rhizobium+enumerasi

7/26/2019 rhizobium+enumerasi

1/15

MODUL XII- PERCOBAAN 35

POPULASI MIKROBA DI TANAH : ENUMERASI

I. TUJUAN

1. mengetahui fora mikroba tanah

2. menentukan jumlah bakteri dan jamur dalam sample tanah

II. PRINSIP PERCOBAAN

Tanah mengandung banyak jenis mikroorganisme seperti bakteri,

jamur, protozoa, alga, dan virus. Mikroba pada suatu sampel tanah

ditentukan oleh beberapa aktor seperti kelembapan, pH,

temperatur, kandungan gas oksigen, dan komposisi organik

maupun anorganik tanah. ada per!obaan kali ini akan dilakukan

pengen!eran dan digunakan tiga jenis medium yang mendukung

pertumbuhan jenis mikroba tertentu, agar yeast gly!erol untuk

a!tinomy!etes, agar "abouraud untuk isolasi jamur dan agar nutrisi

untuk bakteri. "elain nutrisi agar, kedua jenis medium yang lain

ditambahkan 1# g $ureomy!in %klortetrasiklin& per mililiter medium

untuk menghambat pertumbuhan bakteri.

III. TEORI DASAR

Pengertin tn!

Tanah subur mengandung lebih dari 100 juta mikroorganisme per gram tanah.

Produktivitas dan daya dukung tanah tergantung ppada aktivitas mikroorganisme

tersebut.Sebagian besar mikroorganisme memiliki peranan yang menguntungkan bagi

pertanian, yaitu berperan dalam menghancurkan limbah organic, recycling hara

tanaman, fiksasi biologis nitrogen, pelarutan fosfat, meransang pertumbuhan,

biokontrol pathogen dan membantu penyerapan unsure hara.Bioteknologi berbasis

mikroorganisme dikembangkan dengan memanfaatkan peranperan penting

mikroorganisme tersebut. Pembagian mikroorganisme !

"olongan aotohtonus! mikroorganisme yang selalu ditemukan dan tidak

dipengaruhi lingkungan.

"olongan #imogenik! kehadirannya diakibatkan pengaruh luar yang baru.


2/15

"olongan Transien ! kehadirannya bersamaan dengan adanya penambahan secara

buatan.

Pengertin Mi"r##rgni$%e &n Pernnn' D(% Tn!

$ikroorganisme umumnya ada yang bersifat baik maupun buruk.

$ikroorganisme yang memba%a dampak buruk tersebut harus dikendalikan

perkembangannya. Sehingga tidak dapat mengganggu makhluk lainnya. Pengendalian

pertumbuhan mikroorganisme dilakukan dengan berbagai cara, pengendalian tersebut

memiliki & tujuan yaitu mencegah penyebaran penyakit dan infeksi, membasmi

mikroorganisme pada inang yang terinfeksi, dan mencegah pembusukan dan

perusakan bahan oleh mikroorganisme. 'engan demikian, maka mikroorganisme

tidak dapat menggagu kalangsungan makhluk hidup lainnya.

$ikroorganisme adalah organisme yang berukuran sangat kecil sehingga tidak

dapat dilihat dengan mata telanjang. $ikroorganisme dapat disebut mikroorganisme

atau jasad renik. Tanah merupakan tempat hidup yang paling ideal bagi bakteri karena

mengandung bahan organic,anorganik dan mineral yang berlimpah.Setiap elemen

tanah memiliki jenis, populasi dan sifat genetic yang berbeda. (eanekaragaman

mikroorganisme pada tanah ! Bakteri, )lgae,$old, Proto*oa, )muba, )ctinomyces

+lagellata, illiata.Tanah yang subur mengandung lebih dari 100 juta mikroorganisme

per gram tanah. Produktivitas dan daya dukung tanah tergantung pada aktivitas

mikroorganisme tersebut. Sebagian besar mikroorganisme tanah memiliki peranan

yang menguntungkan, yaitu berperan dalam menghancurkan limbah organik, siklus

hara tanaman, fiksasi nitrogen, pelarut posfat, merangsang pertumbuhan, biokontrol

patogen, dan membantu penyerapan unsur hara.

