PRACTICA 5

Practicas de Biologa Celular

PRACTICA 5

AISLAMIENTO DEL ADN

INTRODUCCIN

El aislamiento del ADN es el principio de muchos mtodos usados en la ingeniera gentica, como la transformacin, secuenciacin, mapeo fsico, mutagnesis sitio dirigidas, etc. El aislamiento de los cidos nucleicos implica la destruccin de la clula por choque osmtico; homogeneizacin, digestin enzimtica o tratamiento mecnico suave.

OBJETIVO

El alumno aislar y observara al ADN extrado de forma rudimentaria.

Materiales de laboratorio por equipoMaterial del alumno por equipo

1 Mortero y pistiloMuestra vegetal (ajo, cebolla, planta, jitomate)

4 Tubo de ensayoSal de mesa

1 Pipeta de 10 mlBicarbonato de sodio

1 pipeta PasteurDetergente lquido o champ

Tubos para centrifugapalillos

Materiales de laboratorio por grupo

Alcohol isoamlico a 0C

Centrfuga

Agua destilada

1 bandeja de metal

hielo

ACTIVIDAD DE LA PRACTICA

1. Preparar el tampn con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un bao de hielo triturado:

120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo.

1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.

5 g de bicarbonato sdico.

5 ml de detergente lquido o champ.

2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber en la cocina (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.

3. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos. As se rompern muchas clulas y otras quedarn expuestas a la accin del detergente.

4. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampn fro y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar despus los restos vegetales ms grandes del caldo molecular hacindolo pasar por un colador lo ms fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y despus pipetear el sobrenadante.

5. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamlico enfriado a 0C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo ste inclinado. El alcohol quedar flotando sobre el tampn.

6. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separacin entre el alcohol y el tampn. Remover la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a poco se irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodn mojado.

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CUESTIONARIO

Qu dificultades se presentaron para la realizacin de la prctica?

Qu observaste en las fibras?

Cul es la funcin del detergente y agentes quelantes en la purificacin del ADN?

Porqu se dice que las protenas contaminan al ADN purificado?

Porqu es til el estudiar y analizar al ADN de una clula?

Si todos los organismos vivos tienen ADN en sus clulas, que es lo que hace a los organismos diferentes de otros?

Nota: cuida la presentacin del trabajo, la ortografa y la redaccin, recuerda que es un entrenamiento para tu carrera profesional y/o cientfica.

MMGJ