El ADN y su aplicación a los problemas

El ADN cumple con todos los requisitos que le son exigibles a cualquier prueba para su uso en ciencias forenses, bien sea en la investigación biológica de la paternidad o bienpara la identificación do indicios criminales.

De forma concreta, como portador de la información genética, el ADN se encuentra en el interior del núcleo de todas las células y se transmite de padres a hijos de acuerdo con los postulados mendelianos.

En comparación con las técnicas hasta entonces en uso, las ventajas son varias, según el criterio que se utilice:

Tipos de ADN Descripción

ADN Nuclear Autosomico

•22 pares que no marcan las características sexuales•Establece Lazos de Paternidad y Maternidad.•Permite una Identificación o Discriminación mas elevada.

ADN del Cromosoma

“Y”

•23 cromosomas (cromosoma de tipo sexual)•Heredado por el padre. Estudiando varios Loci que conforman el halotipo.•Casos de Libertad Sexual, paternidad (relación padre-hijo varón)•Estudios de Tipo Antropológico.

ADN Mitocondrial

(ADNmt)

•Compuesto de una molecula de 16.569 pares de bases o unidades, cada mitocondria posee miles de copias.•Poseen todas las personas, procede de la madre.•Casos donde existe poca cantidad o desaparición de personas desaparecidas.

La capacidad de identificación por medio del ADN se basa en la presencia de regiones (locus o loci) polimórficas o hipervariables. Las largas cadenas de ADN. compuestas por millones de pares de bases, presentan ciertas zonas en las que los pares de bases se repiten de una forma secuencial y determinada (repeticiones en tándem o tandem repeats), específicas en longitud y localización para cada persona.

Por ello, al principio de su aplicación forense (1984-1986) se habló de huella dactilar genética (genetic fingerprint). termino este que, si bien se abandonó por la posibilidad de que surgieran equívocos, es, por otra parte, un ejemplo claro: todas las personas tienen huellas dactilares, que a grandes rasgos son similares, pero que estudiadas en detalles son únicas.

Igualmente, existen fragmentos o loci del ADN que todas las personas tienen, que pueden presentar similitudes, pero que analizadas en detalle aparecen como únicas, permitiendo la identificación.

Extraccióndel ADN

Cuantificacióndel ADNextraído

Estudio deRegiones

Hipervariables

Secuenciaciónde ADN

mitocondrial

Amplificaciónpor PCR

Hibridación ySouthern-blotting

de RFLP

Los indicios criminales se encuentran en soportes que no son los naturales: una mancha de sangre en un pantalón, una mancha de semen en una camisa, una de saliva en un sello, etc.

Por ello, lo primero que hay que hacer con una muestra que hay que analizar es extraer el ADN de la misma, para lo cual se realizan dos operaciones antes descritas de modo muchas veces simultáneo: despegar las células del soporte donde estaban como indicios, y romper las células y su núcleo para liberar el ADN y poder analizarlo.

Además, las muestras forenses se caracterizan por ser pequeñas, antiguas, contaminadas e irrepetibles. Obviamente, no cabe otra colección más amplia de características negativas que dificulten el análisis identificativo.

1. Extracción orgánica. Compuesta por una mezcla básicamente de fenol y cloroformo con iso-amil-alcohol y posterior «precipitación» (acumulación del ADN libre en cloroformo en un punto determinado) del material genético con etanol o por filtración con unos microfiltros del tipo Centricon o Microcon.

2. Extracción con Chelex. El Chelex es una resina iónica captadora de iones, muy útil en ciencia forense, porque en concentraciones del 5 al 20 % de Chelex-100 es capaz de depurar suficientemente la gran mayoría de las muestras, dejándolas aptas para su estudio posterior, especialmente útil en casos do amplificación con PCR.

3. Extracción Diferencia (Espermas)

Cantidad que se dispone y su calidad.

Ya que tanto el exceso como el defecto en la cantidad empleada pueden dar lugar a resultados negativos o a problemas en la lectura o en la interpretación de los resultados.

