par helena alves- remy namc, équipe communication chimique cnrs, umr 8620
DESCRIPTION
Analyse des lipides par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC-MS). Par Helena ALVES- REMY NAMC, équipe communication chimique CNRS, UMR 8620 Université Paris Sud, bât 446 ORSAY. Octobre 2004. LIPIDES. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
Analyse des lipides par chromatographie en phase gazeuse
couplée à la spectrométrie de masse (GC-MS)
Par Helena ALVES- REMYNAMC, équipe communication chimique
CNRS, UMR 8620Université Paris Sud, bât 446
ORSAY. Octobre 2004
Définition : Molécules insolubles dans l’eau, mais solubles dans les solvants organiques non polaires comme l’éther, le chloroforme, le méthanol ou le cyclohexane.
LIPIDES
Lipides simples :
• Alcools, aldéhydes, acides, esters gras• Acylglycérols (MG, DG, TG)• Stérols• Hydrocarbures (alcanes, alcènes, ß-carotène,..)• Quinones (vit. K, coenzyme Q)• Céramides • Cires• Lipides aminés (dopamine,…)
Lipides complexes :
• Phospholipides (PE, PI, PC, PS, SM, …)
• Glycolipides (groupes sanguins,…)
Mise en évidence des différentes classes de lipides
Chromatographie sur Couche Mince (CCM) ou Thin Layer Chromatography (TLC)
Chromatographie
Définition:
Méthode de séparation des constituants d’un mélange qui utilise deux phases non miscibles:
• Une phase stationnaire qui établit des liaisons +/- fortes avec les molécules à séparer
• Une phase mobile qui entraîne et décroche les molécules retenues sur la phase stationnaire.
CCM lipides
Migration
1 6 c m
8 c m
4 c m
d é p ô t
Té c h
• Phase stationnaire = Gel de silice
• Phase mobile = 4 mélanges de solvants différents
• Visualisation des spots: sous UV après vaporisation de Primuline.
R f :
D ista n c e p a r c o u r u e p a r le l ip id e
D ista n c e p a r c o u r u e p a r le fr o n t so lva n t
Lipides totaux transportés par la lipophorine
• Lipophorine: lipoprotéine hémolymphatique spécialisée dans le transport des lipides chez les insectes.
• Lipides totaux extraits par un mélange Méthanol – Chloroforme (1:2, v/v).
Lipides transportés par la lipophorine
1 6 c m
8 c m
4 c m
d é p ô t
TL ip o
C H - ( C H ) n - C H3 2 3
Hydrocarbures
C H - ( C H ) n - C H = C H - 3 2
( C H ) n - C H2 3
Lipides transportés par la lipophorine
1 6 c m
8 c m
4 c m
d é p ô t
TL ip o
Hydrocarbures
Triglycérides
CO
C H 2 O
C H
C H
2O C R
1
O C
O
R 3
O
R
Lipides transportés par la lipophorine
1 6 c m
8 c m
4 c m
d é p ô t
TL ip o
Hydrocarbures
Triglycérides
R C
O
O H
AGL
Lipides transportés par la lipophorine
1 6 c m
8 c m
4 c m
d é p ô t
TL ip o
Hydrocarbures
Triglycérides
AGL
C H
C H
C H2
2O C
O
R1
H O
O C
O
R2
D G 1 ,3
DG 1,3
Lipides transportés par la lipophorine
1 6 c m
8 c m
4 c m
d é p ô t
TL ip o
Hydrocarbures
Triglycérides
AGL
DG 1,3
R C
O
C H2
O
C H
C H2
2O C
O
R1
O H
D G 1 ,2
DG 1,2
Lipides transportés par la lipophorine
1 6 c m
8 c m
4 c m
d é p ô t
TL ip o
Hydrocarbures
Triglycérides
AGL
DG 1,3DG 1,2
H O
Sit o s t éro l
Stérols
Lipides transportés par la lipophorine
1 6 c m
8 c m
4 c m
d é p ô t
TL ip o
Hydrocarbures
Triglycérides
AGL
DG 1,3DG 1,2 Stérols
C H O H
C H2 O C
O
R
C H O H2
MG
Lipides transportés par la lipophorine
1 6 c m
8 c m
4 c m
d é p ô t
TL ip o
Hydrocarbures
Triglycérides
AGL
DG 1,3DG 1,2 Stérols
MG
R C
O
C H2 O
C H
C H2
2O C
O
R1
O P
O
O
O C H2
C H2
N H2
P E-
PE
Lipides transportés par la lipophorine
1 6 c m
8 c m
4 c m
d é p ô t
TL ip o
Hydrocarbures
Triglycérides
AGL
DG 1,3DG 1,2 Stérols
MGPE
R C
O
C H2
O
C H
C H2
2O C
O
R1
O P
O
N
O
O C H2
C H2
+C H
3C H
3C H
3P C
PC
Identification individuelle de chaque lipide
Chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse ou GC-MS
Chromatographie en phase gazeuse ou CPG:
• Phase mobile = éluant gazeux inerte (He, H2, N2) qui entraîne le mélange à analyser.
