praĆenje zdravlja i bolesti laboratorijskih …½.-grabarević_praćenje... · •prijenos...
TRANSCRIPT
PRAĆENJE ZDRAVLJA I BOLESTI LABORATORIJSKIH ŽIVOTINJA
Prof. dr. sc. Željko Grabarević Zavod za veterinarsku patologiju
Veterinarski fakultet Sveučilišta u Zagrebu
• Mikrobiologija i bolesti
Praćenje zdravlja i prevencija bolesti
Bolesti laboratorijskih životinja
Interakcija bolesti i pokusa
FELASA – teaching sylabus for category C
NAŠ TEČAJ: praćenje zdravlja i bolesti laboratorijskih životinja (2 h)
• Trenutni status (stanje) jedinke koje se odnosi na kliničke, patološke i fiziološke pojave pokazuje da li je jedinka zdrava ili ne
ZDRAVSTVENO STANJE
Mikrobiološki čimbenici (infekcije) Okoliš Genetski čimbenici
• CILJ:
Stvoriti životinje koje zadovoljavaju zahtjeve mikrobiološke kvalitete
Održavanje mikrobiološke kvalitete kroz čitavo vrijeme uzgoja/ trajanja pokusa (sastavni dio svakog sustava kvalitete (GLP, AAALAC, ISO)
Mikrobiološka standardizacija
Infekcije: Klinički manifestne Latentne
Utjecaj na: fiziologiju lab. životinja i rezultate istraživanja
(ponašanje, prirast, imunološki odgovor….. Kontaminacija biološkog materijala Zdravlje ljudi (zoonoze)
FELASA: Recomendation for the health monitoring of rodent and rabbit colonies in breading and experimental units (Laboratory animals (2002) 36, 20-42)
• Definirati „mikrobiološki entitet”
• Koliko životinja pregledati?
• Koliko često?
• Što tražiti?
• Koje metode koristiti?
• „mikrobiološki entitet” – osobna procjena (kavez/ prostorija)
• Više vrsta životinja u jednom entitetu
Frekvencija monitoringa i veličina uzorka - frekvencija
• Monitoring kolonija – najmanje kvartalno • Bolesne (simptomi koji se ne očekuju u
istraživanju) i mrtve životinje razudba
• Češći monitoring:
Više različitih pokusa
Česti unos novih životinja, naročito iz različitog podrijetla uzgoja
Česti ulazak osoblja i često mijenjanje osoba koje rade sa životinjama
Pojava infekcije
Frekvencija monitoringa i veličina uzorka - frekvencija
Pretpostavke:
• Infekcija oba spola
• Populacija > 100 životinja
• Nasumično uzorkovanje
• Nasumična distribucija infekcije
Frekvencija monitoringa i veličina uzorka - veličina uzorka
Veličina uzorka za različite stupnjeve pouzdanosti
Pretpostavljena učestalost inf. %
95% 99% 99,9%
10 29 44 66
20 14 21 31
30 10 13 20
40 6 10 14
50 5 7 10
log (stupnja pouzdanosti) _____________________
log N (% neinficiranih)
= veličina uzorka
10
• Životinje „stražari”, indikatori
• Kolonije GM i imunodeficijentnih životinja
• Slobodni od mikroorganizama za čiji monitoring služe (pr. Pneumocystis spp.)
• Prijenos infektivnog agensa: izlaganje „sentinela” stelji, vodi i hrani uzetoj iz kaveza pokusnih životinje ili stavljanje u kavez s pokusnim životinjama
Frekvencija monitoringa i veličina uzorka - „sentinel animals”
Preporučeni minimum frekvencije monitoringa, veličina uzorka za kolonije glodavaca i kunića, metode
Frekvencija Dob Broj životinja
Virusologija Bakteriologija Parazitologija Patologija
Svaka 3 mjeseca
> 8 tjedana
10 + + + +
KARANTENA - najmanje 4 tjedna
Virusološka pretraga
• Serologija (ELISA, IFA)
• Western blot, PCR
Bakteriološka pretraga
• Dišni sustav: nazofarinks, dušnik
• Probavni sustav: ileocekalna tonzila, feces
• Spolni sustav: prepucij, vagina
Metode testiranja
Parazitološka pretraga
• Crijeva, feces
• Serologija (Encephalitozzon cuniculi)
• IFA (Giardia sp.)
