Monol isaTM Anti-HBs PLUS

192 adet 72566 testi

NSAN SERUMUNDA/PLAZMASINDA MMÜNOENZ MAT K YÖNTEMLE ANTI-HB ANT KORU ALGILAMA VE DOZAJ K T

mala tçı kal ite kontrolü

Bio-Rad irketi tarafından imal edilen ve pazarlanan tüm ürünler, hammaddelerin teslim alınmasından nihai ürünlerin pazarlanmasına kadar bir kalite güvence sistemi kontrolündedir. Her nihai ürün partisi kalite kontrole tabi tutulur ve ancak kabul kriterlerine uydu u takdirde pazarlanır. Her partinin üretim ve kontrol dokümantasyonu irketimiz tarafından muhafaza edilir.

2

Ç NDEK LER

1. TEST N AMACI

2. TEST SUNUMU

3. TEST PRENS B

4. K T N Ç NDEK LER

5. ÖNLEMLER

6. H JYEN VE GÜVENL K TAL MATLARI

7. GEREKL OLAN ANCAK ÜRÜNLE B RL KTE VER LMEYEN DONANIM

8. REAKT FLER N HAZIRLANMASI

9. SAKLAMA - GEÇERL L K

10. NUMUNELER

11. ÇALI MA ARTLARI

12. KAL TAT F VE KANT TAT F YÖNTEMLER Ç N ELDE ED LEN SONUÇLARIN

DO RULANMASI

13. HESAPLAMALAR VE SONUÇLARIN DE ERLEND R LMES

14. NUMUNE VE REAKT F LAVELER N N SPEKTROFOTOMETR K YÖNTEMLE

KONTROL ED LMES

15. TEST L M TLER

16. PERFORMANSLAR

17. KAYNAKÇA REFERANSLARI

3

1 - TEST N AMACI MonolisaTM Anti-HBs PLUS insan serumu veya plazmasında bulunabilen hepatit B virüsünün yüzey antijenine (anti-HB) yönelik antikorların immünoenzimatik yöntemle kalitatif ve kantitatif olarak belirlenmesini sa lar.

2 - TEST SUNUMU Hepatit B yüzey antijenine yönelik antikorların varlı ı Hepatit B virüs (HBV) enfeksiyonu te hisi konulması ve hastalı ın ilerlemesi hakkında öngörüde bulunulması açısından önemli bir etkendir. Akut enfeksiyon safhasındaki hastalarda, anti-HB'ler vakaların hemen hemen yüzde 80'inde Hepatit B yüzey antijenlerinin (HBs Ag) ortaya çıkmasından 1 ila 3 ay sonra tespit edilir. Epidemiyolojik takipler sırasında, anti-HB Hepatit B'ye kar ı a ılanmı bireylerde Hepatit B virüsüne maruz kalma riskini de erlendirmek, a ılama faaliyetlerini takip etmek ve özel immünoglobülinler hazırlamak için yüksek antikor konsantrasyonlu plazmaları seçmek amacıyla kullanılır. MonolisaTM Anti-HBs PLUS solid faz olarak Hepatit B yüzey antijenlerine (HBs Ag, alt tipler ad ve ay) kar ı duyarlı kılınmı mikroplakalar ve HBs Ag yüzey antijeni (alt tipler ad ve ay) ile i aretlenmi peroksidazlı (yabani turp) bir konjugat kullanan sandviç tipi bir direkt EIA testidir. Anti-BHs konsantrasyon seviyeleri Dünya Sa lık Örgütü tarafından hazırlanan "WHO AntiHBs Reference Preparation" temel alınarak belirlenmi tir ve mililitre ba ına Uluslararası Birimin binde birlik oranları (mUI/ml) cinsinden ifade edilir. 10 mUI/ml'ye e it veya daha yüksek bir seviye genellikle a ılamadan sonra Hepatit B virüsüne kar ı standart bir koruma seviyesi olarak görülür. mmünite e ik seviyesi olarak, 10 mUI/ml minimum konsantrasyon seviyesinin kontrol edilmesi, a ı olmu ve daha sonra Hepatit B virüsüne maruz kalmı bireyleri uygun ekilde takip etmek için gereklidir.

3 - TEST PRENS B Numuneler ve Kontroller Hepatit B yüzey antijenine kar ı duyarlılık kazanmı kaplarda inkübe edilir. Numunelerden birinde veya kontrollerde mevcut anti-HBs antikorları antijenlere ba lanarak immünolojik bir kompleks olu turur. Numune fazlası bir yıkama a aması ile elimine edilir. lave edilen konjugat kaplarda daha önce olu turulan antijen/antikor komplekslerine ba lanır. Konjugat fazlası bir yıkama a aması ile elimine edilir; ardından bir enzimatik developman solüsyonu her kaba ilave edilir. Bunu bir inkübasyon a aması takip eder. E er bir numunede anti-HBs antikorları var ise, HRP ba lı enzimi kromojen solüsyonun TMB'sinin boyanmasına yol açar ve TMB mavi olur. Durdurma solüsyonunun ilave edilmesinden sonra, mavi substratın rengi sarıya döner. Anti-HBs antikoru içermeyen numunelerde, substratın rengi kaplardan kaybolur, inkübasyon a aması sırasında ve durdurma solüsyonu ilave edildikten sonra, kaplar renksiz hale gelir. Spektrofotometri ile ölçülen renk yo unlu u numunedeki anti-HBs konsantrasyonu ile orantılıdır. Her numune için spektrofotometri ile ölçülen absorbans de erleri 10 mUI/ml kalibratör yardımıyla belirlenen bir e ik de er (Vs) ile kar ıla tırlır.

4

4 - K T N Ç NDEK LER Tüm reaktifler sadece in vitro te his koyma amacına yöneliktir.

ET KETLEME

REAKT FLER N N TEL SUNUM

R1 M KROPLAKA:ad ve ay alt tiplerine ait (insan) Hepatit B virüsü yüzey antijenleri ile duyarlı kılınmı 8 kaplık 12 erit

2 mikroplaka

R2 KONSANTRE YIKAMA SOLÜSYONU (20X) NaCl, pH = 7,4 Tris Tamponu Koruyucu: ProClinTM 300 (%0,04)

1 i e 235 ml

C0 NEGAT F KONTROL Dana fötüs serumu ve protein stabilizörü ilave edilmi tampon Koruyucu: ProClinTM 300 (%0,5)

1 i e 2,2 ml

C1

10 mUI/ml KAL BRATÖRÜ* Anti-HBs antikorları (insan), dana fötüs serumu, protein stabilizörü ve ilave renkli göstergesi ilave edilmi tampon Koruyucu: ProClinTM 300 (%0,5)

1 i e 3 ml

C2

POZ T F KONTROL - 100 mUI/ml KAL BRATÖR Anti-HBs antikorları (insan), dana fötüs serumu, protein stabilizörü ve ilave renkli göstergesi ilave edilmi tampon Koruyucu: ProClinTM 300 (%0,5)

1 i e 2,2 ml

C3

400 mUI/ml KAL BRATÖRÜ Anti-HBs antikorları (insan), dana fötüs serumu, protein stabilizörü ve ilave renkli göstergesi ilave edilmi tampon Koruyucu: ProClinTM 300 (%0,5)

1 i e 2,2 ml

C4

1000 mUI/ml KAL BRATÖRÜ Anti-HBs antikorları (insan), dana fötüs serumu, protein stabilizörü ve ilave renkli göstergesi ilave edilmi tampon Koruyucu: ProClinTM 300 (%0,5)