• Phase stationnaire, fixée sur un support inerte, retient +/- les constituants du mélange.
Injection à haute températureCPG s’applique aux gaz et aux composés susceptibles
d’être vaporisés sans décomposition à haute température
G a z v ec teu r
Zo n e ch au ffée - 30 0°C
L in er
S ep tu m en m éth y l-silico n e
C arto u ch ech au ffan te
Th erm o co u p le
é c h a n tillo n liq u id e
C o lo n n e
En masquant les fonctions polaires, elles permettent d'augmenter:
• la volatilité• la stabilité• la détectabilité
Réactions de dérivation des lipides
Alkylation; Silylation
CO
HR
O
Ac i de g r as
+ C H3 O H
KO H
B F3C
OR
O C H3
E ste r m é thyl i que
Alkylation: réduit la polarité des lipides en remplaçant les H actifs par des groupements alkyles
Silylation: réduit la polarité des lipides en remplaçant les H actifs par des groupements triméthylsilyl ou tert-butyl-diméthyl-silyl (t-BDMS)
CO
HR
O
Ac i de g r as
+ M T B S T F A C
O
RO S i C
C H3
C H 3
C H3
C H3C H 3
1 H , 6 0 °C
t-B D M C S
D é r i vé t-B D M S
Séparation des lipides dans la colonne capillaire
G a z ve c te ur
T e m ps d 'a na lys e
0 t 0 t t t1 2 3
C o lo nneM é la ng eà s é pa re r
P ha s e s ta tio nna ire
= T e m ps de ré te ntio n
Phase stationnaire
C H 3
S i OC H 3
C H 3
C H 3 C H 3C H 3
S i S i S i S iO O O
C H 3 C H 3
. . . . . . . O
C H 3
. . . . . .
Sé par ati o n e n fo nc t i o n de : - l a po l ar i té ( i nté r ac t i o ns hydr o pho be s)- l a m asse m o l ai r e- l a te m pé r atur e
Phase stationnaire apolaire de type BP-X5 = Polymethylphenylsiloxanes
5% diphényl95% dim éthyl po lysilo xaneB P X5
Le détecteur de masse
S o u rce S ys tèm e d isp ers if D étec teu rM olécu le s S ign a lion s ion s
F e n te d 'e n tré e F e n te d e so rt ie Sp e c tre
S o u rc e d 'io n s: io n isa t io n d e s m o lé c u le s e t fra gm e n ta t io n d e s io n s
S y stè m e d isp e rsif: sé p a ra t io n d e s io n s su iva n t l e u r ra p p o r t m a sse / c h a rge
D é te c te u r: m e su re l 'a b o n d a n c e re la t ive d e c h a q u e io n
A n a ly s e d e s lip id e s p a r G C -M S
H e liu m1 5 p s i
F o ur
Inje c te ur s p litle s s3 0 0 °C
