Bagian Mikrobiologi FK UNISSULA

PROSEDURPengambilan dan Pengiriman

Bahan Pemeriksaan Mikrobiologi

PEMERIKSAAN MIKROBIOLOGI• Pemeriksaan mikrobiologi Tegakkan Dx

etiologik• Deteksi mikroorganisme diteruskan uji

kepekaan antimikroba in vitro• Kekurangan membutuhkan waktu

yang lama • cth: M.tuberculosis (beberapa minggu)

PENDAHULUAN

DIAGNOSTIC CYCLE

Patien consults physician with sign /symptoms

Physician examines patient and makes a tentative diagnosis

Laboratory request

Specimen are directtly examined(microscopic stains may be set up

Presumptive report

Specimens are processed. Culture media selected, inoculated and incubated

After incubation, cultures are examined

Identification are examined

Final culture report is prepare and sent to physian`s office, clinic, or hospital

Syarat SpesimenBahan pemeriksaan yang diambil dari tubuh

penderita• Darah• Urin• Feses• Dll, tergantung gejala klinik

Prinsip Spesimen :Representative (mewakili proses infeksinya )

• Sputum pada radang paru-paru• cairan sinus untuk sinusitis,

Kesalahan dalam pemilihan, pengambilan ,dan pengiriman memberikan hasil yang tidak sesuai

Syarat SpesimenPatogenesis suatu penyakit cth : Salmonella typhii, pada minggu pertama dapat ditemukan di darah dan pada minggu kedua dapat ditemukan di tinja Spesimen sebelum pengobatan anti mikroba Jumlah adekuat Cara pengambilan dengan teknis aseptik,

wadah harus steril Segera dikirim ke laboratorium untuk segera

diproses

Tempat spesimen dan Pengiriman• Sterilkan wadah autoklaf (tidak dianjurkan

dengan cairan desinfektan)• Wadah rapat &tahan bocor• Spesimen yang diambil dari usapan (swab)

medium transport (beberapa mikroba tidak tahan terhadap kekeringan)

Contoh medium transport :–Amies medium, medium stuart, medium

carry blair• Pemberian label (nama penderita , umur, jenis

kelamin dan tanggal pengambilan spesimen)

Dahak (sputum)• Dahak spesimen penderita dg penyakit yang

menyerang paru-paru (bukan saliva !!)• Diperlukan batuk yang dalam untuk

mengeluarkannya ( kadang diperlukan expectoran)

• Teknik invasif untuk pengambilan sputum (dari bronkhoskopi, penghisapan melalui trakheostomi, aspirasi paru-paru langsung)

• Spesimen yang berupa dahak harus segera diproses dalam waktu 1-2 jam

TUJUAN• Diagnosis• Monitoring terapi

TEHNIK 3 sampel sputum unt diagnosis tuberkulosis ``on the spot``,

``early morning``, ``on the spot`` o Sewaktu : pada saat pasien datango Pagi hari : sebelum makan/ minum /melakukan aktivitaso Sewaktu ketiga`` dapat kapan saja , diutamakan minimal

2 hari (rekomendasi IUATLD ) Untuk Follow Up Terapi Sputum pagi (berakhirnya

intensive phase``, selama ``continuation phase``,dan setelah berakhirnya terapi)

SPUTUM UNTUK PEMERIKSAAN BTA

• Jumlah cukup (3-5 ml memungkinkan spesimen berisi material sputum, tidak hanya saliva)

• Jika < 3 ml memungkinkan hasil negative palsu(hanya berisi saliva, sebaiknya tidak digunakan)

Klasifikasi Makroskopis

SPUTUM UNTUK PEMERIKSAAN BTA

• ``salivary`` : jika isinya sebagian besar hanya saliva• ``mucous`` : jika sebagian besar terdiri dari mukus• ``purulent``: jika sebagian besar terdiri dari pus• ``muco purulent``: jika terdiri dari mukus dan pus• ``bloody`` : jika sebagian besar terdiri dari darah

Cara pelaporan menurut International Union Against Tuberculosis Lung Diseases

(IUATLD)Jumlah Basil Hasil yang Dilaporkan

(-) BTA / 100 LP 0 (negatif)

1-9 BTA / 100 LP 1-9 BTA/100LP (tulis jumlah)

10-99 BTA / 100 LP 1+ (+ / positif 1)

1-10 BTA / LP 2+ (++ / positif 2)

>10 BTA / LP 3+ (+++ / positif 3)

BAKTERI TAHAN ASAM• Famili : Mycobacteriaceae• Ordo : Actinomycetales• Genus : Mycobacterium• Spesies :

–Mycobacterium tuberculosis–Mycobacterium bentuk lain

»Mycobacterium bovis»Kelompok nontuberculosis mycobacteria »Mycobacterium leprae

Mycobacterium tuberculosisEtiologi Tuberkulosis pada

organ paru Kelenjar limfe Peritoneum Kulit Tulang Sendi Meningen dan otak

Penularan Melalui: inhalasi (droplet infection), tertelan & kontak langsung dengan kulit

Mycobacterium tuberculosis• Intraselluler fakultatif (biasanya pd makrofag)• Pertumbuhan lambat (multiplikasi tiap 18 – 24 jam)• Dinding sel khas, terdiri dari : peptidoglikan,

Polisakarida, kaya akan lipid (60 % asam mikolat (glycolipid))

• Memiliki enzim superoxide dismutase• Mati pada :

Suhu 60◦C dalam 15–20 mnt Sinar matahari 2 jam Dalam sputum 20–30 jam Droplet 8 – 10 jam Kultur viabel 6–8 bulan pada suhu ruangan

Fungsi Lipid pada M. tuberculosis• Impermeability to stains and dyes• Resistance to many antibiotics• Resistance to killing by acidic and alkaline

compounds• Resistance to osmotic lysis via complement

deposition• Resistance to lethal oxidations and survival inside of

macrophages

Morfologi :– Basil langsing– soliter, lurus/sedikit

bengkok, ujung tumpul, non motil, spora (-), kapsul (-)

– Panjang = 1-4 µm, lebar = 0,2-0,5 µm

– Mikroskop elektron • Dinding sel tersusun dari

bahan seperti lilin (wax)• Membran sitoplasma

semipermeabel• Peptidoglikan berikatan secara

kovalen dengan arabinogalaktan-mikolat

Pewarnaan M.tuberculosis– Gram : gram (+)– Pewarnaan tahan asam :

• Ziehl Neelsen (ZN) : bakteri warna merah terang, latar belakang biru.

• Kinyoun• Tan Thiam Hok (TTH)

– Material : sputum, masa perkejuan, pus, urin, cairan pleura, LCS, cairan peritoneum, cairan bilas lambung dan biopsi jaringan.

– Merupakan tehnik Dx : murah,mudah, tehnologi sederhana, sensitifitas tinggi

Perbenihan :– Waktu inkubasi : 3-8 minggu– Sifat kuman aerob mutlak– Morfologi koloni : warna krem/putih

kekuningan(buffy), permukaan tidak rata (seperti kembang kol), bau seperti aroma buah

– Media perbenihan : Lowenstein Jensen (LJ), Petragnani media, Middlebrook, Sula, Tharsis, dll

Koloni M.tuberculosis pada medium Lowenstein Jensen

TERIMA KASIH