1 i e 2,2 ml

R6

NUMUNE SULANDIRICISI Dana fötüs serumu, protein stabilizörü ve ilave renkli göstergesi ilave edilmi tampon Koruyucu: ProClinTM 300 (%0,1)

1 i e 27 ml

R7a

KONSANTRE KONJUGAT (1 1X) Peroksidaz ve protein stabilizörü ile i aretlenmi ad ve ay (insan) alt tiplerinden olu an HB antijenleri karı ımı ilave edilmi tampon Koruyucu: ProClinTM 300 (%0,5)

1 i e 2,5 ml

R7b KONJUGAT SULANDIRICIS I Dana fötüs serumu ve protein stabilizörü ilave edilmi tampon Koruyucu: ProClinTM 300 (%0,1)

1 i e 25 ml

R8 SUBSTRAT TAMPONU % 0,015 H2O2 ve % 4 Dimetilsülfoksit (DMSO) içeren sitrik asit ve sodyum asetat pH 4,0 solüsyonu

1 i e 60 ml

R9 KROMOJEN Tetrametil benzidin (TMB) içeren solüsyon

1 i e 5 ml

R10 DURDURMA SOLÜSYONU 1 N sülfürik asit solüsyonu

1 i e 28 ml

* Kontrol kalibrasyonu dahili bir referans temel alınarak yapılır; bu dahili referansın kalibrasyonu da 1st IRP WHO 1977 referans preparatı temel alınarak yapılır.

5

Kiti 2-8°C sıcaklıkta muhafaza edin. Konstantre konjugat hariç tüm reaktifleri kullanımdan önce laboratuar sıcaklı ına (18-30°C) getirin. Kullanımdan hemen sonra reaktifleri yeniden 2-8°C sıcaklı a geri getirin. Kullanılmayan eritleri kapalı po etin içinde muhafaza edin. Kurutucu maddeyi çıkarmayın.

eritleri 2-8°C sıcaklıkta muhafaza edin.

5 - ÖNLEMLER Elde edilecek sonuçların kalitesi a a ıdaki laboratuar uygulamalarına tam olarak uyulmasına ba lıdır:

Test ismi ve test özel tanıtım numarası her mikroplaka çerçevesinin üzerinde belirtilmi tir. Bu özel tanıtım numarası her eridin üzerinde de yer alır. Monol isaTM Ant i-HBs PLUS: Özel Tan ıtım Numarası = 63. Bu tanıtım numarası her kullanımdan önce kontrol edilmelidir. Test numarası bulunmayan veya gerçekle tirilen testin numarasından farklı olan hiçbir erit, kullanılmamalıdır.

Son kullanma tarihi geçen reaktifleri kullanmayın. Aynı deney sırasında farklı partilere ait reaktifleri birbirine karı tırmayın.

NOT: Aynı deney boyunca hep aynı partiyi kullanmak kaydıyla, kitte teslim edilenlerden farklı yıkama solüsyonu (etiketin üzerindeki ye il 20X ibaresi ile tanıtılan, R2), substrat tamponu (mavi TMB buf. ibaresi ile tanıtılan, R8), kromojen (menek e rengiTMB 11X. ibaresi ile tanıtılan, R9) ve durdurma solüsyonu (kırmızı 1N ibaresi ile tanıtılan, R10) partileri kullanmak mümkündür. Bu reaktifler irketimizin di er ürünleri ile birlikte kullanılabilir. Ayrıca, belli bir deneyde bir tek karı ımın kullanılması kaydıyla, yıkama solüsyonu (etiket in üzer indeki ye i l 20X ibares i i le tan ıtı lan, R2) düzgün bir ekilde yeniden olu turulan farklı Bio-Rad reaktif kitlerine dahil edilmi di er iki yıkama solüsyonundan biri ile (etiketin üzerindeki mavi bir 10X veya turuncu bir 10X ibaresi ile tanıtılan, R2) karı tırılabilir. Ayrıntılı bilgi edinmek için teknik servislerimizle irtibat kurun.

Reaktiflerin ortam sıcaklı ında dengelenmesi için, kullanımdan önce 30 dakika bekleyin. Her türlü bula mayı önleyerek, reaktifleri özenle tekrar olu turun Konjugatların enzimatik faaliyetini bozabilecek reaktif buharlar (asitler, alkaliler, aldehitler) veya

tozlar mevcut iken test yapmayın. Damıtık su ile mükemmel bir ekilde yıkanmı cam aletler veya tercihen tek kullanımlık donanım

kullanın. Mikroplakanın yıkama i leminin sonu ile reaktiflerin da ıtımı arasında geçen sürede kurumasına izin

vermeyin Enzimatik reaksiyon tüm metallere veya metal iyonlarına kar ı çok duyarlıdır. Dolayısıyla, hiçbir

metal unsur, konjugatı veya substrat solüsyonunu içeren farklı solüsyonlar ile temas etmemelidir. Developman solüsyonu (substrat tamponu + kromojen) pembeye boyanmalıdır. Yeniden olu umu

takip eden dakikalar içerisinde ba ka bir rengin ortaya çıkması reaktifin kullanılamaz durumda oldu unu ve de i tirilmesi gerekti ini gösterir.

Bu preparat için tercihen, tek kullanımlık kaplar ve plastik da ıtım malzemeleri veya önceden 1 N hidroklorik asit, ardından damıtık su ile yıkanmı ve kurutulmu cam kaplar kullanın. Bu solüsyonu güne ı ınlarına maruz bırakmayın.

Her serum için yeni bir da ıtım konisi kullanın. Kapların yıkanması, yapılan i lemler açısından önemli bir a ama te kil eder: tavsiye edilen yıkama

döngülerine uyun ve tüm kapların tamamen doldurulup, ardından tamamen bo altılmasına özen gösterin. Kötü bir yıkama i lemi yanlı sonuçlar elde edilmesine yol açar.

Konjugatı ve developman solüsyonunu da ıtmak için asla aynı kabı kullanmayın

6 - H JYEN VE GÜVENL K TAL MATLARI Bazı reaktifler ProClinTM 300 (0.04%, 0.1% et/ou 0.5%) içerir R43: Cilde temas etmesi halinde duyarlıla maya yol açabilir S28-37: Cildinizle temas ettikten sonra, derhal su ve sabun ile bol bol yıkanın. Uygun eldivenler takın

MonolisaTM Anti-HBs PLUS kiti, insan kaynaklı olup, Hepatit B (HBV) virüsü yüzey antijeni, Hepatit C (HCV) virüsüne yönelik antikorlar ve HIV virüslerine yönelik (HIV-1 ve HIV-2) antikorlar üzerinde denenerek reaktif olmadı ı belirlenen bile enlerdir. Bununla birlikte, hiçbir yöntem HIV, Hepatit B veya C virüslerinin veya di er bula ıcı ajanların bulunmadı ını kesin bir ekilde garanti edemez. Bu reaktifleri ve ayrıca hastalardan alınan numuneleri potansiyel olarak bula ıcı addedin ve normal önlemlerle kullanın.

Numuneler ve reaktifler ile do rudan temas eden malzemeyi ve ayrıca yıkama solüsyonlarını kontamine ürünler addedin ve buna göre i leme tabi tutun.

Numunelerin veya bunları içeren solüsyonun sıçramasına engel olun. Reaktiflerle çalı ırken tek kullanımlık eldivenler takın. "A zınızla pipetlemeyin".

