plasmin triggers rapid contraction and degradation of fibroblast-populated collagen lattices

7
Plasmin Triggers Rapid Contraction and Degradation of Fibroblast-Populated Collagen Lattices George D. Pins, Maura E. Collins-Pavao, Livingston Van De Water, Martin L. Yarmush, and Jeffrey R. Morgan The Shriners Burns Hospital and Surgical Services, Massachusetts General Hospital, Boston, Massachusetts 02114, U.S.A. We examined the role of the serine proteinase plasmin in regulating ®broblast-mediated tissue remodeling during wound healing. As an in vitro model system, collagen lattices were seeded with human dermal ®broblasts, and various concentra- tions of plasmin were added to the medium of the contracting lattices. Within 16 h, ®broblast-populated collagen lattices treated with plasmin rapidly con- tracted from approximately 20 mm to less than 2 mm in diameter. Measurements of collagen lattices with radiolabeled collagen indicated that, when these lattices included either ®broblasts or conditioned medium derived from ®broblast-populated collagen lattices, exogenous plasmin induced collagen degrad- ation and rapid lattice contraction. Western blot ana- lyses of conditioned medium demonstrated that ®broblasts in collagen lattices secreted the latent matrix metalloproteinase, MMP-1, which was sub- sequently cleaved by plasmin. Additionally, rapid- lattice contraction and collagen degradation were blocked when collagen lattices were treated simul- taneously with plasmin and aprotinin or a tissue inhibitor of metalloproteinases, TIMP-1. These results provide strong evidence that plasmin regulates rapid contraction of collagen lattices by activating ®broblast-secreted MMP-1 that triggers collagen degradation. The ®ndings from this study suggest that ®broblast-populated collagen lattices can be used as an in vitro model system to investigate the mechanisms by which plasmin and cell-secreted plasminogen activators control MMP-1 mediated extracellular lattice degradation and remodeling during wound healing. Key words: matrix metalloprotein- ases/serine proteinases/wound healing. J Invest Dermatol 114: 647±653, 2000 T issue remodeling, a precisely regulated balance between the synthesis and degradation of extra- cellular matrix (ECM) components, is crucial for normal development and growth as well as for the repair and maintenance of proper tissue architecture. Tissue remodeling performs an important role in many physiologic and pathologic processes such as tissue development, bone remodeling, ®brosis, rheumatoid arthritis, and tumor invasion and metastasis (Brenner et al, 1989; Alexander and Werb, 1991; DeClerck et al, 1994; Alexander et al, 1996; Mignatti et al, 1996). It also mediates several aspects of wound repair, including new tissue formation, matrix reorganization, and wound contraction. It has been hypothesized that during tissue remodeling ECM reorganiza- tion and contraction are mediated by ®broblasts that exert tensile forces on the surrounding collagenous connective tissue in the healing wound (Rudolph et al, 1992). ECM degradation is critical to tissue remodeling. This process is essential for removing damaged tissue and provisional matrix, facilitating cell migration and guiding angiogenesis during wound healing and tissue repair. ECM degradation during tissue remodel- ing is mediated by two classes of matrix-degrading proteinases: serine proteinases and matrix metalloproteinases (for reviews see Matrisian, 1990; 1992; Krane, 1994; Mignatti et al, 1996). During wound healing, the serine proteinase plasminogen activator (PA) catalyzes the conversion of the plasma protein plasminogen to plasmin. As plasmin, a second serine proteinase, degrades several ECM components and activates latent matrix metalloproteinases, it is frequently implicated as a key mediator in controlling connective tissue turnover during wound healing. To study the interactions between cells and ECM that occur during wound healing, three-dimensional model systems have been developed (Bell et al, 1979; Ehrlich and Wyler, 1983; Grinnell, 1994). One such system consists of a relaxed, contracted collagen lattice seeded with ®broblasts (Bell et al, 1979; Grinnell, 1994). When dermal ®broblasts are initially embedded in the collagen gel, they generate contractile forces that change the organization of the matrix by reducing inter®brillar spacing (Grinnell and Lamke, 1984). This reorganization results in lattice contraction, the conversion of a low density gel to a higher density structure leading to a reduction in lattice diameter (Bell et al, 1979; Ehrlich and Wyler, 1983; Guidry and Grinnell, 1985). Following lattice contraction, the ®broblasts have been shown to adopt phenotypic characteristics which favor ECM remodeling (Unemori and Werb, 1986; Nakagawa et al, 1989; Grinnell, 1994). The resulting lattices serve as an in vitro system to investigate tissue remodeling and wound repair (Ehrlich and Wyler, 1983; Grinnell, 1994). In this study, we used an in vitro collagen lattice contraction model to examine the role of plasmin in cell-mediated remodeling of the dermis during wound repair. Human dermal ®broblasts were embedded in a type I collagen matrix, and lattice contraction was Manuscript received December 8, 1998; revised October 20, 1999; accepted for publication November 3, 1999. Reprint requests to: Dr. Jeffrey R. Morgan, Shriners Hospital for Children, 51 Blossom Street, Boston, MA 02114. Email: [email protected] Abbreviation: PA, plasminogen activator 0022-202X/00/$15.00 ´ Copyright # 2000 by The Society for Investigative Dermatology, Inc. 647

Upload: jeffrey-r

Post on 06-Jul-2016

215 views

Category:

Documents


2 download

TRANSCRIPT

������� ���� �� �� ���������� ��� ��������� �������������� ������ ������� ��������

������ �� ��� ���� �� ������������ ������ �� �� ������ ��� �� �������� ��������� � ����!�� "����� #��� $��%��� �� "���&�� "���&��� ����&������� ������ $��%���� #����� ����&������� '())*� +�"�,�

�� �������� ��� ��� �� ��� ����� �������� ������ �� ������� ����������������� �������������� ���� ����� ������� � �� �� ���������� �!����" ������� �������� ��� ������ ��������� ����� ���������" ��� #����� �������������� �� ������ ��� ����� �� ��� ������ �� ������������ ��������� ������ $% �" ��������� � ������������� �������� ������ ���� ������ � ���! ���������� ��� � ��������! &'�� �� ���� ���� &���� �������� (���������� �� ������� �������� ��������������� ������� ��������� ����" ���� ������������� �������� ����� ��������� � ����������������� ���#�� ��� ��������� � ������ ���������������" �������� ������ ������� ������� ���������� ��� � �� ������� ����������� ������ ���� �����!��� �� ����������� ������ ����������� ������������� �� ������� �������� ������� ��� ����������� ������� ��������" ((��$" ����� ��� ����

��)�����! ����#�� �! ������� ����������!" � ���������� ���������� ��� ������� ��������� �������*�� ���� ������� �������� ��� ������ ��������������! ���� ������ ��� � ������ � � �������������� �� ������� ���������" �+(��$� ����������� �#��� ���� �#������ ���� ������ �������� �� ���������� �� ������� �������� �! ����#�������������������� ((��$ ���� ���� ����������������� ��� ������ ��� ���� ����! ��������� ��������� � ������ ������� �������� ��� ������ �� �� �� ����� ����� �!���� �� ��#������� ������������� �! ����� ������ ��� ������������ ��������� ����#���� ������ ((��$ ������������������� ������� ��������� ��� ������������ ����� ������� �� ���� ������ �������������������������� ���������������� �������� � ������ ����������� ��� �!"# $%%%