-rganisme tanah berperan penting dalam mempercepat penyediaan hara dan juga

sebagai sumber bahan organik tanah. Penambahan bahan organik dalam tanah akanmenyebabkan aktivitas dan populasi mikrobiologi dalam tanah meningkat, terutama

yang berkaitan dengan aktivitas dekomposisi dan mineralisasi bahan organik.

$ikroorganisme tanah sangat nyata perannya dalam hal dekomposisi bahan organik

pada tanaman tingkat tinggi. 'alam proses dekomposisi sisa tumbuhan dihancurkan

atau dirombak menjadi unsur yang dapat digunakan tanaman untuk tumbuh.

Bakteri sangat banyak di tanah karena kemampuannya beradaptasi dan

berkembangbiaknya dengan membelah diri. (etahanan mikroorganisme tanah

terhadap logam berat juga beragam,tergantung mekanisme yang dikandungnya untuk


3/15

menyesuaikan diri terhadap polusi dan tergantung pada kondisi lingkungan tempat

tinggal organisme tersebut tumbuh. (etahanan mikroorganisme terhadap logam berat

bervariasi dalam kelompok mikroorganisme, genus maupun spesies. Pengaruh logam

terhadap mikroorganisme tersebut terlihat pada beberapa daur kehidupannya. Pada

fungi pengaruh pengaruh tersebut terlihat dalam pembentukan miselium, maupun

perkecambahan spora. Pada khamir berupa peningkatan kegiatan lipolitik,

respirasipenghambatan sistein/. Pada bakteri terlihat pada penurunan dan

perpanjangan laju. Pertumbuhan, penundaan perkembangbiakan dan sebagainya.

Berikut kandungan bakteri pada tanah !

Tn! )$ir

&0 200 ribu sel bakteri3gr tanah

Tn! (e%)*ng

&40 400 ribu sel bakteri3gr tanah

Tn! $*+*r

00 juta sel bakteri3gr tanah


4/15

Mi"r#,*n &(% tn!

B"teri

Bakteri dapat dibedakan menjadi dua yaitu autotroph dan heterotroph. )utotroph

yaitu bakteri yang menghasilkan makanannya sendiri dari bahan anorganik, misalnya

melalui proses photosintesis. 5eterotroph yaitu bakteri yang mendapatkan

makanannya dari bahan organik yang telah ada.

Bakteri autotroph bermanfaat karena mempengaruhi sifatsifat tanah. $isalnya

merubah nitrit menjadi nitrat, sulfida menjadi sulfat dsb. 6itrifikasi berpengaruh

terhadap kualitas lingkungan karena oksidasi dari 657 menjadi 6-& yang mudah

larut, dapat menyebabkan pencemmaran nitrat pada air tanah. (onsentrasi nitrat yang

tinggi dalam air dapat mempengaruhi kesehatan manusia. Bakteri heterotroph dalam

tanah dapat dibedakan menjadi bakteri pengikat nitrogen dan bukan pengikat

nitrogen.

*ngi

'apat dibedakan menjadi parasitik, saprohitik, dan simbiotik, dan simbiotik.

Parasitik yang dapat menyebabkan bercak pada tanaman.

Saprophitik yang mendapatkan makanan dari dekomposisi bahan organik

Simbiotik hidup pada akar dimana keduanya terjadi simbiosis mutualisme.

$ycorhi*a 3jamur akar, adalah asosiasi simbiosis mycelia fungi dengan akar tanaman

tertentu. $embantu tanaman induk menyerap unsur hara tertentu.

Atin#%'ete$

)ctinobacteria atau )ctinomyces adalah kelompok bakteri "ram positif dengan

nisbah "3 yang tinggi. Bakteri ini pernah diklasifikasi sebagai fungi jamur, $ycota/

karena ada anggotanya yang membentuk berkasberkas mirip hifa serta menghasilkan

antibiotik. (etika diketahui memiliki sejumlah ciri bakteri ukurannya kecil dan dapat

diserang virus bakteriofag/, kelompok ini pernah dianggap bukan fungi maupun

bakteri. Baru setelah pengujian '6) dimungkinkan, kelompok ini diketahui sebagai

bakteri. (ebanyakan )ctinobacteria ditemukan di tanah. Sebagian yang lain tinggal di

dalam tumbuhan dan he%an, termasuk beberapa patogen seberti $ycobacterium.

