoz, C. D.1; Scavone, C.1; Camarini, R.1 - 1ICB - USP - Farmacologia INTRODUÇÃO: A sensibilização comportamental é usada como ferramenta para o estudo de dependência de drogas de abuso. O consumo de drogas e a exposição a estresse são duas condições interligadas. Trabalhos confirmam que o óxido nítrico (NO) participa no controle de diferentes processos neurosecretórios, especialmente do sistema neurosecretório do hormônio regulador de corticotropina (CRH). O objetivo deste trabalho foi investigar alterações da atividade da enzima nNOS produzidas por etanol e estresse imprevisível em camundongos adultos. MÉTODOS: Foram usados 24 camundongos Swiss machos, divididos nos grupos: controle (C; N=6), salina (S; N=6), etanol (ET; N=6), estresse (ECI; N=6). Durante dez dias, os animais dos grupos S e ET receberam uma injeção, i.p., de salina 0,9% ou etanol 1,8 g/kg, respectivamente. No mesmo período, o grupo ECI foi submetido ao estresse crônico imprevisível, enquanto o grupo C permaneceu na caixa-moradia. O ECI consistiu em: privação de água e comida, isolamento, imobilização, natação, permanência em serragem úmida. No 11o. dia, todos os animais receberam uma injeção, i.p., de etanol (1,8 g/kg) e a atividade locomotora foi quantificada, prontamente após a injeção. Os animais foram sacrificados 3 hs após a injeção e o encéfalo dissecado em córtex frontal e hipocampo para análise da atividade da enzima nNOS. RESULTADOS: Os animais tratados com etanol apresentaram maior atividade da nNOS no córtex frontal (21,03±2,11) do que o grupo S (15,42±0,23) [F(3,10)=4,66; p < 0,05]. Já no hipocampo, os animais tratados com etanol repetido apresentaram menor atividade da nNOS (24,2±1,24) do que o grupo C (33,29±0,12) e o grupo ECI (33,8±0,7) [F(3,10)=7,58; p < 0,01]. DISCUSSÃO: O etanol é um antagonista de receptores NMDA. A diminuição da nNOS no hipocampo em animais tratados repetidamente com etanol, sugere que o antagonismo do etanol sobre receptores NMDA pode induzir uma subseqüente diminuição de NO. Por outro lado, o etanol repetido aumentou o efeito da nNOS no córtex frontal, indicando que os efeitos do etanol sobre a atividade da nNOS dependem da região encefálica estudada. Dessa forma, os dados sugerem que alterações da atividade enzimática da nNOS podem estar relacionadas às alterações intracelulares induzidas pelo etanol. Apoio Financeiro: FAPESP

02.007 USO DE CONTRACEPTIVO INJETÁVEL E ESTRESSE CRÔNICO EM RATAS: SOBRE PARÂMETROS BIOQUÍMICOS Cirilo, D. M.1; Barros, W. M.1; Semenoff, A. S.1; Buzelle, S. L.1; Semenoff, T. D. V.1; Ribeiro, R. V.2 - 1UNIVAG - GPA de Ciências da Saúde; 2UFMT - Ciências Médicas Introdução: O estresse é a resposta que o organismo apresenta quando submetido a estímulos que alteram sua homeostase. Experimentos têm evidenciado suas respostas frente a parâmetros bioquímicos, pois este reduz a sensibilidade das gônadas ao hormônio LH.Objetivos: Verificar o uso de contraceptivo injetável e estresse crônico em ratas da linhagem Lewis, sobre parâmetros bioquímicos. Método: Foram administradas dose única 0,1 ml/100 g intramuscular de Perlutam (acetofenido de algestona e enantato de estradiol) em Rattus novergicus da linhagem Lewis. Os animais foram divididos em quatro grupos: G-1 (controle), G-2 (estresse), G-3 (contraceptivo) e G-4 (contraceptivo mais estresse). Os G-2 e G-4 foram submetidos á estresse físico por contenção em dias alternados às temperaturas 7°c e/ou 25°c por 4 horas/dia durante 60 dias. Após esse período foi feita a coleta do plasma e submetidos a dosagens bioquímicas. Resultados: O teste de ANOVA (p≤0,05) seguido de Bonferroni mostrou diferença estatística nos parâmetros analisados: creatinina (G-1– 0,50±0,00a; G-4-0,48±0,03b; G-3–0,48±0,03a; G-2–0,48±0,03a), Uréia (G-1-16,22±1,16a; G-4–24,95±2,38b; G-3–21,87±2,06c; G-2– 20,13±1,61c), ALT (G-1–50,63±5,14a; G-4– 87,95±37,15b; G-3–66,42±11,44ab; G-2–57,66±15,77a), AST (G-1–160,20±76,42ab; G-4– 197,92±82,04B; G-3–128,94±20,36ab; G-2–108,03±31,72a), Ácido Úrico (G-1–0,92±0,39a; G-4–1,13±0,63a; G-3–0,81±0,33a; G-2–0,60±0,15a). Os resultados obtidos nas variáveis bioquímicas, creatinina e o ácido úrico não mostraram diferenças estatísticas entre os grupos analisados. Nos grupos G-3 e G-2 a dosagem de uréia demonstrou diferença estatísticamente significante em relação ao G-1 e G-4. As dosagens sorológicas de ALT e AST evidenciam significância estatística apenas no G-4 em relação aos demais grupos. Conclusões: Os resultados demonstram evidências de lesões hepáticas no grupo G-4, portanto presenças de relativa toxicidade, porém novos estudos devem ser realizados para ratificar esses dados. Apoio Financeiro: UNIVAG - CENTRO UNIVERSITÁRIO e FAPEMAT

02.008 THE INVOLVIMENT OF THE LATERAL SEPTAL AREA IN THE MODULATION OF CARDIOVASCULAR RESPONSES TO RESTRAINT STRESS. Reis, D. G.1; Tavares, R. F.1; Correa, F. M. A.1 - 1FMRP - USP - Farmacologia Objectives: It has been described in the literature that the Lateral Septal Area (LSA) modulates the cardiovascular system. Acute restraint is an unavoidable stress condition widely used to evoke marked and sustained cardiovascular changes, which are characterized by elevated blood pressure (BP) and intense heart rate (HR) increase. Restraint stress (RS) causes intense c-fos expression in the LSA. However the role of the LSA in the cardiovascular response to RS has never been tested. Our objective was to verify the LSA role in the modulation of the cardiovascular response to RS through microinjection of selective synapse blocker CoCl2 (1mM/100nL) in the LSA. Methods and Results: Male Wistar rats (250g) had guide cannulas bilaterally implanted in the LSA for drugs injection. After two days of recovery, a polyethylene catheter was implanted into the femoral artery for mean arterial pressure (MAP) and HR recording using a computerized acquisition system. Two experimental groups were used: 1) Animals received bilateral CoCl2 microinjections, n=6). 2) Control animals received artificial cerebral spinal fluid microinjections (n=6). Microinjection of CoCl2 reduced the pressor (Two-way ANOVA, ΔPAM F= 11.08) and tachycardiac responses (Two-way ANOVA, ΔHR F= 18.71) when compared to control animals. Conclusion: The present results suggest that the cardiovascular response to RS is mediated by synapses located in the LSA. Supported by: CAPES

02.009 ROLE OF SCH23390 ON ANTIDEPRESSIVE-LIKE EFFECT OF DEHYDRODIEUGENOL (DDE) IN THE FORCED SWIMMING TEST INDUCED IMMOBILITY IN MICE Vasconcelos, P. F.1; Moura, B. A.1; Silva, M. I. G.1; Neto, M. R. A.1; Falcão do Amaral, J.1; Vasconcelos, S. M. M.1; Barbosa-Filho, J. M.2; Sousa, F. C. F.1 - 1UFC - Fisiologia e Farmacologia; 2UFPB - Tecnologia Farmacêutica Dehydrodieugenol (DDE) known also as bis-eugenol is an eugenol dimer present in low concentrations in some plants like Syzygium aromaticum. DDE could be obtained by an oxidation reaction producing an ortho dimer. It was less cytotoxic, and had a significantly higher antioxidant activity than eugenol. It also have antioxidant, antimutagenic and antiinflamatory activitie. The aim of the present study is to evaluate antidepressant-like effects of DDE in forced swimming test, and to investigate whether antidepressant-like effects involves dopaminergic receptors (D1-like) . The animals (male Swiss mice 25-30g) were divided in six groups: Control (0.2% Tween 80 in distilled water), DDE 25 and 50mg/Kg, SCH23390 (15μg/Kg) a dopaminergic antagonist (D1-like), SCH23390 + DDE 50 and Imipramine 10 mg/Kg (IMI). Animals were treated in accordance with the current law and the NIH Guide for Care and Use of Laboratory Animals. DDE was emulsified with 0.2% Tween 80 and dissolved in distilled water and SCH23390 was dissolved only in distilled water. All drugs were administered intraperitoneally 30 minutes before the experiment. In the case of association of SCH23390 + DDE 50 group, SCH23390 was administered 30 minutes before DDE 50. Results showed that DDE reduced significantly the immobility time, in seconds, as compared to control (Control: 85.60±4.17sec; DDE 25: 53.25±5.36sec, DDE 50: 50.54±5.63sec; p>0.001), SCH23390 was able to revert significantly the effect of DDE 50 (SCH23390: 115.0±10.50sec; SCH23390 + DDE 50: 93.29±7.14sec; p>0.001). Imipramine, a tricyclic antidepressant, reduced significantly the immobility time as compared to control (IMI 10: 31.00±4.76sec). Results showed that the antidepressive-like activity of DDE is probably linked to D1 receptors. Supported by: Capes e CNPq

02.010 ENVIRONMENTAL ENRICHMENT REVERSES COGNITIVE DEFICITS AND INCREASES EMOCIONAL RESPONSES FOLLOWING INTRANASAL ADMINISTRATION OF MPTP IN RATS Bagestan, M.1; Rial, D.1; Tadaiesky, M. T.1; Pandolfo, P.1; Takahashi, R.1; Prediger, R. D. S.1 - 1UFSC - Farmacologia Introduction: The majority of research performed with animal models of Parkinson’s disease (PD) has focused upon their effects on the nigrostriatal dopaminergic system and motor behavior. Since PD is associated with alterations in a variety of functions including depression, memory deficits and olfactory dysfunction, it seems important to evaluate whether the proposed animal models of PD alter any of these functions. We have recently demonstrated that rats treated with intranasal (i.n.) infusion of MPTP suffer from progressive signs of PD that are correlated with time-dependent degeneration in dopaminergic neurons. Indeed, there is evidence that environmental factors can alter the prevalence and outcome of neurodegenerative diseases. In the present study, we investigated whether the exposure of rats to an environmental enrichment (EE) can counteract the effects of i.n. MPTP. Methods: Male Wistar rats were reared in an enriched environment (EE) or in a standard environment (SE) from the post-natal day 30 until the age of 2 months. The EE cages consisted of a running wheel, toys, ladders, tunnels, nesting material and a system of interchangeable tunnels. Then, each group was divided in two, and each subgroup received MPTP (0.1 mg/nostril) or control solution (i.n.). The rats were then returned to their respective home cages and 2 months later were submitted to a battery of behavioral tests (open field, elevated plus-maze, black/white box, forced swim test and the step-down inhibitory avoidance task). Results: Neither MPTP administration nor EE exposure interfere with the locomotor performance of rats as evaluated in the open field. Increased anxiety-like responses associated to MPTP infusion and EE exposure were observed in both the elevated plus-maze [%time in open arms: SE: Control:10.2+1.9 vs. MPTP:3.5+2.1; EE: Control:5.9+2.1 vs MPTP:2.7+1.9], and in the black/white box [time in white compartment (s): SE: Control:23,0+7,5 vs MPTP:18,8+6,5; EE: Control:7,1+ 2,2 vs MPTP:8,6+3,2]. Similar results were obtained with the depression-like responses evaluated in the forced swim test [Immobility time (s): SE: Control:11,2+2,9 vs MPTP:53,3+10; EE: Control:40,1+7,9 vs MPTP:68,6+9,7]. In the step-down, the EE reversed long-term memory deficits caused by MPTP [latency(s):SE: Control:101,2+30,9; vs MPTP:35,8+24,7; EE: Control:113+31,7 vs MPTP:163,5+16,5]. Discussion: The present results reinforce the notion that environmental factors may counteract cognitive dysfunction associated to PD. Interestingly, the general increase in emotional responses verified in both MPTP-treated and control rats exposed to the EE suggests that excessive enrichment-related stimulations can result in an “inverted U dose response curve”. Supported by: CAPES e CNPq