!���� ��������� � %��&���� ��������� -���&�-��.�� ��� ������� �� ��������� �� �/����&������� ����/ 0�� 1 &��%����� � &��&�� �������� ������%��� �� ���.�� �� .��� �� ��� �����%�� �� �����&� �� %��%�� ����� ��&���&�����

!���� �������� %������� � �%����� ���� ��� %�������&�� %�������& %��&����� ��&� �� ����� ������%���� -����������� 2-����� ��������� �������� �� ����� ���� ����������� 0#���� �� ��� )3435 ,��/���� �� ���-� )33)5������&6 �� ��� )33*5 ,��/���� �� ��� )3375 ���� �� ��� )3371� 8����� ������� ������� ��%�&�� �� .��� ��%��� &���� �. ������������� ����/ ������9���� �� .��� &����&��� 8� ���-�� ��%�����9�� ���� ���� ����� �������� �� ������9���� �� &����&�� ��� ������� -� 2-��-����� ���� �/��� ��������&�� � ��� �������� &��������� &��&��� ����� �������� .��� 0 ����%� �� ��� )33(1��� ��������� � &��&�� �� ����� ��������� !�� %��&��� �

������� ��� ������ ������� ����� �� %������� ����/���&����� &��� ������ �� ���� �������� ���� .�������� �� ����� ��%��� �� ��������� ���� ����� ��������� � ������� -� �.� &������ �� ����/�������� %��������:���� %�������� �� ����/ �������%�������� 0��� ����.� ���

������ )33'5 )33(5 ;���� )33*5 ���� �� ��� )3371� ����.��� ������ ��� ���� %������� %������� �&������ 0�,1&�����9�� ��� &������ �� ��� %����� %���� %������� ��%����� ,� %����� � ��&�� ���� %�������� �������� ��������� &��%���� �� �&������ ����� ����/ �������%��������� �� ���<����� �%�&���� �� � 6�� ������� &������� &��&�������� ������� ���� .��� ������!� ����� ��� ����&��� -��.�� &���� �� �� ���� �&&��

���� .��� ������ ������������� ����� ������� ���� -��������%�� 0#��� �� ��� )3=35 ����&� �� ������ )34>5 ������)33*1� ?� ��&� ������ &����� �� � ����/��� &����&��� &����������&� ������ .�� 2-��-����� 0#��� �� ��� )3=35 ������ )33*1���� ������ 2-��-����� ��� ����� ��-����� ��� &������ �������� ������� &����&��� ���&�� ���� &���� ��� ����9��� �� �������/ -� ����&� ���2-����� �%�&� 0����� �� ���6��)34*1� !�� ������9��� ������� ����&� &����&��� ���&������ �� � ��. ����� ��� �� � ����� ����� ����&��������� �� � ����&�� ����&� ������� 0#��� �� ��� )3=35 ����&��� ������ )34>5 ����� �� ������ )34@1� A����.� ����&�&����&��� ��� 2-��-����� ���� -�� ���. �� ���%� %�����%&&����&�����&� .�&� ����� �� �������� 0+���� �� ���-�)3475 B�6���.� �� ��� )3435 ������ )33*1� !�� ������� ����&������� �� � �� ���� ������ �� �������� ����� �������� ��.��� ��%�� 0����&� �� ������ )34>5 ������ )33*1�8 ��� ������ .� ���� � �� ���� &������ ����&� &����&��

����� �� �/��� ��� ���� �� %���� &����������� ���������� ��� ����� ���� .��� ��%��� $��� ������ 2-��-����� .�����-����� � ��%� 8 &������ ����/� �� ����&� &����&�� .��

���&�%� ��&���� ��&��-�� 4� )3345 ������ ?&��-�� ('� )3335�&&�%��� ��� %�-�&��� B����-�� >� )333� �%�� ��<����� ��: ��� ������� � ����� "����� $��%��� ���

������� @) #������ "������ #����� , '())*� ����: C�����D�-����,--������: �,� %������� �&������

''((�('(EF''FG)@�'' H ��%����� � (''' -� !�� "�&��� ��� 8��������� ������������ 8&�

%,-

������ �� � ��&�� �� %���� ������ �� �-������ ������&&������ &����&�� �� &������ ����&�� ������� ����� ��� ������� %����� +%� ������� ������� .� �������� ���� ������2-��-����� ��&����� � ����� 9����� �� ��� ����/ ��������%�������� ��)� .�&� .�� ��-��<����� &������ -� %�����!�� �&���� �� ��� &������ � .�� -��&6�� -� !8 ��)� ?������ ��� &������ .�� �&����� �� ��) -� %����� .�&��������� ��� ��������� �� ��� &������ ����&� �� �������� ��%� ����&� &����&��� !�� �%�&���� �� %�������������&����&�� �� �������� �� &������ ����&�� ��� ��&����� �� ���������� �� �/��� ��� ��&����� -� .�&� %���� �� &������&����� �,� �������� ����/ ��������� �� �������� ����.��� ������

,!� 8,�" ,B� �!$?�"

������ �� ����� ����� $��� ������ 2-��-����� ���� ����/%������ .��� ������ ���� ������ �����6�� !� ������ 2-��-������� �����6 .�� ������ .�� �&����� �� ������ �/&��� ����� ������ ������%������� .�� ������ %���%�����-������� ����� �� �&�� �� �������������� !�� �������� .��� ����.�� �� ������ �� ��� -����� �� � �����&������ %���� � ����2�� )'I �?( �����%���� �� >=�� ��� ) �� ��.��� ��� &������ .�� ���-�&&�J� ���2�� �����J� ����� 0� � 5��� ���&���� �-&� # �� �������-���� �1 ��%%������� .�� ('I����� -��� ����� 0A#"5 � $ #��&�&��� ���/�� ;"1 &���� )''+�� %�&�� �� )''�� �� ����%����& 0�-&� # �1 %����� ?��� �%���� �� )* �� 2-��-����� ������� ���� ��� ����� �������� �� ������� &�K��� ����� � ��� ����� &������ %����� A-��-����� .��� ��������� .��� '�'@I ���%�F����������� �����&��& �&� ������ 0�-&� # �1 ����-&������� � � &���� ('I A#" �� %�&��F����%����&�A-��-����� ���� ��� ��� �/%������ .��� ������� ���. � � &���� ('I A#" �� %�&��F����%����& �� %������� ����� ���&���� ���&��� &�K��&��

�� ������ �� �!����� ������� �������� ��� ���������� ��������� ���������� �! ��������� $������� &������ ����&�� .���&�����&��� ��� � ����� ���2&��� �� � %�������� ���&�-�� ��&�<��0#��� �� ��� )3=31� !�%� 8 &������ ���� ��� ��� ���� .�� %��&����� �� ����%��9�� %�.��� 0"���� "� ����� ?1� �������� @� $�� ��'�'>I &��������� 0��� �����9���1� �� ������ ��� ( �� !�� &������&�&������ .�� �������� ��� � �%�&���%��������� 0?��� (4' �1�� ��� ��C����� �� � 2�� ����� �� (�@�� %����� $��� ������2-��-����� 0%������� 7L)'1 .��� ���%�9�� ���� %����&�K��� �����&������ %����� �� @� )'@ &���� .��� �/�� .�� >�'�� �� � � &���� ('I A#"� '�7�� �� @�� � � �� (�*�� �� ��%� 8 &������������ 0(�@�� %����1� .�&� .�� ������ � &� �� *��� ,���� ���������/�� (�'�� ��<���� .��� %%����� �� �������� �/ .��� &������ %�����0������� %������ ���� ������� ���-����� ,1� A�� ����&�� &�����)�'�� %���� �� &������ �� '�4>� )'@ &���� %���� � � � ����&������ &����� )'I A#" �/&�%� ��� �/%������ .���� ��� ��� A#"&�&������� � � .��� ���2�� �� %����&� 2�� A#"&�&������� �� '�>I� )I� �� @I� ������� ����&�� .��� ����.�� �� ������ ('� -����� -�� %��&�� � ����2�� )'I �?( �����%���� ��>=��� ,���� 7'�� ��� �������� &������ ����&�� .��� ����&��� ���� ��������&� �� ��� .��� -� ���� ��� ����&� .�� � ������ �%����� �� ������.��� ��� �/ .��� %�����A�� &����&�� �/%������� ����&�� .��� ������� .�� ������

&��-���� �� ���� %����� M�&&���� �� ��� �����&����� ��� �4@ 6�� ����%���� 0"���1N� -��� �%��� 0"���1� �� ��&��-������ !8 ��) 0���-�&���� �� ������ �,1� ����� .�� ��&��������.�� � � �� � &�&������ �� (�@+ %���� 0@�(� 1 0@�= +%����O )�'�� %����1 �� ��<���� .��� ����� �� ����&� ����� ��������� ��� %���� ,%��� .�� �������� � � �� � &�&�������� )'�� %���� 0)�@� 1 �� ����� �� ����&� ����� ��������� -�����%����� !8 ��) .�� ��&�������� .�� ������ %���%�����-������� ������ � &�&������ �� )@�� %���� 0@*' 5 �&&���� �� ��� �����&������8�@' ����� 7�= �� ���� ���� ��) � )L@ 1 �� ����� ������&� ����� ��������� ����� %����� !� ������� &����&�� ��������� ����� &������ ����� .��� %����&���� %��&�� � ��% �� � ����%��������& ����� � � �%�<�� -�&6������ !�� �������� �� ��� ����&�� .�����&����� �� ��� ������� ������ �� ��� ��C�� �� ��� �/���

������� ��������� ����! !� ����� &������ ���������� .������ ����9�� ����&� ����� ���� 2-��-����������� &������ ����&��&���� ������-���� ��%� 8 &������� �����-���� &������ ����&�� .���%��%���� -� ���� >$ ��-���� &������ 0B�. ����� B�&����� #����� ,1 �� ���-���� &������ ���� ����&� %����&��� !�� 2��

&�&������ �� >$ ��-���� &������ .�� '�)@�� %�� �� ��%� 8&������� ,���� �������� �/�� '�*�� ��<���� .��� %%����� �� (*.��� ����� &������ %����� 0������� %������ ���� ������1 ���� .���%��������� .�� "���&��� 0"���1 �� ����&� &������ ������� �����������&�� .��� ������� ����&��� ���� ��� �����&�� �� ��� .����� �� ����.�� ��&����&� ��� *4 �� ����&�� .��� ������� .�� ������ &�&������� ��%���� �� !8 ��)� �� ����� (* � ����&� ����� .�� ����9�� ��� ���%����&� �� �������� �����&����� ,����������� �&������� &������ ����&��.��� %��%���� .�� ������-���� &������ �� �-��� �� ����9� ��� ����&�� ��%���� �� &������ ����� � &������ ���������� ,�����<��-���� ��� =( �� �&������� ����&�� .��� ������� .�� ������&��-���� �� %���� �� ���� .�� ���������� � � �� �������.�� &������ ������ ������� ����� .�� %��%���� -� ������2-��-����������� &������ ����&�� .�� ������� &�&������� �� %������ !8 ��)� *4 � ����� &����� !.�������� ����� ����� ���������&������ ����� .�� ������� ���� 2-��-����������� ����&�� ������� �� ������-���� �&������� &������ ����&��� ,&������� &������ ����&��.��� ������� .�� %���� �� &������ ����� ��� (* � �� ��� �������&� ����� .�� ����9�� ��� �������� �����&�����!� ������� ��� ����� �� �����&���� �������� ��� ����&� �����

.� ���� � ���2�� ����� �� � %����&�� ���&�-�� %�������� 0������ �� ���)34)1� #��K�� ������� &������ ����&�� �� ����� .��� &�������� ��)(�'''� ��� )@� �� %����� �������� &������ 2-���� "�%�������.��� ������� ���� ��� &������� ��-��� �� ��� �����&���� �� )''����<���� .�� �������� .�� � �&������ &����� 0#�&6�� 8���������A�������� �,1� A��� ��&� ��<��� ����������� ��� ����� ����� ���������� �����&���� .�� &��&�������

������ ���� ����!��� �� ����������� ������ �� ((��$ ,�<������ &������ ����� ���� 2-��-�����%�%������ &������ ����&��&���� '�>I A#"� .�� �� .����� '�*4 + %���� 0)''' 1 %������������� .��� �/�� .�� ���%�� -����� 07>� !�� 0�����/�������1����������� %$ 7�4� (I ����� ����&�� �������� )'I ���&����� '�'(@I-����%���� -���� )I �����������1� ������ 03'��� @�1� �����&������ -� ����� ����&�� ������� %����&������� ��� ���&���%������� )(I �&������� �������&� ���� 0B?��E E���� 88 �����"������ B?��E� "� ����� �,1 0������� )3='1� ����%�%���� .������������� �� ���A ���-���� -� ���&���%������ �� *�� ��� ( � �� >>�0B?��E E���� 88 ����� -��� ������1 0!�.- �� ��� )3=31� #����.��� &�-���� ������� -��&6� -����� �� *�� 0@I ���� ��� ��6�'�'@I !.�� (' �#"1� �� ��� &�-���� ��� ) � .�� )�'�� %���� ��%����� ��-��� M����� ������� ��) 0,-�)15 ��� ��-�����&��9�� ����� ��� ����� �� �&������ ���� �� ��)5 ���-�&������������ �,N� �� ) � .�� � %���/�����&�C������ ��&����� ��-���0���� �������� 8��5 ���&�� �&6����� 8�1� �����9��� .�� �&����� -�&�-��� ��� -���� .�� "�%��"��� ���������&�� "�-������0���&�1� �� ��� �/%��� ��� ���-���� �� ;���6 E�? ,! , 2�� 0������ ;���6� �&������� B�1�

.���������� ����!��� ��� ������&�� &��%����� -��.�� ���%�� ����%�

.��� ���� ��� � ������ �� ����&� .�� %� '�'@ �&��� ���2&�� ������&� -��.�� ��� ����%�� ����� �%�&2&���� �����������&�� &��%����� -��.�� ���%�� ����%� .��� ���� ��� � �������� "�����J� � ���� .�� %� '�'@ �&��� � ��2&�� ������&�-��.�� ��� ����%��

�"+�!"