1. Por un lado, permito detectar cantidades muy pequeñas de ADN, como 100 pg.

2. Paralelamente, si se emplean sondas complementarias específicas del genoma humano, el resultado positivo de la amplificación nos indica que el ADN es humano y no de otros animales domésticos habituales, como perros, galos, aves, etc.

3. En el caso de cantidades grandes la cuantificación con geles de agarosa teñidos, con sustancias de bromuro de etidio, ofreciendo además su calidad.

Esta técnica analítica permitió, en al bienio 1984-85, la entrada de la biología molecular en el campo de la identificación humana, en un proceso que se dio en llamar por su creador, Sir Alex J. Jeffreys, huella dactilar genética.

Por medio de la misma se pretenden detectar en los indicios biológicos las regiones, fragmentos o «trozos» de ADN (compuestos por un número variable do repeticiones en tándem o VNTR), que, siendo comunes a todas las personas, varían mucho de unas a otras.

Las fases analíticas son; restricción, separación electroforética, southern-blotting o hibridación. Los resultados aparecen tras exponer la membrana donde se ha llevado a cabo la hibridación a un negativo radiográfico, que es excitado por la emisión de partículas radiactivas o quimioluminiscentes.

La reacción en cadena de la polimerasa, comúnmente conocida por sus siglas inglesas PCR (de polymerase chain reaction), es una técnica que permite amplificar (copiar o multiplicar) artificialmente un trozo o fragmento (alelo) de ADN de un locus determinado un número infinito de veces (en la práctica, hasta que haya cantidad suficiente como para poder ser analizado o detectado).La amplificación se realiza en un aparato denominado termociclador, que es capaz de automatizar la reacción, y se compone de un número determinado de ciclos compuestos cada uno de tres fases: desnaturalización, acoplamiento o annealing y extensión. Al acabar la amplificación se han generado millones de copias del locus deseado (determinado por los cebadores flanqueantes), que pueden sor visualizadas con técnicas de electroforesis y tinción o por dol-blot reverso (HLA-DQA1. Polymarker).

El uso del ADN mitocondrial (ADNmt) como medio de identificación se basa en la diversidad que hay en las secuencias que poseen las diferentes personas y que se acumula en la denominada asa de desdoblamiento o d-loop, por lo que lasmutaciones se acumulan con una frecuencia cinco veces mayor que en el resto del genoma mitocondrial.

Se utiliza con indicios realmente pequeños o muy degradados.

� Procurar las máximas condiciones de esterilidad, usando guantes, patucos (fundas de plástico de un solo uso que se ponen en los zapatos), si se entra en la escena del crimen, e instrumentos esterilizados o adecuadamente limpiados.

e Volverá limpiar o utilizar un nuevo instrumento para recoger un indicio diferente. En caso de que se estén utilizando guantes, hay que cambiarlos si contactaron con el anterior.

o Usar diferentes recipientes para cada indicio, aunque hayan sido recogidos en lugares muy próximos o estuviesen juntos (pelos que aparecen juntos, etc.). Si para el envío se utilizan sobres limpios, no hay que cerrarlos nunca humedeciendo con saliva, ya que se puede contaminar la muestra: procede usar celofán u otro medio adhesivo.

e Etiquetar perfectamente cada uno de los recipientes haciendo referencia al menos a: fecha, hora, identificación de la víctima, localización del indicio, tipo de indicio y número del mismo, nombre de la persona que recoge y referencia al caso judicial

1. Enviar lo más rápidamente posible al laboratorio, asegurando quo las muestras que lo necesiten se transmitan en las condiciones adecuadas (frío o perfectamente secas).

2. Es fundamental y básico tomar muestran testigo de la víctima y/o sospechoso. Lo haremos a ser posible extrayéndole sangre o. en su defecto, mediante un raspado o frotis de la cavidad bucal (siempre con autorización de la persona implicada).

3. Tomar la filiación de todas las personas que han intervenido o colaborado en la recogida de las evidencias por si se produce algún problema de contaminación cruzada.