6

nsan kaynaklı numunler ve reaktifler ve kontamine malzeme ve ürünler, bula ıcı özellikleri giderildikten sonra atılacaktır: - Bu i lem ya % 5 sodyum hipoklorit son konsantrasyonlu çama ır suyuna (10 hacim kontamine

sıvı veya su için, 1 hacim çama ır suyu) 30 dakika boyunca batırılarak - ya da minimum 2 saat boyunca 121 °C'de otoklavlama vasıtasıyla gerçekle tirilir. 121°C sıcaklıkta minimum 1 saat otoklavlama HIV virüslerini ve hepatit B virüsünü etkisiz hale getirmek için en iyi yöntemdir. D KKAT: SODYUM H POKLOR T ÇEREN SOLÜSYONLARI OTOKLAVIN Ç NE SOKMAYIN. Kirlenen yüzeyler % 10 sulandırılmı çama ır suyu ile temizlenecektir. Bula an sıvı bir asit ise, kirlenen yüzeyler önceden sodyum bikarbonat ile nötrle tirilecek, ardından çama ır suyu ile temizlenecek ve emici kâ ıt ile kurutulacaktır. Temizleme i leminde kullanılan malzeme kontamine atıklar için öngörülmü özel bir konteynere atılmalıdır.

Atık solüsyonları veya biyolojik numuneler içeren herhangi bir sıvıyı lavaboya atmadan önce, nötrle tirmeyi ve/veya otoklavlamayı unutmayın.

Güvenlik verileri fi i iste e ba lı olarak verilmektedir.

7 - GEREKL OLAN ANCAK ÜRÜNLE B RL KTE VER LMEYEN MALZEMELER Damıtık su Sodyum hipoklorit (çama ır suyu) ve sodyum bikarbonat. 10 l ila 200 l, 1 ml, 5 ml ve 10 ml'lik hacimler ölçmeye ve bo altmaya yönelik ayarlanabilir veya

sabit, pipetler, otomatik veya yarı otomatik multipipetler. 25 ml, 100 ml, 1.000 ml dereceli deney tüpleri. Kontamine atık konteyneri 37°C ± 1°C termostatlı benmari veya mikroplaka inkübatörü. Manüel, yarı otomatik yıkama tertibatı veya mikrotitrasyon plakası için yıkama cihazı. 405 nm, 450 nm ve 620 nm filtrelerle donatılmı mikroplakalar için okuma cihazı Emici kâ ıt Eldivenler TMB'nin hazırlanması için polipropilenden imal edilmi temiz konteynerler

8 - REAKT FLER N HAZIRLANMASI MonolisaTM Anti-HBs PLUS kitinde bulunan reaktifleri kullanmadan önce, 30 dakika ortam sıcaklı ında (18-30°C) bırakarak dengelenmesini sa layın.

1) Kul lan ıma hazı r reakt if ler

Mikroplaka (R1) 12 erit içeren her ta ıyıcı çerçeve kapalı po et içine konulmu tur. Po eti makas veya bıçak ile birle me noktasının 0,5 ila 1 cm üzerinde kesin. Po eti açın ve çerçeveyi po etten çıkarın. Kullanılmayan eritleri tekrar po etin içine yerle tirin. Po eti özenle kapatın ve yeniden +2-8°C sıcaklıkta muhafaza edin.

Numune Su land ır ıcı (R6)

Anti-HBs Negati f Kontrol (C0)

10 mUI/ml Kal ibratör (C1)

100 mUI/ml Kal ibratör - Ant i-HBs Pozit if Kontro l (C2)

400 mUI/ml Kal ibratör (C3)

1000 mUI/ml Kal ibratör (C4) Kullanımdan önce bir vorteks yardımıyla veya ters çevirerek reaktifleri homojenle tirin.

2) Yeniden olu turulacak reakt if ler

Konsantre y ıkama so lüsyonu (20X): R2 Solüsyonu damıtık su ile 20 kez sulandırın.. Bu ekilde, kullanıma hazır yıkama solüsyonu elde edilir. 12 eritten olu an bir plaka için 800 ml hazırlayın.

Konjugat solüsyonu (R7a + R7b) Konjugat Sulandırıcısını (R7b) laboratuar sıcaklı ına getirin. Sulandırıcıyı (R7b, renksiz ila açık sarı) ve Anti-HBs Konjugatı (R7a, ye il) kullanımdan önce ters çevirerek karı tırın.

7

Teste tabi tutulacak her erit için, R7a reaktifini R7b reaktifinin içinde 1/11 oranında sulandırın (Örnek: 100 l Anti-HBs Konjugatı (R7a) 1 ml Konjugat Sulandırıcısının içinde (R7b), temiz polipropilen bir tüpte). Tabloyu kılavuz olarak kullanın. Köpük olu umunu önlemek için yava yava karı tırın.

Konjugat solüsyonu laboratuar s ıcak lı ında veya +2-8°C sıcak lıkta sak land ı ında

güne almayan b ir yerde bu lundurulma lıd ır . Konjugat solüsyonu ye il olmalıdır. Konjugat solüsyonu laboratuar sıcaklı ında 8 saat, +2-8°C sıcaklıkta ise 24 saat dayanır. Konjugat solüsyonu Anti-HBs Konjugat (R7a) i esinin içeri i tamamen pipete çekilerek ve Konjugat Sulandırıcısının (R7b) i esine doldurularak hazırlanır. Çalı ma solüsyonunu daima kullanımdan önce ters çevirerek karı tırın. Kullanımdan hemen sonra, Anti-HBs Konjugatı (R7a) yeniden buzdolabına yerle tirin. Konjugatın bula masına engel olmak amacıyla, temiz eldivenler giyin ve pipet uçlarına dokunmayın.

Her eri t için konjugat solüsyonunun haz ır lanması .

Kullanılacak erit sayısı 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12* 24**

Konsantre Konjugat Miktarı ( l) R7a

100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200 2400

Sulandırıcı miktarı (ml) R7b 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 24

* 1 tam plaka ** 2 tam plaka

Enzimat ik deve lopman so lüsyonu (R8 + R9) Kromojen (R9) ile Substrat Tamponunu (R8) laboratuar sıcaklı ına getirin. Kromojeni (R9) ve substrat tamponunu (R8) kullanımdan önce ters çevirerek karı tırın.. Reaktif R9'u reaktif R8'in içinde 1/11 oranında sulandırın (Örnek: 10 ml reaktif R8 içinde 1 ml reaktif R9); 12 erit i lemek için 10 ml yeterlidir. Homojenle tirin. Enzimatik developman solüsyonunu kullanmadan önce yava ça karı tırın. Kullanımdan önce 5 dakika bekleyin. Bu solüsyon 8 saat içinde kullanılmalı ve ortam sıcaklı ında, karanlıkta muhafaza edilmelidir. Kromojen pembe olmalıdır. Ba ka herhangi bir renk reaktifin kontamine oldu unu gösterir: Bu durumda, kromojen kullanılmamalıdır. Sadece 6 saat içinde kullanılacak miktarda reaktif hazırlayın. Sulandırılan reaktif hacminin yapılan testin tamamı için yeterli olaca ından emin olun. Tabloyu kılavuz olarak kullanın.

Her eri t için enzimat ik deve lopman so lüsyonunun haz ır lanması.

Kullanılacak erit sayısı 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12* 24** Kromojen Miktarı ( l) R9 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200 2400 Tampon Miktarı Substrat (ml) R8

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 24

* 1 tam plaka ** 2 tam plaka

9 - SAKLAMA VE SON KULLANMA TAR H Kit +2-8°C sıcaklıkta saklanmalıdır. +2-8°C sıcaklıkta saklanan kitteki her unsur kutunun üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar kullanılabilir (özel bir uyarı bulunmadı ı takdirde).

R1: Vakumlu po etin açılmasından sonra, +2-8°C sıcaklıkta muhafaza edilen ve özenle kapatılan orijinal ambalajlarındaki eritler 1 ay dayanabilir.