02.011 AVALIAÇÃO DOS EFEITOS DO USO DE CONTRACEPTIVO INJETÁVEL E ESTRESSE CRÔNICO EM RATAS: SOBRE O SISTEMA NERVOSO CENTRAL (SNC). Cirilo, D. M.1; Barros, W. M.2; Semenoff, A. S.1; Ribeiro, R. V.3; Buzelle, S. L.1; Semenoff, T. D. V.1 - 1UNIVAG - GPA de Ciências da Saúde; 2UNIVAG - Farmácia; 3UFMT - Ciências Médicas Introdução: O termo estresse mostra o estado gerado pela percepção pela alteração de estímulos que provocam processo de adaptação na secreção de neurotransmissores produzindo diversas manifestações sistêmicas, com distúrbios fisiológico e psicológico. O termo estressor excitação emocional e, ao perturbarem a homeostasia, disparam um por sua vez define o evento ou estímulo que provoca ou conduz ao estresse. Objetivos: Verificar o efeitos do uso de contraceptivel injetável sobre o LCE (labirinto em cruz elevado) e CA (campo aberto) em ratas. Métodos: Foram administradas dose única 0,1 ml/100 g intramuscular de Perlutam (acetofenido de algestona e enantato de estradiol em Rattus novergicus da linhagem Lewis no 1° dia e no 31° dia do experimento. Os animais foram divididos em quatro grupos: G-1 (controle), G-2 (estresse), G-3 (contraceptivo) e G-4 (contraceptivo mais estresse). Os grupos G-2 e G-4 foram submetidos á estresse físico por contenção alternadamente a temperaturas 7°c e/ou 25°c por 4 horas/dia durante 60 dias; Para a observação da atividade motora em CA e LCE. Estes procedimentos foram aprovados no comitê de ética da Unesp - Araçatuba. Resultados: O teste de ANOVA (p≤0,05) seguido de Bonferroni não mostraram diferença estatística nos parâmetros analisados: LCE - braço aberto, (G-1-1,50±1,06A; G-4–3,87±3,31A; G-3-2,00±1,50A; G-2-2,62±2,77A); Tempo no braço aberto (G-1-53,12±66,00A; G-4-46,87±31,73A; G-3-27,22±22,23A; G-2-39,37±41,09A); Braço fechado (G-1-1,75±1,38A; G-4-5,37±3,92A; G-3-3,33±1,87A; G-2-4,00±3,06A); Tempo no braço fechado (G-1-246,87±66,00A; G-4-253,12±31,73A; G-3-272,78±22,24A; G-2-260,62±41,09A). CA - Centro, (G-1-3,12±3,52A; G-4– 4,25±4,16A; G-3 2,77±2,99A; G-2-4,87±7,88A); Periferia (G-1-62,00±27,00A; G-4– 70,87±36,00A; G-3 51,22±11,60A; G-2-53,75±15,02A); Coçar (G-1-1,00±0,75A; G-4–1,87±1,45A; G-3 1,44±1,81A; G-2-2,25±1,48A); Levantar (G-1-3,12±4,64A; G-4–2,37±2,61A; G-3-1,11±1,96A; G-2-2,62±3,11A); Conclusão: Os resultados não mostraram diferenças estatísticas entre os animais dos grupos testados portanto os resultados não evidenciam atividade ansiolítica nem ansiogênica, porém novos estudos devem ser realizados para ratificar esses dados. Apoio Financeiro: UNIVAG - CENTRO UNIVERSITÁRIO e FAPEMAT

02.012 AVALIAÇÃO DOS EFEITOS DE DOIS MODELOS DE ESTRESSE CRÔNICO SOBRE O SISTEMA NERVOSO CENTRAL DE RATOS Lemes, A. F.1; Buzelle, S. L.1; Cirilo, D. M.1; Barros, W. M.2; Semenoff, T. D. V.1; Semenoff, A. S.1 - 1UNIVAG - GPA de Ciências da Saúde; 2UNIVAG - Farmácia Introdução No mundo moderno, o estresse é um fenômeno inevitável que afeta o organismo em vários níveis. Além de estressores físicos, fatores psicológicos (variáveis) também são aceitos como agentes capazes de induzir alterações comportamentais e fisiológicas significativas. Constitui-se o objetivo do trabalho analisar o efeito do estresse crônico variável e físico sobre o SNC de ratos por meio de avaliação motora e psicológica. Metodologia: Foram selecionadas 38 ratas adultas, da espécie Rattus novergicus, linhagem Wistar, divididas aleatoriamente em grupo estresse variável - GEV - (n=13), estresse físico – GEF - (n=13) e controle – GC - (n=12). Os modelos escolhidos para o estresse variável (GEV) foram exposição à luz piscante com lâmpada de 15 Watts, isolamento por 24 horas em caixas individuais, exame da cavidade bucal com espátula n° 36, ambiente congestionado por 24 horas com 12 ou 13 animais, odor de sangue humano e barulho com volume entre 87 e 90 dB. Executou-se um tipo de estresse variável por dia durante 4 horas, com exceção do isolamento e ambiente congestionado. O GEF foi submetido à contenção física por 4 horas diárias, seis dias por semana, alternando-se diariamente as temperaturas de 7°C e 25°C. Após 60 dias de estresse, os animais foram observados durante cinco minutos no campo aberto, e cinco minutos no labirinto em cruz elevado, sendo mantidos em biotério após este período. No labirinto em cruz elevado os tempos de permanência nos braços aberto e fechado, e número de entradas em cada braço foram considerados. Os parâmetros analisados no campo aberto foram: locomoção central e periférica, considerando-se o número de quadros centrais ou periféricos caminhados pelos animais, contados apenas após a passagem das quatro patas por um quadro; auto-limpeza, considerando-se o número de vezes que o animal se lambia ou organizava os pelos; e sustentação em duas patas. Conforme o protocolado no Comitê de Ética e Pesquisa da UNESP – Araçatuba. Resultados O teste ANOVA seguido de Bonferroni, na análise da atividade motora e comportamental dos animais em campo aberto pelos parâmetros: locomoção central, locomoção periférica, auto-limpeza e sustentação em duas patas não demonstrou diferenças estatísticas significativas entre os grupos. A observação dos animais no labirinto em cruz elevado, comparando-se os grupos, pelos tempos de permanência e número de entradas nos braços aberto e fechado, da mesma forma não demonstrou diferenças estatísticas significativas. Conclusão O campo aberto é utilizado para testar os efeitos de ambientes não familiares sobre a emocionalidade em ratos. O teste do campo aberto demonstrou, através de indicadores de ambulação, que os animais do grupo estresse apresentaram maior atividade locomotora geral e menor atividade exploratória do que os animais controle, apesar de os resultados não apresentarem diferenças estatísticas entre si. As médias de locomoção central e sustentação em duas patas para GEV e GEF e locomoção periférica para GEV, foram numericamente maiores. O labirinto em cruz é utilizado como modelo de avaliação da ansiedade, baseada na aversão incondicionada do animal por lugares abertos. O tempo gasto em cada braço, o número de entradas nos braços abertos e as porcentagens de tempo e entradas são seus parâmetros mais usados, sendo a permanência nos braços abertos um índice confiável de ansiedade. Em relação ao comportamento demonstrado no labirinto em cruz, percebeu-se preferência dos animais do GEF pelo braço aberto e de GEV pelo braço fechado, baseando-se apenas nas médias, sem se levar em consideração os desvios padrão, que revelaram inexistência de diferença significativa entre os valores. Portanto o estresse não evidenciou atividade ansiolítica nem ansiogênica nos animais testados frente aos modelos executados. Apoio Financeiro: FAPEMAT

02.013 VASOPRESSIN AND ANGIOTENSIN II RECEPTORS INTO THE MEDIAL SEPTAL AREA IN CONTROL OF URINE AND SODIUM EXCRETION INDUCED BY VASOPRESSIN Camargo, L. A. A.1; Saad, W. A.2; Camargo, G. M. P. A.3 - 1UNESP - FO - Araçatuba - Fisiologia; 2UNESP - FO - Araçatuba - Fisiologia e Patologia; 3UNESP - FO - Araçatuba - Análises Clínicas Introduction: The present study was intended to determine the effects of (Phenilac1, D-Tyr(Me)2, Arg6,8, Lys-NH2

9)-AVP; [D(CH2)51, D-Ile4, Arg8, Ala-0NH2

9]-AVP, and Conivaptan, selective antagonists of V1a (A1aAVP), V2 (A2AVP), and V1a/V2 (A1aAVP/A2AVP) arginine8-vasopressin (AVP) receptors, respectively, as well as, the effects of the angiotensin II (ANGII) antagonists losartan (AT1) and CGP42112A (AT2) on the urine and sodium excretion induced by AVP injected into the medial septal area (MSA). Methods: Male Holtzman rats with stainless steel cannulae implanted into the MSA were used. All experiments were carried out in conscious rats. The AVP doses of 5, 10, 20, 40 and 80nM were used. All antagonists were injected with the same doses previously 80nM of AVP. Results: The AVP administration into the MSA decreased the urinary sodium excretion in a dose-dependent manner. Pretreatment with A2AVP induced a marked and sustained rise, whereas A1aAVP had no effect on urinary excretion induced by AVP. Previous injection of A1aAVP/A2AVP also increased the urine excretion induced by AVP. Losartan and CGP42112A elicited a concentration-dependent increase in the urine excretion induced by AVP, but the AT2 antagonist was more effective. Both ANGII antagonists injected together caused a more pronounced effect in the urine excretion. The AVP administration into the MSA increased the sodium excretion. Previous treatment with the A1aAVP, abolished, whereas the A2AVP only impaired the sodium excretion induced by AVP. Both AT1 and AT2 antagonists decreased the sodium excretion, but the AT2 antagonist showed a more pronounced effect into decrease the sodium output induced by AVP. The concomitant administration of A1aAVP/A2AVP and the two ANGII antagonists showed a more pronounced effect in decreasing the AVP response on the sodium excretion. Discussion: These data are the first to demonstrate an effector mechanism for the V1a, V2, AT1 and AT2 receptors in the MSA and provide a potential physiological mechanisms that may underlie AVP effects on urinary and sodium excretion. Supported by: Fapesp/CNPq

02.014 ATIVAÇÃO DE RECEPTORES ALFA-1 NA ÁREA SEPTAL LATERAL (ASL) DE RATOS SACIADOS CAUSA AUMENTO NA INGESTÃO DE ALIMENTO. Scopinho Augusto, A.1; Resstel, L. B. M.1; Correa, F. M. A.1 - 1FMRP - USP - Farmacologia INTRODUÇÃO: A area septal (AS) está envolvida na regulação de uma série de processos comportamentais. Ratos com lesão da AS apresentam hiperatividade e uma diminuição significativa na ingestão de alimentos. Esses comportamentos são similares aos apresentados por ratos com lesão hipotalâmica. No entanto, lesões septais bloquearam o aumento na ingestão de alimento provocada pela estimulação elétrica do hipotálamo, sugerindo o envolvimento da AS na regulação da ingestão de alimento. A microinjeção intrahahipotalâmica de agonista alfa adrenérgico causa aumento no comportamento de ingestão de alimentos em ratos saciados, e esse efeito é potencializado por inibidores da recaptação de noradrenaline (NA). Adicionalmente, a microinjeção de NA em regiões diencefálicas provoca aumento de ingestão de alimentos, sugerindo envolvimento do sistema noradrenérgico neste tipo de comportamento. Portanto, o presente trabalho tem o objetivo de caracterizar os efeitos causados pela NA na ASL de ratos sobre o comportamento de ingestão de alimentos. MÉTODOS: Ratos Wistar (220-270g) foram submetidos a cirurgia de estereotaxia para implantação bilateral de cânulas guias na ASL. Os experimentos foram realizados na caixa do animal, numa sala ventilada à prova de som. Uma placa de Petri com alimento (ração em grãos) foi colocada dentro da caixa do animal e essa placa foi pesada antes e após a microinjeção das drogas na ASL dos ratos. RESULTADOS: A microinjeção bilateral de 21nmoles/200nL de NA na ASL de ratos saciados provocou um aumento significativo na ingestão de alimento quando comparado com o grupo controle que recebeu salina na ASL (Quantidade de alimento ingerido após salina: 0.23± 0.2 g e quantidade de alimento ingerido após NA: 4.9± 0.6 g, em uma hora, t=6 e p<0,05, n=6). O aumento na ingestão de alimento causado pela NA na ASL foi bloqueado pelo pré-tratamento da ASL com um antagonista dos receptores alfa-1, o WB4101, e não sofreu alterações significativas quando os ratos foram pré-tratados com salina (Quantidade de alimento ingerido após pré-tratamento com salina: 5.3±0.2 g e quantidade de alimento ingerido após pré-tratamento com WB4101: 1.6± 0.4 g, em uma hora, t=5 e p<0,05, n=6). DISCUSSÃO: O conjunto de dados mostra que a ativação de receptores alfa-1 na ASL de ratos saciados causa aumento na quantidade de alimento ingerido, sugerindo o envolvimento desta estrutura cerebral na regulação do comportamento de procurar e ingerir alimento. SUPORTE FINANCEIRO: CNPQ.