S o urc ed 'io ns
E I +
Inte rfa c e3 5 0 °C
P o m pa g e du v ide
A na ly s e urqua dripo la ire
P ho to -m ultip lic a te ur
d 'é
3 0 0 °C m /z 3 0 -8 0 0 D a
D e te c te ur de m a s s e M D -8 0 0
A cq u isit io n e t t ra it em en t d es
d o n n ées( M a ssL a b )
C o lo nne c a p illa ireB P - X 5 , L = 3 0 m
1 0 0 à 2 0 0 °C a v e c 1 0 ° /m in
C hro m a to g ra m m eS pe c tre de m a s s e du c o m po s é x
2 0 0 à 3 6 0 °C a v e c 1 0 ° /m in3 0 m in à 3 6 0 °C
G C 8 0 0 0
L ip ide s s ily lé s
ide ntific a tio n de x
1 m A
Io ns
7 0 e V
e -
F ila m e nt
R e po us s e ur
T ra ppe
L e ntille s de fo ca lis a tio n
A na lys e urIntro ductio né cha ntillo n
B lo c s o urc e3 0 0 ° C
P rin c ip e d 'u n e sou rce à im p act é lec tron iq u e
Electrons cibles de l’impact électronique
• Électron arraché, par ordre de préférence:
• 1) électron des doublets n (O, N, …)• 2) électron Π (double liaison)• 3) électron σ
• Réarrangements moléculaires• Rupture de liaisons• Les fragments chargés + sont détectés.
F iltre d e m a sse q u a d rip o la ire
S o urc e
D é te c te ur
Io ns sta ble s
2 pa ire s de ba rre sc o nduc tric e s , is o lé e s
c o nne c té e s 2 pa r 2
+ U + V c o s (w t)
-U -V c o s (w t)
Io n s
V o ltage co ntinu + , V o ltage a lternatif
V o ltage co ntinu - , V o ltage a lternatif
C ham p électro sta tiqu equ i fa it o scille r les io ns
m /z d o n n é
A n a ly s e d e s lip id e s p a r G C -M S
H e liu m1 5 p s i
F o ur
Inje c te ur s p litle s s3 0 0 °C
S o urc ed 'io ns
E I +
Inte rfa c e3 5 0 °C
P o m pa g e du v ide
A na ly s e urqua dripo la ire
P ho to -m ultip lic a te ur
d 'é
3 0 0 °C m /z 3 0 -8 0 0 D a
D e te c te ur de m a s s e M D -8 0 0
A cq u isit io n e t t ra it em en t d es
d o n n ées( M a ssL a b )
C o lo nne c a p illa ireB P - X 5 , L = 3 0 m
1 0 0 à 2 0 0 °C a v e c 1 0 ° /m in
C hro m a to g ra m m eS pe c tre de m a s s e du c o m po s é x
2 0 0 à 3 6 0 °C a v e c 1 0 ° /m in3 0 m in à 3 6 0 °C
G C 8 0 0 0
L ip ide s s ily lé s
ide ntific a tio n de x
15.000 20.000 25.000 30.000 35.000 40.000 45.000 50.000 55.000 60.000 65.000 70.000 75.000
rt0
100
%
47.18
46.97
27.32
19.85