R2: Sulandırılmı yıkama solüsyonu +2-30°C sıcaklıkta 2 hafta saklanabilir. Konsantre yıkama solüsyonu (R2) +2-30°C sıcaklıkta muhafaza edilebilir.

R7a + R7b: Kon jugat solüsyonu labora tuar sıcakl ı ında veya +2-8°C sıcak lıkta sakland ı ında güne a lmayan bir yerde bulunduru lma lıd ır . Konjugat solüsyonu ortam sıcaklı ında (18-30°C) 8 saat, +2-8°C sıcaklıkta ise 24 saat boyunca kullanılabilir.

R8 + R9: Yeniden olu turulduktan sonra, karanlıkta saklanan reaktifler ortam sıcaklı ında (18-30°C) 6 saat boyunca kullanılabilir.

Ambalaj açıldıktan sonra, di er tüm reaktifler 2-8°C sıcaklıkta saklandı ı takdirde kutunun üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar dayanır.

8

10 - NUMUNELER Ola an uygulama yöntemleriyle bir kan numunesi alın. Testler serum veya plazma numuneleri üzerinde gerçekle tirilir. Sadece a a ıdaki numuneler teste tabi tutulmu tur: Standart tüplerde toplanan veya bir ayırıcı jel içeren serum, EDTA üstünde toplanan plazma veya heparin. Sitrat veya ACD üzerinde toplanan plazma kullanılması durumunda, elde edilen sonuçlar serum üzerinde (EDTA veya heparin gibi antikoagülanlar ile toplanarak) elde edilenlerden yakla ık %20 daha dü ük olur. Agrega içeren numuneler teste tabi tutulmadan önce santrifugasyon ile arıtılmalıdır; gerçekten de, partiküller veya fibrin agregaları yanlı pozitif sonuçlar üretebilir. Tarama 7 gün içinde yapılır ise, numuneler + 2 - 8°C sıcaklıkta saklanacaktır veya -20°C sıcaklıkta dondurulmu olarak saklanabilecektir. Dondurma/Çözdürme i lemlerini tekrarlamaktan kaçının. Üçün üzerinde dondurma/çözdürme döngüsüne tabi tutulmu numuneler kullanılmamalıdır. E er numuneler ta ınacak ise, bunları etyolojik ajanların ta ınması ile ilgili yürürlükteki mevzuata uygun ekilde ambalajlayın ve tercihen dondurulmu olarak ta ıyın. NOT: 90 gr/l'ye kadar albumin ve 100 mg/l'ye kadar bilirubin içeren numunelerde ve ayrıca 36 gr/l'ye kadar trigliserit içeren lipemik numunelerde ve 2,55 gr/l'ye kadar hemoglobin içeren numunelerde hiçbir etkile im ispatlanamamı tır. 30 dakika boyunca 56°C sıcaklıkta i leme tabi tutulan numuneleri kullanmayın.

11 - ÇALI MA ARTLARI Önerilen protokole kesinlikle uyun.

Testin kalitesini do rulamak için, test her uygulandı ında negatif ve pozitif kontrol serumlarını kullanın. Do ru laboratuar uygulamalarını kullanın.

Protokol 1. Numune da ıtım ve tanıtım planını özenle hazırlayın. 2. Testi gerçekle tirmeden önce, tüm reaktifleri laboratuar sıcaklı ına �getirin. 3. Konjugat solüsyonunu (R7a+R7b), enzimatik developman solüsyonunu (R8+R9) ve R2

sulandırılmı yıkama solüsyonunu hazırlayın. 4. Ta ıyıcı çerçeveyi ve eritleri (R1) koruyucu ambalajdan çıkarın. Test açısından gereksiz eritleri 8

çıkarın ve bunların yerine bo eritler koyun. 5. Numuneleri, kalibratörleri ve kontrolleri a a ıdaki iki yöntemden birine göre R6 numune

sulandırıcısında dörtte üç oranında sulandırın; bu i lemi: a. Do rudan kabın içinde yapın (her kaba 25 l numune sulandırıcısı, ardından 75 l numune

veya kontrol ilave edin; köpük olu masına engel olmak için iki defa emip, püskürterek karı tırın).

b. Kaplara ilave etmeden önce gerçekle tirin (Örnek: 150 l numuneyi 50 l numune sulandırıcısının içinde sulandırın; köpük olu masına engel olmak için yava ça karı tırın ve kaba 100 l aktarın).

Not: Numuneyi ilave ettikten sonra, sulandırıcının rengi lâl renginden maviye dönecektir. Haznelerde numune olup olmadı ını 620 nm'de spektrofotometrik ölçüm yapmak suretiyle kontrol etmek mümkündür (bkz. Bölüm 14: NUMUNE VE REAKT F LAVELER N N SPEKTROFOTOMETR LE KONTROL ED LMES ).

6. Plakayı ön yıkama i lemine tabi tutmadan, art arda a a ıdakiler arasından seçilen yönteme göre do rudan ilave edin:

Kal itat if Yöntem - A1'de Anti-HBs Negatif Kontrol (C0), - B1, C1, D1'de 10 mUI/ml Kalibratör (C1), - E1'de, 100 mUI/ml Kalibratör - Pozitif Kontrol (C2), - F1, G1, vs.de numuneler

Kanti tati f Yöntem - A1'de Anti-HBs Negatif Kontrol (C0), - B1, C1'de 10 mUI/ml Kalibratör (C1), - D1'de, 100 mUI/ml Kalibratör - Pozitif Kontrol (C2), - E1'de 400 mUI/ml Kalibratör (C3), - F1'de 1.000 mUI/ml Kalibratör (C4), - G1, vs.de numuneler

Kullanılan sisteme ba lı olarak, kontrollerin konumu veya da ıtım sırası de i tirilebilir. 7. Sızdırmazlık sa lamak için, mümkünse üstünü yapı kan bir film ile örterek, tüm yüzeyin üzerine

9

iyice basın. 8. Mikroplakayı 37°C ± 1°C sıcaklıkta 60 ± 5 dakika inkübe edin. 9. Yapı kan filmi çıkarın. Tüm kapların içeri ini kontamine atıklar için öngörülmü bir konteynere çekin

ve kaplardan her birinin içine derhal minimum 0,375 ml yıkama solüsyonu ilave edin. Minimum 30 saniye ve maksimum 60 saniyelik bir batırma süresi (bekleme süresi) kullanın. Yeniden emin. Yıkama i lemini en az 4 kez tekrarlayın (veya toplam, minimum 5 yıkama). Artık hacim 10 l'den az olmalıdır (gerekirse plakayı emici bir kâ ıt üzerinde ters çevirerek kurutun).

10. Otomatik bir yıkayıcınız var ise, aynı i lem döngüsünü uygulayın. . 11. 100 l'lik konjugat solüsyonunu (R7a+R7b) hızlı bir ekilde tüm kaplara da ıtın. Mümkünse yeni bir

filmle kaplayın ve beklemeksizin 37°C ± 1 °C sıcaklıkta 60 ± 5 dakika inkübe edin. Not: Konjugat ye il renktedir. Haznelerde konjugat olup olmadı ını 620 nm'de spektrofotometrik ölçüm yapmak suretiyle kontrol etmek mümkündür (bkz. Bölüm 14: NUMUNE VE REAKT F LAVELER N N SPEKTROFOTOMETR LE KONTROL ED LMES ).