Patološka pretraga
• Razudba
• Histopatologija
• Dodatne metode (IHC …)
Metode testiranja
• Charles River Laboratories (www.criver.com)
• B&K Universal (www.bku.com)
• Ellegard Göttingen Minipigs (www.minipigs.dk)
• Jackson Laboratories (www.jax.org)
• RCC (www.rcc.ch)
Prikaz rezultata monitoringa
Čimbenici koji utječu na procjenu promjenjene morfologije
• Uzorkovanje i procesiranje tkiva – SOP – Kvaliteta razudbe – Provjera težine organa – Autoliza – Vrste fiksativa – Histološka priprema
• Životinja – Vrsta, soj, spol, dob – Spontane bolesti – Fiziološke promjene – Normalne histološke varijacije
Čimbenici koji utječu na procjenu promjenjene morfologije
• Čimbenici okoliša
– Prehrana
– Temperatura
– Osvjetljenje
– Zvuk
Uzročnici (preporučeni monitoring) bolesti
BAKTERIJE Pasteurellaceae Pasteurella pneumotropica o Respiratorni patogen, supkutani apscesi, mastitis o Često latentna infekcija u glodavaca stres ili
imunosupresija bolest
Pasteurella multocida o Fakultativni patogen kod kunića (proljeće, jesen) o Respiratorna infekcija, pneumonija, septikemija,
konjunktivitis
Cilia-Associated Respiratory (CAR) Bacillus o miš, štakor (kunić)
o asimptomatske infekcije o ponekad – kontagiozna, sporo progresivna i
nekontrolirana kronična respiratorna bolest (CRD) štakora i kunića(gubitak težine, smetnje disanja, peribronhijalna limfoidna hiperplazija)
o utjecaj na rezultate istraživanja
Salmonella spp.
o Naročiti problem u institucijama s više vrsta istraživanja i više vrsta životinja
o Osoblje o S. typhimurium (miš, štakor) o S. enteritidis (zamorčić)
Streptobacillus moniliformis
o Miš, štakor (prirodni domaćin), zamorčić o Zoonoza – bolest štakorskog ugriza o Miš (C57BL/6!) – oticanje cervikalnih limfnih
čvorova, septikemija, kronični artritis o Zamorčić – lokalni apscesi o Danas - rijetka
Streptococcus spp.
o hemolitični (S. pneumoniae), hemolitični
o Važni kod imunodeficijentnih životinja o Respiratorne infekcije, septikemija, kutani
apscesi, mastitis
Staphylococcus spp.
o Najčešće S. aureus o Ubikvitarne bakterije, životinja čovjek (osoblje – rezervoar!) o Apscesi na mjestu ugriznih i kirurških rana, pneumonija
Citrobacter rodentium
o Inficira miševe (C3H/HeJ, C57/BL/6,DBA/2J i NIH Swiss) o Transmisivna hiperplazija kolona miševa, hiperplastični
kolitis, kataralni enterokolitis, kolitis s prolapsom rektuma o Bolest utječe na imunološka, nutritivna i onkološka
istraživanja
Helicobacter spp.
o Miš, štakor o H. hepaticus, H. bilis o Kronični hepatitis u odraslih imunokompetentnih
miševa o Tiflokolitis i prolaps rektuma u imunodeficijentnih
miševa o Stalno otkrivanje novih vrsta
Corynebacterium bovis
o Korinebakterijska hiperkeratoza atimičnih golih miševa (scaly skin)
o Hiperkeratoza, pojačana konzumacija vode, gubitak težine o Imunokompetentni miševi – mogući rezervoar (neobavezan monitoring )
Respiratorna mikoplazmoza
Mycoplasma pulmonis o Miš, štakor o Gnojna upala gornjih dišnih prohoda i pluća, hiperplazija BALT-a o Sklonost sekundarnim bakterijskim infekcijama o Dispneja, šmrcanje, „trljanje” očiju, iscjedak iz očiju i nosa
Druge bakterije:
Bordetella bronchiseptica Corynebacterium kutscheri Lawsonia intracellularis Leptospira spp. Pseudomonas aeruginosa
Dermatofiti: Microsporum spp. Trychophyton spp.