8adi, secara taksonomi dan morfologi dapat digolongkan sebagai fungi ataupun

bakteri, tetapi akhirakhir ini diklasifikasikan sebagai bakteri. +ungsi utamanya yaitu


5/15

dalam dekomposisi bahan organik terutama selulosa dan bahan organik lain yang

resisten. (eadaan yang baik untuk perkembangan actinomycetes yaitu banyak tersedia

bahan organik segar, p5 tanah netral sampai agak masam, tanah lembab, tetapi lebih

tahan kekeringan daripada fungi.

$ereka memainkan peranan yang penting dalam dekomposisi materi organik

seperti selulosa dan kitin. )ktivitas ini menambah cadangan hara di dalam tanah dan

merupakan bagian penting dari pembentukan humus. (emampuan )ctinobacteria

untuk hidup di lingkungan bernutrisi rendah dan untuk mengonsumsi lognoselulosa

lignin dan selulosa, *at*at penyusun kayu, biasanya sukar dicerna kebanyakan

bakteri tanah/ menyebabkan )ctinobacteria mendominasi ka%asan bebatuan karst.

Pemberian pupuk kandang yang kaya selulosa akan meningkatkan populasi

)ktinobakteri di tanah. Pemupukan amonium atau nitrat yang terusmenerus menekan

populasi karena )ktinobakteri tidak suka p5 di ba%ah 49 sebaliknya, pengapuran

untuk menaikkan p5 juga menaikkan populasinya.

Peng!it*ngn J*%(! Mi"r##rgni$%e

Setelah masa inkubasi, diamati koloni yang tumbuh pada masingmasing ca%an

petri dan dilakukan penghitungan pada masingmasing pengenceran. Penghitungan

dilakukan berdasarkan jumlah koloni Plate count/, pada penghitungan dengan cara

ini diperlukan beberapa syarat yang harus dipenuhi,

yakni !

1. 8umlah koloni tiap ca%an petri antara &0&00 koloni, jika tidak ada yang

memenuhi syarat maka dipilih koloi yang jumlahnya mendekati &00.

. Tidak ada koloni yang menutup lebih besar dari setengah luas ca%an petri,

koloni tersebut dikenal denganspreader.

&. Perbandingan jumlah bakteri dari hasil pengenceran yang berturutturut antara

pengenceran yang lebih besar dengan pengenceran sebelumnya, jika sama atau lebih

kecil dari hasilnya diratarata, tetapi jika lebih besar dari maka yang dipakai

adalah jumlah mikroorganisme dari hasil pengenceran sebelumnya.

7. 'ari jumlah koloni tiap ca%an petri, jumlah bakteri tiap cc atau gram bahan

ditentukan dengan mengalikan jumlah koloni dengan kebalikan pengencerannya

8utono, et al., 1:;/.


6/15

iriciri koloni bakteri

I/. ALAT DAN

BAHAN

)lat!

1. a%an Petri

. . Batang "elas berbentuk =

:. Beaker glass

Bahan!

1. Sampel Tanah subur

. )gar 6utrisi&. )gar ?east "lycerol

7. )gar Sobouraud

2. )@uades

4. )lkohol :2A

I. HASIL PEN0AMATAN

N#

.

Peng%tn Keterngn


7/15

1 $edia biakan! )gar 6utrisi

aktu Pengamatan! & hari

Pengenceran! 107

8umlah koloni! ;

8umlah bakteri! ; C 1073ml sample



Pengenceran! 102

8umlah koloni! 7

8umlah bakteri! 7C1023ml sample



Pengenceran! 104

8umlah koloni! Tidak terbentuk koloni

8umlah bakteri! Tidak diketauhi

$edia biakan! )gar 6utrisi


Pengenceran! 10;

8umlah koloni! Tidak terbentuk koloni

8umlah bakteri! Tidak diketahui


8/15

5 Pengenceran 10&

8umlah koloni! 1:

$edia biakan! )gar ?east "lycerol

aktu inkubasi! 7; hari

8umlah sel actinomycetes! 1:.0003ml

sample

4 Pengenceran! 107

8umlah koloni! 1&2


8umlah sel actinomycetes! 1.&20.0003ml

sample


Pengenceran! 102

8umlah koloni! >


8umlah sel actinomycetes! >00.0003ml

sample


6 Pengenceran! 104

8umlah koloni!