02.015 BED NUCLEUS OF THE STRIA TERMINALIS NORADRENERGIC NEUROTRANSMISSION MODULATES BAROREFLEX IN RATS. Crestani, C. C.1; Alves, F. H. F.1; Resstel, L. B. M.1; Correa, F. M. A.1 - 1FMRP - USP - Farmacologia Introduction: The bed nucleus of the stria terminalis (BST) is involved in central cardiovascular modulation. Previous report from our laboratory indicated that bilateral microinjections of the unspecific neurotransmitters blocker CoCl2 into the BST evokes reversible enhancement of bradycardiac reflex, without affecting the tachycardiac reflex, thus suggesting that synapses in the BST modulate the parasympathetic component of the baroreflex. Recent unpublished data suggest that BST-glutamatergic neurotransmission may be involved in the modulation of the parasympathetic component of the baroreflex, via an NMDA-receptors/nitric oxide interaction. Because an interaction between BST-glutamatergic and noradrenergic neurotransmission had been previously reported, we aimed to study the involvement of the BST-noradrenergic neurotransmission in the modulation parasympathetic baroreflex component. Methods: Male Wistar rats had guide cannulas bilaterally implanted in the BST for drugs injection. A polyethylene catheter was implanted into the femoral artery for mean arterial pressure (MAP) and heart rate (HR) recording using a computerized acquisition system. Baroreflex activation was induced by infusion of phenylephrine in the femoral vein. Baroreflex function was evaluated using linear regression analysis. Results: Bilateral microinjection of the selective α1-adrenoreceptor antagonist WB4101 (15nmol/100nL) in the BST evoked an increase in the gain of reflex bradycardia toward higher pressures, in response to increases in mean arterial pressure (MAP) caused by i.v. infusion of phenylephrine (gain before = -1.1±0.2 and after 10 min= -2.1±0.3 bpm/ mmHg, F=5, p<0.05). The effect of WB 4101 was reversible and the HR returned to pre-injection levels after 60 min (-1.3±0.2 bpm/mmHg, p>0.05). However, bilateral microinjection in the BST of either the selective α2-adrenoceptor antagonist RX821002 (15nmol/100nL) (gain before= -1.3±0.3 and after 10 min= -1.4±0.2, F=0.1, p> 0.05) or the β-adrenoceptor antagonist propranolol (15nmol/100nL) (gain before = -1.4±0.3 and after 10 min= -1.4±0.2, F=0.04, p> 0.05) did not affected baroreflex responses. Conclusion: Our data indicate that the noradrenergic neurotransmission in the BST has a tonic inhibitory influence on the parasympathetic component of the baroreflex through activation of noradrenergic α1-receptors. Supported by: FAPESP, CNPq and FAEPA.

02.016 THE MICROINJECTION OF ANGIOTENSIN (ANG) III IN THE RAT PERIAQUEDUCTAL GRAY MATTER (PAG) ELICITS RECEPTOR-MEDIATED ANTINOCICEPTION. Rosa, E.1; Guethe, L. M.1; Pelegrini-Da-Silva, A.2; Juliano, M. A.3; Prado, W. A.4; Martins, A. R.4 - 1FFCLRP - USP - Psicologia e Educação; 2FOP - UNICAMP - Fisiologia; 3UNIFESP - EPM - Instituto de Farmacologia; 4FMRP - USP - Farmacologia INTRODUCTION: In a previous study we have shown that the administration of Ang III in the rat PAG elicits antinociception. However, the receptors involved in Ang III antinociception were not yet described. To address this issue, the specific Ang receptor antagonists type I (AT1, losartan) and II (AT2, CGP42112A) were injected in the ventrolateral PAG (vlPAG) before Ang III. METHODS: Male Wistar rats (160–180 g) were chronically implanted with guide cannula in the vlPAG. The stereotaxic coordinates (in mm) used were AP, lambda 0 mm; L, -1.9 from the midline; and H, -6.0 from the skull surface, all taken from Paxinos and Watson´s (1986) atlas. The injection procedure and the localization of the injection site were as described by Pelegrini-da-Silva et al (2005). Antinociception was determined using the tail flick test. RESULTS: The administration of Losartan [25 pmol (F3,18=15.44, P<0.0001, n=7); 2.5 pmol (F3,17=20, P<0.0001, n=5); 0.25 pmol (F3,19=17.99, P<0.0001, n=7)] and CGP42112A [25 pmol (F3,16=23.75, P<0.0001, n=7); 2.5 pmol (F3,20=17.02, P<0.0001, n=7)] fully blocked the Ang III-elicited antinociceptive effect, differing significantly from Ang III plus saline-treated group (n=5). The injection of 0.25 pmol CGP42112A (n=6) only attenuated this effect. DISCUSSION: The inhibition of the Ang III-elicited antinociception at the low pmol doses of losartan and CGP42112A used here indicates that the antinociceptive effect of the Ang III injection in the vlPAG is mediated by AT1 and AT2 receptors. Supported by: FAPESP, FAEPA and CNPq.

02.017 A NOVEL AMINO ACID WITH ACTIVITY IN BRAIN NMDA RECEPTORS Caruso, R. R. B.1; Figueira, M. V. F.1; Lima, E. C.2; Costa, P. R. R.2; Castro, N. G.1 - 1UFRJ - Farmacologia Básica e Clínica - ICB; 2UFRJ - Química Bioorgânica - NPPN Objectives: A new ligand of N-methyl-D-aspartate (NMDA) excitatory aminoacid (AA) receptors may have wide therapeutic application in schizophrenia, brain ischemia and neurodegenerative diseases. Our objective was to test a new synthetic chiral d-AA (PCPT02-D) aiming at an activity on NMDA receptors, using electrophysiological approaches. Methods and Results: In patch-clamp recordings on cultured rat hippocampal neurons, PCPT02-D produced no whole-cell currents when applied alone at 1-100 µM, like NMDA. However, at these concentrations, PCPT02-D mimicked the effect of glycine or D-serine, evoking currents when co-applied with sub-saturating concentrations of NMDA. At this range of concentrations, the evoked currents achieved a maximum of ~90% of those produced by co-application of NMDA and glycine, with an EC50 of 20 µM (n = 4-8; glycine´s EC50 = 0.4 µM). Surprisingly, when applied at millimolar concentrations (1-10 mM), PCPT02-D, even without NMDA, was able to produce robust whole-cell currents (n = 1-6). With or without NMDA, the PCPT02-D-evoked currents were blocked by APV, 5,7-dichlorokynurenic acid and Mg2+, showing that the currents were produced by the activation of NMDA receptors (n = 4-5). Furthermore, when applied with saturating concentrations of NMDA, PCPT02-D inhibited the peak currents (to 62±19% of those evoked by NMDA and glycine), whilst the plateau currents reached 84±6% (n = 4), showing an almost complete activation at steady-state. The modulatory effect on responses mediated by endogenous glutamate was evaluated by recording excitatory post-synaptic currents (EPSCs) evoked by electrical stimulation of neighboring neurons in the culture while blocking GABAA receptors. PCPT02-D 300 µM potentiated the NMDA component of the EPSCs to approximately 66% of the level observed with application of glycine 10 µM. Discussion: PCPT02-D interacts with the glycine and glutamate sites of the NMDA receptor in a complex manner, apparently as a partial agonist at both sites. The agonist effect at the glycine site produced by micromolar concentrations may be useful in conditions of NMDA hypofunction, but the effect at the glutamate site (in the low-millimolar range) may be neurotoxic. So far, this novel AA is the first non-endogenous high-efficacy agonist of the glycine site of the NMDA receptor which, in further studies, can provide better understanding about receptor activation. Another question that is raised is whether this new compound has any selectivity for the subunits in the receptor assembly. Apoio financeiro: FAPERJ, PRONEX, CNPq, CAPES.

02.018 CARDIOVASCULAR EFFECTS OF L-GLU MICROINJECTION IN THE PARAVENTRICULAR NUCLEUS OF UNANESTHETIZED RATS. Busnardo, C.1; Tavares, R. F.1; Correa, F. M. A.1 - 1FMRP - USP - Farmacologia INTRODUCTION: The PVN is a site of integration for autonomic and endocrine cardiovascular responses. Electrical stimulation of the PVN causes pressor responses. Our objective was to investigate the occurrence of cardiovascular responses to chemical stimulation of the PVN with different doses of L-glutamate (L-glu). METHODS: Male Wistar rats were used (250-270g). Guide cannulas were implanted into the PVN. A catheter was introduced into the right femoral artery for blood pressure and heart rate recording. RESULTS: Microinjections of artificial cerebrospinal fluid (ACF) in the PVN did not affect baseline MAP or HR (before: MAP=96±5 mmHg, HR=345±17 bpm; and after: MAP=97±6 mmHg, HR=330±28 bpm, p>0.05, n=6). Injections of 1, 3, 10, or 50 nmol (100nL) of L-glu in the PVN caused dose-related pressor and tachycardic response. Nonlinear regression analysis indicated a significant correlation between dose and hypertensive (r2=0.91, p<0.05) or tachycardic responses (r2=0.88, p<0.05), with an estimated ED50 of 10 nmol. CONCLUSION: Results indicate that activation of glutamatergic receptors in the PVN causes cardiovascular responses, which are characterized by mean arterial pressure and heart rate increase Supported by: FAPESP (06/52446-9)

02.019 INFLUÊNCIA DO TREINO REPETIDO EM ESQUIVA ATIVA NA DENSIDADE DE RECEPTORES NICOTÍNICOS A7, APÓS INFUSÃO DO PEPTÍDEO B-AMILÓIDE NO CÉREBRO DE RATOS. Caetano, A. L.1; Nasello, A. G.1; Buck, H. S.1; Viel, T. A.2 - 1FCMSCSP - Ciências Fisiológicas; 2EACH - USP - Fundamentos Biológicos Introdução: Em estudo anterior mostramos que a infusão contínua do peptídeo b-amilóide 1-40 humano (b-A) no cérebro de ratos causou uma redução de corpos celulares no córtex e hipocampo e também uma redução parcial, porém significativa, da consolidação da memória desses animais (Viel, T.A., Neurobiol. Aging, no prelo). A ausência de um maior declínio na memória pode estar relacionada à estimulação de novas vias neuronais, como tentativa de se evitar o estímulo aversivo (choque). O objetivo desse trabalho foi localizar e quantificar a densidade de receptores nicotínicos a7 no cérebro de ratos após a infusão de b-A e após treinamento semanal em esquiva ativa. Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos (3 a 4 meses) receberam infusão contínua do b-A (grupo b-A, 0,25 mL/hora, por 28 dias, n = 6) por uma cânula implantada no ventrículo lateral, conectada a uma mini-bomba osmótica posicionada subcutaneamente no dorso do animal. Os controles (n = 7) receberam o veículo nas mesmas condições. Durante o período de infusão, os animais foram submetidos, semanalmente, à esquiva ativa de duas vias (50 provas), onde foi avaliado o número de respostas condicionadas (RC). Na primeira semana de testes os animais de ambos os grupos apresentaram um aumento crescente de RC ao longo das 50 provas. Na última semana, os controles apresentaram um desempenho de 90,8±4,1%, evidenciando a consolidação da memória. Por outro lado, o grupo b-A apresentou uma redução significativa nas RC (68,6±20,9%, P < 0,05), caracterizada por reduções na consolidação da memória e falhas na aprendizagem. Após os testes, os cérebros foram extraídos, congelados e cortados em criostato (20 mm). A radioautografia para receptores a7 ([125I]-BUTX (5 nM, 90 min, 25°C) mostrou redução significativa (P < 0,05) na densidade das áreas CA3 hipocampal (87%) e na camada cinzenta intermediária do colículo superior (InG, 43,2%) no grupo b-A, comparativamente aos controles (37,8±6,1 fmols/mg e 18,5±1,7 fmols/mg, respectivamente). Por outro lado, foi observado um aumento significativo na densidade de a7 nas áreas da camada polimórfica do giro denteado (PoDG, 19,4%) e CA1 hipocampal (47,1%) e na amídala (55,6%) do grupo b-A, em relação ao grupo controle (17,2±0,9 fmols/mg, 22,5±1,5 fmols/mg e 14,8±1,0 fmols/mg, respectivamente, P < 0,05). Na área hipotalâmica lateral (23,1±5,1 fmols/mg), fimbria (12,5±1,5 fmols/mg), comissura hipocampal dorsal (14,4±1,7 fmols/mg) e nos núcleos pré-mamilares (27,3±2,2 fmols/mg), arqueado (18,6±3,6 fmols/mg) e habenular (17,3±2,5 fmols/mg) do grupo b-A também foi verificada marcação para [125I]-BUTX. No grupo controle não foi observada marcação do radioligante nessas áreas. Conclusão: A neurodegeneração no córtex e hipocampo foi relacionada à redução da capacidade de aprendizagem e consolidação da memória dos ratos e à redução na densidade de receptores a7 nas áreas CA3 do hipocampo e InG. Por outro lado, foi observado aumento significativo da densidade desses receptores em outras áreas cerebrais relacionadas a funções cognitivas e respostas de defesa, sugerindo a formação de novas vias neuronais compensatórias. Apoio Financeiro: FAP-FCMSCSP, CAPES

