metodologia analitica ketorolac 10 mg

Metodología analítica para la evaluación de la calidad de Ketorolac Trometamina.(10 mg)

InstructivoNº ID: PNT/I-056CC.044PTNº de Rev: 01

Elaborado por: (Nombre y apellido)

_______________________ Analista Físico-Químico

Revisado por: (Fecha y firma)

10/09/15/__________Coordinador Físico- Químico

Aprobado por:(Fecha y firma)

11/09/15/_________Responsable de Control de Calidad

Fecha de Emisión: Septiembre, 2015Página: 1 de 40

INDICENº DESCRIPCIÓN Pág.

1.Fórmula cuali-cuantitativa del producto.

2

2.Periodo de eficacia.

2

3. Condiciones propuesta de almacenamiento. 2

4.Nº de lote 2

5.Descripción de la forma farmacéutica.

3

6.Procedimiento para la evaluación de las características organolépticas en tabletas.

4

7. Procedimiento para la determinación de peso promedio. 5

8.Procedimiento para la uniformidad de unidades de dosificación: Método de Uniformidad de Contenido. 6

9.Procedimiento para la fuerza de ruptura.

7

10.Procedimiento para la desintegración. 8

11. Procedimiento para la determinación del % humedad.

9

12.Método analítico para la identificación, valoración y uniformidad de contenido de Ketorolac Trometamina en Ketorolac Trometamina por HPLC-DAD.

10

13.Método analítico para la disolución de Ketorolac Trometamina en Ketorolac Trometamina por espectrofotometría UV-VIS. 22

14.Método microbiológico de productos no estériles: prueba de recuento microbiano.

30

15.Examen microbiológico de productos no estériles: prueba de microorganismos específicos. 37

Prohibida la reproducción total o parcial de este documento de Calidad. Propiedad de Panzyma Laboratories S.A

Tipo de Doc: I Nº ID: PNT/I-056CC.044PT Nº Rev: 01 Fecha de emisiónSeptienbre, 2015 Página: 2 de 43

I. - FÓRMULA CUALI-CUANTITATIVA DEL PRODUCTO.

Componente Formula Unitaria.Ketorolac Trometamina 10,0 mgEstearato de Magnesio 3,0 mgTalco Simple 3,0 mgAlmidón de Maíz 4,5 mgAlmidón Glicolato de Sodio 2,0 mgColorante Amarillo GT 107 0,02 mgLactosa Anhidra 127,50 mgAgua Purificada 0,0375 mL

II.- PERÍODO DE EFICACIA: 2 años.

III.- CONDICIONES PROPUESTA DE ALMACENAMIENTO:

“Mantener en lugar fresco y seco. No exceder los 30ºC.”

IV.- Nº DE LOTE:__________________________.



DESCRIPCIÓN DE LA FORMA FARMACÉUTICA.

ESPECIFICACIONES DEL PRODUCTO.

Ítems Parámetro de calidad Especificaciones Método1. Características

OrganolépticasTabletas biplanas, bordes lisos con ranura central en una de sus caras, color amarillo, olor característico.

Análisis sensorial

2. Identificación El tiempo de retención del pico principal en el cromatograma de la preparación de valoración se corresponde con el del pico principal en el cromatograma de la solución del estándar, según se obtiene en la valoración.

HPLCUSP 35-NF30

3. Peso promedio 150 mg ± 3% Metodología Interna

4.Fuerza de Ruptura 3,0 – 7,0 Kgf Metodología

Interna

5. Desintegración ≤ 25 min USP35-NF30

6.% Humedad ≤ 3,0 % Pérdida de Peso

USP35-NF307. Uniformidad de Unidades

de Dosificación: Uniformidad de Contenido. (UC)

Etapa 1: VA ≤ L1 (n = 10; L1 = 15,0)Etapa 2: VA ≤ L1; (1- L2*0,01)*M < Contenido < (1+ L2*0,01)*M(n = 30; L1 = 15,0, L2 = 25,0)

USP 35-NF30

8. Valoración Ketorolac Trometamina (90,0% - 110,0%) USP 35-NF30

9. Disolución No menos 75 % (Q) en 45 min. USP 35-NF30

10. PRUEBAS RECUENTO MICROBIANO10.1. Recuento Total de

Microorganismos Aerobios≤ 103 UFC/g USP 35-NF30

10.2. Recuento Total Combinado de Hongos, Filamentos y Levaduras

≤ 102 UFC/g USP 35-NF30

11. Microorganismo(s) Específico(s).11.1. Escherichia coli Ausencia USP 35-NF30

Referencia bibliográfica:

USP 35 – NF 30. (2012). Versión electrónica. Pág. 3624.

Metodología Interna.



PROCEDIMIENTO PARA LA EVALUACIÓN DE LAS CARACTERÍSTICAS ORGANOLÉPTICAS EN TABLETAS.

1. ALCANCE.

El instructivo describe el procedimiento para la evaluación de las características organolépticas de tabletas recubiertas y no recubiertas producidas por Panzyma Laboratories S.A.

2. PRECAUCIONES Y ADVERTENCIA DE SEGURIDAD.

Observar bajo condiciones adecuadas de visibilidad.

3.- CONDICIONES AMBIENTALES.

Operar a temperatura ambiente.

4. APARATOS Y EQUIPOS

Hojas de papel blanco

5. PROCEDIMIENTO.

5.1. Seleccionar 5 unidades de análisis.5.2. Colocar la muestra sobre hojas de papel blanco5.3. Observar bajo condiciones adecuadas de visibilidad.5.4. Anotar la forma geométrica, marcas, aspecto, color y olor. Comparar con las especificaciones.

6. EXPRESION DE LOS RESULTADOS

Conforme / No conforme

7. REFERENCIAS

Metodología Interna Panzyma Laboratories S.A.

---------------------------------------------Fin del procedimiento------------------------------------------

PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIÓN DE PESO PROMEDIO.



1. Equipo y Material.

1.1. Balanza analítica, d = 0,1 mg

1.2. Pesa muestra

2. Procedimiento

2.1. Pesar con exactitud 20 Tabletas y registrar el peso obtenido en gramos.

2.2. Calcular el peso promedio por medio de la siguiente fórmula

2.3. Reportar el resultado en mg

3. Referencia USP 35 / NF 30.

---------------------------------------------Fin del procedimiento---------------------------------------------



PROCEDIMIENTO PARA LA UNIFORMIDAD DE UNIDADES DE DOSIFICACIÓN: MÉTODO DE UNIFORMIDAD DE CONTENIDO.

La prueba de Uniformidad de Contenido para preparaciones que se presentan en unidades de dosificación se basa en la valoración individual del contenido de un fármaco o fármacos en un número de unidades de dosificación para determinar si el contenido individual se encuentra dentro de los límites fijados. El método de Uniformidad de Contenido se puede aplicar en todos los casos.

Seleccionar no menos de 30 unidades y proceder según se indica a continuación para cada forma farmacéutica especificada. Cuando se utilizan procedimientos diferentes para la valoración de la preparación y para la prueba de Uniformidad de Contenido, puede ser necesario establecer un factor de corrección que deberá aplicarse a los resultados de esta última.

1. Procedimiento

1.1.- valorar 10 unidades individualmente usando un método analítico apropiado. Calcular el valor de aceptación.

1.2.- Criterios. Proceder conforme lo establece la USP 35 – NF 30. Uniformidad de Unidades de Dosificación Capítulo <905>.




PROCEDIMIENTO PARA LA FUERZA DE RUPTURA

1.- ALCANCE: La prueba sirve para determinar el cumplimiento de los límites de fuerza de ruptura establecidos en las especificaciones de las tabletas sin cubierta y tabletas con cubierta simple.