8umlah sel actinomycetes! .000.0003ml

sample



9/15

7 $edia Biakan! )gar Saboroud


8umlah koloni! 1&:

Pengenceran pada 10

8umlah sel jamur! 1&:00



8umlah koloni!

Pengenceran pada 10&

8umlah sel jamur! .000



8umlah koloni! 17

Pengenceran pada 107

8umlah sel jamur 170.000

12 Sumber +oto! 5asil Pengamatan

kelompok shift rabu siang

$edia Biakan! )gar Saboroud


8umlah koloni! 1

Pengenceran pada 102

8umlah sel jamur 100.0003ml sample


10/15

II. ANALISIS

Pada percobaan kali ini digunakan beberapa medium diantaranya agar yeast

glycerol untuk media pertumbuhan actinomycetes, agar Sabouroud untuk isolasi

jamur dan agar nutrisi untuk bakteri.

)gar nutrisi

)dalah medium umum untuk uji air dan produk dairy. 6) juga digunakan untuk

pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme yang tidak selektif, dalam artian

mikroorganisme heterotrof. $edia ini merupakan media sederhana yang dibuat dari

ekstrak beef, pepton, dan agar. 6) merupakan salah satu media yang umum

digunakan dalam prosedur bakteriologi seperti uji biasa dari air, se%age, produk

pangan, untuk memba%a stok kultur, untuk pertumbuhan sampel pada uji bakteri, dan

untuk mengisolasi organisme dalam kultur murni. Dntuk komposisi nutrien adar

adalah eksrak beef 10 g, pepton 10 g, 6al 2 g, air desitilat 1.000 ml dan 12 g agar3=.

)gar dilarutkan dengan komposisi lain dan disterilisasi dengan autoklaf pada 11E

selama 12 menit. (emudian siapkan %adah sesuai yang dibutuhkan.

)gar Sabourad

)gar Sabouraud adalah jenis agar yang mengandung peptones. peptone adalah

produk hidrolisis protein he%ani atau nabati seperti otot, liver, darah, susu, casein,

lactalbumin, gelatin dan kedelai. )gar Sabouraud ini digunakan untuk menumbuhkan

dermatofit dan jenisjenis jamur.

?east "lycerol )gar.

$edium yang berfungsi untuk isolasi, enumerasi, dan menumbuhkan sel

khamir. 'engan adanya dekstrosa yang terkandung dalam media ini, P"?) dapat

digunakan untuk mengidentifikasi mikroba terutama sel khamir. Dntuk membuatnya,

semua bahan dicampur dengan ditambah a-& terlebih dahulu sebanyak 0,2 g lalu

dilarutkan dengan akuades. (emudian dimasukkan dalam erlenmeyer dan disumbat

dengan kapas lalu disterilisasi pada suhu 11E selama 12 menit.

+aktor yang mempengaruhi dan menentukan jenis mikroba pada suatu sampel

tanah adalah kelembaban, p5, temperatur, kandungan gas oksigen dan komposisi

organik maupun anorganik tanah. 8enis mikroba tanah sangat bervariasi sehingga

untuk menganalisanya diperlukan salah satu metodenya yaitu metode pengenceran.

'imana pengenceran ini menyebabkan jumlah mikroorganisme menjadi lebih sedikit.

5al ini terjadi karena pada proses pengenceran, mikroorganisme dalam bentuk koloni


11/15

besar berubah menjadi koloni koloni yang lebih kecil karena adanya air yang

memisahkan koloni mikroorganisme tersebut. 'engan adanya pengenceran membuat

mikroorganisme lebih mudah diteliti karena selain jumlahnya sedikit, juga biasanya

tidak berkoloni besar. Selain itu pada percobaan kali ini dilakukan beberapa

pengenceran yang menyebabkan mikroorganisme yang tumbuh jumlahnya akan

semakin sedikit dikarenakan proses pemisahan tadi.

Berdasarkan hasil percobaan didapat bah%a jumlah bakteri pada agar yeast

glycerol semakin banyak jumlah airnya pengencerannya/ maka semakin sedikit

jumlah mikroorganisme yang tumbuhnya. 5al ini sesuai dengan literatur dimana

semakin banyak air yang digunakan untuk pengenceran maka semakin sedikit jumlah

mikroorganisme yang tumbuh.