02.020 THE LATERAL SEPTAL AREA MODULATES THE BAROREFLEX IN RATS. Fortaleza, E. A. T.1; Scopinho Augusto, A.1; Crestani, C. C.1; Alves, F. H. F.1; Resstel, L. B. M.1; Correa, F. M. A.1 - 1FMRP - USP - Farmacologia INTRODUCTION: The lateral septal area (LSA) integrates autonomic, neuroendocrine and behavioral responses. Previous experiments attempting to establish the role of LSA in cardiovascular control indicated that mean arterial pressure (MAP) increase or decrease could be evoke after its electrical or chemical stimulation, and is putative candidates to also modulate baroreflex.. The baroreflex cardiovascular changes evoked by bilateral carotid occlusion are decreased when occlusion was performed during septal stimulation, and the stimulation of the aortic depressor nerve, which reproduces baroreceptors activation, altered the activity of one third of the spontaneously firing neurons recorded in the LSA, either increasing or decreasing their firing rate, indicating that baroreceptor information carried by the ADN project to the LSA. Thus, the hypothesis of the present work is that synapses in the LSA are involved in baroreflex modulation. METHODS: Male Wistar rats were used. Guide cannulas were bilaterally implanted in the LSA for drug injection and a polyethylene catheter was implanted in the femoral artery for arterial pressure (AP) and heart rate (HR) recording using a computerized acquisition system. Baroreflex changes were induced by infusion of phenylephrine or sodium nitroprusside (SNP) through a catheter implanted in the femoral vein. Baroreflex activation was evaluated using nonlinear and linear regression analysis. RESULTS: Bilateral microinjections of CoCl2 (n=6) in the LSA did not affect MAP baseline (101±4 vs 99±3 mmHg, t=0.04, p>0.05) or HR (342±20 vs 350±18 bpm, t=0.03, p>0.05). However, nonlinear regression analysis of baroreflex activity indicated that bilateral microinjections of CoCl2 in the LSA affected the baroreflex response. Changes were characterized by increase in the lower (P1, bpm) and upper (P2, bpm) plateaus, in the HR range (bpm) and in the average gain (G, bpm/ mmHg). Sixty min after treatment with CoCl2, baroreflex parameters had returned to control values. To further analyze the baroreflex response, the effects of either MAP increases or decreases on HR before and after bilateral microinjections of 2% CoCl2 into the LSA, were analyzed separately using linear regression. The slope of bradycardiac (before= -1.5±0.2, and 10 min after= -2.6±0.2 bpm/mmHg; r2: 0.65 and 0.78, F=9, p<0.01) and tachycardiac (before= -1.5±0.2, and 10 min after= -2.7±0.3 bpm/mmHg; r2: 0.5 and 0.6, F=6, p<0.05) responses was significantly increased 10 min after CoCl2 microinjection in the LSA. Sixty min after CoCl2, the slope of bradycardiac (-1.6±0.3 bpm/mmHg, r2: 0.64, p>0.05) and of tachycardiac (-1.8±0.3 bpm/mmHg, r2: 0.78, p>0.05) regression lines were back to control values. No effect on baroreflex was observed when CoCl2 was microinjected into structures surrounding the LSA. DISCUSSION: These results suggest that reversible LSA synapses inhibition using CoCl2 increases both sympathetic and parasympathetic baroreflex activities. Supported by: FAPESP, CNPq e CAPES.

02.021 DOPAMINE INTRACEREBROVENTRICULAR MICROINJECTION MAY INFLUENCE THE BASAL METABOLIC RATE AND IMPROVES THE AEROBIC PERFORMANCE Balthazar, C. H.1; Coimbra, C. C.1 - 1UFMG - Fisiologia e Biofísica Introduction: Dopaminergic agents have been described as altering locomotors activity as well as adjustments for thermoregulation such as peripheral vasodilatation. Taking this fact into account, further studies to determine its role in the metabolic cost and in aerobic performance become relevant. Therefore, the aim of this study was to investigate the influence of the intracerebroventricular (ICV) microinjection of dopamine in resting metabolic rate and aerobic performance. Methods: To achieve this, male Wistar rats (220-250 g), where housed under controlled conditions, and submitted to surgical procedures for right cerebral ventricular cannulation. After a recovery period of five days, the resting metabolic rate (MR) of rats was registered during 30 minutes (Oxymax System, Columbus Instruments, Ohio) under four conditions at random: after 0.2 ml ICV microinjection of (1) saline or; (2) dopamine 5 x 10-1or; (3) dopamine 5 x 10-2 or; and/or (4) dopamine 5 x 10-3. In other set of experiments, immediately after ICV injection of dopamine 5 x 10-3 or saline, the rats were submitted to a progressive exercise (PE) protocol on a motor-driven treadmill (starting speed of 10 m.min-1; increasing 1 m.min-1 each 3 min step; 5% inclination) until attain fatigue (Treadmill Simplex, Columbus Instruments, Ohio). Fatigue was defined as the point when the animals were unable to keep pace with the treadmill. Differences between groups and the effect of time were evaluated using the analysis of variance (ANOVA) test followed by the Newman-Keuls test. The data were also compared using paired t-test. Significance level was set at p<0.05. The Pearson´s coefficient was assessed to determine the correlation presented in this results. Results: Changes in MR at rest, observed after ICV microinjections: Saline: 10.0±4.8 ml.Kg-1.min-1; dopamine 5 x 10-1: 37.9±12.3 ml.Kg-1.min-1; dopamine 5 x 10-2: 13.5±4.9 ml.Kg-1.min-1; dopamine 5 x 10-3: -10.7±5.6 ml.Kg-1.min-1.(Data reported as means±SEM). We have observed a strong dose-dependent correlation between the resting MR and dopamine ICV microinjected (r=0.77; p<0.05; n = 5). Our results also showed that the dopamine 5 x 10-3 ICV microinjection improved aerobic performance in rats, as seen by increased time to fatigue after dopamine injection: Saline: 31.6±4.0 min vs dopamine: 35.3±3.4 min (p<0.03; n = 16). Conclusions: Central dopaminergic tonus may influence the resting metabolic rate and dopamine 5 x 10-3 ICV microinjection improves aerobic performance in rats. Supported by: CNPq; FAPEMIG.

02.022 CARACTERIZAÇÃO FUNCIONAL DOS RECEPTORES NICOTÍNICOS EXPRESSOS EM CÉLULAS DA LINHAGEM PC12. Setti-Perdigao, P.1; Santos, L. A.2; Serrano, M. A. R.2; Flausino Jr., O.2; Bolzani, V.2; Castro, N. G.1 - 1UFRJ - Farmacologia Básica e Clínica - ICB; 2UNESP - IQ - Araraquara - NuBBe / Quim. Orgânica Introdução: Os receptores de acetilcolina nicotínicos (RAChN) neuronais estão envolvidos em diversas doenças como Alzheimer, Parkinson, déficits cognitivos e epilepsia. Em contrapartida, ligantes nicotínicos possuem atividades neuroprotetora, ansiolítica, antidepressiva, analgésica, entre outras, tornando o estudo dos receptores nicotínicos e de seus ligantes relevante para a descoberta de novos medicamentos. Objetivamos testar a atividade em RAChN de três alcalóides isolados da Erythrina mulungu, uma planta que mostrou conter substâncias neuroativas em diversos ensaios in vivo. Métodos: Nesse estudo utilizamos dois modelos celulares, previamente caracterizados em nosso laboratório. A linhagem tumoral PC12, proveniente da medula da glândula supra-renal de ratos, expressa RAChNs neuronais funcionais, sendo que nosso subclone expressa o subtipo alfa3*, sensível à mecamilamina 1 microM. O outro modelo, de neurônios hipocampais de rato em cultura, expressa quase exclusivamente o RAChN tipo alfa7, sensível à metilicaconitina 1 nM. Os experimentos foram feitos utilizando-se a técnica de patch clamp na configuração de célula inteira para registro de correntes iônicas mediadas pelo RAChN. Os experimentos foram feitos na presença de 0,5 microM de atropina e 0,15 microM de tetrodotoxina. Para a triagem das substâncias candidatas a ligantes de RAChN utilizamos pulsos de 0,5 s de acetilcolina (ACh) 100 microM e as substâncias eram adicionadas somente à solução de aplicação na concentração de 100 microM. Resultados: Os três alcalóides apresentaram atividade antagonista em células PC12, com bloqueios de 24,2±3,2 % (n=4), 64,9±4,4 % (n=5) e 70,2±4,1 % (n=4) e também em neurônios, com bloqueios de 11,0±1,5 % (n=3), 60,9±7,2 % (n=3) e 65,9±10,0 % (n=3), respectivamente. Conclusão: As substâncias testadas, alcalóides da Erythrina, apresentaram atividade antagonista em receptores nicotínicos do tipo ganglionar (alfa3*) e do tipo alfa7. Duas delas mostraram mais que 50% de inibição a 100 microM. Esta interação com RAChN neuronais talvez contribua para os efeitos neurocomportamentais desses alcalóides ou de extratos de E. mulungu. Apoio Financeiro: PRONEX-MCT, FAPERJ, CNPq e CAPES.

02.023 INVOLVEMENT OF DIAGONAL BAND OF BROCA IN THE CARDIOVASCULAR RESPONSE TO NORADRENALINE MICROINJECTION IN THE DORSAL PERIAQUEDUCTAL GRAY AREA OF RATS Pelosi, G. G.1; Tavares, R. F.1; Correa, F. M. A.1 - 1FMRP - USP - Farmacologia INTRODUCTION: The dorsal periaqueductal gray area (dPAG) and the diagonal band of Broca (DBB) are brain structures involved in cardiovascular control and in the behavioral modulation. In a previous study we showed that noradrenaline (NA) microinjected in the dPAG caused pressor response mediated by vasopressin. Moreover, the vasopressin also mediates cardiovascular changes caused by L-glutamate microinjection in the DBB. In the present study, we evaluated the involvement of synapses within DBB in the cardiovascular response of NA microinjection in the dPAG of unanesthetized rats. METHODS: Male Wistar rats were used (220-270g). Guide cannulas were implanted into the dPAG and DBB. A catheter was introduced into the right femoral artery for blood pressure recording. RESULTS: Cobalt (1mM/100nL - synaptic inhibitor) microinjection in the DBB reduced significantly the cardiovascular change (before, �MAP: +41±3 mmHg and �HR: -57±7 bpm; and after, �MAP: +19±3 mmHg and �HR: -29±5 bpm, n=5; One-Way ANOVA followed by Bonferroni post hoc; MAP: F2;4= 17 and HR: F2;4= 7.5;* p<0.05) evoked by NA injection (15nmol/50nL) in the dPAG. 24 hours later the cardiovascular response to NA into the dPAG was restored (�MAP: +43±4 mmHg; �HR: -54±4 bpm, n=5). DISCUSSION: The results suggest that the noradrenergic dPAG pathway involves synapses in the DBB. Supported by: FAPESP (05/57227-0; 04/01270-2); CNPq (306381/2003-6; 505394/2003-0)

02.024 PARTICIPAÇÃO DO RECEPTOR TRPA1 NA HIPERATIVIDADE DA BEXIGA URINÁRIA INDUZIDA POR LESÃO MEDULAR EM RATOS Andrade, E. L.1; Koepp, J.2; Calixto, J. B.1 - 1UFSC - Farmacologia; 2Faculdades Integradas ASSESC - Ciências Biomédicas Objetivos: A hiperatividade da bexiga urinária, a qual pode ser decorrente de uma lesão medular, é uma patologia caracterizada pela presença de contrações involuntárias do músculo detrusor da bexiga urinária durante a fase de enchimento e afeta aproximadamente 17% da população adulta dos Estados Unidos. A lesão medular leva à reorganização das vias aferentes que participam do processo de micção, desencadeando assim uma sensibilização de fibras C sensoriais (Steers, W.D., Rev. Urology, 4:S7, 2002), sítio de localização dos receptores de potencial transitório TRPA1 e TRPV1. Como conseqüência, ocorre aumento da excitabilidade da bexiga urinária. Embora diversos estudos apontem à importância dos receptores TRPV1, a participação dos receptores TRPA1 nesta patologia não foi ainda avaliada. Desta forma, o presente estudo tem por objetivo avaliar as respostas funcionais da bexiga urinária aos agonistas dos receptores TRPA1 (cinamaldeído) e TRPV1 (capsaicina), assim como a expressão destes receptores após a indução de lesão medular. Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos (270-300g) foram anestesiados e em seguida a medula espinhal foi lesada no nível da 10º vértebra torácica, com o auxílio de um cateter Fogarty 2F. Dois, sete, quatorze e vinte e oito dias após a lesão medular, animais controle, falso operado ou com lesão da medula espinhal foram sacrificados e o peso úmido (mg) e a resposta contrátil das tiras de bexiga urinária isoladas aos agonistas dos receptores TRPA1 e TRPV1 (cinamaldeído 300 µM e capsaicina 0,1 µM, respectivamente), ao agonista de receptores muscarínicos carbacol (0,1 µM) e ao agente despolarizante KCl (80 mM) foram avaliados. Além disso, foi avaliada a expressão dos receptores TRPV1 e TRPA1 na bexiga urinária através da técnica de Western Blot. A lesão da medula espinhal induziu aumento significativo e progressivo do peso das tiras de bexiga urinária em todos os dias avaliados (dia 2: 71,9±6,4%; dia 7: 221,8±20,8%; dia 14: 222,6±22,9%, dia 28: 246,5±32,4%). Da mesma forma, a resposta contrátil ao carbacol aumentou 68,3±13,0% no 2º; 173,1±22,4% no 7º; 115,6±19,7% no 14º; 205,3±38,2% no 28º dias após a lesão. Porém, a resposta contrátil ao KCl esteve aumentada no 7º, 14º e 28º dias (35,6±6,4%; 90,5±28,1%; 107,4±17,2%, respectivamente). Por outro lado, houve um aumento significativo da resposta contrátil ao cinamaldeído (51,6±15,3%, 76,3±22,5%) e à capsaicina (98,1±46,4%; 154,8±34,4%) no 14º e no 28º dias respectivamente, mas não no 2º e 7º dias, enquanto que a expressão destes receptores apresentou-se aumentada já no 2º dia após a lesão medular. Conclusão: Nossos resultados funcionais e moleculares mostram que em animais com lesão da medula espinhal ocorre uma hipertrofia da bexiga urinária, um aumento da resposta contrátil ao carbacol, ao KCl, à capsaicina, ao cinamaldeído e um aumento da expressão dos receptores TRPV1 e TRPA1. O envolvimento de receptores TRPA1 na hiperatividade da bexiga urinária induzida por lesão medular sugere uma possível interação entre receptores TRPV1 e TRPA1 nesta patologia. Apoio financeiro: CAPES, CNPq, FINEP, FAPESC, PRONEX.