12. Yapı kan filmi çıkarın. Tüm kapların içeri ini kontamine atıklar için öngörülmü bir konteynere çekin ve kaplardan her birinin içine derhal minimum 0,375 ml yıkama solüsyonu ilave edin. Minimum 30 saniye ve maksimum 60 saniyelik bir batırma süresi (bekleme süresi) kullanın. Yeniden emin. Yıkama i lemini en az 4 kez tekrarlayın (veya toplam, minimum 5 yıkama). Artık hacim 10 l'den az olmalıdır (gerekirse plakayı emici bir kâ ıt üzerinde ters çevirerek kurutun).

13. Otomatik bir yıkayıcınız var ise, aynı i lem döngüsünü uygulayın. 14. 100 l'lik enzimatik faaliyet developman solüsyonunu (R8+R9) tüm kaplara hızla da ıtın.

Reaksiyonun ortam sıcaklı ında (18 ila 30°C) 30 ± 5 dakika boyunca karanlıkta gerçekle mesini sa layın. Bu inkübasyon sırasında yapı kan film kullanmayın. Not: Developman solüsyonu pembe renktedir. Haznelerde substrat olup olmadı ını 490 nm'de spektrofotometrik ölçüm yapmak suretiyle kontrol etmek mümkündür (bkz. Bölüm 14: NUMUNE VE REAKT F LAVELER N N SPEKTROFOTOMETR LE KONTROL ED LMES ).

15. Developman solüsyonu ile aynı sıra ve da ıtım temposunu kullanarak 100 l durdurma solüsyonu (R10) ilave edin. Reaksiyonel karı ımı homojenle tirin.

16. Plakaların altını özenle silin. Durdurma solüsyonunun da ıtılmasından sonra en az 4 dakika bekleyin ve reaksiyonun sona ermesinden sonraki 30 dakika içinde, bir plaka okuyucusu yardımıyla 450/620-700 nm ve 405/620-700 nm'de optik yo unlu u okuyun.

Sonuçları kayda geçirmeden önce, okuma i lemi ile plaka ve numunelerin da ıtım ve tanıtım planının birbirleriyle uyumlu oldu unu kontrol edin.

12 - KAL TAT F VE KANT TAT F YÖNTEMLER Ç N ELDE ED LEN SONUÇLARIN DO RULANMASI E ik de er (Vs) 10 mUI/ml (C1) kalibratör için ölçülen OPT K YO UNLUK de erlerinin ortalamasına tekabül eder.

Negatif Kontro l (C0) ç in Ölçülen absorbans 0,000 de erinin üzerinde ve 0,070 de erine e it veya bu de erin altında olmalıdır (0,000 < OPT K YO UNLUKC0 0,070).

Pozi tif Kontro l (C2) ç in Ölçülen absorbans 0,400 de erine e it veya bu de erin üzerinde olmalıdır (OPT K YO UNLUKC2

0,400). Negatif (C0) ve Pozitif (C2) Kontroller için, kalitatif ve kantitatif yöntemlerde bu kriterlerden birine uyulmamı ise, test geçersiz kılınır ve tekrarlanmalıdır.

10 mUI/ml Kal ibratör (C1) ç in Ölçülen absorbans 0,050 de erine e it veya bu de erin üzerinde olmalı ve 0,200 de erine e it veya bu de erin altında olmalıdır (0,050 OPT K YO UNLUKC1 0,200). Ölçülen her absorbans de eri Negatif Kontrol C0'ın OPT K YO UNLUK de erinin 1,5 katına e it veya daha büyük olmalıdır: OPT K YO UNLUKC1 (1,5 x OPT K YO UNLUKC0).

Kal itat if yöntemde, e er ölçülen üç OPT K YO UNLUKC1 de erinden biri do rulama de erleri ölçe i dı ında kalırsa (ölçülen OPT K YO UNLUKC1 0,050 de erine e it veya bu de erin üzerinde ve 0,200 de erine e it veya bu de erin altında olmalıdır), ortalama geri kalan iki de er kullanılarak hesaplanacaktır. Dolayısıyla test do rulanacaktır. E er ölçülen birden fazla OPT K YO UNLUKC1 de eri do rulama de erleri ölçe i dı ına çıkarsa, test geçersiz kılınır ve tekrarlanır. Kanti tati f yöntemde, e er ölçülen iki OPT K YO UNLUKC1 de erinden biri do rulama de erleri ölçe i dı ında kalırsa (ölçülen OPT K YO UNLUKC1 0,050 de erine e it veya bu de erin üzerinde ve 0,200 de erine e it veya bu de erin altında olmalıdır), test geçersiz kılınır ve tekrarlanır.

10

13 - HESAPLAMALAR VE SONUÇLARIN DE ERLEND R LMES Anti-HBs antikorlarının var olup olmadı ı, her numunede kaydedilen aborbansın hesaplanan e ik de er ile kar ıla tırılması suretiyle belirlenir.

1. Ka lita ti f Yöntem

10 mUI/ml ka libra tör (C1) iç in ö lçülen absorbans lar ın orta lamasın ı hesap layın Örnek: 10 mUI/ml Kalibratör C1

B1 0,078 C1 0,079 D1 0,089

Toplam = 0,246 Ortalama OPT K YO UNLUKC1 = 0,246 / 3 = 0,082 E er ölçülen OPT K YO UNLUKC1 de erlerinden biri do rulama de erleri ölçe i dı ında kalırsa (ölçülen OPT K YO UNLUK C1 0,050 de erine e it veya bu de erin üzerinde ve 0,200 de erine e it veya bu de erin altında olmalıdır), ortalama geri kalan iki de er kullanılarak hesaplanacaktır.

E ik De erin (Vs) Hesap lanmas ı E ik de er 10 mUI/ml (C1) kalibratör için ölçülen OPT K YO UNLUK de erlerinin ortalamasına tekabül eder. Vs = Ortalama OPT K YO UNLUKC1

Sonuçlar ın Yorumlanması Ölçülen optik yo unlu u e ik de ere e it veya bu de erin üzerinde olan numuneler ba langıçta reaktif addedilir. Ölçülen optik yo unlu u e ik de erin altında olan numuneler reaktif olarak kabul edilmez. Ölçülen optik yo unlu u okuyucunun algılama üst limitinin üzerinde olan numuneler reaktif olarak kabul edilmelidir. UYARILAR: Her testte kullanılan antikorların ve antijenlerin çe itlili i nedeniyle, elde edilen sonuçlar kullanılan teste göre farklılık gösterebilir. A ılama Stratejileri: lgili bölge ve ülkelere göre farklı tavsiyeler sunulur. Bir a ılama takibi sırasında analiz yönteminde de i iklik yapılması durumunda, anti-HBs antikor oranı bir geçi dönemi boyunca iki yöntemle paralel olarak belirlenmelidir.