������� ����������! �������� ��� ���������� �� ��������������� �! ����� ��������� !� ������� ��� ����&� ��%���� � 2-��-������������ &������ ����&� &����&��� .� &���&���� �� &������ ����&��� ����� ������ &�&������� �� %������ ��� ������ �� ������� &����&�� ���� � %���� �� ����������� -� ������� ��� ��� ����&� ��������� ������� ����&����%��� &����&��� ���� �%%��/������ ('�� �� ���� ��� (�� ������� .�� (*L*4 � .�� ���� .��� ������� .�� �� �����'�)3+ %���� 0>4' 1 �� %����� *4 � ����� &���� 0�� $1� !������ �� &����&�� .�� ���� ��%�� �&&���� .�� )(L)7 �� .������&�� .��� ������� .�� '�(= + %���� 0@@' 1 �� %��������������� ����&�� ���� .��� �� ������� ���&��� � ������������������� 0)=L('��1 .�� =(L37 ��!� &����&���9� ��� ����&�� �� ����� &�&������ �� ��� ��

%���� ����� � ��� ��%� &����&�� �� ��� &������ ����&���.� &��� ����&�� .�� ����� ���� &����� � 2�� &�&������ ��)I� @I� �� )'I A#" �� .� ����� %���� �� ��� ����� '� (*��� *4 � ����� &����� !�� ��� &����� ������ ���.�� ���� ��� ����

%,/ �8B" �� � !$� �?+ B,� ?A 8B��"!8�,!8�� �� ,!?�?��

�� %������������ ����&� &����&�� &������ .�� .� �����%���� �� ����� ��� %��� 0�� &1� A�� �/��%��� .�� &����������&�� &���� )'I A#" .��� ������� .�� %���� ' � �����&����� ���&�� &����&�� �� �� �&&�� ��� ���� ��� )'' �0�� &�1� .������ ����� ����&�� ������� .�� %���� *4 � �����&���� ��%��� &����&��� .�� (* � 0��� &�1� ����������&������ ����� &�&������� ���6���� ��������� ��� �-��� ��%���� �� ��&� ��%� &����&�� �� ��� &������ ����&�� 0�� &1�A�� �/��%��� &������ ����&�� &���� )I A#" �� ������� .��%���� (* � ����� &���� ��%��� &����&��� �� ���� ��� (�� �������� ���������� �� ��� %���� &�&������ 0�� &&1� -��.�� ����� ����&�� &���� )'I A#" .��� ������� .��%���� �� ��� ���� ���� ���&�� &����&�� �&&����� �������.��� � �� ��� 0�� &�1�

������� ��������! ������� ������� ��������� ������������ ������� ���������� !� ������� .������ &����������&�� .��� ������� ���� %������������ ����&� &����&���.� %��%���� 2-��-����������� &������ ����&�� .�� >$ ��-���� ��%�8 &������� �� ����� *4 � .� ����� %���� �� ��� ������ ��

�-������ ���� ��� ����� �� �����&���� �������� �� ��� �����&������ ��2&���� .�� ��� &������ ����&�� .��� ������� .���� ����� '�>*+ %���� 0=)' 1 �� %���� 0�� 0�1� !� ����������� ��&���� -� .�&� %���� ��&�� &������ ������������� ��%� ����&� &����&��� .� ����� &������ ��������� &����&��� ����&�� �� ������� &�&������� �� %���� ��������-����� �&�������� &������ ����&��� ��� .� ������� �&�����������&�� .�� %����� ���� �%%����� �&����� ����� (* � �� .��� �� ����&� � ��2&�� &����� ��� ����� �� �����&������������ �� ��� ����&� ����� 0�� ���.� ,����������� .���&������� ����&�� .��� ������� .�� &������ ����� &������ ����� '�>*+ %���� 0=)' 1 �� %����� ���� �%%����� ��������.�� (* �� ,������ �� ����� ���%��� �&���� ���� ����� .�� ���2&�� &����� ��� ����� �� �����&���� �������� ��������� ����&�� 0�� 0'1� !���� 2��� ��������� ���� %���� ������ �� ��&� &������ ���������� -�� ��� %����&� �� &���� ��&������ ����� ���� &����� %���� �&������ � &������&�����%����&� ���� &�&������� ��&�� ��%� ����&� &����&�� ��&������ ����������

������ ((��$ �� ������� �! ��������� �� ������� ����������� ����#�� �! ������ !� ������� .������ ��� ��%� 8&������������� �������%�������� ��)� .�� ��&����� -�2-��-����� &������ ����&�� �� �&������ -� %����� .�%�������� .����� -��� ������� � &������ ����� ���%������ ����&��� � ����� ���� �� ��) �� � @( 6�� -�� &������ ����� �� ������� .�� %����� ��� &������ .���&������ .� ����&��� &������ ����� �� ��) �� *' �� (> 6��-��� &������ ����� ������� .�� '�*4+ %���� 0)''' 1 �� %���� 0�� ,1�

������ ��� �+(��$ ������� �������� ������� ������������� ������� ��������� !� �������� .������ ��� ����%������� %���� ����� ��%� &����&��� .� ���� 2-��-����������� &������ ����&��� ����.�� ��� ����&�� �� &����&� ��� *4 ���� ��� ������� ��� ����� .�� %���� �� ��� ����%������� �-��� �%���� ������� �/%������ ����-��������� �%��� &��%������ �-��� %���� .�� ���� �� � ���� ��)''' 6����6�� �-��� ��� �� �%��� %�� �� �� %����� !��� �%%��/������ � (:) ����� ���� �� �-��� �� %����0"������ �� ��� )3=@1� ����&�� ������� .�� �%��� ��%���� ��� �������� ���� .��� &��%���-�� .�� ����� ���������� ����&��� (* � ����� �������� 0�� 11� !�� �������&���� ���� %���� ����� ��%� ����&� &����&���!� ������� .������ ��� ����� �-��� �� �������%���������

!8 ��)� �-��� &������ ��������� �� ��%� &����&�� ��&������ ����&�� .� &��� &���������� &������ ����&�� .�� >$ ��-������%� 8 &������� ����.�� ��� ����&�� �� &����&� ��� *4 �� �� �������� ������� &�&������� �� %���� �� !8 ��) �� ��������� ����&�� ���� ��&���� '�*4+ %���� 0)'' 1 �� %������ *> �� !8 ��) ��� �������� ���� .��� ����� �� ����� ���������� &����� ����&��� (* � ����� �������� 0�� 11�A����������� ������ �� ����� ���%��� �&���� ���� ����� .��� �������%���� �� ��2&�� ��&����� ��� ����� �������&���� �������� ���� ����&�� .�� '�*4+ %���� 0)''' 1�� %���� �� *> �� !8 ��) .��� ����� �� ��� ����� 0��%�1�!� ������� .������ ��� !8 ��) �-�� �� &������

��������� �� ��%� ����&� &����&�� .�� ������� -� &���L!8 ��) ����&��� �� -� ����&��� -��.�� &������&����� � �� !8 ��)� .� ��-������� &������ ����� ����%����F!8 ��) ������� &����&��� ����&�� ��� &���� &����������&�� &���� ������-���� ��%� 8 &������� �� �-������ ��������� �&������� ����&��� ������� .�� &������ ����� &����'�*4+ %���� 0)''' 1 �� %���� �� *> �� !8 ��)��%%����� �� -� ���� ������� ��� ����&�� ������� .�� &����������� &���� '�*4+ %���� 0)''' 1 �� %���� ��'�' �� !8 ��) ����� (* � 0�� ���.1� ,��������� .��������� ���� ����� .�� � ��2&�� ��&����� ��� ����� �������&���� �������� ���� �&������� ����&�� .�� ���� .��� �������

���� $� ������� �������� ��� ���������� �� ������� �������������� ���� ����� ���������� 0�1 , ��%&�� ��� &����� �� &����&���� 2-��-�����%�%������ &������ ����&�� .�� ����� &�&������� ��%����� ����� .�� ����� *4 � ����� &����� 0�1 ,%%����&� �� &����&�������&�� (* � ����� ��� ����� �� %����� ������ ����&�� ��� �%%��/������)=L('�� ��������

�?�� ))*� B?� * ,� 8� (''' ��," 8B ! 8��� " � ?���8B� ?A �?��,��B �,!!8��" %,2

.�� &������ ����� ���� ����&�� &���� '�*4+ %����0)''� 1 �� %���� �� *> �� !8 ��) 0�� %'1� !����2��� &�2���� ���� �L!8 ��) ����&��� �� ��2-��-����L!8 ��) ����&��� ��������� ��� �-�� �� &��������������� �� ��%� ����&� &����&���

�8"�+""8?B

!�� ���� �� ��� ����� .�� �� �������� ��� ���� �� ��� ����%������� %���� � 2-��-������������ ����/ &����&�� ������� �������� ���� .��� ������ ,� � �� ���� ������ .����� &������ ����&�� %�%������ .�� ���� ������ 2-��-������ ������� ���� ��� -�� .��� &����&���9�� ��� ������ &������������� ������9���� .��� &����&��� �� ����� ������������ .��� ����� 0#��� �� ��� )3=35 ����&� �� ������ )34>5������ )33*1� !� �/��� ��� ���� �� %����� ������&�&������� .��� ����� �� ��� ����� �� &����&��2-��-�����%�%������ &������ ����&��� ,���� �� %���� �������� � ������& &����� ��� ���� �� ����&� &����&��� ,������ ������&�� &���� ������-���� &������ ���.�� ����� ���%����&� �� ����� &���� �� &������ ����� ���� &����� %������&�� &������ ��������� �� ��%� ����&� &����&���,��������� .� �������� ���� ��� 2-��-����� ��� &����������&�� ��&����� � ����� %��&����� �� ��� &������L��������������%������� ��) ���� .�� &������ -� %����� ��)>��� ���� %��� � ���� ��� ������� -�� ��� .����� -���� ��� ��

)> ���� -�� �<���&��� A����� .�� %���� �� �%��� �� �������� �-��� �� �������%��������� !8 ��)� .��� ������������� ����� �� &������ ����&��� .� �-������ � �������%�����-�� �� &������ ��������� �� ����&� &����&���!�� ������� �� ��� ����� %����� &�&����� ����&� ����

%���� ���&��� ����� &������ ��������� �� ��%�� 2-��-������������ ����&� &����&�� -� ������� ��� �&����� �� &������&����� ����/ �������%��������� ������� ������ ���� ���.���� ��� ��%� 8 &�������������� �������%��������� ��) �� ��)>� ��� �%��������� -� 2-��-����� &����&��� &����������&�� 0+���� �� ���-� )3475 ��&� �� ��� )3435 ���-��� �� ���)33(5 ������� �� ��� )33=5 ���� �� ��� )3331� #�&���&��������� ���� ���� ���. ���� ����� �� ��� ������9�� ����&����� -� &���� �� �&��� 9������� %�� ��) �� %�� ��)> 0"��&6� �� ��� )3==5 ;��%�� �� ��� )3371� ���� &� -� �&������-� %���� 0$� �� ��� )3435 ;��%�� �� ��� )3375 )33=1� !��%������������ &������ ��������� �� ��%� ����&� &����&��� �-������ ��� ����� ���� �� -�� �-������ %�������� ��%����� �. ���� �� ��� ��&����� �� 2-��-����������������/ ������9��� �� �������� &������ ����&��� ������������� ���� ���. ���� 2-��-����� ����� &������ ���� ������/��� ����� ���&�� � ��� �������� &������ ����/ ��������9� ��� 2-����� ��.��6 �� � ������ %�&6�� ����&��&���� ����/�� ����&���� 0#��� �� ��� )3=35 ����� �����6�� )34*5 ����� �� ������ )34@� )34=5 ����� )33*1�!�� ������9��� �� ��� &������ ��.��6 ��� -�� ���. ��

���� &� .��� ������������ ��� ���� �� ������ �������� ������ ��� ������! �� ����� ��������� �� ������� ������� ��������� !�%&�� ���&������ �� &����&�� ��� &������ ����&�� &��� .�� ����� &���� � 2�� &�&������ �� )I 0�� �� �1� @I 0�� �� �1� �� )'I A#" 0� �� � 1� ,� �&������� %���� ������� &�&������� �� %���� .��� ����� �� ��� ����&� ������

%1' �8B" �� � !$� �?+ B,� ?A 8B��"!8�,!8�� �� ,!?�?��

���� %�����%& &����� ����&� 2-��-����� .�&� ����� �� ��������� �� �������� 0+���� �� ���-� )3475 ������)33*1� 8 ����� �� ����&�� &��� %��������� 0B�6���.� �� ���)3431� 2-��-����� ����/�� &������ ����&�� �/�-��� � ��.�������� �� &������ -�������� 0B����� �� ��� )34*5 ��&� �� ���)3445 B�6���.� �� ��� )3431� �� � �%�������� �� ��)�/%����� �� ��&���� 0+���� �� ���-� )3475 ��&� �� ���)3435 ������9 �� ��� )33@5 E� �� ����6� )33=1� !���� 2���������� ���� ��� ��&��&�� ����9��� �� ��� ����� &� ���������� -�������� �� �������� 0������ )33*1 �� ���� ������2-��-����� ����/�� &������ ����&�� ��� %���� �� ������ ����/��������� �� ������9��� ���� ����� ��������������&���� &������ ����&�� &���� ������ 2-��-����� ����

-�� &��&������� .�� ���� 6�����&���� �� ���� � ��� �6�<������� �� ���� -�� ���� &�&�� ����� ��� ��� �������� ������� ��&��� 0�������� �� ��� )3375 A����� �� ��� )3341� ,������������ ���� �6 �<������� ���� -�� ��%����� �� ����&� ������ ��� ����� ��&�� ������ ��� ���������� ���� ���� @3I ����� ������ �� �� %����� ��� .��� ���� �� ��� %�������<���� ����%�� �%%�&���� �� ��� �6 �<������ %��� ������� 0A����� �� ��� )3341� !�� ������� �� ��� �������� ����������� ��� ���� �� ����� �6 �<������� ��� .��� ���� ��� ����-�� &����� -� ��� %����&� �� %������� �� �,� ��� .����/����� .�&� &���� �&����� 2-��-�������&����� �������%���������� ������ ��������� �� &����&�� �� ��� &������ ����&���"�������� �� �-� � %����&�� �� �&�� ��� ���% &�������� ���-��� �� ����� �6 �<������� &���� .��� �������

�� ������ �� �������� ���� .��� ����� ���������� �� -� ��������� -� � ����& -���&� -��.�� �� ������ �-����� .�&� &���� !8 �� �� ��� ����� %���� �(���&�����-�� 0��� ����. ��� ������ )33(1�8��������&���&�� ������� �� ����� -�� .���� ����

���� 0� ���������������� ��������� �� ������� ���������������� ����&�� .��� ���� .�� >$ ��-���� ��%� 8 &������� ������� .��%���� �� &������ ������ �� ����9�� ��� �����&���� ���������� ��� ������ 8 0�1� ��� ����� ����� �� �����&���� ��� �����.�� �������� ����� 2-��-�����%�%������ &������ ����&�� .��� ������� .��%���� ��� (* �� 8 0�1� ��� ����� �����&���� ��� ����� .�� ����9������� �&������� ����&�� .��� ������� ��� (* � .�� &������ ����� ����2-��-�����%�%������ &������ ����&��� ,�� ����&� �/%������ .���&���&��� ��%�&��� �� ��%�&���� ���� ���� ��%����� ������� ��������

���� ,� ������� ����#�� ((��$ ������� �! ���������� ,�<���� ��� � .�� '�>I A#" ������� .�� '�*4 + %���� 0)''' 1 �� %����0���1 �� &������ ����� ���%��� 0� 1 ���� 2-��-�����%�%������&������ ����&�� ������� .�� '�' �� '�*4 + %���� 0)''' 1 �� %����.��� ����9�� -� ������ -��� ��� ��-���� ����� ��)� �����&��� ��� ��&��� �� ��� ��) -��� 0@(� *'� �� (> 6��1�

���� 1� ������ ��� �+(��$ ������� �������� ���������� ��������� ��������� ,%%����&� �� &������ ����&�� (* � ����� ������������������ .�� ������� &�&������� �� %���� �� 0�1 �%��� M'�'��%�� .��� 0L1 �� )'�� %�� .��� 0>�)L>�3� 1 0P1N �� 0�1 !8 ��)� ����������&�� ��� �%%��/������ =L)'�� ��������

�?�� ))*� B?� * ,� 8� (''' ��," 8B ! 8��� " � ?���8B� ?A �?��,��B �,!!8��" %1$

��&��9�� �� �� !8 �� �� ������L�%������ C�&��� ��������L-���� ������ �����&�� 0"��&6� �� B���� )33*1� ������ ������ ���� ���� ���. ���� 2-��-������������ �/%������� ��&���� �� �� �� !8 �� ��� ����&���� ��������� -�.��� ����� &���6�� ��&� �� !�A�� 0��.���� �� ��� )34=1� ?������� ��� ���.� ��.����� ���� ��&���� �� �� -� ������2-��-����� ��� � ����&� � &������ ����&� ��������� ���������� ����� %���� .�� �����&�� �� ��� ��&�� &���L����/�������� !���� ��� &�&������� �� %���� �� �,� ����%���&%��� ��� -���&�� �������� � � %����� %���� ���� ����� ���� &�&������ �/������&���� ����� �� ��� -���� ������� ��� ����� 08������� �� �6� )34>5 ���� �� ��� )3371 �� �&������� �� %���� -� ������� �,�� !���� �,� ��� �/%������ -� ���-�� �� &��� ��%�� ������ ����� �������� &����2-��-������ 6�����&����� ��������� &����� �� �&������ ��&���%���� 0?���.�6 �� ��� )3=>5 ���- �� ��� )34'5 $������� �� ���)34>5 ��%%�� �� ��� )33>1� ,������� ��� �&��� �� �,� .�������� ��� �� ��� .��� &����&���9��� ��� �-�������� ������� ����%������� �&����� -� �,� %���� � &��&�� ���� ���� ��������� ����/ ��������� �� ����� ��������������������2&�� �&� ���� ���� -�� ���� �� �/��� ��� �����

�� %������� �� �,� ������ ��� ��������� �� �� � ������� �������� �� �6� ����%�� �� ��� ���6������%� �, ����&� �-������ %����������%���� -���6��.�� >$�%�����

��-���� ��-��������� ����/ -� �&������ ��&��%����� ������������ ���6������%� �,�������� %���� ������� ��� ����/��������� 0�������� �� ��� )33*1� , &���� ����� �� �6.��� ����� ���.�� ���� %����������2&�� 0���LFL1 �&��/�-� �%���� 6�����&��� ������� ���%������9���� ��.��� &������ 0 ���� �� ��� )3371� ���� ����� &��-��%�������� �� 2-�������2&�� �&�� ��.����� .�� ���%����� �&��� ���� 2-� �������� �� � ����� ������� ��� ����&���� %������� ��2&�&� 0#���� �� ��� )3371� !���� .�� &�������-�� 2������ �� ��&��%������ �����%��& ������&����� ��2-��-������6� &����� ������� �� �������� ������ �� ����&� �������&����9��� ���LFL �&�� 8� .�� �� ����-������ ��.�����.������ ����� %��&����� ��� ��2&���� �%���� -� ��������������/ ����&���� ��&� �� 2-� �� .������ ����� ��� <��������������&�� -��.�� ���LFL �� ���PFP �&� 0 ���� �� ��� )3371�,������� %����������2&�� �&� %����� ��2&�� ���� ����� ����� �� %������� �� �,� ���� .��� ������ ���&��%��/�� �� ��� ���� ������ ���6� ��� &������� �� -�&���&����&����� �������� ����� ������ ����������� &������ ����&��%����� � �� ���� ���� ���� &� &��%����� ��� ������� �� ���������� �� ��.�� %��&�� <������ �-��� ��� ����� �� %��������� �,� ���� .��� ������"&� 2-��-����� ��� &���� %��/��� �� ������� &��� ��%��

���� %����&� �,� ���� .��� ������ 2-��-�����%�%������&������ ����&�� &� -� ���� �� � �� ���� ����� ������ ���������� ��� ����� �� &������� ����&��� � ��������%������� �&����� �� ��������� ����/ ������������� ����� ��������� "������ ������ ���� ���. ����6�����&���� �%�������� ��� �/%����� �� �, �� ����� �� ���%��� �� ��� &���6�� ��A� $�A� �� ;�A 0$��������� ��� )34>5 �����&��� �� ��� )3435 !��-� �� ��� )33>1��������� ���� �,� %��� � ���� &������� .������%������9���� ?�� ����� �������� ���� 6�����&����%�����&�� �,� ��� ���� %��� � ���� �������� �� ��� ��C�&�������� ����� �� %������� ����/� #� &��&������ 6������&���� .�� 2-��-����� &������ ����&�� ������� .�� %�������&������ �� %�������� ��� ����� ������ &� -� ���� ���/��� ��� ����&�� �� 6�����&������&����� �,� � 2-��-������������ &������ ��������� �� ����/ �������� �� ���������L�%������ C�&��� �� .��� �� ��� K��&� �� ���.����&����� ��&� �� $�A �� ;�A� .�&� �%�������� �, �/%������"������� ��������� &���� �%�������� �, �� ����� �� ���%��� �� ����� ���� -A�A �� ���A 0 ���� �� ��� )3435)33)5 ��%%�� �� ��� )33)� )33(� )33>5 ����6� )3371� !����2��� �%�&��� �,� ������ ����/ ��������� �� &��������� ���� ��������� #� &��&������ ��������� &����.�� 2-��-����� &������ ����&�� .� &� �������� ��� ������� ��������� &���� �� .��� ����� &���6�� ��&� �� ���A� �������� 2-��-������������ ����/ ��������� ���������� ��� ��&�� ����� ������� �������� �.������ ��������

�� ��������� ��������� �������� ������ ��� ������ ������� �� ���� ���� ���

������� ����� ��� �� ������� � ��� ��� ����� !������� �� ��� "�������

����� #������ �� ���������� ���� ��� ��������� ���$�������% ���� ��� ���

�������� �� � ���� ��$ ��� "������� #������ �� ��������%

�A� �B��"

,��/���� � � ���- Q: �/���&������� ����/ ���������� 8: $�� �� 0���1� �������� � �&����������� ����&% B�. ���6: ����� ������ )33)� %%� (@@L>'(�

,��/���� � � $�.��� ��� #����� �� ���- Q: ��&�� �� ������� �%������&��� �%�%���� �� ���&� ��������� -� � ����� �-��� ���������%���������) �������� � ���� ��� )>@:)773L)7==� )337

#��� �� 8������ #� ����� �: �����&�� �� � �������6� ����&���� -� &����&�� ��&������ ����&�� -� ���� 2-��-����� �� ������� %���������� %������ �� �����'�� (��� ��� "��� )" =7:)(=*L)(=4� )3=3

#���� �,� ,���� � �%%���� �,� ������� ,� ���- Q: ���� ����/���&������� ����/�������� �������%�������� �� ���� �-���� !8 ����� �/%������ ���� ����� ������� ������%���� *���� ��� +�����$���>:4*4L4@3� )343

���� %� �+(��$ �������� ��������� �� ������� ��������� ����&��.��� ���� .�� ������-���� &������� ������� .�� %���� �� !8 ��)�� &������ ������ �� ����9�� ��� �����&���� �������� �� ��������� 0�1 !�� ����� ����� �� �����&���� ��� ����� �� 2-��-�����%�%������ &������ ����&�� .�� �������� ����� ������ ���� .�� �&����&�&������� �� %���� �� !8 ��) ��� (* �� 8 0�1� &������ ����&����&6� &���� .��� ������� .�� &������ ����� ���� 2-��-�����%�%������ &������ ����&�� &���� ������� &�&������� �� %������ !8 ��)� �� �����&���� �������� �� ��� ����&� ����� .���������� ����� (*�� ,�� ����&� �/%������ .��� &���&��� ��%�&�������� ���� ��%����� ������� �������� 0, ������6 � �&���� � ��2&��������&� -��.�� ����%�� %� '�'@� �������� "�����J� � �����1

%1& �8B" �� � !$� �?+ B,� ?A 8B��"!8�,!8�� �� ,!?�?��

#���� !$� ;��-�&6 ;�� A�&6 �� ��������� ��� ���� �� ���� ��: ������ 2-���� ���&��� �&� ���� ��� %������%& ����&�� �� %���������2&�&�� ���� 4=:='3L=)3� )337

�������� �� "&���C�� �� ;�&6�� �� �� ��: ��������&�� &���<��&�� �� ���� ��%������� �&������ ��� ��&�� �&�� (����� >74:*)3L*(*� )33*

����6 ,A: ���� ��%��: ������. �� ������ &���������� 8: ����6 ,A0���1� ��� ������� ��� �������� ���� � ���� ,������ B�. ���6: ����������� )337� %%� >L@'

������&6 �,� "����� $� !����� " � ������ ;�: ���/ �������%�������� ������ �-���� ����� %��������� �� (- ��� "�� =>(:(((L(>(� )33*

��.����� � ��%���� ������ ���������"����&�����,���,��� ��$���� �;:!�������� ���.�� ��&��� -��� ��������� ��� �/%����� �� &��������� ���������%������� �-���� � �. � 7:)433L)3'=� )34=

����&� $�� ����� ��: A-��-���� &����&�� �� &������ ����&�� �� ����: �-��-� &���& K�������� &��� ��������� � ���� '����� ))7:>*@L>@)� )34>

�����&��� ,� ����.�� ,� #�� �� "&����� ���� ������� ���:�����&���9��� �� ��� &������� -�� ��� ��� ��� ���6������%�%������� �&������� � ��� ���$ (7*:))4'L))43� )343

A����� �� ������ �� ,�����9 ?� �� ��: �%� ����� �� ����� ��&��� �� ��&6 ��&�&�� ��C�&�� .�� � �������& &������� ���� �6 �<������� ���+��$��� )>*:(3>L>''� )334

����� A: A-��-������ ���2-��-����� �� .��� &����&��� � ���� ��� )(*:*')L*'*� )33*

����� A� ���6� � : �����9��� �� �������� &������ ����&�� -� ���� �62-��-������ � ���� "�� 77:@)L7>� )34*

����� �� ����� A: "����� � ��� ��&���� �� �������� &������ ���������9��� -� ���� �6 2-��-������ � ���� "�� =3:7=L4)� )34@

����� �� ����� A: $�%�� ��������� ��� ����9��� �� �������� &������ ������ �-�� ��� &����&�� -� 2-��-������ � ���� ��� )'*:)'3=L))'>� )34=

$������� ;� "��� ;$� ��� �#� "����� ;� ��--�� �� ���6� "� ��9���� �":�������� �&������ &������� ���� �%������ &����� � ������ +��$���4):*(*L*(3� )34>

$� �� ������ " � ������ ,�� ����� #�� ���� �,� ��� ,Q� ����-��� �8:!���� &��%����� � %��������& &��&��� �&����� ���� ��������&���������� '�� (��� ��� "��� )" 47:(7>(L(7>7� )343

8������� � �6 �#: �������� � %����� ��� -���� ����� �� ��� �%������ ������� +��$��� 4':(3=L(33� )34>

;��%�� �� ��%�9�?� �� "��� #� ;��� �� ��%�� �: #�&���&��&����&���9��� �� ���� &����������>� � ��� ���$ (=):)@**L)@@'� )337�

;��%�� �� ��� $� ��%�9�?� �� �� ��: �������� ��&����� ��� ����%��&����������> 0 ��)>1 �&������ � ��� ���$ (=):)=)(*L)=)>)� )337-

;��%�� �� ��.��� "� "��� #� ��%�9�?� �� ?"� ����� $� Q��� �� ��%���: !�� ���� �� ��� �������� ���� �� ���� &����������> 0 ��)>1 ��� �&����� �� %��&����������>� ��-������ �%�&2&��� �� ����� �-��� ���������%������� ����&��� � ��� ���$ (=(:=7'4L=7)7� )33=

;��� " : ��&�� �%����&� �� �������%�������� �� ���� �-����� �� (- ��� "�� =>(:)L)'� )33*

������ +;: �������� �� ����&����� %����� ���� ��� �����-�� �� ��� ���� ��-�&����%���� !*� (����� ((=:74'L74@� )3='