VIRUSI
Coronavirusi • Mouse hepatitis virus (MHV) o Više sojeva – različiti tropizam: enterotropni, politropni (mozak,
pluća, jajnici, epididimis) o Smanjuje broj NK stanica, inficira monocite i makrofage…
• Sialodacryoadenitis virus (SDAV/RCV rat corona virus)
o Vrlo kontagiozan, kratka inkubacija o Sialoadenitis, povećani limfni čvorovi na vratu, oftalmološke i
respiratorne lezije o Smanjeno uzimanje hrane, gubitak težine, ↓ rasplodnu
sposobnost
Parvovirusi
o Dosta rašireni o Niski morbiditet o Perzistentna infekcija Miš: o Mice minute virus (MMV) – smetnje u plodnosti, poremetnje
rasta i razvoja o MPV-1a (adaptiran stničnim kulturama) – supresija T-
staničnog odgovora in vitro … Štakor: o Rat virus (RV), rat parvovirus (RPV) Kunić o Rabbit parvovirus Hrčak: o Hamster parvovirus (HPV) (sirijski naročito osjetljivi!)
Respiratorni virus štakora (RRV)
o Štakori - svi sojevi osjetljivi o Najčešće do 8-12 tjedana o Intersticijska pneumonija o Mijenja histološku sliku kod inhalacijskih studija, ↑ smrtnost u
anesteziji
Norovirus
o Familija Caliciviridae o Humani (epidemijski gastroenteritisi ), goveđi, mišji, svinjski o Murine norovirus 1 (MNV-1) (opisan 2003) • Dosta raširen i dugo vremena ostaje u okolišu • Diseminirana infekcija i encefalitis u imunodeficijentnih
miševa • Vjerojatno može imati utjecaj na istraživanje dendritičkih
stanica i urođene imunosti • (WARD et al., Toxicologic Pathology, 34:708–715, 2006)
Sendai virusne infekcije
o Sendai virus (parainfluenca virus 1) o Miš, štakor, hrčak, zamorčić o Proliferacija i regeneracija bronhijalnog i bronhiolarnog epitela,
upalni infiltrati u plućima
Theiler‘s murine encephalomyelitis virus (TMEV)(mouse polio)
o Miš, štakor, zamorčić o Rijetko se pojavljuje (imunokompromitirani) o Akutni encefalitis, poliomijelitis, demijelinizacija → paralize,
konvulzije
Lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV)
o Porodica Arenavirusa o Prenose miševi i hrčci o Primljivi zamorčići, štakori, kunići, čovjek (zoonoza!-simptomi
od strane CNS-a, mijalgija, groznica) o Choriomeningitis, bolest imunih kompleksa
Drugi virusi:
Lactate dehidrogenase elevating virus (LDEV) o Važan kontaminant biološkog materijala (pasaže!) Reovirus tip 3 o Miš, štakor o Pancitotropan – nekroze po jetri, srcu, povećanje slezene … Hemoragijska bolest kunića o Calicivirus
PARAZITI
Nematode o Koloniziraju različite
dijelove probavnog sustava o Oxyuriasis • Syphacia spp., Aspiculuris
tetraptera • Kolitis, promjene u
ponašanju i imunološkom odgovoru
o Lab. životinje – trebale bi biti slobodne od parazita (invazije najčešće supkliničke, ali mogu utjecati na istraživanje
o Znak loših higijenskih uvjeta
Pneumocistoze
Pneumocystis murina (miš), Pneumocystis carinii (štakor) o Vrlo rasprostranjen u okolišu o Problem kod imunodeficijentnih sojeva o Dispneja, cijanoza, „smanjivanje”
Encephalitozoon cuniculi
o Najčešće kunići i zamorčići o Izlučuje se putem urina o Granulomatozni nefritis i encefalitis (često subklinički)
Druge bolesti (neinfekciozne)
o Često kod starijih jedinki o Amiloidoza o Kalcifikacije mekih tkiva o Glomerulopatije o Spontani tumori
Endokrine neoplazije o najčešći spontani tumori u štakora (Sprague-Dawley, Wistar Han
i F344) o Hipofiza, štitna i nadbubrežna žlijezda
Tumori mliječne žlijezde
o Učestalost kod ženki CD štakora - 30 do 50% o Najčešće fibroadenomi i karcinomi
Hemolimfatične neoplazije (štakor)
Leukemija – LGL leukemija, Fischer, Wistar, nije virusne etiologije Limfomi Kožni limfom (mycosis fungoides) Histiocitni sarkom, Sprague-Dawley, Wistar
Distrofična mineralizacija (kardijačna kalcinoza)
o Miš (DBA/2, BALB/c i sl.)