2. Kant itat if Yöntem Numunelerin (serum veya plazma) Anti-HBs antikor konsantrasyonunu belirlemek amacıyla, C0 (0 mUI/ml), C1(10 mUI/ml), C2 (100 mUI/ml), C3 (400 mUI/ml) ve C4 (1000 mUI/ml) kalibratörleri kullanılmalıdır. Kalibratörler, plaka ön yıkama i lemine tabi tutulmadan, protokolde belirtildi i gibi art arda do rudan her kabın içine yerle tirilir (bkz. Bölüm 10: ÇALI MA ARTLARI: Kantitatif Yöntem). Bir plaka okuyucusu yardımıyla 450/620-700 nm'de optik yo unlu u okuyun. 450 nm'de ölçülen absorbansı (A450) 400mUI/ml C3 kalibratörünün (A450 OPT K YO UNLUKC3) absorbans de erine e it veya bu de erin üzerinde olan numuneler için, 405/620-700 nm'de optik yo unlu u okuyun. C0, C1, C2 ve C3 kalibratörleri için, 450 nm'de ölçülen absorbans (A450) ikinci derecede bir polinom regresyonuna göre her birinin kendi konsantrasyonuna ba lı olarak grafik eklinde belirtilir. C4 kalibratörünün A450 absorbansı (1.000 mUI/ml) bu grafik üzerinde kullanılamaz, zira absorbans de eri okuyucunun algılama limitlerinin dı ında olabilir, bu yüzden de ikinci bir grafik gerekir. Ölçülen D.O. de erleri C3'ün D.O. de erinin altında olan numuneler 450 nm'de olu turulan e ri ile yorumlanır. C3 (400 mUI/ml) ve C4 (1.000 mUI/ml) kalibratörleri için 405 nm'de (A405) ölçülen absorbans her birinin konsantrasyonuna ba lı olarak, her nokta için grafik eklinde gösterilir. Bu noktaları birle tiren bir do ru çizilir. Her numunenin Anti-HBs antikor konsantrasyonu (mUI/ml) bu ekilde, ölçülen absorbans de erinin kesi me noktasında okunabilir. 405 nm'deki bu absorbans e risi, de eri 400 mUI/ml'nin üzerinde ve 1.000 mUI/mlye e it veya bu de erin altında olan, numunelerin (serum veya plazma) Anti-HBs antikor konsantrasyonunu belirlemek için kullanılır. Anti-HBs antikor konsantrasyonu 1.000 mUI/ml de erinin üzerinde olan numuneler yıkama solüsyonu (sulandırılmı R2) kullanılarak sulandırılabilir ve yeniden teste tabi tutulabilir.

11

14 - NUMUNE VE REAKT F LAVELER N N SPEKTROFOTOMETR K YÖNTEMLE KONTROL ED LMES (OPS YONEL)

SULANDIRICI (R6) VE NUMUNE LAVES N N KONTROL ED LMES Numuneyi ilave ettikten sonra, R6 sulandırıcısının rengi menek e renginden maviye dönecektir. R6 sulandırıcısı ile numune veya kontrolün e zamanlı olarak mevcut oldu u 620 nm'de yapılan spektrofotometrik bir okuma ile kontrol edilebilir: her kap için ölçülen OPT K YO UNLUK de eri 0,150 de erine e it veya bu de erin üzerinde olmalıdır (bu standardın altındaki bir de er, numune veya kontrolün iyi da ıtılmadı ını gösterir).

KONJUGAT SOLÜSYONU LAVES N N KONTROL ED LMES (R7a + R7b) Konjugat solüsyonu (R7a + R7b) ye il renktedir. Konjugat solüsyonunun kaplarda mevcut oldu u 620 nm'de yapılan spektrofotometrik bir okuma ile kontrol edilebilir: her kap için ölçülen OPT K YO UNLUK de eri 0,070 de erine e it veya bu de erin üzerinde olmalıdır (bu standardın altındaki bir de er, konjugat solüsyonunun iyi da ıtılmadı ını gösterir).

DEVELOPMAN SOLÜSYONU LAVES N N KONTROL ED LMES (R8 + R9) Developman solüsyonu pembe renktedir. 490 nm'de yapılan otomatik bir okuma ile pembemsi developman solüsyonunun mevcut olup olmadı ı kontrol edilebilir: Developman solüsyonunu içeren bir kabın optik yo unlu u 0,100 de erinin üzerinde olmalıdır (daha dü ük bir OPT K YO UNLUK de eri developman solüsyonunun iyi da ıtılmadı ını gösterir) Bo bir kap ile pembemsi developman solüsyonunu içeren bir kap arasında önemli bir renk farkı bulunur.

15 - TEST L M TLER Anti-HBs antikorlarının algılanmasına yönelik olarak yapılan serum veya plazma numune analizleri

sırasında protokole ve sonuçlar hakkında yapılmı de erlendirmelere uyulmalıdır. Bu kitin her kullanıcısının herhangi bir i lem yapmadan önce bu talimatları dikkatle okuması tavsiye edilir. Özellikle, numune ve reaktiflerin da ıtımı ile ilgili protokole, yıkama a amalarına ve inkübasyon a amalarına titizlikle uyulmalıdır.

Yapılan kötü bir numune veya reaktif da ıtımı yanlı negatif sonuçlar elde edilmesine yol açabilir. Protokole uyulmadı ı yönünde üphelerin bulundu u e antiyonları yeniden teste tabi tutmanız tavsiye edilir.

Sonuçların geçerlili ini etkileyebilecek etkenler unlardır: Numunelerin kaplara iyi da ıtılmaması, yetersiz bir kap yıkama a aması, yanlı sıcaklıklar veya inkübasyon süreleri, kaplara yanlı reaktiflerin ilave edilmesi, kaplarda metal veya çama ır suyu bulunması.

Hem bir Hepatit B virüs enfeksiyonu, hem de bir a ılama veya terapötik immünoglobülin enjeksiyonu sonrasında, bir bireyden di erine farklılık gösteren immünolojik yanıtlar nedeniyle, dü ük de erli sonuçların ihtiyatla de erlendirilmesi tavsiye edilir.

16 - PERFORMANSLAR A a ıdaki analitik performanslar MonolisaTM Anti-HBs PLUS testinin de erlendirilmesi sırasında elde edilmi tir. Laboratuarda elde edilen sonuçlar bunlardan farklı olabilir.

1. Seri çi Aynı seride, be pozitif ve bir negatif numune üç kopya olarak 10 defa teste tabi tutulmu tur

Numune Ortalama OPT K

YO UNLUK DS

VARYASYON KATSAYISI%

Negatif Anti-HBs 0.023 0.003 13.6 Pozitif Anti-HBs ~ 20 mUI/ml 0.143 0.005 3.4 Pozitif Anti-HBs ~ 50 mUI/ml 0.358 0.012 3.3 Pozitif Anti-HBs ~ 100 mUI/ml 0.715 0.019 2.6 Pozitif Anti-HBs ~ 150 mUI/ml 1.231 0.037 3.0 Pozitif Anti-HBs ~ 300 mUI/ml 1.982 0.048 2.4

12

2. Seri ler arası Üç pozitif ve bir negatif numune 20 gün boyunca günde iki kez olmak üzere, EP5 NCCLS (National Commitee for Clinical Laboratory Standards) prosedürüne göre iki kopya halinde teste tabi tutulmu tur.

Numune Ortalama OPT K YO UNLUK

DS VARYASYON KATSAYISI%

Negatif Anti-HBs 0.023 0.004 15.5

Pozitif Anti-HBs ~ 20 mUI/ml 0.146 0.008 5.5

Pozitif Anti-HBs ~ 150 mUI/ml 1.284 0.060 4.9

Pozitif Anti-HBs ~ 300 mUI/ml 2.015 0.067 3.6

3. Tekni in Do ru lu u Kantitatif sonuçlar mUI/mL cinsinden ve a a ıdaki uluslararası referans preparata göre kalibrasyonu yapılmı olarak verilir: 1 st IRP WHO Reference Standard 1977. WHO uluslarası standardının sulandırılması ile elde edilen 0, 10, 100, 400 ve 1.000 mUI/mL konsantrasyonları teste tabi tutularak, kitin içinde verilen kalibratörlere göre bir korrelasyon incelemesi yapılmı tır. Korrelasyon katsayısı ve elde edilen korrelasyon do rusunun e imi R2 =0,99 ve a= 0,96'dır.

4. Anal it ik Duyar lı lık (= 0 ve 10 mIU/ml noktalarında elde edilen ortalamalar ve standart sapmalar yardımıyla hesaplanan, sıfırdan farklı ölçülebilir en dü ük analit konsantrasyonuna tekabül eden alt algılama limiti): Bu limit 2 mUI/ml de erinin altında elde edilir.