2.- APARATOS:

Durómetro automático ELECTROLAB. Modelo EH01P

3.- PROCEDIMIENTO:

3.1. Seleccionar no menos de 10 tabletas.

3.2. Colocar cada una de las tabletas diametralmente.

3.3. Registrar los valores del instrumento en Kgf.

3.4. Accionar el aparato.

3.5. Registrar el valor que se presenta en la pantalla.

3.6. Obtener el valor promedio de los resultados.

4. EXPRESION DE LOS RESULTADOS.

Los resultados se expresan en Kgf, como Fuerza de Ruptura = X,X

5.- REFERENCIA

5.1.- Procedimiento interno de Panzyma Laboratories S.A.5.2.- USP 35 / NF 30.




PROCEDIMIENTO PARA LA DESINTEGRACIÓN

1.- Alcance: La prueba sirve para determinar el cumplimiento de los límites de desintegración establecidos en las especificaciones de las tabletas sin cubierta y tabletas con cubierta simple.

2.- Aparatos:

Sistema de Prueba de Desintegración. Hanson Research Modelo No. 64-700-131

3.- Reactivos:

Agua destilada

4.- Procedimiento:

4.1. Suspender la canastilla ensamblada del vaso de precipitados.

4.2. Llenar el vaso de precipitados con agua destilada.

4.3. Ajustar la temperatura del baño del líquido 37°C ± 2.

4.4. Colocar 1 tableta en cada uno de los seis tubos de la canastilla.

4.5. Colocar en cada tubo un disco.

4.6. Poner el aparato en operación.

4.7. Cuando haya transcurrido el tiempo indicado, elevar la canastilla para separarla del líquido de inmersión y observar las tabletas.

5.- Interpretación: Transcurrido 25 minutos, todas las unidades dosis deben de haberse desintegrado completamente. Si no ha sucedido así con una o dos unidades, repetir la prueba con otras 12; de un total de 18 unidades ensayadas, cuando menos 16 deben desintegrarse completamente.

6. Referencia

6.1. USP 35/NF 30. Versión electrónica Cap. <701>

6.2. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. Octava Edición Volumen I. México 2004. MGA. 0261.




PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIÓN DEL % HUMEDAD.

1.- Principio:

El porcentaje de humedad se determina por el método III (gravimétrico) de la USP 33-NF 28.

2.-Aparato.

2.1. Electrobalanza: Balanza termogravimétrica OHAUS MB45.

2.2. Mortero y pilón.

2.3. Pesamuestra de aluminio.

2.4. Espátula

3.- Procedimiento.

3.1.- Encender la balanza termogravimétrica.

3.2.- Levantar la cubierta.

3.3- Colocar en la pesamuestra de aluminio, el polvo equivalente a 4 tabletas trituradas.

3.4- Cerrar la cubierta

3.5.- Accionar el aparato por 10 minutos.

3.6.- Reportar el % de pérdida de secado como el % humedad descrita en la pantalla.

4.- Referencia:

USP 35-NF 30. Determinación de agua Cap. <921>.


`



MÉTODO ANALÍTICO PARA LA IDENTIFICACIÓN, VALORACIÓN Y UNIFORMIDAD DE CONTENIDO DE KETOROLAC TROMETAMINA EN KETOROLAC POR HPLC-DAD

1. ALCANCE.

El método propuesto se utilizará para la identificación, valoración (cuantificación) y uniformidad de contenido de Ketorolac Trometamina en Ketorolac por HPLC-DAD.

2. PRECAUCIONES DE SEGURIDAD.

Leer las precauciones para el uso de los materiales. Tome las precauciones necesarias durante el desarrollo del estudio. La seguridad del personal incluye el uso adecuado de los equipos de protección, vestimenta, así mismo deben manipular y almacenar adecuadamente los reactivos empleados. Los desechos generados durante los análisis deben de colocarse en el lugar correspondiente para evitar accidentes laborales.

3. CONDICIONES AMBIENTALES

Trabajar a temperatura menores de 30ºC, preferiblemente entre 20-30 ºC. La humedad relativa entre 35% y 55%.

4. PRINCIPIO

La Keterolac Trometamina es resuelto cromatograficamente en modalidad de fase reversa usando una columna de Octil silano ligado químicamente a partículas de sílice porosa o a micropartículas cerámicas, de 1,5 a 10 μm de diámetro y leído en la región ultravioleta del espectro electromagnético.

5. APARATOS Y EQUIPOS

5.1. Cromatógrafo Líquido Sistema HPLC 1260 Agilent Technologies: Desgasificador, Bomba cuaternaria, Inyector automático, compartimiento Termostatizado de Columna, detector de arreglo de diodo (DAD) con Software ChemStation.

5.2. Columna Eurospher II C18 H, 125 X 4,6 mm, 5 µm. (Knauer)

5.3. Balanza analítica marca A&D. Modelo GR-202. Máx: 210 g, d = 0,01 mg.

5.4. Generador de Ultrasonido.

5.5. Bomba de vacío.

5.6. Agitador magnético y magneto

5.7. Cronómetro.

5.8. Matraz volumétrico clase A: 25,0 y 50,0 mL.



5.9. Pipetas volumétricas clase A: 5,0 mL.

5.10. Jeringa de vidrio 5,0 m

5.11. Probeta de 25,0 y 50,0 mL.

5.12. Vidrio reloj o pesa muestra.

5.13. Peras para pipetear.

5.14. Mortero y Pilón

5.15. Equipo de filtración de solventes.

5.16. Espátula analítica.

6. REACTIVOS Y MATERIALES

6.1. Ketorolac Trometamina. Estándar de referencia primario. Pureza

6.2. Ácido Acético glacial. Grado ACS.

6.3. Metanol. Grado HPLC.

6.4. Agua desionizada.

6.5. Fase Móvil. Metanol: Agua: Ácido Acético Glacial. (55:44:1). Mezcle, filtre y desgasifique la fase móvil.

6.6. Filtros de nylon para jeringas, tamaño de poro 0,20 µm y diámetro de 25 mm.

6.7. Filtros de membranas de nylon, tamaño de poro 0,45 µm y diámetro de 47 mm.

7. CALIBRACIÓN

7.1. Calibrar cada vez que se realice ensayos de valoración de Ketorolac Trometamina con los estándares de trabajo sobre el rango de interés analítico.

7.2. Prepare una serie de diluciones de los estándares de trabajo según se indica en el apartado 9.2.

7.3. Prepare con ayuda en software ChemStation la curva de calibración de la concentración de Ketorolac Trometamina en µg/mL contra las áreas de los picos.

8. CONTROL DE CALIDAD.

8.1. Cromatografíar la solución estándar al 100% y registrar el cromatograma. La desviación estándar relativa (DER) para inyecciones repetidas no es mayor de 1,5 % para n = 6 inyecciones, factor de asimetría o de cola T no es mayor de 1,5 y el número de platos teóricos ≥ 2700.



8.2. Si es necesario prepare una muestra de control de calidad conforme a 9.1. (valoración) y 9.2 (uniformidad de contenido) y un estándar de referencia conforme a 9.2 con el objeto de asegurar que la curva de calibración y los resultados de la muestra se encuentran bajo control estadístico.

9. PROCEDIMIENTO.

9.1. Preparación de la Solución de la muestra de valoración.

9.1.1. Pesar y pulverizar finamente no menos de 20 tabletas. Obtener el peso promedio. Pesar una cantidad de polvo equivalente a 10,0 mg de ketorolac trometamina, transferir a un matraz volumétrico clase A de 25,0 mL, adicionar 10,0 mL de fase móvil y someter a ultrasonido durante 10 minutos, enfriar a temperatura ambiente. Llevar a volumen con fase móvil. Agitar y mezclar.

