metabolismo microbiano de proteinas -iv-ciclo-ing agroindustrial(torres villanueva mitshell)
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ÍNDICE
CAPÍTULO I: GENERALIDADES……………………………………..……
1.1. ESPECIALIDAD…………………………………………………….…
1.2. TITULO…………………………………………………….……....…
1.3. OBJETIVO………………………………………………………….….
a. General:…………………………………………………….…..…
b. Específicos:……………………………………………………….
1.4. RESPONSABLE DE LA INVESTIGACIÓN………………………..
CAPÍTULO II:FUNDAMENTO TEORICO ........……………………………..
CAPÍTULO II: EXPERIMENTACIÓN…………………………………..…….
3.1. MATERIALES………………………………………………..………
a. Materiales y equipos………………………………………..……
b. Reactivos: …………………………………………………………
3.2. METODOLOGÍA……………………………………………………..
CAPÍTULO IV: RESULTADOS Y DISCUSIÓN………….……….….………
4.1. RESULTADOS ……………………………………………………….
4.2. DISCUSIÓN ……………………………………………………….….
CONCLUSIONES ………………………………………………………….……
BIBLIOGRAFÍA………………………………………………………..…………
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I. GENERALIDADES
1.1. ESPECIALIDAD
Laboratorio de microbiología
1.2. TITULO.
Metabolismo microbiano de proteínas
1.3. OBJETIVO.
Demostrar la acción de las bacterias frente a compuestos poliméricos
nitrogenados, como proteínas, urea,etc.
Demostrar que no todas las bacterias tienen capacidad de degradar
ciertos compuestos.
Observar la presensacia de algunos compuestos de la degradación de
proteínas por medio de reactivos de lectura
1.4. RESPONSABLES DE LA INVESTIGACIÓN
Torres Villanueva Mitshell
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II. FUNDAMENTO TEÓRICO
Se conoce poco sobre cómo los factores intrínsecos (pH y actividad de agua) y
extrínsecos (temperatura de almacenamiento) actúan sobre la síntesis y
actividad de enzimas microbianas en los alimentos, por lo que es importante
estudiar las interacciones entre la presencia de microorganismos y la actividad
enzimática durante el deterioro. La humedad es un factor crítico que influye en
las reacciones enzimáticas, una de las formas en las que el agua influye en las
reacciones enzimáticas es como reactivo (por ejemplo: reacciones de
hidrólisis).
Las enzimas para mantener su actividad, deben mantener su estructura. El
estudio de las actividades enzimáticas de los microorganismos constituye un
punto de partida en la comprensión de la posible relación metabólica y
fisiológica que establecen con sus hospederos, a la vez que permite investigar
enzimas con potenciales aplicaciones biotecnológicas.
Los cultivos iniciadores son preparaciones de cultivo de cepas de
microorganismos seleccionados por su actividad enzimática que agregados en
proporción definida producen la transformación deseada del sustrato, se hace
necesario hacer crecer microorganismos en un agar nutritivo que lo contenga.
Si el microorganismo es capaz de hidrolizar, entonces aparece en el medio de
cultivo un precipitado alrededor del crecimiento bacteriano debido a la
combinación del Ca2+ y los ácidos grasos liberados por la hidrólisis. Cuando la
bacteria no posee la capacidad para hidrolizar, no se observa ningún tipo de
precipitado.
Hidrólisis de la gelatina .- Los biotipos bacterianos se inocularon en placas de
medio de Gelatina Nutritiva mediante estría por agotamiento; se va examinando
diariamente las placas para observar el crecimiento y la liquefacción de la
gelatina.
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III. EXPERIMENTACIÓN.
3.1. MATERIALES.
a. Material biológico.
Escherichia coli, citrobacter freundi y proteus vulgaris, peseudomonas
b. Medio de cultivo
Agar urea
Medio gelatina
Caldo triptonado
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c. Material de vidrio
Placas Petri
Tubos de ensayo 13x100mm
d. Otros
Asa bacteriológica
Lugol, Acetato de plomo y Reactivo de lovac¨s
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3.2. METODOLOGÍA.
METABOLISMO DE PROTEÍNAS : LICUEFACCIÓN DE LA
GELATINA (Escherichia coli sp(A) Y pseudomonas sp(B) )
2 Tubos con GELATINA
Sembrar muestras A y B
respectivamente una por cada
tubo (ESTRIAS)
Incubar a 37°C/24h
Observar a través de la
degradación de proteínas
(color, aspecto y forma)
Hacer lecturas de licuefacción
de la gelatina
Anotar resultados
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PRODUCCIÓN DE INDOL Y H2S. (Escherichia coli (A) y proteus vulgaris
(B).Y citrobactr freundii (C))
2 Tubos con CALDO
TRIFTOFANO
Sembrar muestras A ,B y C
respectivamente una por cada
tubo (siembra por puntura)
Incubar a 37°C/24h
Observar a través de la
degradación de aminoácidos
azufrados y producción de
H2S (color, aspecto y forma)
Hacer lecturas
Anotar resultados
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DECRADACION DE COMPUESTOS AMINADOS: HIDROLISIS
DE LA UREA . (Escherichia coli (A) y proteus vulgaris (B).)
2 Tubos con AGAR UREA
Sembrar muestras A y B
respectivamente una por cada
tubo (siembra por puntura)
Incubar a 37°C/24h
Observar a través la hidrolisis,
se debe tornar un viraje de
color grosella.