1 9 .4 5
1 5 .7 0
2 3 .8 5
20.30
24.49
2 8 .7 3
43.37
33.40
29.21
33.29
50.69
47.77
54.09
51.27
57.27
62.76
l ip id e sP
T r ia c y l-sn -g ly c é r o ls
S té ro ls
12:0
-14:
0 1
,2
14:0
-14:
0 1
,2
16:0
-16:
1
16:0
-18:
1
12:0
-14:
1
14:0
-14:
1
D ia c y l-sn -g ly c é r o ls
H y d r o c a r b u r e s
M GA G L
12:0
-12:
0 1
,2
Tri
capr
ine
- SI
12:0
-14:
0 1
,3
14:0
-14:
0 1
,3
14:0
-16:
1
16:0
-18:
1
18:0
-18:
0
14:0
x3
C12
:0
C14
:0
C16
:1 C16
:0
C18
:1
C23
:1
C23
:0
C25
:1
C26
:0-S
I
2MC
26
2MC
28
7,11
-HD
C27
:1C
27:0
7,11
-ND
C18
:2
C18
:0
C25
:0
S ép aration et id en tification d es lip id es tran s p ortés p ar la lip op h orin e p ar G C-M S
16:0
-16:
112
:0 x
3
12:0
x2-
14:
0
16:0
-18:
0
12:0
- 14:
0 X
2
14:0
- 16:
1- 1
4:0
12:0
-12:
0 1
,3
fe m e lle â g é e d e 4 jo u r s
Acides gras libres (AGL) avant dérivation :
3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0 1 7 0 1 8 0 1 9 0 2 0 0 210 2 2 0 2 3 0 2 4 0 2 5 0 2 6 0 2 7 0 2 8 0 2 9 0 3 0 0
m /z0
1 0 0
%
7360
4 1
3 9
3 6
4 3
5 5
4 5
5 3
5 1
5 7
6 9
6 1
6 7
6 5
129
8 3
7 48 1
7 9
8 5 9 78 7
9 5
9 3
1 1 59 8
1 1 11 0 1
1 0 9 1 2 51 1 6
185
1 7 11 4 3
1 3 0
1 4 01 5 7
1 4 41 5 3
1 6 6 1 7 2
228
1 9 91 8 6
1 9 2 2 0 7208 2 2 3
2 2 9
M . +
O
O H
C 1 4 :0
Esters méthyliques d’acides gras :
R C
+O
O C H 3
M LC H 3 O
C
O+H
7 4
3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0 1 7 0 1 8 0 1 9 0 2 0 0 2 1 0 2 2 0 2 3 0 2 4 0 2 5 0 2 6 0 2 7 0 2 8 0 2 9 0 3 0 0 3 1 0 3 2 0 3 3 0 3 4 0 3 5 0 3 6 0 3 7 0 3 8 0 3 9 0 4 0 0
m /z0
1 0 0
%
74
4 3
4 1
3 9
3 2
5 5
5 3
5 7
6 9
5 9
6 7
6 0
87
7 5
8 3
8 1
1 4 3
9 7
8 8 1 0 1 1 2 9
1 1 1 1 1 51 3 0
2 5 51 9 9
1 8 51 5 71 4 4 1 7 11 8 1 1 8 6
2 1 32 0 0 2 4 12 2 7 2 4 2
2982 6 72 5 6 2 6 9 2 9 9
E s te r mé thyl iq ue d e C 1 8 :0
M. +
AGL après silylation :
4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 0 2 8 0 3 0 0 3 2 0 3 4 0 3 6 0 3 8 0 4 0 0 4 2 0 4 4 0 4 6 0
m /z0
1 0 0
%
285
7 5
7 3
4 3
41
3 9
575 5
4 7
6 95 9
1 2 9
1 1 7
1 1 5
9 57 69 3 9 9 1 0 5 1 1 8
131
1 7 1
1 4 3 1 5 7 1 5 91 8 5
1 7 2 1 8 7 2 0 7 2 1 32 4 12 2 7 2 6 92 4 3 2 5 5
2 8 6
2 8 7
3272 8 8
3 2 52 9 9 3 2 83 4 1 342
M -15M+.