02.025 TUNING ADENOSINE A1 AND A2A RECEPTORS ACTIVATION MEDIATES L-CITRULLINE INHIBITION OF [3H]ACETYLCHOLINE RELEASE DEPENDING ON NERVE STIMULATION PATTERN Campesatto-Mella, E.1; Oliveira, L. J.2; Barroso, A.2; Silva, C.2; Alves-do-Prado, W.3; Timoteo, M. A.2; Correia-de-Sá, P.2 - 1UEM - CESUMAR - Farmácia; 2Universidade do Porto - Farmacologia e Neurobiologia; 3UEM - Farmácia e Farmacologia INTRODUCTION – Recently, we demonstrated that L-citrulline might not be merely a by-product of NO-synthesis catalysed by nitric oxide synthase (NOS), but could also play a role in synaptic transmission by increasing extracellular adenosine accumulation (Barroso et al., 2007, Br. J. Pharmacol., in press). It is well-known that nerve stimulation conditions critically influence endogenous adenosine formation and A1/A2A receptor activation balance (Correia-de-Sá et al., 1996, J. Neurophysiol., 76, 3910). This prompted us to investigate the role of L-citrulline on transmitter release from motor terminals stimulated with 5 Hz-trains or 50 Hz-bursts and the putative interactions between NOS activity and the adenosine system. METHODS - The experiments were performed at 37ºC on rat phrenic nerve-hemidiaphragm preparations. The procedures for labelling the preparations and measuring evoked [3H]acetylcholine ([3H]ACh) release were previously described (Correia-de-Sá et al., 1996). Adenosine and adenine nucleotides were evaluated by HPLC analysis (Barroso et al., 2007). RESULTS – L-citrulline (0.01-4.7 mM), L-arginine (0.01-4.7 mM) and 3-morpholinylsydnoneimine (SIN-1, 1-100 µM), concentration-dependently inhibited evoked [3H]ACh release. In contrast to the NO donor, SIN-1, inhibition of [3H]ACh release by L-arginine and L-citrulline was amplified by changing stimulus pattern from 5 Hz-trains to 50 Hz-bursts. NOS inhibition with Nω-nitro-L-arginine (100 µM) prevented release-depression by L-arginine, but failed to modify the effect of L-citrulline. Inactivation of extracellular adenosine with adenosine deaminase (2.5 U/ml) and inhibition of the nucleoside outflow with S-(p-nitrobenzyl)-6-thioinosine (10 µM) attenuated the effects of L-arginine- and L-citrulline in both stimulation conditions. L-citrulline increased the resting extracellular concentration of adenosine, without changing that of the adenine nucleotides. With 5 Hz-trains, blockade of A1 receptors with 1,3-dipropyl-8-cyclopentyl xanthine (2.5 nM), but not of A2A receptors with ZM241385 (10 nM), reduced the inhibitory effects of L-arginine and L-citrulline; the opposite was observed when 50 Hz-bursts were used. Blockade of muscarinic M2 autoreceptors with AF-DX116 (10 nM) also attenuated the effects of L-arginine and L-citrulline when 50 Hz-bursts were used. L-arginine enhanced the ability of the M2 receptor agonist, oxotremorine (10 µM), to inhibit [3H]ACh release, in a similar manner to that observed with the A2A receptor agonist, CGS21680C (2 nM). DISCUSSION - Data indicate that NOS-derived L-citrulline negatively modulates the release of [3H]ACh by increasing adenosine outflow channelling to the activation of A1 and A2A receptors depending on the stimulus paradigm. While adenosine acts predominantly at inhibitory A1 receptors during 5 Hz-trains, L-citrulline-induced reduction of ACh release during 50 Hz-bursts depends on the interplay between adenosine A2A and muscarinic M2 receptors. Supported by: FCT (FEDER funding, POCTI/CVT/43368/2001 and UMIB-215/94), Cesumar e Capes/Cnpq.

02.026 ESTUDO DA SINALIZAÇÃO GLUTAMATÉRGICA E MORTE CELULAR EM CÉREBRO DE RATOS Ureshino, R. P.1; Bertoncini, C. R. A.2; Lopes, G. S.1; Smaili, S. S.3 - 1UNIFESP - EPM - Farmacologia; 2UNIFESP - EPM - CEDEME; 3UNIFESP - EPM - Farmacologia - MAD O envelhecimento cerebral é marcado pelo déficit das funções cognitivas, somatosensoriais e motoras, que podem ter relação com o desenvolvimento de doenças neurodegenerativas. Algumas áreas do Sistema Nervoso Central (SNC), tais como os gânglios da base, são bastante afetadas no envelhecimento, pois têm um papel importante no controle da motilidade voluntária. Muitas das alterações estão correlacionadas com uma perda da homeostase do Ca2+ intracelular, que pode levar ao estresse oxidativo, na disfunção mitocondrial e na morte celular. Nossos estudos anteriores mostraram que há um aumento no transiente de Ca2+ citosólico no corpo estriado de animais velhos estimulados com glutamato e um aumento na morte celular por apoptose. Estas alterações podem estar relacionadas à excitotoxicidade e à conseqüente perda na função dos tecidos que está presente no envelhecimento. No presente trabalho objetivamos investigar as vias glutamatérgicas ativadas pelo glutamato no corpo estriado e que induzem a um aumento de Ca2+. Além disso, como há um aumento do número de células apoptóticas no estriado de animais velhos, verificar se há alterações na expressão de genes que codificam proteínas envolvidas na cascata da apoptose, tais como bax e bcl-2. Para isso, foram utilizadas fatias (200mm) do SNC (obtidas com “vibroslicer”) da região do estriado de ratos Wistar com 5-6 meses (jovem). Estas foram incubadas com indicador de fluorescência para Ca2+ Fura-2 e as medidas, em tempo real, realizadas em microscópio de fluorescência de alta resolução. Curvas de doses simples de glutamato (1mM) foram realizadas na ausência e na presença de antagonistas dos receptores de NMDA (AP5, 100mM) e mGluR1 (AP3, 100mM). Parte do estriado foi utilizado para extração de mRNA e análise de expressão gênica diferencial de bax e bcl-2 por RT-PCR. Observamos que houve inibição do transiente de Ca2+ induzido pelo glutamato na presença de AP3 (63,93%) e de AP5 (62.95%). Estes dados indicam que o estriado tem uma mistura de receptores glutamatérgicos dos tipos metabotrópico e ionotrópico que promovem uma elevação nas concentrações de Ca2+ intracelular. Quanto ao mRNA, foram observados níveis de 5% de bax e 9% de bcl-2 em relação à b -actina, que indica uma maior expressão da proteína anti-apoptótica Bcl-2 e está de acordo com nossos resultados anteriores, onde se observou apenas 1% de células apoptóticas no corpo estriado de animais jovens. Na próxima etapa estes resultados serão comparados com os obtidos de animais senescentes (24-25 meses) e buscaremos uma correlação com os resultados que apontaram um maior número de células apoptóticas no envelhecimento. Apoio Financeiro: FAPESP e CNAPq.

02.027 MODULATION OF B1 AND B2 KININ RECEPTORS IN HIPPOCAMPUS OF RATS WITH TEMPORAL LOBE EPILEPSY Pereira, M. G. A. G.1; Gitai, D. L. G.2; Paço-Larson, M. L.2; Pesquero, J. B.3; Garcia-Cairasco, N.4; Costa-Neto, C. M.1 - 1FMRP - USP - Bioquímica e Imunologia; 2FMRP - USP - Biologia Celular e Molecular e Bioagentes Patogênicos; 3UNIFESP - EPM - Biofísica; 4FMRP - USP - Fisiologia Introduction: Epileptic seizures are hypersynchronous, paroxystic and abnormal neuronal discharges. Epilepsies are characterized by diverse mechanisms involving alteration of excitatory and inhibitory neurotransmission that result in hyperexcitability of the central nervous system (CNS). Many inflammatory reactions in the brain can also lead to enhanced neuronal excitability. Pro-inflammatory cytokines, prostaglandins and kinins are molecules directly involved in either triggering or establishing inflammation. Multiple inductions of audiogenic seizures in the Wistar audiogenic rat (WAR) strain is a model of temporal lobe epilepsy (TLE), because of the recruitment of limbic areas such as hippocampus. Methods: In this study we investigated the modulation of the B1 and B2 kinin receptors in TLE in WARs by RT-PCR. The expression level of pro-inflammatory (IL-1β) and anti-inflammatory (IL-10) cytokines were also evaluated, as well as COX-2. Results: Our results showed that the B1 and B2 kinin receptors were up-regulated about 7 and 4-fold, respectively, in the hippocampus of WARs with TLE. In the other hand, the expression of the IL-1β, IL-10 and COX-2 were not related the observed increase of expression of kinin receptors. Discussion: Based on those results we believe that the B1 and B2 kinin receptors have a pivotal role in this model of TLE, and that their participation is not depending on pro-inflammatory mediators. We believe also that kinin receptors in the CNS may act in seizure mechanisms by participating in specific neurochemical pathways. Supported by: FAPESP, CAPES, CNPq and FAEPA

02.028 AVALIAÇÃO DE GAMA-DECANOLACTONA NO MODELO DE “KINDLING” INDUZIDO POR PTZ EM CAMUNDONGOS Oliveira, P. A.1; Pereira, P.1; Linno, F. L.1; Cappelari, S. E.1; Nascimento Picada, J.1; Brum, L. F. da S.1 - 1ULBRA - Farmacologia e Toxicologia Introdução: Epilepsia refere-se a uma desordem da função cerebral caracterizada pela ocorrência periódica e repentina de convulsões, que são transientes alterações de comportamento devido a uma descarga desordenada, sincronizada e rítmica dos neurônios cerebrais. Cerca de 1% da população mundial apresenta epilepsia, sendo que muitas pessoas são refratárias aos tratamentos convencionais, sofrendo de epilepsia não controlada. Gama-decanolactona é um composto monoterpênico que tem demonstrado atividade em alguns modelos animais. Trabalhos anteriores revelaram um efeito dose-dependente no sistema nervoso central, incluindo atividade hipnótica, anticonvulsivante e hipotérmica. Através de ensaios neuroquímicos gama-decanolactona mostrou-se capaz de antagonizar o binding de glutamato em córtex cerebral de ratos. Objetivos: O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos de gama-decanolactona no modelo de kindling induzido por pentilenotetrazol (PTZ) e seus efeitos genotóxicos em camundongos. Materiais e métodos: Camundongos SR-1, machos (25-30g, n=10-11) foram utilizados. No primeiro protocolo de kindling os animais receberam uma dose subconvulsivante de PTZ 60 mg/kg (s.c), a cada três dias, em um total de seis tratamentos. Apenas no último dia de tratamento os animais, divididos em cinco grupos, receberam (i.p) gama-decanolactona 0,1 e 0,3 g/kg, tween 10% (veiculo), fenobarbital 10mg/kg e salina 0,9%, 30min antes da administração de PTZ. No segundo protocolo os animais, receberam (i.p) gamma-decanolactona 0,1 e 0,3 g/kg, tween 10% (veiculo), fenobarbital 10mg/kg e salina, 30min antes de cada administração de PTZ, a cada três dias, em um total de seis tratamentos. Após a administração de PTZ os animais eram observados em caixas de acrílico durante 30min. Após os testes de kindling os animais foram sacrificados e tecido cerebral foi coletado para a realização do ensaio cometa, para verificação de atividade genotóxica. Resultados e Discussão: Gama-decanolactona 0,3g/kg e fenobarbital 10mg/kg, mas não gama-decanolactona 0,1g/kg e tween, foram capazes de bloquear as convulsões induzidas por PTZ, segundo o protocolo 1 (p < 0,01; Fisher). Ainda, nos grupos de animais que receberam gama-decanolactona 0,3g/kg e fenobarbital 10mg/kg a indução do kindling por PTZ foi bloqueada, segundo protocolo 2 (p < 0,01; Fisher). No ensaio cometa, após o primeiro e segundo protocolo, fenobarbital 10mg/kg e gama-decanolactona 0,3g/kg demonstraram uma redução de danos no DNA no tecido cerebral (p < 0,001; ANOVA, Tukey´s test), no primeiro protocolo gama-decanolactona 0,1g/kg também demonstrou redução nos danos no DNA (p < 0,001; ANOVA, Tukey´s test) em comparação com o grupo tween. Este estudo claramente demonstrou que gama-decanolactona, na dose mais alta testada, foi capaz de bloquear as convulsões induzidas por PTZ e também a indução do processo de kindling de forma similar ao fenobarbital, apresentando efeito anticonvulsivante e antiepileptogênico. Gama-decanolactona demonstrou um efeito neuroprotetor no teste do cometa, sugerindo que esse efeito esteja relacionado com sua atividade anticonvulsivante e antiepileptogênica. Apoio Financeiro: ULBRA