���-��� �,� "����� ��� B����� #�� ��%��� � : ������������� �������� ���/���&������� ����/ ��&������&���� �� &��������� �/%����� 2-��-�����-� ��&��&�� ���&��� ��� ������ 77:***L*@)� )33(

������9 ?� �&6�� �� ��&� �� ;�9��.�6� �� #�6 8� ;��� !� �&6�� #: ��������� &��������� ��� �/%����� ������������� &������ ����&�� �������������� ��������� -� �)�) �� �(�) ������ � ���� ��� )>):)3'>L)3)@�)33@

����� � : ������%�������� �� ���� �-���� ����/ ��������� ������*���� 7:)()L)(@� )33'

����� � : !�� ����/�������� �������%��������� �������� )*:*@@L*7>� )33( ��&� �� $�����&� ,� "&���������� ;� ;��� !: ������� �� &������ �������

2-��-����� .�� � ������������� &������ ���� �&� ���� ,�� )=4:*3>L@'>�)344

��&� �� ,���������� #� $�����&� ,� ;��� !: ���������� ��� �/%����� 2-��-����� � ��������� -� � ������������� &���&� .�� &������� !�� ���������$ "� (@':>')L>'@� )343

���� �� !��-� � �--� �� �6 �#: �� ���� �������� � ��� ��������& ���-���: ��<������ ��� -��& 2-��-���� ���.�� ��&������&��%��������� � ���� ��� )'4:7=)L74(� )343

���� �� �99�� � �6 �#: �/%����� �� ��� ���6��� ��&�%��� ���&������������� &���� � ��������� -� -��& 2-��-���� ���.�� ��&���� � ���� ���))>:))3>L)(')� )33)

���� �� �6 �#� ������ $�� ���6� ��: ��������� �� ����� ��������:8: ����6 ,A 0���1� ��� ������� ��� �������� ���� � ���� ,������ B�.���6: ����� ������ )337� %%� *(=L*=*

B�6���.� "� ��.���6 �� ����� A: �/���&������� ����/ ����9��� ���������2-��-���� ���.�� �� ���.�� ��&��� ���%�������� �&� ���� ,�� )4(:@=(L@4(�)343�

B�6���.� "� ��.���6 �� ����� A: �������� &������ �� 2-��-����� &����&���&������ ����: ����&�� � &��� ���.�� �� -�������& �&����� � ������ +��$���3>:=3(L=34� )343-

B����� #� ����� �� ��%��� �� #��� �: ������� -�������� -� &���� � ������<������ ����/ �� ����% ������ ,�� ,�� *:>@)L>7*� )34*

?���.�6 �� R����� ��� ;������� � � �&� �: A-������ ����&���� .���&���& ������������ � �&� �� )>4:)'@7L)'7*� )3=>

�������� B� "�-���6 � ����6� "� B���� �� ?���� � ;�.�� ;� #�-� �:#����&�� �� %���&�� ��&���� K��&� ��� ��&&������ ��������� �� �&������� ���� �6 ��-������� ������ ���� @(:>L)*� )337

��%%�� "� A������ B� ?�& �� ������ : ���&���� ��������� ���.�� ��&���0���A1 ��&�� %������� �&������� �� %������� �&������ �-����) �&�����&���� �������� &����� �����$ ������ ,�� �$$ )4):3'(L3'7�)33)

��%%�� "� A������ B� ?�& �� ������ : ����� ������� -��.�� ���&������������� ���.�� ��&��� �� -��& 2-��-���� ���.�� ��&��� ��� ��&�� ���������� �� ����% �����$ ������ ,�� �$$ )43:4(*L4>)� )33(

��%%�� "� "�%%� ,��� "��&6� � ������ � ?�& �� ������� ���:+%�������� �� ���6��� ��&�%��� �/%����� � ������ ��������� &��������� ��� )((:7=>L74*� )33>

���� �� $�� �� ��%�9�?� �� ;���� �� : 8��&�� �� &����������> 0 ��)>1 �/%����� ���� �6 2-��-����� -� ������������� &������ �������� -� %>4 �������&������ %���� 6���� � ��� ���$ (=*:(**7L>*@@� )333

���� �� #���� !$� ��6� �� ��� � � A�&6 �� ���� ��� ��� ;: 8�%����.��� ����� �&� .�� � ����%��� %������� ���� (����� �� (:(4=L(3(� )337

����%� � �� �� #��� �� ����&� $�: ���� &����&�� �� �&�� &����&����� 8:���� 8;� ������� A� ��-��� �� 0���1����� #������ �����$���� ����������� ������� �������%��� �,: �� #� "������� )33(� %%� 37L))*

"��&6� ��� B��� �#: 8������&��9��� �� &��������� �� !8 � ��������� -�� .����� � ������ +��$��� )'>:*44L*3(� )33*

"��&6� ��� #���� �,� ������� ��� ��� ,Q: $��� �6 &���������: ������ ��%��&����� �� �&��� ����� ���� -��� 2-��-���� �� ���� &������� �����$�����)7:)7'=L)7)@� )3==

"������ �� ,�9��� �� #���-� ��� �--� ;�: !�� �&����� �� %������� ��%���� -� ���6���� ��� %����&� �� ��� %���� �-��� !�������� � ������$ (@':>344L>33@� )3=@

!�.- $� "������ !� ����� �: ���&���%�����& ������� �� %����� ����%����&������� ���� �� ���&�������� ������: %��&����� �� ���� �%%�&�����'�� (��� ��� "�� )" =7:*>@'L*>@*� )3=3

!��-� � "��� �� ;���� �� � �� �- �"� ?��.� $: ;�����&��� ���.����&��� 0A�A�=1 ��������� ������ �� %������� �&������ �&���� ������� ���� 6�����&����� � ������ +��$��� )'):*3L@>� )33>

+���� �B� ���- Q: �����9��� �� %������9�� �&�: � %���-�� ������ �����&�� �� %��&��������� 2-��-����� &������� �� � &������ ����� ����� ��� )'>:)'()L)'>)� )347

������� � ����� �� ������� B� ;���� ,��� ;��C��������-��� ���;���� �� � "��������;��� +: ���&� %�%������ �� ������� &���� �/%����&����������> 0 ��)>1 �� &����������) 0 ��)1 &���& ��&��� -�� �� ������� ����� .����� � ������ +��$��� )'3:37L)')� )33=

������ $�� ������� ��� ��� ,Q: $��� �6 2-��-���� &���������� � ��� ���$(@7:3@)7L3@()� )34)

���- Q� #��� �� ���� �,: ��������� �� &��&��� ����� ����&�� -���&��%����� 8� ���������� �� ������ ���&�%����� �� &������ -� %��������������� ���� ��&��%������ � �&� �� )@(:)>*'L)>@=� )34'

E� �� ����6 ,A: , ������������� &������ ����&� ��&�� %���� 6��� ����&����: ���� �( ���� �� &��������� � B, �/%������ � ���� ���)>7:*=>L*4>� )33=

�?�� ))*� B?� * ,� 8� (''' ��," 8B ! 8��� " � ?���8B� ?A �?��,��B �,!!8��" %10