S i C
O
O
M -57
M -57
131
Standard de distéarine après silylation
4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 0 2 8 0 3 0 0 3 2 0 3 4 0 3 6 0 3 8 0 4 0 0 4 2 0 4 4 0 4 6 0 4 8 0 5 0 0 5 2 0 5 4 0 5 6 0 5 8 0 6 0 0 6 2 0 6 4 0 6 6 0 6 8 0 7 0 0 7 2 0 7 4 0 7 6 0 7 8 0 8 0 0
m /z0
1 0 0
%
341
4 3
4 1
5 7
5 5 1317 3
6 97 5
1 2 9
8 3 1 1 78 5
9 79 8
1 7 1
1 4 7
267
1 8 5 2 3 13 3 9
2 9 9
681
3 4 2 455
4 1 53 4 33 5 5
4 5 44 1 6
4 5 66 0 6
4 6 9 6 7 6
6 8 3
6 8 4
6 8 5
A
B
C
M -57
+
+ +
C 1 8 :0
C 1 8 :0
tB D M S
Spectre de la tricaprine
4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 0 2 8 0 3 0 0 3 2 0 3 4 0 3 6 0 3 8 0 4 0 0 4 2 0 4 4 0 4 6 0 4 8 0 5 0 0 5 2 0 5 4 0 5 6 0
m /z0
1 0 0
%
155
5 7
4 3
4 1
3 9
5 5
7 1
6 9
6 7
8 5
8 4
7 3
9 8
8 61 1 2
1 3 71 1 6
383
229
2 2 7
1 5 61 7 1
1 5 9 1 8 5 2 1 31 9 6
2 7 0
2 3 02 4 1 2 5 5
2 8 3
2 7 2
3 3 9
3 2 53 1 12 9 7
3 6 9
3 4 0 3 5 33 7 0
3 8 4
4 2 43 8 54 5 2
A +
C +
B +
C 1 0 :0
C 1 0 :0
C 1 0 :0
TG composé de 3 AG différents
4 0 6 0 8 0 100 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 0 2 8 0 3 0 0 3 2 0 3 4 0 360 3 8 0 4 0 0 4 2 0 4 4 0 460 4 8 0 5 0 0 5 2 0 5 4 0 5 6 0 5 8 0 6 0 0 6 2 0 640 6 6 0 6 8 0
m /z0
1 0 0
%
523
5 7
5 5
4 3
4 1
3 9 5 3
2366 9
6 7
8 3
7 1
8 1
2119 5
8 5
9 8
1 0 9
1 1 11 3 5 1 3 7
1 9 31 5 1 1 7 1
1 5 7 1 8 51 9 4
2 2 1
521
285239
2 4 0
313
311
3 0 9
2 9 5
5 2 0
4 2 3339
3 2 6
3 6 7
3 6 5
3 5 4
3 9 5
3 8 1
4 2 1
4 0 9
4954 7 7
4 5 14 2 45 0 5
5495 2 4
5 2 5
5 5 1
5 5 25 6 4 5 7 7 5 9 2 6 0 9 6 3 7 6 8 8
C 1 4 : 0
C 1 6 : 0
C 1 6 : 1
A+
A+
A+ B+
B+
B+
C +
C +
C +
Mécanismes de fragmentation des acyl-sn-glycérols:
F orm ation d es ion s A +
.
.R
O H
1 OO
O CR 2
3O
+
O
R
F orm ation d es ion s B e t C
R - C O O2 ( o u t B D M S O )
R
O
H1 O
+
O(R - C H )23 C M - R C O O2
R C O3
R
O
1 O O H+
B R C O O H + 5 71
O
+ +
+
+
.
. .
1,3-dimyristine
4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 0 2 8 0 3 0 0 3 2 0 3 4 0 3 6 0 3 8 0 4 0 0 4 2 0 4 4 0 4 6 0 4 8 0 5 0 0 5 2 0 5 4 0 5 6 0 5 8 0 6 0 0 6 2 0 6 4 0 6 6 0 6 8 0
m/z0
1 0 0
%
569
5 7
4 3
4 1
3 9
5 5
4 4
5 6 7
2852117 37 1
6 9
6 7
7 5
8 59 5 9 7
1 0 9 1 7 1131
1 4 71 4 9
1 8 3 1 9 1
2 8 3
2 1 22 3 9
2 3 6 2 5 7
3 5 92 8 6
3 3 93 1 32 8 7 3 2 6
3 5 9
3 6 0
3994 9 44 1 3
4 5 1 4 9 24 9 5
5 7 0
5 7 1
5 7 2
C '
C 1 4 :0
C 1 4 :0
OS iC
A+ B+
C +
M - 5 7
1,2-dimyristine
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700
m /z0
100
%
285
57
43
41
44
21173
67
17113175
831 2 9
95 115
147 149 191
283236
212 237269
569
286 399
339287
311 326395
359383
567
400
421 494477451423 520495 565549
570
571
572611 613
CA
B
M -5 7
C 14:0
C 14:0
O S i C
M - 5 7
+ +
+
Hydrocarbures ramifiés:Formation de carbocations secondaires
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440
m /z0
100
%
85
57
43
55
54
71
69
58
83
82
72
81
99
97
96
86
95
168113
111
110
109
127
125
124
1 4 0
139
138
133
155
154
147166
196
169
183170 195
197
224
211
323253239238 266 309294 322 324 341 355
M -1 5
M + = 3 3 8
+io ns d é tec té s
m /z m /z
+
1 6 8 196
Localisation des doubles liaisons:dérivation au DMDS
I 2
C H3
C H3
C H3
C H3
S
SS S
D M D SC C C C
Spectre du 7-pentacosène
C H 5 1623 )(C H C H
S
C H 2 )(C H C H 3
1 4 5
299
S C H 3
C H 3
+ .