9.1.2.Transferir una alícuota de 5,0 mL de la solución anterior a un matraz volumétrico clase A de 25,0 mL, diluir a volumen con fase móvil y mezclar.

9.1.3. Filtrar con filtros de nylon para jeringas, tamaño de poro 0,20 µm y diámetro 25 mm.

9.2. Preparación de la solución de la muestra para la uniformidad de contenido de Ketorolac Trometamina.

9.2.1. Seleccionar 30 tabletas y analizar 10 tabletas individualmente para etapa 1.

9.2.2. Adicionar cada una de las 10 tabletas de Ketorolac Trometamina a matraces volumétricos clase A separados de 25,0 mL.

9.2.3. Adicionar 10,0 mL de fase móvil y agitar mecánicamente hasta que la tableta se disgregue por completo, someter a ultrasonido durante 10 minutos, enfriar a temperatura ambiente y llevar a volumen con fase móvil. Agitar y mezclar.

9.2.4. De cada una de la solución anterior tomar una alícuota de 5 ,0 mL, transferir a un matraz volumétrico clase A de 25,0 mL, llevar a volumen con fase móvil. Agitar y mezclar

9.2.5. Filtrar con filtros de membranas de nylon, tamaño de poro 0,20 µm y diámetro de 25 mm.

9.3. Preparación de las Soluciones Estándar.

9.3.1. Pesar por separado con exactitud aproximadamente 32,0; 40,0; 48,0 mg del estándar de Ketorolac Trometamina.



9.3.2. Transferir a matraces volumétricos clase A separados de 50,0 mL, adicionar aproximadamente 10,0 mL de fase móvil, someter a ultrasonido por 5 minutos, y llevar a volumen con fase móvil.

9.3.3. Transferir una alícuota de 5,0 mL de la solución anterior a un matraz volumétrico clase A de 50,0 mL, diluir a volumen con fase móvil y mezclar.

9.3.4. Filtrar con filtros de nylon para jeringa de tamaño de poro 0,20 µm y diámetro de 25 mm.

9.3.5. Calcular la concentración práctica en μg/mL de las soluciones de estándares de referencia de Ketorolac Trometamina conforme a la siguiente fórmula

Donde:

Wmg: Es el peso en mg del estándar de Ketorolac Trometamina.

V1: Es el volumen de la primera dilución = 50,0 mL.

V2: Es el volumen de la alícuota = 5,0 mL.

V3: Es el volumen de la segunda dilución = 50,0 mL.

%P: Es el porcentaje de la pureza declarada del estándar en el certificado.

100: es el factor para obtener el contenido en %.

9.4. Sistema Cromatográfico

Columna Eurospher II C18 H, 125 X 4,6 mm, 5 µm. (Knauer)

Temperatura de la columna Ambiente.

Longitud de onda analítica 254 nm

Flujo 1,2 mL/min.

Volumen de inyección 20 µL.

9.4.1. Acondicionar la columna con la fase móvil durante 30 minutos o hasta obtener una línea base estable.



9.4.2. Cromatografíar la solución estándar 100% y registrar el cromatograma. La desviación estándar relativa (DER) para inyecciones repetidas no es mayor de 1,5 % para n = 6 inyecciones factor de asimetría o de cola T no es mayor de 1,5 y el número de platos teóricos ≥ 2700.

9.4.3. Inyectar por separado volúmenes iguales (20 µL) de las soluciones estándares y de la solución de la muestra de valoración en el cromatógrafo, siguiendo la siguiente frecuencia y registrar el área del pico correspondiente a Ketorolac Trometamina.

Secuencia de la solución a inyectar. Nº de inyecciones

Solución Estándar 2 (100%) 6

Solución estándar 1 (80%) 2

Solución Estándar 3(120%) 2

Solución de la Muestra 2 por muestra analizada

Muestra de control de calidad 2 (si es necesario confirmación)

Solución Estándar 2 (100%) 2

10. CÁLCULOS

Calcular el porcentaje de contenido de Ketorolac Trometamina en la muestra tomada, por medio de la siguiente fórmula.

Donde

A: es el área del pico de la solución de muestra de valoración.b0 : es el intercepto de la recta de regresión. b1 : es la pendiente de la recta de regresión.PP: Peso promedio de la tabletas en mg. D: es la dosis que declara la tableta de Ketorolac Trometamina = 10,0 mg. P: es el peso de la muestra en polvo en mg.V1: es el volumen de dilución = 25,0 mL.V2: es el volumen de la alícuota= 5,0 mL.V3: es el volumen de la segunda dilución = 25,0 mL.1000 es el factor de conversión de mg a µg.



100 es el factor para obtener en contenido en %.

10.1. Cálculos para la uniformidad de contenido de Ketorolac Trometamina.

Calcular el contenido de Ketorolac Trometamina en la muestra por medio de la siguiente fórmula:

Donde

A: es la área del pico de la solución de muestra.

b0: es el intercepto de la recta de regresión.

b1: es la pendiente de la recta de regresión.

D: es la dosis que declara la tableta de Ketorolac Trometamina = 10,0 mg.

V1: es el volumen de la dilución = 25,0 mL.

V2: es el volumen de la alícuota = 5,0 mL.

V3: es el volumen de la segunda dilución = 25,0 mL.

1000: es el factor de conversión de mg a µg.

100: es el factor para obtener en contenido en %.

11. REPORTE DE RESULTADOS

11.1. Identificación.

Reportar el tiempo de retención de la muestra de valoración en comparación con el tiempo de retención de la solución estándar. La diferencia no debe ser mayor del 5%.

11.2. Valoración.



Reportar los resultados como % de contenido de la siguiente manera; %C = XX, XX ± % DER. La DER se reportara con dos cifras significativas.

11.3. Uniformidad de Contenido.

Reportar los resultados del Valor de Aceptación de la siguiente manera: %C = XX, X.

12. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN

12.1. Identificación: El tiempo de retención del pico principal en el cromatograma de la preparación de valoración se corresponde con el del pico principal en el cromatograma de la solución del estándar, según se obtiene en la valoración.

12.2. Valoración: Ketorolac Trometamina: 90,0% - 110,0%.

12.3. Uniformidad de Contenido de Ketorolac Trometamina: Conforme al capítulo <905> de la USP35-NF30 (2012). Uniformidad de Unidades de Dosificación.

Etapa S1 : VA ≤ L1 (n = 10; L1 = 15,0)

Etapa S2: VA ≥ L1 (1- L2*0,01)*M < Contenido < (1+ L2*0,01)*M;(n = 30; L2 = 25,0)

12.3.1. Interpretación de resultados.

12.3.1.1. Seleccionar no menos de 30 unidades de dosificación y proceder del siguiente modo para las tabletas.

12.3.1.2. Puede ser necesario aplicar algún valor de corrección.

12.3.1.3. Analice 10 tabletas individuales y calcule el valor de aceptación M mediante la fórmula:

En donde los términos son los definidos en la Tabla.

Criterios

Aplicar los siguientes criterios, se cumplen los requisitos de uniformidad de dosificación si el valor de aceptación de las primeras 10 unidades de dosificación es menor o igual a L1%. Si el valor de aceptación es mayor que L1%, analizar las siguientes 20 unidades y calcular el valor de aceptación. Se cumplen los requisitos si el valor de aceptación final de las 30 unidades de dosificación es menor o igual a L1%, y si el contenido individual de ninguna unidad de dosificación es menor de [1 –L2*0,01]M ni mayor de [1 + L2*0,01] M como se especifica en Cálculo del Valor de Aceptación en Variación de Peso. A menos que se indique algo diferente en la monografía individual, L1 es 15,0 y L2 es 25,0



Tabla.