02.029 INFLUÊNCIA DO TREINAMENTO FÍSICO EM ESTEIRA NA DENSIDADE DE RECEPTORES B2 PARA BRADICININA, NO BULBO, MEDULA ESPINHAL E ARTÉRIA AORTA DE RATOS ESPONTANEAMENTE HIPERTENSOS (SHR). Caetano, A. L.1; Rotulo, C. C.1; Bittencourt, M. F. Q. P.1; Araújo, M. S.2; Viel, T. A.3; Buck, H. S.1 - 1FCMSCSP - Ciências Fisiológicas; 2UNIFESP - EPM - Bioquímica; 3EACH - USP - Fundamentos Biológicos Introdução: A microinjeção do peptídeo bradicinina (BK) no núcleo do trato solitário medial (NTSm), no núcleo paratrigeminal (Pa5) ou na região torácica da medula espinhal (TSC) causa aumento na pressão arterial de ratos. Em SHR este efeito está significantemente aumentado. Foi observado que o exercício físico regular reduz a pressão arterial e aumenta a sensibilidade do barorreflexo em ratos SHR e em humanos. O objetivo desse estudo foi quantificar e localizar anatomicamente os sítios de ligação para receptores B2 no bulbo, TSC e artéria aorta (AA) de ratos SHR treinados (SHRt) e Wistar Kyoto treinados (WKYt), comparando os resultados obtidos com controles sedentários, para avaliarmos o envolvimento do receptor B2 na redução da pressão arterial média (PAM) após treinamento físico. Métodos e Resultados: Os ratos, após serem adaptados à esteira ergométrica, foram submetidos ao teste de esforço físico para determinação do protocolo de treinamento e distribuídos aleatoriamente nos grupos “treinados” e “sedentários”. O treinamento foi realizado 5 dias por semana durante 11 semanas. A PAM de cada animal foi aferida semanalmente por via indireta. Na décima primeira semana de treinamento foi observada uma diminuição significativa da PAM (20,4%, p < 0,05) dos SHRt, em comparação com os SHR sedentários (PAM = 118 mmHg). A PAM dos WKYt (82 mmHg) não diferiu da PAM dos WKY sedentários (81 mmHg). Ao final do treinamento foram obtidos, por congelação, cortes transversais seriados e não fixados, do bulbo, TSC e AA de todos os animais. A radioautografia “in vitro” para receptores B2 ([125I]-Hoe-140, 200 pM, 90 min, 25°C) mostrou ligações específicas no Pa5 > NTSm e área postrema > ao redor do canal central (CC) > núcleo espinhal do trigêmio (Sp5) > lâmina 1 TSC > AA > lâmina 2 TSC > lâmina 3 TSC. As ligações específicas variaram de 0,91±0,31 a 0,10±0,06 fmols/mg de proteína nos SHR sedentários e de 0,82±0,18 a 0,10±0,07 fmols/mg de proteína nos WKY sedentários. Nos SHRt e WKYt foram observadas, respectivamente, diminuições de 54% e 26% das ligações específicas no NTSm. Também foi observado aumento de 25% no Sp5 e de 80% no CC dos SHRt (todos para p < 0,05). Conclusão: O exercício físico regular ocasionou uma redução na densidade de receptores B2 na região média do NTS dos animais treinados. Esta região está diretamente relacionada ao mecanismo do barorreflexo. Essa redução dos sítios de ligação pode estar relacionada com a significativa diminuição da PAM nos SHRt. Apesar de também termos observado uma redução nos sítios de ligação dos WKYt, a mesma foi de menor intensidade, o que pode explicar a ausência de diferença entre a PAM dos WKYt versus sedentários. Esses resultados fornecem subsídios anatômicos e farmacológicos para novos experimentos. Apoio financeiro: Fundo de Amparo a Pesquisa na FCMSCSP (FAP-FCM) e CAPES.

02.030 DIETA HIPERCALÓRICA (DIETA DE CAFETERIA) PROMOVE DÉFICIT DE MEMÓRIA E DEPRESSÃO EM RATOS. Albuquerque, M. S.1; Galhardoni, R.1; Gesseff, A.1; Oyama, L. M.2; Santos Junior, J. G. dos3; Cisternas, J. R.3; Buck, H. S.3; Viel, T. A.1 - 1EACH - USP - Fundamentos Biológicos; 2UNIFESP - EPM - Ciências da Saúde; 3FCMSCSP - Ciências Fisiológicas Introdução: A cetoacidose diabética é uma complicação potencialmente fatal da Diabetes mellitos e é caracterizada por hiperglicemia, aumento da produção de corpos cetônicos e acidose metabólica. Uma das conseqüências dessas alterações é a modificação de funções do sistema nervoso central levando à perda cognitiva, confusão mental e depressão. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito das alterações metabólicas provocadas pela dieta de cafeteria na memória e no humor de ratos. Métodos e Resultados: Após o desmame, ratos Wistar (100-150 g, 1 mês de idade) foram alimentados com dieta hipercalórica que consistiu de ração comercial acrescida de chocolate ao leite, bolacha de amido de milho e amendoim torrado nas proporções 3:2:1:2. Os ratos controles foram alimentados com ração comercial. Após 30 dias de tratamento os animais apresentaram aumento significativo na concentração plasmática de glicose (104,2±2,7 mg/dL, n = 9, P<0,05) em comparação com os animais controles (96,5±1,4 mg/dL, n = 10). Após 60 dias de tratamento os animais foram submetidos aos seguintes testes comportamentais, de acordo com a ordem a seguir: actômetro, teste do nado forçado e esquiva inibitória. Os animais submetidos ao tratamento com dieta de cafeteria apresentaram um aumento significativo do tempo de imobilidade (118,5±10,0 seg, n = 20, P<0,05) em relação aos ratos controles (77,5±15,2 seg). Esse comportamento não foi devido à redução da atividade motora, uma vez que o número de eventos relacionados à locomoção total ou ao comportamento de levantar, medidos em actômetro, não diferiram dos animais controles (678,6±71,3 e 170,1±31,7 eventos, respectivamente). No teste da esquiva inibitória (0,8 mV, 2,0 seg, tempo máximo de 300 seg), os animais do grupo controle apresentaram aumento significativo do tempo de latência ao choque (300 seg [300, 300], P<0,05), 24 horas após o dia do treino (39 seg [24,52]). Por outro lado, os animais submetidos à dieta de cafeteria não apresentaram aumento significativo do tempo de latência ao choque no dia do teste (300 seg [17,300]), comparativamente ao dia do treino (21 seg [14,39]). Conclusões: Os resultados mostraram que o tratamento com dieta hipercalórica por 60 dias produziu aumento da glicemia e do tempo de imobilidade no teste do nado forçado, sem alterar a atividade motora dos ratos. Da mesma forma, o tratamento reduziu a consolidação da memória de longa duração nesses animais. Essas observações sugerem que a dieta de cafeteria induz um estado depressivo e prejudica a consolidação da memória. Apoio Financeiro: CNPq, FAP-FCMSCSP

02.031 AVALIAÇÃO DO MECANISMO DE AÇÃO ANTIDEPRESSIVO DA RIPARINA I (RIPI) EM CAMUNDONGOS Melo, R. A.1; Sousa, F. C. F.1; Vasconcelos, P. F.1; Melo, T. V.1; Silva, M. I. G.1; Barbosa-Filho, J. M.2; Luz, P. B.1; Araujo, F. L. O.1 - 1UFC - Fisiologia e Farmacologia; 2UFPB - Tecnologia Farmacêutica A ripI foi isolada da fruta de Aniba riparia e apresenta comprovada atividade antimicrobiana, ansiolítica e antidepressiva. Este trabalho tem como intuito observar o envolvimento do sistema dopaminérgico no mecanismo de ação antidepressivo da ripI no teste do nado forçado. Camundongos Swiss machos (20-25g) foram tratados com ripI (25 e 50 mg/kg; vo) e veículo (AD). Imipramina (IMP; 10mg/kg) e bupropiona (BUP; 30mg/kg) foram usados como padrões positivos. Para a elucidação do mecanismo de ação, foram usados os antagonistas SCH23390 (SCH; 15μg/kg) e sulpirida (SPD; 50mg/kg), 30 minutos antes da administração de ripI 50 mg/kg ou AD, v.o. Após 60 minutos, os animais foram submetidos ao teste. Os resultados são apresentados como média±erro padrão (n). O parâmetro avaliado no nado forçado foi o tempo de imobilidade (TI) (s) por 5 minutos. Os resultados mostraram que a ripI diminuiu esse parâmetro [ripI-50: 50,33±5,15 (9)] comparando com o controle [102,5±4,74 (10)] e, que, tanto o grupo [SCH-15 + ripI-50: 157,3±18,50 (7)] como o grupo [SPD-50 + ripI-50: 128,2±8,39 (12)] reverteram este efeito da ripI-50. Assim, os resultados mostraram que o efeito antidepressivo da ripI deve-se, provavelmente, a sua interação com os receptores dopaminérgicos D1 e D2. Apoio Financeiro: CAPES e CNPQ

02.032 POSSÍVEL MECANISMO DE AÇÃO ANTIDEPRESSIVO DA RIPARINA III (RIPIII) EM CAMUNDONGOS Melo, R. A.1; Vasconcelos, P. F.1; Araujo, F. L. O.1; Melo, T. V.1; Barbosa-Filho, J. M.2; Luz, P. B.1; Silva, M. I. G.1; Sousa, F. C. F.1 - 1UFC - Fisiologia e Farmacologia; 2UFPB - Tecnologia Farmacêutica A ripIII foi isolada da fruta de Aniba riparia e apresenta comprovada ação antimicrobiana, espasmolítica, assim como ansiolítica e antidepressiva. Este trabalho tem como intuito observar o envolvimento do sistema dopaminérgico no mecanismo de ação antidepressivo da ripIII no teste do nado forçado. Camundongos Swiss machos (20-25g) foram tratados com ripIII (25 e 50 mg/kg; vo) e veículo (AD). Imipramina (IMP; 10mg/kg) e bupropiona (BUP; 30mg/kg) foram usados como padrões positivos. Para a elucidação do mecanismo de ação, foram usados os antagonistas SCH23390 (SCH; 15μg/kg) e sulpirida (SPD; 50mg/kg), 30 minutos antes da administração de ripIII 50 mg/kg ou AD, v.o. Após 60 minutos, os animais foram submetidos ao teste. Os resultados são apresentados como média±erro padrão (n). O parâmetro avaliado no nado forçado foi o tempo de imobilidade (TI) (s) por 5 minutos. Os resultados mostraram que a ripIII diminuiu esse parâmetro [ripIII-25: 50,50±7,89 (14); ripIII-50: 53,47±5,79 (15)] comparando com o controle [103,80±6,66 (20). O grupo [SCH-15 + ripIII-50: 56,29±8,11 (7)] não reverteu o efeito da ripIII-50, enquanto o grupo [SPD-50 + ripIII-50: 125,70±13,73 (9)] foi capaz de reverter o seu efeito. Os resultados mostraram que o efeito antidepressivo da ripIII deve-se, provavelmente, a sua ligação com os receptores dopaminérgicos tipo D2. Apoio Financeiro: CAPES E CNPQ