5. Yöntemin Do rusal lı ı Anti-HBs açısından son derece pozitif 5 numune (924 mUI/ml, 330 mUI/ml, 326 mUI/ml, 544 mUI/ml ve 857 mUI/ml) sulandırılmamı olarak ve farklı sulandırma oranlarında (1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32 ve bazıları 1/64) teste tabi tutulmu tur. Örtme yüzdeleri yüzde 92 ile yüzde 116 arasındadır.

6. Ölçüm Alan ı Ölçüm alanı 2 ile 1.000 mUI/ml arasındadır; bu alan, algılama alt limiti ve referans e rinin maksimum de eri ile tanımlanmı tır. Algılama limitinin altındaki ba lıklar a a ıdaki ekilde ifade edilmi tir: < 2,00 mUI/ml, ölçüm alanının üstündeki ba lıklar ise a a ıdaki ekilde ifade edilmi tir: > 1.000 mUI/ml.

7. Çengel Etkisi Anti-HBs antikor konsantrasyonları 200.000 mUI/ml, 5.500 mUI/ml, 28.000 ve 9.000 mUI/ml olarak de erlendirilen sulandırılmamı 4 numune test edildi.

Konsantrasyon 200.000 mUI/ml

28.000 mUI/ml

9.000 mUI/ml 5.500 mUI/ml

OPT K YO UNLUK 450

405 nm'de okuyun

405 nm'de okuyun

405 nm'de okuyun

405 nm'de okuyun

OPT K YO UNLUK 405

1.342 1.596 1.629 1.310

Sonuç > 1.000 mUI/ml > 1.000 mUI/ml > 1.000 mUI/ml > 1.000 mUI/ml Performans de erlendirmeleri sırasında hiçbir çengel etkisi tespit edilmedi.

8. Özgüllük a) A a ıdaki patolojilere sahip 179 hastadan alınan serum numuneleri teste tabi tutuldu: Hepatite A,

hepatit C, HIV1, HIV2, HTLV, HSV, EBV, Kızamıkçık, Toksoplazmoz, Miyelom (IgG, IgM), RF, ANA, HAMA, Siroz ve çoklu transfüzyon. 21 numune, MonolisaTM Anti-HBs PLUS ve CE ile i aretlenmi anti-HBs algılama testlerine (2 adet) göre pozitif sonuç vermi tir. Bir pozitif ANA numunesi sadece MonolisaTM testinde reaktivite göstermi tir; di er iki numune, bir HIV1 ve bir HIV2, MonolisaTM ve rakip bir test ile reaktivite göstermi tir.

b) Testin özgüllü ü rastgele seçilmi , kan donörleri ve hastaneye yatırılan hastalardan alınmı numuneler yardımıyla belirlenmi tir.

Yer 1 Donörler ve

Hastaneye Yatır ı lan Hastalar

Yer 2 Donörler

Yer 3 Hastaneye

Yatır ı lan Hastalar TOPLAM

Numune say ısı 511 300 240 1051 Pozi tif sayısı 3 0 3 6 Özgüllük yüzdes i 99.4% 100% 98.7% 99.4%

13

Özgüllük %99,4'tür (%98,8 - %99,8, güven aralı ı %95).

14

9. Hassasiyet A ılanmı veya do al olarak enfeksiyon kapmı farklı hasta popülasyonlarından alınan 654 numune MonolisaTM Anti-HBs PLUS ve ba ka bir anti-HBs testi yardımıyla teste tabi tutulmu tur. Birbiriyle uyu mayan sonuçlar CE i aretli üçüncü bir teknikle test edilmi tir

Monol isaTM Uyu ması

Hasta prof il i N aretl i Test 1 aretl i Test 2*

A ı lanmı 347 98.8% 99.1%

"Kararlı" Hepat it B 71 95.8% 100%

Kronik Hepati t B 37 100% Test edilmeyen

Hastaneye ya tır ı lan hastalar

199 98.6% Test edilmeyen

Toplam 654 98.5% 99.5%

Teste tabi tutulan bu 654 hastadan 617'si anti-HBs açısından pozitif sonuç verdi, 37'si ise test 1'de negatif sonuç verdi (kronik hepatit hastalı ından mustarip hastalar). Bu 617 hasta için, uyu ma oranı %98,4'tür (güven aralı ı %95, %97 - %99,2). *De erlendirmeye tabi tutulan testin hassasiyeti, test 2 ile uyu mayan de erler çözüme kavu turulduktan sonra, %99,2'dir (güven aralı ı %95, %98,1 - %99,7).

15

17 - KAYNAKÇA

1. Lai CL, Ratziu V, Yuen M-F, Poynard T: Viral hepatitis B. Lancet 362: 2089-2094, 2003.

2. Maddrey WC: Hepatitis B: an important public health issue. J Med Virol 61: 362-366, 2000.

3. Delmonico FL, Snydman DR: Organ donor screening for infectious diseases. Transplantation 65: 603-610, 1998.

4. Centers for Disease Control: Recommendations for preventing transmission of infections among chronic hemodialysis patients. MMWR 50 (No. RR-5): 1-43, 2001.

5. Tiollais P, Pourcel C, Dejean A: The hepatitis B virus. Nature 317: 489-495, 1985.

6. Lee WM: Hepatitis B infection. New Engl J Med 337: 1733-1745, 1997.

7. Mushahwar IK, Dienstag JL, Polesky HF, McGrath LC, Decker RH, Overby LR Interpretation of various serological profiles of hepatitis B virus infection. Am J Clin Pathol 76: 773-777, 1981.

8. McMahon BJ, Alward WLM, Hall DB, et al.: Acute hepatitis B infection: relation of age to the clinical expression of disease and subsequent development of the carrier state. J Infect Dis 151: 599-603, 1985.

9. Hoofnagle JH, Di Bisceglie AM: Serologic diagnosis of acute and chronic viral hepatitis. Semin Liver Dis 11: 73-83, 1991.

10. Centers for Disease Control: Hepatitis B vaccination—United States, 1982-2002. MMWR 51(No. 25): 549-563, 2002.

11. Yu AS, Cheung RC, and Keefe EB: Hepatitis B vaccines. Clin Liver Dis 8: 283-300, 2004.

12. Bos ES, van der Doelen AA, van Rooy N, Schuurs AHWM: 3,3',5,5' - tetramethylbenzidine as an ames test negative chromogen for horseradish peroxidase in enzyme immunoassay. J Immunoassay 2: 187-204, 1981.

13. Garner RC, Walpole AL, Rose FL: Testing of some benzidine analogues for microsomal activation to bacterial mutagens. Cancer Letters 1: 39-42, 1975.

14. Bond WW, Favero MS, Petersen NJ, Ebert JW: Inactivation of hepatitis B virus by intermediateto-high-level disinfectant chemicals. J Clin Microbiol 18: 535-538, 1983.

15. U.S. Environmental Protection Agency, Office of Solid Waste: EPA Guide for Infectious Waste Management, Washington D.C., 1987. (USG PO 530-SW-86-014).

16. Sehulster LM, Hollinger FB, Dreesman GR, Melnick JL: Immunological and biophysical alteration of hepatitis B virus antigens by sodium hypochlorite disinfection. Appl and Envi Microbiol 42: 762- 767, 1981.