Variable Definición Condiciones Valor

Media de los contenidos individuales (x1,x2,…xn), expresados como el porcentaje de la cantidad declarada

x1,x2,…xn Contenido individual de las unidades probadas, expresado como el porcentaje de la cantidad declarada

n Tamaño de la muestra (número de unidades en una muestra)

kConstante de aplicabilidad

Si n = 10, K = 2,4

Si n = 30, K = 2,0

s Desviación estándar de la muestra

RSD Desviación estándar relativa

M (caso1) aplicar cuando T≤101,5

Valor de referenciaSi 98,5%≤ ≤101,5%,

entonces

Si < 98,5%,

entonces

Si > 101,5%,

entonces



M (caso2) aplicar cuando T > 101,5

Valor de referenciaSi 98,5%≤ ≤T, entonces

Si < 98,5%, entonces

Si > T, entonces

Valor de aceptación (AV)

Fórmula General

(Los cálculos especificados anteriormente son para los distintos casos)

L1

Máximo valor de aceptación permitido.

L1 = 15,0 a menos que se especifique algo diferente en la monografía individual

L2 Máximo intervalo permitido para la desviación de cada unidad de dosificación probada a partir del valor calculado de M.

En el lado del valor menor, ningún resultado de unidad de dosificación puede ser menor de (1-L2*0,01)M, mientras que en el lado del valor superior ningún resultado de unidad de dosificación puede ser mayor de (1+L2*0,01)M (Esto está basado en un valor de L2 de 25,0)

L2 =25,0 a menos que se especifique algo diferente en la monografía individual.

T Valor deseado en el momento de la fabricación. A los efectos de esta farmacopea, a menos que se especifique algo diferente en la monografía



individual, T es 100% y a los efectos de la fabricación, T es el valor asignado al fármaco, aprobado por el fabricante, en el momento de la fabricación.

13. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN

13.1. Identificación: El tiempo de retención del pico principal para Ketorolac Trometamina en el cromatograma de la muestra de valoración se corresponde con el del pico principal de Ketorolac Trometamina en el cromatograma de la solución estándar, según se obtiene en la valoración.

13.2. Valoración: Ketorolac Trometamina: 90,0% - 110,0%

14. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA.

14.1. Protocolo de la Validación del método analítico para la identificación y valoración de Ketorolac Trometamina en Ketorolac por HPLC-DAD. Protocolo Nº 285P.

14.2. USP 35 – NF 30. (2012) Versión electrónica.

15. REGISTROS

15.1. Este procedimiento está almacenado en archivo electrónico bajo la custodia del Responsable de Control de Calidad. Una copia en físico está en manos del responsable de validación.

15.2. Los registros que se generen por la aplicación del documento deberá de reflejarse en las bitácoras de los equipos utilizados y en la de Ketorolac.

16. ANEXOS

16.1. Anexo 1. Cromatograma de la solución del estándar de referencia.

16.2. Anexo 2. Cromatograma de la solución de la muestra de valoración.

16.3. Anexo 3. Cromatograma de la solución de la muestra de uniformidad de contenido.

.............................Fin del procedimiento...........................



ANEXOS.

Anexo 1. Cromatograma de la solución del estándar de referencia.

Anexo 2. Cromatograma de la solución de la muestra de valoración.


min1 2 3 4 5 6 7 8 9

mAU

0

2

4

6

8

10

12

DAD1 A, Sig=254,4 Ref=360,100 (KETO20\KETOROLAC20MG 2015-02-24 11-14-25\VALKET10000001.D)

Estándar de Ketorolac Trometamina .

6.25

8 - K

etor

olac T

rome

tami

na


Anexo 3. Cromatograma de la solución de la muestra de uniformidad de contenido.


Muestra de Ketorolac. Valoración.

Muestra de Ketorolac. Uniformidad de Contenido.

min0 1 2 3 4 5 6 7 8 9

mAU

0

2.5

5

7.5

10

12.5

15

17.5

DAD1 A, Sig=254,4 Ref=360,100 (KETO20\KETOROLAC20Y10 MG 2015-02-24 12-03-24\VALKET10000035.D)

Muestra de Ketorolac 10 mg tableta .Uniformidad de Contenido

6.0

03 -

Ket

orolac

Tro

met

amina

min0 1 2 3 4 5 6 7 8 9

mAU

0

2.5

5

7.5

10

12.5

15

17.5

DAD1 A, Sig=254,4 Ref=360,100 (KETO20\KETOROLAC20Y10 MG 2015-02-24 12-03-24\VALKET10000040.D)

Muestra de Ketorolac 10 mg tableta .

5.98

1 - K

etoro

lac T

rom

etami

na


MÉTODO ANALÍTICO PARA EL ENSAYO DE DISOLUCIÓN DE KETOROLAC TROMETAMINA EN KETOROLAC POR ESPECTROFOTOMETRÍA UV-VIS.

1. ALCANCE.

El método propuesto se utilizará para cuantificar el porcentaje disuelto de Ketorolac Trometamina en Ketorolac por espectrofotometría UV – Vis.

2. PRECAUCIONES DE SEGURIDAD.

Leer las precauciones para el uso de los materiales. Tome las precauciones necesarias durante el desarrollo del estudio. La seguridad del personal incluye el uso adecuado de los equipos de protección, vestimenta, así mismo deben manipular y almacenar adecuadamente los reactivos empleados. Los desechos generados durante los análisis deben de colocarse en el lugar correspondiente para evitar accidentes laborales.

3. CONDICIONES AMBIENTALES.

Trabajar a temperatura entre 20ºC - 30 ºC. La humedad relativa entre 35% y 55%.

4. PRINCIPIO.

El fundamento de la espectroscopia se debe a la capacidad de las moléculas para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV-visible. Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y la eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atómica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante



dieléctrica), por lo que dicha técnica constituye un valioso instrumento para la determinación y caracterización de moléculas. Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna. Cuando la luz (considerada como energía) es absorbida por una molécula se origina un salto desde un estado energético basal o fundamental, E1, a un estado de mayor energía (estado excitado), E2.

Y sólo se absorberá la energía que permita el salto al estado excitado. Cada molécula tiene una serie de estados excitados (o bandas) que la distingue del resto de moléculas. Como consecuencia, la absorción que a distintas longitudes de onda presenta una molécula -esto es, su espectro de absorción constituye una seña de identidad de la misma. Por último, la molécula en forma excitada libera la energía absorbida hasta el estado energético fundamental.

Según la Ley de Beer la absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración a mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas; también depende de la distancia que recorre la luz por la solución a igual concentración, cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra más moléculas se encontrará; y por último, depende de ε, una constante de proporcionalidad denominada coeficiente de extinción que es específica de cada cromóforo.

La Ketorolac Trometamina es una molécula orgánica que presenta grupos cromóforos y auxócromos y por lo tanto puede ser identificada por medio de su espectro de absorción y cuantificada por medio de la espectrofotometría UV-Vis en el rango de concentración que cumple la ley de Beer.

5. APARATOS Y EQUIPOS.

5.1. Espectrofotómetro UV-Visible Evolution 201, Thermo Scientific. Diseño óptico: Doble haz con posiciones para muestras y cubeta de referencia; Monocromador Czerny-Turner. Fuente de Luz: Lámpara flash de xenón. Detector: Fotodiodos de silicona dobles.