Hacer lecturas
Anotar resultados
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GRAFICA GENERAL DE LOS PROCEDIMIENTOS MENCIONADOS
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IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
METABOLISMO DE PROTEÍNAS : LICUEFACCIÓN DE LA
GELATINA (Escherichia coli sp(A) Y pseudomonas sp(B) )
PRODUCCIÓN DE INDOL Y H2S. (Escherichia coli (A) y proteus vulgaris
(B). citrobactr freundii (C)
LA REACION SE A DADO SOLO EN
LA PSEUDOMONA YA QUE ESTA
TIENE UNA ENZIMA
DEGRADADORA DE LA GELATINA
(COLO VERDE), A DIFERENCIA DE
LA E COLI QUE NO TIENE UNA
REACION (MANTIENE SU COLOR
AMARILLO). EL ASPECTO PARA
MABOS CASOS ES VISCOSO.
EL PROTEUS FEO LA PRINCIPAL
BACTERIA QUE REACIONO CON
GRAN RAPIDES MIENTRAS LA
SEUDOMONA TARDO UN LARGO
TIEMPO (FORMACION DE UN
VIOLETA). LA E COLI NO TUBO
ÉXITO AL REACIONA
MANTENIENDO SU COLOR.
PSEUDOMONA –
PROTEUS +
ASPECTO SOLIDIFICADO.
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DECRADACION DE COMPUESTOS AMINADOS: HIDROLISIS
DE LA UREA . (Escherichia coli (A) y proteus vulgaris (B).)
EL E COLI NO REAACIONO, MIENTRAS LA
BACTERIA PROTEUS TORNO COLOR
GROSELLA Y DE ASPECTO SOLIDIFCADO Y
UNIFORME. ESTOS MEDIOS SON
DETERMINADOS SEGÚN EL CAMBIO DE PH EN
FORMACION.
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CONCLUSIONES
Las proteínas no pueden ser usadas de manera directa por labacteria, por lo
que se recurre a degradarlas a péptidos con la
ayuda de proteinasas, para luego descomponerlas en sus elementos más
básicos, es decir aminoácidos, los cuales por medio de un proceso de
desaminación pierden sus aminas y quedan solo cuerpos
o esqueletos carbonatados los cuales son oxidados o sintetizados, si es
lo primero hay producción de CO2 y agua, si es lo segundo va al ciclo de
Krebs; los aminoácidos son eliminados
alexterior siendo los directos responsables de la alcalinidad delmedio de
cultivo.
Para la formación de Indol por parte de la bacteria es necesario la
presencia de la enzima triptofanasa que es la que va a descomponer
al triptófano cuya estructura es muy similar a la de muchas aminas como las
del tipo de la serotonina
La Bacteria al degradar el triptófano por desanimación, obtiene como producto
resultante al indol, ácido pirúvico y amoniaco.
BIBLIOGRAFÍA
Pelczar, Michael. Microbiología. Cuarta Edición. Editorial Mc. GrawHill.
México D.F., México. 1997. Pagina 155
Brock, T.D. y Madigan , M.T. Microbiología. Sexta Edición.Editorial Prentice-
Hall Hispanoamericana S.A. México, D.F.,México. 1993. Paginas 521 y 522.
Bohinski, Robert. Bioquímica. Quinta Edición. Addison
wesleyIberoamericana. Washington, Delaware, U.S.A. 1991 Páginas631 -
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CUESTIONARIO
1. ¿Qué importancia tiene la degradación de proteínas?
La degradación de las proteínas desempeña importantes funciones, ya
sea por la modulación de los niveles intracelulares de proteínas
específicas (proteólisis limitada), como por la eliminación de proteínas
anormales.
La degradación de las proteínas, y de los biopolímeros en general, no
fue considerada por mucho tiempo como un mecanismo necesario en la
homeostasis de células y tejidos.
Actualmente se sabe que en la degradación de determinadas proteínas
reside el control de diversos procesos biológicos. Algunos
fundamentales, como la progresión del ciclo celular
2. ¿fundamente la hidrolisis de Las proteínas en la formación de indol
y ácido sulfhídrico?
El indol es uno de los productos de degradación metabólica del
aminoácido triptofano.Las bacterias que poseen la triptofanasa son
capaces de hidrolizar y desaminar el triptofano con producción de indol,
ácido pirúvico y amoníaco. La producción de indol es una característica
importante para la identificación de muchas especies de
microorganismos. La prueba de indol está basada en la formación de un
complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehído del p-
dimetilaminobenzaldehído. Este es el principio activo de los reactivos de
Kovacs y Ehrlich descriptos más adelante. El medio de cultivo utilizado
debe ser rico en triptofano.
El indol, ácido piuvico y amoniaco son uno de los productos de
degradación metabólica del aminoácido triptofano.
Qué compuestos se obtienen mediante la degradación del triptófano
ocasionada por la acción bacterial?
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El enrojecimiento de la capa superficial del cultivo en tubo de ensayo
¿Qué le indica?
El desarrollo de un vivo color rojo fucsia en la interfase del reactivo y el
caldo, segundos después de añadir el reactivo indica la presencia de
indol y una prueba positiva
3. explique el cambio de color en la urea.
Se cultiva el microorganismo en slant en agar urea de Christensen. Este
medio se complementa después del autoclavado con 50ml/l de urea.
Ésta será degradada por aquellos microorganismos capaces de producir
el enzima ureasa. Esta degradación produce amoniaco que hará variar
el color del indicador de amarillo a rojo, poniéndose así de manifiesto la
actividad ureasa.
Para revelar el resultado de esta prueba es importante tener en cuenta el
tiempo de incubación ya que especies de Proteus vuelven alcalino el
medio poco después de la inoculación y sus resultados deben ser leídos
en las primeras 2-6 horas, mientras que Citrobacter freundii y Klebsiella
pneumoniae tienen actividad ureasa dentro de las 24-48 horas de
incubación