Setelah inkubasi pada suhu 20 pada posisi terbalik setelah & hari, diketahui

bah%a semakin tinggi faktor pengenceran larutan sampel tanah tersebut maka jumlah

bakteri yang terkandung semakin rendah. Begitu pula pada jenis mikroba lainnya

yaitu jamur dan actinomycetes yang memiliki %aktu lebih panjang yaitu 7; hari.

Berdasarkan referensi, terdapat korelasi yang kuat bah%a semakin banyak

kandungan organik tanah dan oksigen, maka jumlah dan jenis mikroorganismenya

juga semakin tinggi. 'engan demikian sampel tanah subur termasuk memiliki jumlah

dan jenis mikroorganisme yang tinggi. Beberapa kelompok mikroorganisme yang

penting dalam kaitannya dengan mobilitas dan keberadaan *at pencemar, terutama

organik antara lain! Bakteri, 8amur, )lgae, dan Proto*oa.


12/15

III. KESIMPULAN

1. Tanah terbukti mengandung flora mikroba tanah diantaranya adalah 8amur,

actinomycetes dan bakteri.

. Berikut jumlah jamur, actinomycetes, dan bakteri yang terdapat pada sampel

tanah subur.

8umlah jamur pada sampel tanah!

' Pengenceran 10.8umlah koloni F 1&:. 8umlah mikroba 1&: C 10 sel.

' Pengenceran 10&.8umlah koloni F . 8umlah mikroba 127 C 10&sel.

' Pengenceran 107.8umlah koloni F 17. 8umlah mikroba 17 C 107 sel.

' Pengenceran 102.8umlah koloni F 1. 8umlah mikroba 102sel.

8umlahActinomycetespada sampel tanah!

' Pengenceran 10&. 8umlah koloniF 1:. 8umlah mikrobaF 1: C

10&sel.

' Pengenceran 107. 8umlah koloni F 1&2. 8umlah mikrobaF 1&2

C 107 sel.

' Pengenceran 102. 8umlah koloni F >. 8umlah mikroba F > C 102

sel

' Pengenceran 104. 8umlah koloni F .8umlah mikroba F C 104

sel.

8umlah bakteri pada sampel tanah !

' Pengenceran 10 7. 8umlah koloni F ;.8umlah bakteri F ; C

107 sel.

' Pengenceran 102. 8umlah koloni F 7.8umlah bakteri F 7 C 102

sel.

' Pengenceran 104. 8umlah koloni F 0. 8umlah bakteri F tidak

diketahui.

' Pengenceran 10;. 8umlah koloni F 0. 8umlah bakteri F tidak

diketahui.

/. DATAR PUSTAKA

Pelc*ar, $8 dan han. 1:>4.Dasar-dasar Mikrobiologi. 8akarta! DG Press.


13/15

). Gsolasi Hhi*obium

")$B)H (


14/15

(elompok 11

(elompok :

(elompok 2

I. ANALISIS

ada isolasi Rhizobium, pengamatan langsung diamati diba(ah

mikroskop. "ebelum itu nodul akar yang ada diremukkan pada ka!a

preparat yang telah disterilisasi, kemudian di)ksasi untuk

menghindari bakteri kontaminan. *alu diberikan metilen biru pada

apusan tersebut dan dibiarkan selama 1 menit. Hal ini dilakukan

agar metilen biru tersebut meresap dan me(arnai apusan ketika di

amati diba(ah mikroskop. +erdasarkan hasil pengamatan, tidak

terdapat Rhizobium pada apusan yang telah dibuat. Terbukti

karena bakteri yang terlihat bersiat gram positive karena bakteri

yang teramati ber(arna biru. "edangkan Rhizobiumbersiat gram

negative. Hal ini dapat terjadi karena kemungkinan pada sampel

nodul akar yang dibuat untuk apusan tersebut memang tidak

memiliki Rhizobium."elain itu hal ini juga dapat terjadi karena ka!a

preparat yang digunakan belum benar benar steril atau pada saat

proses )ksasi tidak dilakukan dengan benar. "ehingga bakteri

kontaminan dapat masuk dan mengganggu hasil pengamatan.


15/15

rhizobium+enumerasi

Documents