5.2. Balanza analítica marca A&D. Modelo GR-202. Máx: 210 g, d = 0,01 mg.

5.3. Balanza de precisión, marca CAS. Modelo XB620HW. Máx. 620 g. Min. 0,02g; e = 0,01g y d = 0,001g.

5.4. Disolutor Hanson SR8PLUS.

5.5. pHmetro digital Denver Instrument. Modelo 250. Presenta una Exactitud de ± 0,002 unidades de pH y Resolución 0,01unidades de pH. Consta de un electrodo de vidrio pH/ATC Marca Denver Instrument.

5.6. Agitador magnético + magneto.

5.7. Generador de ultrasonido.

5.8. Celda de cuarzo de 10 mm.

5.9. Matraz volumétrico clase A: 50,0 y 100,0 mL.

5.10. Pipetas volumétricas clase A de 5,0 mL.



5.11. Espátula analítica.

5.12. Recipiente de capacidad de 10,0 Litros.

5.13. Probeta de 1000,0 mL.

5.14. Peras para pipetear.

5.15. Jeringa de plástico de 10,0 mL.

5.16. Cronómetro.

6. REACTIVOS Y MATERIALES

6.1. Ketorolac Trometamina estándar de referencia primario. Pureza 99,5%.

6.2. Agua desionizada.

6.3. Blanco: agua desionizada.

6.4. Papel para lentes.

6.5. Filtros de cánulas tamaño de poro 10,0 µm.

7. CALIBRACIÓN

7.1. Calibrar cada vez que se realice ensayos de disolución con estándares de trabajo sobre el rango de interés analítico.

7.2. Prepare una serie de disoluciones de los estándares de trabajo según se indica en el apartado 9.3.

7.3. Prepare con ayuda del software INSIGHT la curva de calibración de la concentración de Famotidina en µg/mL contra la absorbancia.

8. CONTROL DE CALIDAD

8.1. Determinar concomitantemente las absorbancias de la solución al 100% (punto central) y registrar el espectro de absorción. La desviación estándar relativa (DER) para las lecturas repetidas no es más de 2,0%.

8.2. Si es necesario prepare una muestra de control de calidad conforme 9.1.- 9.2 y un estándar de referencia conforme a 9.3 y leer, con el objeto de asegurar que la curva de calibración y los resultados de la muestra se encuentran bajo control estadístico.

9. PROCEDIMIENTO.

9.1. Condiciones de Disolución.



Medio de Disolución : Agua desionizadaVolumen de Disolución : 600 mLAparato 2 : 50 rpmTemperatura : 37ºC ± 0,5 ºCTiempo : 45 minTolerancias : No menos de 75 % (Q) en 45 min.

Programar las condiciones en el disolutor y esperar hasta que se estabilice la temperatura de cada una de los vasos a 37ºC ± 0,5ºC. Una vez alcanzada la temperatura colocar las tabletas y accionar el aparato para dar inicio a la prueba.

9.2. Preparación de la muestra de disolución para la lectura.

9.2.1 Al terminar el tiempo de prueba, filtrar con filtros de cánulas (10 µm) y descartar de cada uno de los vasos, los primeros 10,0 mL de muestra.

9.2.2 Determinar la absorbancia a 322 nm.

9.3. Preparación de la soluciones estándares de referencia.

9.3.1. Pesar por separado, con exactitud aproximadamente 13,2 16,6 y 19,9 mg de Ketorolac Trometamina respectivamente.

9.3.2.Transferir a matraces volumétricos clase A separados de 100,0 mL, adicionar aproximadamente 20,0 mL de agua desionizada someter a ultrasonido por 5 minutos y llevar a volumen con agua desionizada. Para cada solución continuar con el pasos 9.3.3 y 9.3.4.

9.3.3.Transferir por separados alícuotas de 5,0 mL de las soluciones de Ketorolac Trometamina a matraces volumétricos separados clase A de 50,0 mL y llevar a volumen con agua desionizada.

9.3.4.Calcular la concentración del estándar como Ketorolac Trometamina en µg/mL para cada punto de la curva de calibración por medio de la siguiente fórmula.

Dónde:

Wmg: Peso en mg del estándar de referencia de Ketorolac Trometamina.

%P: Porcentaje de la pureza declarada del estándar en el certificado.

V1: Volumen de la primera dilución (solución madre): 100,0 mL



V2: Volumen de la alícuota de la solución madre: 5,0 mL

V3: Volumen de la segunda dilución: 50,0 mL.

1000: Factor de conversión de mg a µg

9.4. Determine concomitantemente la absorbancia de la solución de trabajo del estándar y de la solución de la muestra respectivamente a longitud de onda de máxima absorción, de aproximadamente a 265 nm, registrar los espectros de absorción y absorbancia conforme a la siguiente secuencia:

Solución a leer Nº replicasBlanco (6.6) 2,0Estándar Concentración 2(100%) (9.3) 6,0Estándar Concentración 1 (9.3) 2,0Estándar Concentración 3 (9.3) 2,0Muestra (9.1-9.2) 2 por muestra analizadaMuestra de control de calidad (9.1-9.2) 2 (si es necesario confirmaciones)Estándar Concentración 2(100%) (9.3) 2,0

9.4.1. Usar como blanco: medio de disolución: Agua desionizada.

10. CÁLCULOS.

Calcular el porcentaje disuelto de Ketorolac Trometamina en la muestra tomada por medio de la siguiente fórmula:

Donde:

A: es la absorbancia de la solución de muestra.

b0: es el intercepto de la recta de regresión.

b1: es la pendiente de la recta de regresión

D: es la dosis de Ketorolac Trometamina que declara la tableta = 10,0 mg

V: es el volumen de dilución = 600,0 mL

1000: es el factor de conversión de mg a µg.



100: es el factor para obtener en contenido en %.

11. REPORTE DE RESULTADOS

Reportar los resultados como % disuelto de los 6 vasos individuales de la siguiente manera: % D = XX ± % DER. Reportar él % disuelto promedio.

La DER se dará con dos cifras significativas.

12. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN.

12.1. Tolerancias

No menos 75 % (Q) en 45 min.

12.2. Interpretación de los resultados para el ensayo de disolución.

Se cumplen los requisitos si la cantidad de ingrediente activo disuelto a partir de las unidades de dosificación analizadas se ajusta a la Tabla de Aceptación. Continuar con las tres etapas de prueba a menos que los resultados se ajusten a S1 o a S2. La cantidad, Q, es la cantidad de ingrediente activo disuelta especificada en la monografía individual, expresada como un porcentaje del contenido declarado de la unidad de dosificación; los valores de 5%, 15% y 25% en la Tabla de Aceptación son los porcentajes del contenido declarado de forma que estos valores y Q están expresados en unidades equivalentes.

12.3. Tabla de aceptación.

Etapa CantidadAnalizada

Criterios de Aceptación

S1 6 Ninguna unidad es menor que Q + 5%.

S2 6 El promedio de 12 unidades (S1 + S2) es igual o mayor que Q, y ninguna unidad es menor que Q – 15%.

S3 12 El promedio de 24 unidades (S1 + S2 + S3) es igual o mayor que Q, no más de 2 unidades son menores que Q – 15%, y ninguna unidad es menor que Q – 25%.

13. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA.



13.1. Protocolo del estudio de validación del método analítico para el ensayo de disolución de Ketorolac Trometamina en Ketorolac por espectrofotometría UV-Vis. Protocolo Nº 287P.

13.2. USP 35-NF 30 Capitulo general <711>. Disolución. Versión Electrónica.

14. REGISTROS.

14.1. Este procedimiento está almacenado en archivo electrónico bajo la custodia del Responsable de Control de Calidad. Una copia en físico está en manos del responsable de validación.