02.033 NEUROPROTECTIVE EFFECT ON BRAIN INJURY BY NEUROTOXINS FROM THE SPIDER Phoneutria nigriventer Lima, E. G.1; Pinheiro, A. C.1; Gomez, R. S.2; Massensini, A. R.3; Cordeiro, M. N.4; Richardson, M.4; Romano-Silva, M. A.1; Prado, M. A. M.1; Marco, L. A. C. de1; Gomez, M. V.1 - 1UFMG - Farmacologia; 2Hospital Madre Tereza - Neurologia; 3UFMG - Fisiologia e Biofísica; 4FUNED - Farmacologia Introduction: The role of calcium channels blockers in ischemic condition has been well documented. The PhTx3 neurotoxic fraction of the spider Phoneutria nigriventer venom is a broad-spectrum calcium channel blocker that inhibits glutamate release, calcium uptake and also glutamate uptake in synaptosomes. Material and Methods/Results: In the present study we describe the effect of PhTx3 (1.0 µg/ml), ω-conotoxin GVIA (1.0 µmol/L) and ω-conotoxin MVIIC (100 nmol/L) on neuroprotection of hippocampal slices and SN56 cells subjected to ischemia by oxygen deprivation and low glucose insult (ODLG);the slices were placed on nylon mesh platforms in a covered incubatin chamber(25 mL) 95% N2/5% CO2 bubbled ACSF with 4 mmol/L glucose for 10 min at 36.5 C in the presence or absence of the test toxins.After the insult, cell viability in the slices and SN56 cells was assessed by confocal microscopy and epifluorescence, using live/dead kit containing calcein-AM and ethidium homodimer. During the staining procedure the slices were protected from light.Viable cells show green fluorescence of calcein and dead cells were indicated by the red fluorescence of the ethidium homodimer.Confocal images of CA1 region of the rat hippocampal slices subjected to ischemia insult and treated with ω-conotoxin GVIA, ω-conotoxin MVIIC and PhTx3 showed a percentage of dead cells of 68, 54 and 18, respectively. The SN56 cells subjected to ischemia were almost completely protected from damage by PhTx3 while with ω-conotoxin GVIA or ω-conotoxin MVIIC the cell protection was only partial. Discussion: Thus, PhTx3 provided robust ischemic neuroprotection showing potential as a novel class of agents that targets multiple components and exerts neuroprotection in in vitro model of brain ischemia. Supported by: CNPq, Pronex

02.034 INHIBITION OF NITRIC OXIDE SYNTHASE (NOS) ATTENUATES L-DOPA-INDUCED DYSKINESIA IN A RAT MODEL OF PARKINSON’S DISEASE. Padovan, F. E. N.1; Echeverry, M. B.1; Tumas, V.2; Del Bel, E. A.1 - 1FORP - USP - Morfologia, Estomatologia e Fisiologia; 2FMRP - USP - Neurologia, Psiquiatria e Psicologia Médica Introduction: Dopamine denervated rats can exhibit behavioral and cellular signs of dyskinesia when they are treated with l-DOPA. Dyskinesia (abnormal involuntary movements) is a common complication of l-DOPA pharmacotherapy in humans with Parkinson´s disease. It is thought to depend on abnormal cell signaling in the basal ganglia. There are evidences that nitric oxide plays a role in the neurotransmitter balance within the basal ganglia and in the pathology of Parkinson’s disease. Objectives: In this study, we have examined: i-) the pharmacological profile of l-DOPA-induced abnormal involuntary movements (AIMs) and rotational behavior; ii-) the effects of nitric oxide synthase (NOS) inhibitor NG-nitro-L-arginine (L-NOARG) on this movements; iii-) the expression of NOS on homogenate of intact and denervated striatum from naive, 6-hydroxydopamine (6OHDA) lesioned rats, which received (dyskinetics) or not l-DOPA chronic treatment. Methods and Results: Male Wistar rats (250g) received unilateral microinjections of either 6-OHDA or saline in the right medial forebrain bundle. Twenty days after surgical procedure, parkinsonian rats were treated chronically with daily doses of l-DOPA (100 mg/kg, oral) during 15 days. During the treatement, rats developed AIMs affecting the head, trunk and forelimb (axial, limb, orofacial and locomotive AIMs) and rotational behavior on the side contralateral to the lesion. The severity of l-DOPA-induced AIMs and rotational behavior was significantly reduced when L-NOARG (50 mg/kg i.p.) was administered 30 min prior l-DOPA (axial: non significant; limb: -39±13%; orofacial: -44±20%; locomotive: -59±13%; rotational behavior: -52±12%; P<0,05). A group of 6-OHDA and saline rats that did not receive l-DOPA was used as control. One day after the last test rats were anesthetized decapitated and the brains immediately removed. Ipsi- and contralateral striatum from individual animals were quickly isolated. Western blots analysis showed an increase of NOS expression in intact and denervated striatum of 6-OHDA-lesioned rats and 6-OHDA-lesioned rats chronically-treated with l-DOPA when compared with saline animals (P<0,05). Conclusions: These results strongly implicate nitric oxide system in 6-OHDA-lesioned rats and 6-OHDA-lesioned rats chronically-treated with l-DOPA. The mechanisms of inhibitors of neuronal NOS interfering with dykinesia needs to be further investigated. Supported by: FAPESP, CNPq, CAPES

02.035 COMBINATION OF TEMOZOLOMIDE AND RC-3095 IN IN VIVO MODELS FOR GLIOMAS’ TREATMENT Cechim, G.1; Oliveira, M.2; Braganhol, E.3; Battastini, A. M. O.3; Lenz, G.1; Roesler, R.2 - 1UFRGS - Biofísica; 2UFRGS - Farmacologia; 3UFRGS - Bioquímica INTRODUCTION: Brain tumors are the third most common cause of death by cancer in adults and the second in children (20 thousand cases per year –USA), and despite several treatments, gliomas – the most common type of brain tumor – recur rapidly due to its high level of invasion. Those characteristic found in human gliomas are also noticed on animal models. The purpose of this work is to evaluate the synergism between temozolomide (TMZ), a DNA alkylanting agent and one of the first treatment choices for gliomas, with RC-3095, a selective antagonist of GRPR (Gastrin Release Peptide Receptor). This receptor was shown to be over-expressed in several tumors, including gliomas. METHODS and RESULTS: According to "Comitê de Ética do HCPA", we implanted 1x106 rat C6 glioma cells into the striatum of Wistar rats. After one week of implantation, animals received IP injection with the drugs shown in Table 1 for one week. Animals were sacrificed, brains were fixed with paraformaldehyde and analyzed by Hematoxilin-Eosin. Table 1. Glioma tumor size. Treatment Tumor size (mm2)±SEM (n) Sol. Salina 8.8 ±1.6 (8) RC-3095 0.1mg/kg 3.7±0.8 (7) RC-3095 0.3mg/kg 1.8±0.5 (8) RC-3095 1.0mg/kg 4.2±1.1 (8) TMZ (5mg/kg) 2.6±0.6 (8) TMZ + RC-3095 0.3mg/kg 0.7±0.6 (6) The control group showed the biggest tumors after two weeks implantation. RC-3095 reduced the tumor size, in a U-shaped dose response, with the strongest effect seen with 0.3mg/kg. The combined therapy – TMZ and RC-3095 0.3mg/kg – produced a robust reduction in the tumor size, greater than with either alone. DISCUSSION: There are evidences in the literature of "U" shaped dose response curves for GRP receptor antagonists. This may be due to inespecific targets being affected by high concentrations. Therefore it is very important to experimentally determine the optimized concentrations for the reduction in cell proliferation. The group treated with TMZ and RC-3095 0.3 mg/kg had the best results among all experimental groups in terms of tumor area reduction. This result indicates that these drugs present different mechanisms of action in the restraint of glioma growth. Although indicating that the combination of TMZ with RC-3095 is favorable in reducing tumor growth, it is not clear whether they acts additively or synergistically. Supported by: CNPq, PROPESQ, PIBIC/CNPq

02.036 SPINAL CHEMICAL MEDIATION OF STIMULATION-PRODUCED ANTINOCICEPTION OF THE PEDUNCULOPONTINE TEGMENTAL NUCLEUS IN RATS Dias Q. M1; Reis, G. M.1; Prado, W. A.1 - 1FMRP - USP - Farmacologia INTRODUCTION: The electrical or chemical stimulation of the pedunculopontine tegmental nucleus (PPTg) produces intense and long-lasting antinociceptive effect in several algesimetrics tests. Neuroanatomic and pharmacologic evidences indicate that the stimulation-produced antinociception (SPA) from the PPTg results from the release of neurotransmitters in the spinal cord. However, there are scarce direct spinals projections from the PPTg, thus suggesting that this SPA probably results from the activation of intermediary stations involved in adrenergics and serotoninergics bulbo spinal systems. METHODS: The present study evaluates the spinal mediation of the antinociception produced by electrical stimulation (35µA rms, 60 Hz) of the PPTg in the tail flick test in rats. The animals received intrathecal antagonists of the main neutransmissors possibly involved in the SPA from the PPTg, i.e., dopamine, noradrenaline, acetylcholine, serotonine, endogenous opioids and GABA. RESULTS: The SPA from PPTg was blocked by phenoxibenzamine (20µg/5µL), α-adrenergic antagonist, reduced in a dose-dependent fashion by WB 4101 (20µg/5µL), α1-adrenergic antagonist, or atropine (20µg/5µL and 30µg/5µL), muscarinic colinergic antagonist and prolonged by phaclofen (20µg/5µL), GABAB antagonist. The pre-treatement of the animals with idazoxan (50µg/5µL), α2-adrenergic antagonist, methysergide (30µg/5µL), serotoninergic antagonist, or naloxone (20µg/5µL), opioid antagonist, did not hinder the attainment of the SPA from the PPTg, but significantly reduced its duration. On the other hand the pre-treatment of the animals with haloperidol (25µg/5µL), dopaminergic antagonist, propranolol (20µg/5µL), β-adrenergic antagonist, mecamylamina (40µg/5µL), colinergic nicotinic antagonist, or bicuculline (0,3µg/5µL), GABAA antagonist, did not change the SPA from the PPTg. The intrathecal WB 4101 (20µg/5µL), idazoxan (50µg/5µL) or bicuculline (0,3µg/5µL) reduced the nociceptive threshold, but the effect did not reach statistic relevance when compared to the control group (saIine sham-stimulated). DISCUSSION: These results show that the SPA from the PPTg depends on the integrity of spinal α1-noradrenergic and muscarinic colinergic mediation. Moreover, the GABA released in the spinal cord, via GABAB receptors, modulates negatively the SPA from the PPTg. The duration, but not the attainement of the effect, depends on the integrity of the α2-noradrenergic, serotoninergic and opioidergic spinal modulation. Dopaminergic, β-adrenergic, colinergic nicotinic and GABAA GABAergic, are not involved in the SPA from the PPTg. Supported by: FAPESP, FAEPA, CAPES

02.037 EFEITO DE INIBIDOR DA SÍNTESE DE ÓXIDO NÍTRICO E DA AMANTADINA NSOBRE OS MOVIMENTOS INVOLUNTÁRIOS ANORMAIS INDUZIDOS POR L-DOPA Romano, A.1; Padovan, F. E. N.1; Tumas, V.2; Del Bel, E. A.1 - 1FORP - USP - Morfologia, Estomatologia e Fisiologia; 2FMRP - USP - Neurologia, Psicologia e Psiquiatria Médica Introdução: A perda progressiva dos neurônios dopaminéricos nigroestriatais é uma das características da doença de Parkinson (DP). O tratamento clínico utiliza a l-DOPA, porém, o tratamento prolongado induz complicações motoras ou discinesias, caracterizada por movimentos involuntários anormais (AIMs). Resultados preliminares do grupo sugerem que a inibição da enzima sintase do óxido nítrico (NOS) diminui a discinesia induzida pelo tratamento crônico com a l-DOPA. Objetivos: Analisar o comportamento rotatório e AIMs induzidos pelo tratamento crônico com l-DOPA; Investigar os efeitos do inibidor seletivo para a NOS neuronal 7Nitroindazol (7NI) e da amantadina (droga utilizada para o tratamento de pacientes parkinsonianos com discinesia) sobre as discinesias induzidas em ratos com lesão unilateral da via nigroestriatal. Métodos: Ratos machos Wistar (n=6/grupo;±250 g) foram submetidos à cirurgia esterotáxica e receberam microinjeção de 6-OHDA ou Salina no feixe prosencefálico medial (via nigroestriatal). Vinte e um dias após a análise da intensidade da lesão por meio da aplicação de apomorfina, os animais foram tratados com doses diárias de l-DOPA (30mg/kg) por 5 semanas. Durante o tratamento foi observado o desenvolvimento de AIMs (axial, orofacial, membro anterior e locomoção) e comportamento rotatório contralateral à lesão. Uma vez estabelecida a discinesia, foram testados os efeitos da administração de amantadina e de 7NI previamente à administração de L-DOPA, sobre os movimentos involuntários e o comportamento rotatório. Resultados: A amantadina (40mg/kg) induziu diminuição significativa da discinesia orofacial (-48,61±10,63%) e discinesia do membro anterior (-44,36±16,34%) (Test t, P<0,05). O 7NI apresentou redução significativa com as doses de 30 e 60mg/kg para AIMs e comportamento rotatório (-100±0%; Test t, P<0,05). Conclusão: O inibidor seletivo para a NOS neuronal reduziu os AIMS e comportamento rotatório, de forma mais efetiva que a amantadina, composto atualmente utilizado na clínica. Esses achados reforçam a idéia de que o óxido nítrico esteja envolvido com patologias neurodegenerativas e aponta para uma possível utilização de inibidores da NOS para tratamento das discinesias. Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq, CAPES