.+
4 0 6 0 8 0 1 0 0 120 140 160 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 0 2 8 0 3 0 0 3 2 0 340 360 380 4 0 0 4 2 0 4 4 0 4 6 0 480 5 0 0 5 2 0 5 4 0 560
m /z0
1 0 0
%
299145
4 3
4 1
3 2
5 5
4 7
6 19 7
6 9
8 3
8 1 9 5
1 0 9 111 1 2 9
1 4 6
2 8 31 4 7
1 7 31 5 7 199 2502 1 3 2 2 72 7 1
300
4443 0 1
3 9 73 0 2
3813 4 83 1 1 3 2 5 355 398445
M + 2S C H3
7-p entac o s ène
Phéromones chez Drosophila melanogaster Femelle
7,11 Heptacosadiene
1 7 8 11 12 27CH3-(CH2)5-CH=CH-(CH2)2-CH=CH-(CH2)14-CH3
5,9 Heptacosadiene
1 5 6 9 10 27CH3-(CH2)3-CH=CH-(CH2)2-CH=CH-(CH2)16-CH3
7 Tricosene
1 7 8 23
CH3-(CH2)5-CH=CH-(CH2)14-CH3
7 Pentacosene
1 7 8 25
CH3-(CH2)5-CH=CH-(CH2)16-CH3
Cis-vaccenyl acetate
1 7 8 18
CH3-(CH2)5-CH=CH-(CH2)9-CH2-O-C-CH3
O
Phéromones chez Drosophila melanogaster
Mâle
Identification des phospholipides
• 1) identification du type de PL par CCM grâce à la co-migration de standards
• 2) identification des AG estérifiés par GC-MS
Lipides transportés par la lipophorine
1 6 c m
8 c m
4 c m
d é p ô t
TL ip o
Hydrocarbures
Triglycérides
AGL
DG 1,3DG 1,2 Stérols
MGPE
R C
O
C H2
O
C H
C H2
2O C
O
R1
O P
O
N
O
O C H2
C H2
+C H
3C H
3C H
3P C
PC
Analyse des spots correspondant à PE et à PC par GC-MS
4 8 .0 0 0 4 9 .0 0 0 5 0 .0 0 0 5 1 .0 0 0 5 2 .0 0 0 5 3 .0 0 0 5 4 .0 0 0 5 5 .0 0 0 5 6 .0 0 0 5 7 .0 0 0 5 8 .0 0 0 5 9 .0 0 0
r t0
100
%
0
100
%
5 3 .7 6 5
5 6 .8 2 2
PE
5 6 .7 9 0
5 3 .4 0 3
5 6 .5 5 5
5 4 .5 1 6
PC
PL
16:
0- 1
6:1
PL
16:
0- 1
6:1
PL
16:
0- 1
8:0
PL
16:
0- 1
8:1
PL
16:
0- 1
8:1
PL
16:
0- 1
8:0
PL
16:
0- 1
8:2
X 3 0
L’analyse des lipides par GC-MS permet :
• d’identifier les AG libres• d’identifier les AG estérifiés dans les MG, DG,
TG et PL• de distinguer entre DG 1,2 et 1,3• d’identifier les hydrocarbures• de localiser la position d’une ramification• de localiser la position d’une double liaison• d’identifier les stérols