14.2. Los registros que se generen por la aplicación del documento deberá de reflejarse en la bitácoras de los equipos utilizados y de Ketorolac.

15. ANEXOS.

15.1 Anexo. 1 Espectro de Absorción UV-Vis de la solución del estándar de referencia.

15.2 Anexo. 2. Espectro de Absorción UV-Vis de la solución de la muestra en el ensayo de disolución.

.............................Fin del procedimiento...........................



ANEXO

Anexo. 1 Espectro de Absorción UV-Vis de la solución del estándar de referencia.


Estándar de Ketorolac Trometamina


Anexo. 2. Espectro de Absorción UV-Vis de la solución de la muestra en el ensayo de disolución.

MÉTODO MICROBIOLÓGICO DE PRODUCTOS NO ESTÉRILES: PRUEBA DE RECUENTO MICROBIANO.

1 OBJETIVO

1.1 Determinar la calidad microbiológica de los productos de PANZYMA LABORATORIES, S.A aplicando la Pruebas de Recuento Microbiano.

2. ALCANCE

Este procedimiento es de aplicación a todas las formas farmacéuticas no estériles de la producción de PANZYMA LABORATORIES, S.A. 3. RESPONSABILIDADES

3.1 Es responsabilidad del gerente de control de calidad garantizar el presente PNT.


Muestra de Ketorolac


3.2 Es responsabilidad del encargado del área de microbiología cumplir y hacer cumplir el presente PNT.

3.3 Es responsabilidad del analista cumplir con el presente PNT.

4. DEFINICIONES

4.1 Microorganismos viables: Son todos aquellos microorganismo que pueden vivir en condiciones mínimas de nutrientes para su normal crecimiento y multiplicación y pueden encontrarse como contaminantes en el agua, alimentos y medicamentos.

4.2 Contaminación: Es la presencia de entidades físicas, químicas o biológicas indeseables en productos, ambientes, equipos y materia prima.

4.3 Microorganismos: Seres unicelulares muy pequeños que para poder observarlo, hay que usar un microscopio o lente de aumento, algunos son perjudiciales ya que causa enfermedades (patógenos) otros son beneficiosos.

5. MATERIAL Y EQUIPO:

c.s.p: Cantidad suficiente para

6. MEDIOS DE CULTIVOS Y REACTIVOS

7. PRECAUCIONES

7.1 Las precauciones que se deben de tomar en cuenta para evitar la contaminación son:


Microscopio 1 Pipetas 5 mL, 10mL c.s.pIncubadora 30°C-36°C 1 Contador de colonia 1Incubadora 20°C-25°C 1 Platos Petry c.s.pBaño María 1 Tubos de ensayo c.s.pBalanza 600 x 0,1g 1 Gradillas 1Espátula 1 Algodón c.s.pCampana de Flujo Laminar 1 Erlenmeyer 500 mL,250

mLc.s.p

Agar Digerido de Caseína y Soja Caldo MR/VPAgar Sabouraud Dextrosa Agua Peptonada BufferAgar Manitol Salado Caldo CasoyAgar Cetrimida Caldo Lactosa

Agar Levine Eosina-Azul de Metileno Medio SIM (Sulfuro-indol-movilidad)Agar Citrato de Simmons Agar UreaAgar MacConkey Reactivos de Kovac.Agar Triple Azúcar-Hierro (TSI) Reactivos para Tinción de GramAgar Xilosa Lisina Desoxicolato Alcohol 70°Caldo Tetrationato Polisorbato 80 Estéril


7.1.1 El analista debe cumplir con la vestimenta: boquilla, gorro, pantalón, gabacha estéril y zapatos.

7.1.2 Antes de ingresar al área estéril, el analista se debe lavar las manos de acuerdo al PNT/I-022CC.

7.1.3 Utilizar cristalería estéril.

7.1.4 Limpiar la superficie interior de la campana de flujo laminar con alcohol al 70%.

7.1.5 El área debe estar limpia y desinfectada de acuerdo al PNT/I-018CC.002.

7.1.6 Encender el flujo de la campana de flujo laminar antes de introducir el material a utilizar.

7.1.7 El material que se vaya a utilizar se debe limpiar con alcohol al 70% e igualmente se hará con la superficie de los productos antes de introducirlos a la campana de flujo laminar.

7.1.8 Cargar la campana de flujo laminar con los materiales a utilizar.

7.1.9 Se debe realizar control ambiental dentro de la campana flujo laminar en el momento en que se realiza el análisis del producto.

8. PROCEDIMIENTO

8.1 PREPARACIÒN DE LA MUESTRA De acuerdo a la forma farmacéutica del producto, elegir el método adecuado para obtener una solución, suspensión o emulsión sin alterar el número y clase de microorganismos. Los métodos de preparación de la muestra se describen a continuación.

8.1.1 Jarabes y suspensiones: Representar la muestra en un Erlenmeyer. Medir 10 mL del producto y transferirlo a un Erlenmeyer conteniendo 90 mL de Agua Peptonada.

8.1.2 Crema, óvulos, supositorios y geles: Representar la muestra en un Erlenmeyer. Pesar 10 g de producto en otro Erlenmeyer y agregar la cantidad mínima necesaria de Polisorbato 80 Estéril (de 1 a 10 mL) para que al agitar con una barra magnética estéril se forme una pasta. Calentar en un baño de agua a una temperatura que no exceda los 45°C y agregar gradualmente el volumen necesario para completar 90mL de Caldo Lactosa. Sacar la barra magnética y transferir la mezcla a un Erlenmeyer estéril. Repetir el procedimiento: - Para supositorios y óvulos, con Caldo Casoy

- Para crema y geles, con el caldo Casoy y Agua Peptonada.

8.1.3 Tabletas: Representar la muestra en un Mortero estéril. Morterizar el producto con ayuda de un pilón estéril. Pesar 10 g del producto y transferirlo a un Erlenmeyer conteniendo 90 mL de Agua Peptonada.



8.1.4 Cápsulas: Extraer el polvo de cada cápsula y representarla en un Erlenmeyer, agitar con una espátula estéril: Pesar 10 g del contenido de las cápsulas y transferirlo a un Erlemenyer conteniendo 90 mL de Agua Peptonada. 8.1.5 Pellets. Extraer el contenido de cada cápsula y representar la muestra en un mortero estéril. Morterizar el producto con ayuda de un pilón Estéril. Pesar 10 g del producto y transferirlo a un Erlenmeyer conteniendo 90 mL de Agua Peptonada.

8.1.6 Suspensiones Polvo para reconstituir: Representar la muestra en un Erlenmeyer estéril, agitar con una espátula estéril: Pesar 10 g del producto y transferirlo a un Erlenmeyer conteniendo 90 mL de Agua Peptonada.

9. DETERMINACIÓN DEL PODER INHIBITORIO DEL PRODUCTO

9.1 Antes de realizar por primera vez las pruebas de recuento microbiano a un producto, determinar si el producto posee actividad antimicrobiana (presencia de inhibidores microbianos en el mismo), según el PNT-029CC (Determinación de actividad antimicrobiana del producto). También se puede realizar cuando haya cambio en la fórmula.

10. RECUENTO TOTAL DE MICROORGANISMOS AEROBIOS. (RTMA)

10.1 Método en Placa

10.1.1 Efectuar las diluciones decimales necesarias para que 1 mL tenga entre 30 y 300 UFC/mL, usando como diluyente Agua Peptonada Buffer.