(GB) - CE marking (European directive 98/79/CE on in vitro diagnostic medical devices)(FR) - Marquage CE (Directive européenne 98/79/CE relative aux dispositifs médicaux de diagnostic in vitro)(ES) - Marcado CE (Directiva europea 98/79/CE sobre productos sanitarios para diagnóstico in vitro)(IT) - Marchiatura CE (Direttiva europea 98/79/CE relativa ai dispositivi medico-diagnostici in vitro)(DE) - CE Konformitätskennzeichnung (Europäische Richtlinie 98/79/EG über In-vitro-Diagnostika)(PT) - Marcação CE (Directiva europeia 98/79/CE relativa aos dispositivos médicos de diagnóstico in vitro)(SE) - CE-märkning (Europeiskt direktiv 98/79/EG om medicintekniska produkter för in vitro-diagnostik)(DK) - CE-mærkningen (Europa direktiv 98/79/EF om medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik)(GR) - ����������� CE ( �������� ������ 98/79/CE � �� in vitro ��������� � ������ � �� � �)(PL) - CE oznaczenie (Dyrektywa unijna 98/79/CE dotycząca produktów medycznych do badań in vitro)(LT) - CE ženklas (Europos sąjungos direktyva 98/79/CE dėl in vitro diagnostikos medicinos prietaisų)(HU) - CE jelzés (98/79/CE Európai Irányelv az in vitro orvosi diagnosztikai eszközökről)(EE) - CE märgistus (Euroopa direktiiv 98/79/CE in vitro diagnostikameditsiiniseadmete kohta)(SK) - CE označenie o zhode (Európska direktíva 98/79/CE pre in vitro diagnostické zdravotnícke postupy)(CZ) - CE značka (Evropská direktiva 98/79/CE o diagnostických zdravotnických prostředcích in vitro)(NO) - CE-merking (EU-direktiv 98/79/CE om medisinsk utstyr til in vitro-diagnostikk)(RO) - Marca CE (Directiva europeana 98/79/CE pentru dispozitive medicale de diagnostic in vitro)(BG) - СЕ маркировка (Европейска директива 98/79/CE за ин витро диагностичните медицински изделия)

IVD

(GB) - For in vitro diagnostic use(FR) - Pour diagnostic in vitro(ES) - Para diagnóstico in vitro(IT) - Per uso diagnostico in vitro(DE) - In-vitro-Diagnostikum(PT) - Para uso em diagnóstico in vitro(SE) - In vitro-diagnostik(DK) - In vitro diagnose(GR) - ��� in vitro ���������� ����(PL) - Do stosowania in vitro(LT) - in vitro diagnostikai(HU) - Csak in vitro diagnosztikai alkalmazásra(EE) - In vitro diagnostiliseks kasutamiseks(SK) - Na diagnostiku in vitro(CZ) - Pro diagnostiku in vitro(NO) - Til in vitro-diagnostikk(RO) - Pentru diagnostic in vitro(BG) - За ин витро диагностика

(GB) - Catalogue number(FR) - Référence catalogue(ES) - Número de catálogo(IT) - Numero di catalogo(DE) - Bestellnummer(PT) - Número de catálogo(SE) - Katalognummer(DK) - Katalognummer(GR) - ������ ���������(PL) - Numer katalogu(LT) - Katalogo numeris(HU) - Cikkszám(EE) - Katalooginumber(SK) - Katalógové číslo(CZ) - Katalogové číslo(NO) - Katalognummer(RO) - Număr de catalog(BG) - Каталожен номер

(GB) - Manufacturer(FR) - Fabricant(ES) - Fabricante(IT) - Produttore(DE) - Hersteller(PT) - Fabricante(SE) - Tillverkad av(DK) - Fremstillet af(GR) - ����� �����(PL) - Producent(LT) - Gamintojas(HU) - Gyártó(EE) - Tootja(SK) - Výrobca(CZ) - Výrobce(NO) - Produsent(RO) - Producător(BG) - Производител

(GB) - Authorised Representative(FR) - Représentant agréé(ES) - Representante autorizado(IT) - Distributore autorizzato(DE) - Bevollmächtigter(PT) - Representante Autorizado(SE) - Auktoriserad representant(DK) - Autoriseret repræsentant(GR) - ���������� ��� �����������(PL) - Upoważniony Przedstawiciel(LT) - Įgaliotasis atstovas(HU) - Meghatalmazott Képviselő(EE) - Volitatud esindaja(SK) - Autorizovaný zástupca(CZ) - Zplnomocněný zástupce(NO) - Autorisert representant(RO) - Reprezentant autorizat(BG) - Упълномощен представител

(GB) - Batch code(FR) - Code du lot(ES) - Código de lote(IT) - Codice del lotto(DE) - Chargen-Bezeichnung(PT) - Código do lote(SE) - Batchnr(DK) - Batchkoden(GR) - ������� ��������(PL) - Numer serii(LT) - Serijos numeris(HU) - Gyártási szám(EE) - Partii kood(SK) - Číslo šarže(CZ) - Číslo šarže(NO) - Partikode(RO) - Număr de lot(BG) - Партиден номер

(GB) - Expiry date YYYY/MM/DD(FR) - Date de peremption AAAA/MM/JJ(ES) - Estable hasta AAAA/MM/DD(IT) - Da utilizzare prima del AAAA/MM/GG(DE) - Verwendbar bis JJJJ/MM/TT(PT) - Data de expiração AAAA/MM/DD(SE) - Utgångsdatum ÅÅÅÅ/MM/DD(DK) - Anvendes før ÅÅÅÅ/MM/DD(GR) - � ������ ����� YYYY/MM/DD(PL) - Data ważności YYYY/MM/DD(LT) - Galioja iki YYYY/MM/DD(HU) - Szavatossági idő ÉÉÉÉ/HH/NN(EE) - Aegumistähtaeg AAAA/KK/PP(SK) - Použiteľné do RRRR/MM/DD(CZ) - Datum exspirace RRRR/MM/DD(NO) - Utløpsdato ÅÅÅÅ/MM/DD(RO) - Data expirarii AAAA/LL/ZZ(BG) - Срок на годност година/месец/ден

(GB) - Storage temperature limitation(FR) - Limites de températures de stockage(ES) - Temperatura límite(IT) - Limiti di temperatura di conservazione(DE) - Lagertemperatur(PT) - Limites de temperatura de armazenamento(SE) - Temperaturbegränsning(DK) - Temperaturbegrænsning(GR) - � ������� � �������� ������ ���(PL) - Temperatura przechowywania(LT) - Saugojimo temperatūriniai apribojimai(HU) - Tárolási hőmérsékleti határok(EE) - Piirangud säilitustemperatuurile(SK) - Skladovacia teplota od do(CZ) - Teplotní rozmezí od do(NO) - Oppbevaringstemperatur(RO) - Limitele de temperatură la stocare(BG) - Температурни граници на съхранение

(GB) - Consult Instruction for use(FR) - Consulter le mode d'emploi(ES) - Consulte las instrucciones de uso(IT) - Consultare le istruzioni per uso(DE) - Siehe Gebrauchsanweisung(PT) - Consulte o folheto informativo(SE) - Se bruksanvisningen(DK) - Se instruktion før brug(GR) - ������ �� �� ��� ����� � �����(PL) - Sprawdź instrukcję(LT) - Ieškokite informacijos vartojimo instrukcijoje(HU) - Olvassa el a használati utasítást(EE) - Kasutamisel vaata instruktsiooni(SK) - Katalógové číslo(CZ) - Viz návod k použití(NO) - Se bruksanvisninger(RO) - Consultati prospectul de utilizare(BG) - Виж инструкцията за употреба

Bio-Rad3, bd Raymond Poincaré92430 Marnes-la-Coquette - FranceTél.: +33 1 47 95 60 00 09/2009Fax.: +33 1 47 41 91 33 Code: 883582