o Može dovesti do kongestivnog zatajenja srca i uginuća
Traumatska oštećenja kože
Barbering (trihotilomanija) Rane od traumatskih ozljeda (tučnjave, ugriza) o Dosta česta pojava o Može zahvatiti značajan broj životinja o Komplikacija sa sekundarnim bakterijskim infekcijama (može
sličiti zaraznim bolestima kože)
Limforetikularne i hemotopetske neoplazije miševa
o Često uzrokovane retrovirusima! o Česte kod atimičnih miševa, SCID, BALB/c o Limfomi, mijelogena leukemija, histiocitni sarkom
• Infekcija → uginuće
• Subklinička infekcija → utjecaj na tjelesnu težinu, ponašanje; patološke promjene – poteškoće u interpretaciji prilikom toksikoloških studija
• Respiratorne bolesti → uginuće prilikom anestezije
• Infekcija → imunomodulacija (supresija ili ponekad aktivacija imunološkog odgovora)
• Utjecaj na reprodukciju (smanjena plodnost, pobačaji, mrtvorođene životinje)
• Kontaminacija biološkog materijala
• Modulacija onkogeneze (mogući utjecaj mikroorganizma na onkološke studije)
Bolest – istraživanje - rezultati
Izvori slika korištenih u prezentaciji:
Zavod za veterinarsku patologiju, Veterinarski fakultet Sveučilišta u Zagrebu
Charles River Laboratories
• Životinje bi trebale biti dostavljene sa svjedodžbom o trenutnom zdravstvenom stanju
• Karantena
• (trenutno ne postoji općeprihvaćeni program kontrole zdravlja nehumanih primata – osim preporuka – FELASA Laboratory Animals (1999), suppl. 1, 3-51)
Kontrola zdravlja u kolonijama nehumanih primata
• Serološka pretraga
• Pretraga fecesa
• Brisevi
• Obdukcija uginulih životinja (u koloniji/ pokusu)
• Redovita kontrola zdravlja osoba koje rade sa nehumanim primatima
• FELASA recommendations for the health
monitoring of breeding colonies and
experimental units of cats, dogs and pigs
(Laboratory Animals (1998), 32, 1-17).
• FELASArecommendations for the health
monitoring of experimental units of calves,
sheep and goats
(Laboratory Animals (2000), 34, 329-350).
• Doktor veterinarske medicine
• Kontrola zdravlja – ovisno o lokalnim uvjetima (prisutnost određenih mikroorganizama)
• Karantena za nove životinje u uzgoju/ pokusu
• Laboratorijske pretrage
• Obdukcija mrtvih i pobačenih životinja
Kontrola zdravlja laboratorijskih mačaka, pasa i svinja: veličina uzorka i frekvencija
Frekvencija
Veličina uzorka Pretrage
Dob Broj životinja Virusi Bakterije Paraziti
Svaka 3 mjeseca
Odbijene 2 - + +
2-7 mjeseci 4 + + +
8 mjeseci 4 + + +
• Zebrafish International Resource Center
• (http://zebrafish.org/zirc/home/guide.php)
• Monitoring morbiditeta i mortaliteta ribe (dnevni)
• Promjene u ponašanju i izgledu ribe → izdvajanje od ostalih → eutanazija
• Mrtve ribe → izdvajanje os ostalih PREGLED
Fixing Zebrafisch for Histopathology (ZIRC protokol)
Post-mortem autolysis and putrefaction (post-mortem decomposition caused by non‐pathogenic bacteria) occurs rapidly once a fish dies. This makes fish that are found dead poor specimens for histopathology. For optimum preservation and diagnostic value, fish must be alive and euthanized just prior to fixation. Fish designated for histopathology should be euthanized according the Euthanizing fish for PCR or Fixation SOP.
Eutanazija – hipotermalni šok