10.1.2 Inocular por duplicado 1 mL de cada dilución de la muestra en platos petry.

10.1.3. Agregar a cada plato petry de 15 a 20 mL de Agar Digerido de Caseína y Soja, previamente esterilizado y mantenido en baño maría a una temperatura de 45ºC.

10.1.4. Mezclar la muestra con el Agar Digerido de Caseína y Soja con movimientos suaves rotatorios.

10.1.5 Permitir que el medio de cultivo solidifique e incubar en posición invertida a una temperatura de 30°C a 36°C, durante 48 - 72 horas.

10.1.6 Verificar el crecimiento de microorganismos, una vez finalizada el período de incubación, contar el número de colonias, auxiliándose del contador de colonia.

10.1.7 Expresar el promedio de las dos placas en términos del número de microorganismos por g o mL de muestras.

10.1.8 Expresar los resultados como: menor de 10 UFC por g o mL de muestra. Si no se observa el crecimiento en la dilución inicial.



10.2 RECUENTO TOTAL COMBINADO DE HONGOS FILAMENTOSOS Y LEVADURAS. (RTCHL)

10.2.1 Proceder como se indica en el recuento de microorganismos aerobios excepto que se utiliza el Agar Dextrosa Sabouraud e incubar las placas petry de 20 a 25°C, durante 5 – 7 días.

10.2.2 Expresar los resultados como menor de 10 UFC por g o mL de muestra. Si no se observa crecimiento. 11. CONTROL NEGATIVO

11.1 Verificar las condiciones de prueba, realizar un control negativo, utilizando el diluyente seleccionado en lugar de la preparación de la muestra. No debe presentarse crecimiento de microorganismos.

12. PROMOCIÒN DEL CRECIMIENTO DE LOS MEDIOS

12.1 Analizar cada partida del medio listo para usar, según el PNT/I-030CC.001.

13. CRITERIOS DE ACEPTACIÒN PARA PREPARACIONES FARMACÈUTICAS NO ESTERILES.

13.1 Interpretar de la siguiente manera los criterios de aceptación: - 101 UFC: recuento máximo aceptable = 20 - 102 UFC: recuento máximo aceptable = 200 - 103 UFC recuento máximo aceptable = 2000 13.2 Criterios de aceptación para la calidad microbiológica de formas farmacéuticas no estériles ( ver anexo Nº2) 14. REPETICIÒN DE LA PRUEBA. 14.1 Confirmar un resultado dudoso, puede realizarse una nueva prueba en una muestra con 25 g o mL del producto.

15 CONTROL DE CAMBIOS

Ver anexos

16 ANEXOS

Anexo 1: Esquema de Análisis de Prueba de Recuento Microbiano.

Anexo 2. Criterios de aceptación para la calidad microbiológica de forma farmacéuticas no estériles.

17 BIBLIOGRAFÍA



17.1 U.S. Farmacopea de los Estados Unidos de América Formulario Nacional, USP 35-NF 30, Washington, D.C, 2011.

17.1.1 Capítulo <1111>. Examen Microbiológico de productos no estériles: Criterios de aceptación para preparaciones farmacéuticas y sustancias de uso farmacéutico.

17.1.2 Capítulo <61>. Examen Microbiológico de productos no estériles: Prueba de Recuento Microbiano. 17.2 Manual de procedimiento, control biológico y microbiológico de drogas, medicamentos y Cosméticos, Bogotá, D.E. 1989.

---------------------------------------------Fin del procedimiento------------------------------------------

ANEXO Nº 1ESQUEMA DE ANÁLISIS DE PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO

Método en Placa

Representación del Producto

10-3

10-1 10-2



90 mL de Agua

Peptonada

Agar Digerido de Caseína y Soja incubar 30 a 36ºC por 48 a 72 hrs 1 mL 1 mL 1 mL

Agar Sabouraud Dextrosa incubar 20 a 25 1ºC de 5-7 días

1mL 1mL 1mL

ANEXO Nº 2CRITERIOS DE ACEPTACIÒN PARA LA CALIDAD MICROBIOLOGICA DE FORMAS FARMACÈUTICAS

NO ESTÈRILES

Vía de administración Recuento total de Microorganismos Aerobios UFC/g o

UFC/mL

Recuento total combinado de Hongos y Levaduras

UFC/g o UFCmL

Microorganismos Específicos

Preparaciones no acuosas para uso oral

103 102 Ausencia de Escherichia Coli

Preparaciones acuosas para uso oral

102 101 Ausencia de Escherichia Coli

Uso rectal 103 102 ------Uso cutáneo 102 101 Ausencia de

Pseudomona aeruginosa.Ausencia de Staphylococcus aureus.

Uso nasal 102 101 Ausencia de Pseudomona aeruginosa



Ausencia de Staphylococcus aureus.

Uso auricular 102 101 Ausencia de Pseudomona aeruginosaAusencia de Staphylococcus aureus.

Uso vaginal 102 101 Ausencia de Pseudomona aeruginosaAusencia de Staphylococcus aureus.Ausencia de Candida albicans.

Uso por inhalación (Para preparaciones líquidas para nebulización.)

102 101 Ausencia de Pseudomona aeruginosaAusencia de Staphylococcus aureusAusencia de bacterias Gram-negativas tolerantes a la bilis

Nota: Esta lista no es necesariamente exhaustiva y, para algunas preparaciones, puede que sea necesario realizar pruebas para detectar otros microorganismos dependiendo de la naturaleza de los materiales iniciales y del proceso de fabricación.

EXAMEN MICROBIOLÓGICO DE PRODUCTOS NO ESTÉRILES: PRUEBA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS.

1 OBJETIVO

1.1 Determinar la ausencia o presencia limitada de microorganismos específicos en productos no estériles de PANZYMA LABORATORIES.

1.2 Cumplir con las Buenas Prácticas de Manufactura al efectuar al efectuar la determinación de microorganismos específicos. 2. ALCANCE

Este procedimiento es de aplicación para productos no estéril de PANZYMA LABORATORIES.

3. RESPONSABILIDADES



3.1 Es responsabilidad de la gerencia de control de calidad garantizar el cumplimiento del presente Procedimiento Normalizado de Trabajo (PNT).

3.2 Es responsabilidad del encargado del área de microbiología cumplir y hacer cumplir el presente Procedimiento Normalizado de Trabajo (PNT).

3.3 Es responsabilidad del analista del área de microbiología ejecutar el presente Procedimiento Normalizado de Trabajo (PNT).

4. DEFINICIONES

Ver PNT-030CC

5 MATERIAL Y EQUIPO

6. MEDIOS DE CULTIVOS Y REACTIVOS

Caldo Digerido de Caseína y Soja Agar MacConkeyCaldo Lactosa Agar Manitol SaladoCaldo Tetrationato Agar Xilosa Lisina DesoxicolatoAgar Cetrimida Agar Levine Eosina -Azul de MetilenoCaldo Mossel Agar Violeta Rojo Bilis GlucosaDiclorohidrato de N-N-dimetilp-fenilendiamina al 1%

Caldo Selenito Cisteína

Plasma Fresco de conejo Caldo Sabouraud Dextrosa

7. PRECAUCIONES ANTIMICROBIANAS

Ver PNT-030CC.

8. PROCEDIMIENTO GENERALES

8.1. Preparar la muestra según se indica en PNT-030CC.

8.2. Neutralizar la actividad antimicrobiana si la posee el producto a examinar según se indica en PNT-029CC.

8.3. Realizar análisis de propiedades de promoción del crecimiento e inhibitorias de los medios según PNT/I-030CC.001.


Incubadora 1 Asa c.s.pMechero de alcohol 1 Marcador punta fina 1Gradilla 1 Pipeta volumétrica 1mL 1


8.4. Verificar las condiciones de prueba, realizando un control negativo, utilizando el diluyente seleccionado en lugar de la preparación de prueba. No debe presentar crecimiento de microorganismo.