02.038 NOVO DERIVADO HIDANTOÍNICO (LPSF/MS) COMO POSSÍVEL CANDIDATO A FÁRMACO ANTICONVULSIVANTE Albuquerque, B. M. F.1; Silva, M. M.1; Carvalho, M. S.1; Silva, T. G.1; Lima, M. C. A.1; Galdino, S. L.1; Pitta, I. R.1 - 1UFPE - Antibióticos Introdução: Epilepsia tem sido reconhecida como uma desordem neurológica, afetando uma larga seção de pessoas de ambos os sexos pelo mundo. A cada ano aproximadamente 2,500.000 novos casos são estimados. Muitos pacientes têm crises que são resistentes às terapias médicas disponíveis. Novos fármacos, tais como flupirtina, topiramato, zonisamida, e vagabatrina têm surgido como promissores anticonvulsivantes. A respeito desses novos fármacos, muitos ainda tem problemas de neurotoxicidade, sintomas de depressão e problemas relacionados ao SNC. Entretanto, isso é o alvo de pesquisas de novas entidades químicas para o tratamento da epilepsia (Nadeem Siddiqui, Bioorg.& Med. Chem. Let.; v.17; p.255; 2007). O anel imidazolidínico, foco de nosso estudo, é referido em inúmeros trabalhos como possuidor de diversas atividades farmacológicas, dentre elas podemos citar: anticonvulsivante, antiinflamatória, antihipertensiva, antimicrobiana, dentre outras. A fenitoína, um importante fármaco anticonvulsivante, que contém em sua estrutura o anel imidazolidínico, é eficaz em vários tipo de crises epilépticas, no tratamento das convulsões generalizadas, crises psicomotoras. Então muitos análogos da hidantoína foram sintetizados e mostraram ter atividade anticonvulsivante (Charles P. Taylor, Epilepsy Res; xxx-xxx; p.02; 2006). Como proposta do Laboratório de Síntese e Planejamento de Fármacos da UFPE, foi sintetizado um novo derivado da série 5-benzilideno-3-benzil-imidazolidina-2,4-diona, derivado LPSF/MS, e foi avaliada a atividade anticonvulsivante em camundongos por meio de indução por estricnina. Métodos: Para tanto, foi sintetizado o composto 3-benzil-5-benzilideno-imidazolidina-2,4-diona (LPSF/MS) e avaliada a atividade anticonvulsivante da seguinte forma: o teste anticonvulsivante seguiu o método de indução por quimioconvulsivante administrando 3,28 mg/kg de sulfato de estricnina hidratado por via intraperitoneal. O derivado LPSF/MS foi administrado na dose de 100 mg/kg de peso corporal 1 hora antes da indução das convulsões por sulfato de estricnina hidratado. O efeito protetor dos compostos testados foi observado e comparado ao grupo padrão, que utilizou a fenitoína na dose de 100mg/kg. Após administração do sulfato de estricnina hidratado, os animais foram acondicionados em superfície plana, com livre movimentação, para observação do comportamento e possíveis convulsões. Resultados: A avaliação da atividade anticonvulsivante do derivado hidantoínico (LPSF/MS) foi determinada pelo tempo de proteção antes da primeira crise que foi de 170,8 s, o que representou um tempo maior de proteção para a primeira crise quando comparado ao efeito da fenitoína que foi de 127,2 s. Discussão: O derivado (LPSF/MS) demonstrou maior tempo de proteção para primeira crise visto que os parâmetros eletrônicos e lipofílicos são importantes na atividade anticonvulsivante. Tal estudo demonstrou este derivado como promissor agente anticonvulsivante o que o direciona para um screning utilizando outros métodos de indução de convulsões já utilizados na pesquisa pré-clínica. Apoio Financeiro: CNPq/CAPES-PIBIC/UFPE

02.039 TX3-4: A TOXIN FROM THE VENOM OF THE SPIDER Phoneutria nigriventer BLOCKS CALCIUM CHANNELS ASSOCIATED WITH EXOCYTOSIS Junior, C. J. C.1; De Souza, A. H.1; Gonçalves, J. M.1; Guatimosim, C.2; Gomez, M. V.1 - 1Universidade Federal de Minas Gerais - Farmacologia Bioquímica e Molecular; 2Universidade Federal de Minas Gerais - Morfologia Introduction: Voltage-sensitive calcium channels (VSCC) have a key role in regulating diverse cellular and physiological functions including contraction, secretion and neuronal communication. The opening of VSCC may produce a localized rise in Ca2+ and exocytosis of neurotransmitters. Thus, calcium permeates nerve endings through VSCC triggering exocytosis of synaptic vesicles docked at the active zones. We have previously shown that Tx3-4 a toxin from the brazilian spider Phoneutria nigriventer blocks the exocytosis of synaptic vesicles with great potency. In this work we aim to investigate the effect of this toxin on [Ca2+]i incresase induced by KCl depolarization in isolated mammalian nerve endings (synaptosomes) and also to compare its action with the effect of the well known calcium antagonists ω-CgTx-GVIA, ω-CgTx-MVIIC and ω-AgaTx-IVA. Methods: Cortical brain nerve endings (synaptosomes) were isolated by centrifugating brain homogenates in a discontinuous gradient density (Percoll) Dunkley, 1986). After that, synaptosomes were incubated for one hour with the fluorescent calcium chelator Fura2-AM for the measurements of the fluorescent signal. Synaptosomes loaded with Fura2-AM were depolarized with 30mM KCl 30 mM in the presence/absence of Tx3-4 and other toxins calcium antagonists, added 60 s before the depolarizing stimulus. Results: Depolarization with 30mM KCl induced an increase (from 300 nM to aprox. 540 nM) on the average [Ca2+]i measured with Fura2 in rat cortical synaptosomes. The toxin Tx3-4 incubated 60s before KCl depolarization decreased by 53% the [Ca2+]i increase, in a dose-dependent way. The IC50 for the Tx3-4 inhibition of KCl-induced calcium increase was 1,4nM and the maximum effect was obtained with the same toxin at 5 nM. In order to test wether Tx3-4 targeted channels overlap with known neuronal classes of calcium channels such as those blocked by ω-CgTx-GVIA, ω-CgTx-MVIIC and ω-AgaTx-IVA, we compared the inhibitory effect of these toxins with the inhibitory effect of Tx3-4. For this purpose GVIA (1 μM), MVIIC (2,5 μM) and AgaIVA (30 nM) were tested alone or jointly with Tx3-4. GVIA, MVIIC and AgaIVA decreased by 22, 47 and 24%, respectively, the [Ca2+]i increase induced by KCl. GVIA+Tx3-4, MVIIC + Tx3-4 and AgaIVA+Tx3-4 decreased by 51, 47 and 66%, respectively, the [Ca2+]i increase induced by KCl. The results show an addictive effect for AgaIVA +Tx3-4 compared to Tx3-4 alone. Discussion: Taken together these results confirm the competence of Tx3-4 on blocking calcium influx in nerve endings induced by KCl, a event strictly related to voltage sensitive calcium channels (VSCC). This action do not overlap with the blockage of [Ca2+]i increase caused by the conotoxin AgaIVA, a specific blocker for P-Type calcium channels, suggesting that these two toxins have different sites of action. Supported by: FAPEMIG, CNPq, Instituto Milênio.

02.040 INTRATHECAL MICROINJECTION OF NITRIC OXIDE DONOR NOC12 IN RATS AFTER SPINAL CORD INJURY: EFFECT ON SENSORIMOTOR FUNCTION Garcez, V. F.1; Del Bel, E. A.2 - 1FMRP - USP - Fisiologia; 2FORP - USP - Morfologia, Estomatologia e Fisiologia Introduction: Overproduction of Nitric Oxide (NO) after spinal cord injury could increase the processes of secondary lesion and tissue destruction. This study evaluate whether microinjection of a NO donor 3-ethyl-3-(ethylaminoethyl)-1-hydroxy-2-oxo-1-triazene (NOC12) after spinal canal narrowing injury and decompression 6 hours later results in impairment on the sensorimotor recovery. Methods: Adult male Wistar rats (270-300g; n=5-13/group) were divided in 3 groups: a control laminectomy (T10) group, a lesion group in which spacer of 35% was placed into the spinal canal after laminectomy and a decompression group where the spacer was removed 6 hours after insertion. Each group was divided in 3 sub-groups that received intrathecal injection (5μl/ 1min.) of vehicle, or NOC12 30nM or 300nM, one day after surgery. Locomotor recovery was monitored by Basso, Beattie, Bresnahan (BBB) Locomotor Rating Scale (Ohio State University, Columbus, OH). This scale have 21 points (‘0’ indicate no limb movement and ‘21‘ perfect ability to walk). The sensorial function was evaluated through tail flick test (withdrawal latency 0-6 sec.). The tests were carried out one day before and 1, 2, 5 and 7 days post-operative (PO). The data was analyzed by MANOVA and ANOVA, followed by Duncan´s test of multiple comparisons. Results: Laminectomy group did present neither motor or sensorial deficit (time effect BBB scale: p=0.534, F(3,10)=0.77; mean±EPM raging from 20.68±0.24 to 21±0.0; Tail flick: p=0.518, F(4,9)=0.87; mean±EPM raging from 2,74±0.08 to 2.92±0.1). Canal narrowing followed by vehicle, NOC12 30nM or 300nM resulted in neurological injury (lesion effect p=0.050, F(2,19)=3.52; p<0.001, F(2,25)=25.58; p<0.001, F(2,21)=9.50; respectively; Duncan, p<0.05 on PO1 to PO7). Motor scores were consistently better with decompression after 6 hours (lesion effect p<0.001, F(2,65)=26.43; mean±EPM: laminectomy 20.88±0.9, compression 12.79±0.7, decompression 16.56±0.5). NOC12 30nM induced significant impairment on motor function in the 35% spinal canal narrowing group on PO2, compared to vehicle (Duncan, p<0.05). In addition, narrowing and decompression plus vehicle compared to laminectomy on PO1 and narrowing plus NOC12 30nM compared to laminectomy plus NOC12 30nM on PO7 presented an increase in the tail flick latency (Duncan, p<0.05). Discussion: These results corroborate with previous one (Dimar JR 2nd, Spine, 24(16)1623,1999) presenting strong evidence that the prognosis for neurological recovery is adversely affected by both canal narrowing and a longer duration of canal narrowing. Spinal cord may benefit from early decompression. Additionally, it appears that exogenous NO worse the prognosis for neurological recovery after spinal cord compression in a dose-dependent manner. Supported by: CAPES, CNPq, FAPESP

02.041 AVALIAÇÃO DO EFEITO NEUROPROTETOR DA PROBENECIDA NA LESÃO NEURAL EXCITOTÓXICA E ISQUÊMICA Elias, M. J. G.1; Alves, S. O.1; Castro, N. G.1 - 1UFRJ - Farmacologia Básica e Clínica - ICB Introdução: Após um insulto isquêmico, a liberação excessiva de glutamato desencadeia uma série de eventos intracelulares levando ao aumento dos níveis de diversas substâncias, algumas contribuindo para a morte e outras para a proteção celular. Os níveis de nucleotídeos cíclicos (NCs) intracelulares variam durante o processo excitotóxico, mas pouco se sabe do seu papel na cascata de neurodegeneração. Estudos anteriores mostraram que o aumento de [AMPc] por forscolina (FK) ou por inibição de fosfodiesterases tem efeito neuroprotetor, enquanto que o estímulo à produção de GMPc com SNAP, um doador de NO, pode ser tóxico ou protetor, dependendo da concentração. A probenecida (PB), um inibidor de transportadores de ânions orgânicos, é capaz de inibir o transporte de NCs. Nosso objetivo foi investigar o potencial terapêutico in vitro da PB como um fármaco neuroprotetor na isquemia cerebral e em doenças neurodegenerativas. Métodos e Resultados: Ensaios de dano induzido por glutamato (DIG) foram realizados com neurônios corticais de rato em cultura de 14-18 dias. O dano celular tardio foi avaliado pela quantidade de enzima desidrogenase láctica (LDH) liberada 4 h após 5 min de exposição ao glutamato 0,5 mM + d-serina 10 microM. A PB apresentou efeito neuroprotetor dependente de concentração, inibindo completamente o DIG quando presente o tempo todo no ensaio. Foi obtido um EC50 de 0,55 mM. Quando coaplicada com MDL-123304A 10 microM, um antagonista de adenilato ciclase, o efeito neuroprotetor da PB tendeu a uma pequena redução, mas não foi revertido. ODQ 10 microM, um antagonista de guanilato ciclase, diminuiu o efeito protetor da PB 1 mM em 30,4% (n=3). Para avaliar a toxicidade direta da PB sozinha, as células foram expostas continuamente ao fármaco, com leitura de LDH após 4 e 24 h de incubação. A 10 mM (maior concentração usada), a PB apresentou uma citotoxicidade de 40,2% após 4 h de incubação e 38,5% após 24 h, em relação ao valor máximo de LDH liberado através da lise celular com Triton X-100. Conclusão: A PB apresentou um grande efeito neuroprotetor na lesão excitotóxica in vitro, em concentrações comumente usadas para inibição de transportadores da família ABC. A dependência dos níveis de NCs no efeito neuroprotetor da PB ainda não foi confirmada nem tampouco descartada, de modo que outras substâncias endógenas podem estar envolvidas. A baixa citotoxicidade, observada em concentrações muito acima do EC50, está de acordo com a pouca evidência de toxicidade no uso clínico em humanos. Apoio Financeiro: CAPES, FAPERJ, CNPq, PRONEX