pesquisa de patÓgenos controle microbiológico de produtos não estéreis
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PESQUISA DE PATÓGENOSPESQUISA DE PATÓGENOS
Controle Microbiológico Controle Microbiológico de Produtos não estéreisde Produtos não estéreis
Pesquisa de PatógenosPesquisa de Patógenos
Microrganismos a serem pesquisados devido à sua Microrganismos a serem pesquisados devido à sua presença indesejável nas formulações farmacêuticas, presença indesejável nas formulações farmacêuticas, segundo Resolução 481/99segundo Resolução 481/99:
- Staphylococcus aureus - nas preparações tópicas em Geral. - Pseudomonas aeruginosa - preparações tópicas, principalmente para áea dos olhos. - Escherichia coli - nas preparações orais. -Salmonella sp - Nas preparações orais.
-Obs. Pode ser tb interessante a pesquisa de outras cepas ou grupos microorganismos, tais como coliformes.
Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus
• Staphylococcus aureus– Familia Staphylococcaceae– Coco Gram (+) cacho de uva– Anaeróbios facultativos
• Doenças– Infecções cutâneas– Infecções oportunistas– Das vias urinárias– Sistêmicas potencialmente fatais
Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa
• Pseudomonas aeruginosa– Bacilo Gram (-)– Anaeróbios facultativos
• Infecta– Aparelho pulmonar– Aparelho urinário– Queimaduras– Infecções Sanguíneas
Escherichia coliEscherichia coli
• Escherichia coli– Familia Enterobacteriaceae– Bacilo Gram (-) flagelado– Anaeróbios facultativos– Fermentadores de açúcares- Lactose (+)
• Doenças– Gastroenterites
Salmonella spSalmonella sp
• Salmonella– Familia Enterobacteriaceae– Bastonetes Gram (-) flagelado– Anaeróbios facultativos– Fermentadores de açúcares
• Sintomas da Salmonelose– Febre– Náuseas– Vômito– Diarréia
Procedimentos:Procedimentos:
-Sofrem pequenas distinções entre os vários compêndios oficiais, entretanto os aspectos básicos são mantidos.
- Segue- se apenas com a citação dos diferentes meios de cultura recomendados.
Sequência para execução das etapas para realizar pesquisa de patógenos em amostras de produtos não
estéreis:
- Amostragem matéria-prima, medicamentos ou cosméticos não estéreis;
- Determinação tomada de ensaio da amostra a ser analisada;
- Enriquecimento não seletivo da amostra;
- Isolamento seletivo utilizando meios cultura seletivos;
- Realização coloração de gram e provas bioquímicas pertinentes.
Meios de EnriquecimentoMeios de Enriquecimento
Tomada de ensaio: 10 g(mL). Enriquecimento não seletivo (100 mL): - Caldo lactose (CL): Escherichia coli e Salmonella sp - Caldo caseína-soja (TSB): Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa.
Ambos incuba: 35 – 37ºC - 24 a 48 horas
Enriquecimento seletivo para Salmonella sp: - 10 mL da suspensão resultante do caldo não seletivo para os caldos tetrationato (100mL) e selenito-cistina (100mL) por 24 horas a 36±1ºC.
Meios de DiferenciaçãoMeios de Diferenciação
- Após enriquecimento seletivo e não-seletivo (Salmonella sp), alíquotas são transferidas, por repique (estria), para meios de cultura para isolamento e diferenciação visando a identificação do microorganismo.
Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus
• Ágar Baird Parker
– colônias pretas, halo transparente.
Ágar Vogel-Johnson• colônias pretas, halo amarelo
Ágar Manitol• colônias amarelas, halo amarelo
Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus
Ágar Vogel-Johnson
Ágar ManitolMeio de cultura sem inoculação
• Ágar Pseudomonas Base– colônias amareladas a douradas
Placa inoculadaPseudomonas aeruginosa
Placa não-inoculada
• Ágar Cetrimida– colônias esverdeadas com fluorescência
Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa
Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa
• Ágar Pseudomonas para Fluoresceína (A e C)– colônias claras e amarelas, com fluorescência amarela.
• Ágar Pseudomonas para Piocianina (B e D)– colônias esverdeadas, com fluorescência azul.
• Ágar Mac Conkey– colônias vermelho-tijolo a púrpura – com halo de precipitação de bile
Escherichia coliEscherichia coli
• Ágar Eosina-Azul de metileno (EMB)– colônias vermelho-escuras, brilho metálico
Escherichia coliEscherichia coli
• Ágar Endo– colônias rosadas a vermelho, brilho metálico.
Salmonella spSalmonella sp
• Enriquecimento seletivo– caldo selenito-cistina e tetrationato
• Meio de isolamento
• Ágar Verde Brilhante– colônias transparentes
• Ágar sulfito de bismuto– colônias pretas ou esverdeadas
Teste de promoção de crescimento dos meiosTeste de promoção de crescimento dos meios
• Verificar a capacidade de promoção de crescimento do meio de cultura.
• São utilizados microrganismos testes:
– Para TSB (tryptone soya broth) , TSA (tryptone soya agar) : S.aureus e P. aeruginosa– Para CL (caldo lactose): E.coli e Salmonella– Para Sabouraud: C.albicans
Conforme Portaria 348/97 que determina a todos estabelecimentos produtores de Produtos de Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes, o cumprimento das Diretrizes estabelecidas no Regulamento Técnico - Manual de Boas Práticas de Fabricação para Produtos de Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes.
TSA (Tryptone Soya Ágar) como meio de crescimento para bactérias, incubação a 35 a 37º C, durante 48h.
SDA (Sabouraud Dextrose Ágar) como meio de crescimento para fungos, incubação a 20-25º C, durante 7 dias.
MÉTODO DE ANÁLISE DE PRODUTOS NÃO ESTÉREISMÉTODO DE ANÁLISE DE PRODUTOS NÃO ESTÉREIS
Inativante + diluente9 mLPote de
creme
10g
TSB CL
10g
SAB TSA CETR
MAN. Mac SALM
10-1
Inativante + diluente90 mL
0,1mL
Inativante + diluente9 mL0,1mL 0,1mL
10g 1mL 1mL
10-2 10-3
E. coli Salmonella
Pseudomonas
StaphyloStaphylococcuscoccus
fungos bactérias