9. PROCEDIMIENTO

9.1 Bacterias Gram-Negativas Tolerantes a la Bilis

9.1.1 Preparar una muestra 1 en 10 de no menos de 1 g del producto analizar en Caldo Digerido de Caseína de Soja, mezclar e incubar 20º a 25ºC durante un período de 2 horas.

9.1.2 Inocular 1mL en Caldo Mossel, incubar a una temperatura de 30º a 35º durante un período 24 a 48 horas.

9.1.3 Subcultivar en placas de Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa. Incubar a una temperatura de 30 a 35ºC durante un período de 18 a 24 horas. El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias.

9.2 Escherichia coli

9.2.1 Preparar una muestra empleando una dilución 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a analizar. Usar la cantidad correspondiente a 1 g ò 1 mL, para inocular en Caldo Lactosa, mezclar e incubar a una temperatura de 30º a 35º durante un período de 18 a 24 horas.

9.2.2 Agitar el Caldo Lactosa y aislar resembrando por estría cruzada el medio en una placa de Agar MacConkey ó Agar Levine Eosina-Azul de Metileno e incubar a una temperatura de 30º a 35º durante un período de 18 a 72 horas.

9.2.3 Interpretación: El crecimiento de colonias indica la posible presencia de E. coli. Esto se confirma mediante pruebas de identificación. El producto cumple con la prueba si no se presentan colonias o si los resultados de las pruebas de identificación son negativos. (Ver anexo Nº1)

9.3 Salmonella

9.3.1 Preparar una muestra empleando una dilución 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a analizar. Usar la cantidad correspondiente a 1 g ò 1 mL, para inocular en Caldo Lactosa e incubar entre 30º y 35ºC de 18 a 24 horas, si presenta crecimiento, resembrar 1 mL a los siguientes medios de enriquecimiento Caldo Selenito Cisteína y Caldo Tetrationato. Mezclar e incubar de 12 horas a 24 horas entre 30º-35ºC.

9.3.2 Tomar una asada y resembrar por estría cruzada en los medios de Agar Xilosa Lisina

Desoxicolato, incubar a una temperatura de 30º-35ºC por un período de 18 a 48 horas.

9.3.3 Observar la morfología, el crecimiento de colonias bien desarrolladas de color rojo con o sin centros negros indica la posible presencia de Salmonella. Esto se confirma mediante pruebas de identificación. (ver anexo Nº1)



9.3.4 Si las características son similares resembrar el medio Agar Triple Azúcar Hierro por estría y picadora e incubar entre 30º-35ºC por un período de 24 -48 horas.

9.4 Pseudomonas aeruginosa.

9.4.1 Preparar una muestra empleando una dilución 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a analizar en Caldo Digerido de Caseína y Soja y mezclar e incubar a una temperatura de 30 a 35ºC por un período de 18 a 24 horas.

9.4.2 Sembrar por estría cruzada en placa de Agar Cetrimida e incubar a una temperatura de 30 a 35ªC durante un período de 18 a 72 horas.

9.4.3. Observar e interpretar los resultados cuando el crecimiento de colonias indica la posible presencia de Pseudomona aeruginosa. Esto se confirma mediante pruebas de identificación. El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias o si los resultados de las pruebas de identificación confirmatorias son negativa.(ver anexo Nº1)

9.4.4 Confirmar si un crecimiento de colonias sospechosa corresponde a Pseudomonas aeruginosa, por medio de la prueba de oxidasa. Colocar o transferir las colonias sospechosas a tiras o discos de papel filtro que se han impregnado previamente con una solución de diclorohidrato de N-N-dimetil p-fenilendiamina al 1% y. La prueba es positiva si se desarrolla un color púrpura.

9.5 Staphylococcus aureus.

9.5.1 Preparar una muestra empleando una dilución 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a analizar en Caldo Digerido de Caseína y Soja y mezclar e incubar a una temperatura de 30 a 35ºC por un período de 18 a 24 horas

9.5.2 Sembrar por estría cruzada en una placa de Agar Manitol Salado e incubar a una temperatura de 30 a 35º durante un período de 18 a 72 horas.

9.5.3 Observar e interpretar los resultados, si el crecimiento de colonias amarillas o blancas rodeadas de una zona amarilla indica la posible presencia de Staphylococcus aureus. Esto se confirma mediante pruebas de identificación. El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias de los tipos descritos o si los resultados de las pruebas de identificación confirmatorias son negativa. (ver anexo Nº1).

9.5.4. Confirmar si un crecimiento de colonia sospechosa corresponde a Staphylococcus aureus, por medio de la prueba de la coagulasa. Colocar o transferir una porción de la colonia sospechosa desde la superficie de Agar Manitol Salado a tubos individuales que contengan cada uno 0.5mL de Plasma Fresco de Conejo. Incubar en Baño María a 37ºC por 24 horas.

9.5.5 Observar si la muestra no presenta grado de coagulación. Si no presenta ningún grado de coagulación la muestra cumple los requisitos de ausencia de Staphylococcus aureus.

9.6 Candida albicans



9.6.1 Preparar una muestra empleando una dilución 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a analizar, inocular en Caldo Sabouraud Dextrosa y mezclar. Incubar a una temperatura de 30 a 35ºC durante un período de 3 a 5 días.

9.6.2 Aislar en una placa de Agar Sabouraud Dextrosa e incubar a una temperatura de 30 a 35ºC durante un período de 24 a 48 horas.

9.6.3 Observar e interpretar los resultados, si el crecimiento se presenta colonias blancas puede indicar la presencia Candida albicans. El producto cumple con la prueba si no se desarrollan tales colonias o si las pruebas de identificación confirmatorias resultan negativas.

10 CONTROL DE CAMBIOS

Ver anexo.

11. ANEXOS

Anexo 1: Características morfológicas.

12. BIBLIOGRAFÍA

12.1. Benéitez Palomeque Enrique. Good Manufacturing Practices. La Gestión Técnica en la Fabricación de Medicamentos. Editorial Centro de Estudios Superiores de la Industria Farmacéutica Madrid, España. 1996.

12.2. René Tejedor Arias. Manual de Práctica de Laboratorio de Higiene de los alimentos Habana, 1986.

12.3. U. S Pharmacopeia E National Formulary, USP 35, NF 30, Washington, D.C.2011. Capitulo <62> Examen microbiológico de productos no estériles: Prueba de Microorganismos Específicos.

12.4. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, Octava edición, Volumen I, México 2004



.........................Fin del procedimiento....................

Anexo Nº1

CARACTERÌSTICAS MORFOLÓGICAS

Medio de Cultivo Morfología colonial Morfología microscópica y reacción al Gram.

Agar Manitol Salado.

Colonias amarillas doradas rodeadas de una zona amarrilla.

Cocos Gram positivos agrupados en racimos.

Agar Cetrimida. Colonias verdosas (prueba oxidasa positiva).

Bacilos Gram negativos.

Agar Xilosa Colonias rojas con o sin centro negro. Bacilos Gram negativos.



Lisina Desoxicolato.Agar MacConkey Colonias grandes rosas a rojas rodeadas

de una zona de precipitado.Bacilos Gram negativo.

Agar Levine Eosina- Azul de Metileno

Colonias pequeñas azul-negro con brillo metálico de color verde.

Bacilos Gram negativo.


metodologia analitica ketorolac 10 mg

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