Markerii microsatelit-ComparațiiCojocaru Emilia

• Promotor- loc de semnalizare a ARN polimerazei ptr începerea funcției; cuprinde secvențele consensus: cutia TATA (-10) şi secvența TTGAC(-35)

• Inițiatorul - locul în care ARN polimeraza îşi începe funcția

• Regiunea operatorului- locul specific de legare a represorului (proteină cu funcție reglatoare care nu permite ca ARN-polimeraza să înceapă sinteza ARNm)

• Locul de legare la ribozom(SD)• Gena structurală începe cu codonul

START – care transcris în ARNm devine codonul AUG, iar capătul genei este marcat de unul din codonii non-sens (STOP)

Ce sunt microsateliții?

• MICROSATELIŢII - sunt secvențe repetate în tandem, supuse unei evoluții extrem de rapide, datorită unor procese randomizate -> erorile făcute de ADN polimeraza în timpul replicării ADN.

Se consideră că aceşti loci au un polimorfism foarte înalt, potrivit pentru întocmirea de amprente genetice care pot discerne chiar între indivizi strâns înrudiți.

• Sunt grupați în regiunea centromerului şi a telomerelor unde formează ciorchini

• Nu se transcriu• Sunt foarte polimorfi şi se transmit codominant

Organizare în ADN

• Sunt secvențe repetate la nivelul ADN• Sunt de mai multe feluri:• Mononucleotide repeats ...AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA...• Dinucleotide repeats ...CACACACACACACACACACACACACA...• Trinucleotide repeats ...CGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGT...• Tetranucleotide repeats ...CAGACAGACAGACAGACAGACAGA...• Pentanucleotide repeats ...AAATTAAATTAAATTAAATTAAATT...• Hexanucleotide repeats ...CTTTAACTTTAACTTTAACTTTAA...

Examples of perfect microsatellites made up from mono-, di-, tri, tetra , penta-,and hexanucleotide repeats, respectively

Unde sunt folosiți?

• Ingineria genetică este definită ca ansamblul de metode şi tehnologii efectuate in vitro cu gene, cromozomi sau celule întregi, în scopul construirii unei structuri genetice cu proprietăţi ereditare premeditate. (L. Popa şi Rodica Repanovici)

Tipuri de markeri microsatelit

ISSRSAMPLSSCPVNTRSNPSTMP

SNP, STR

Aplicații

Sursele de ADN utilizat în scop de identificare:Ţesuturi proaspete, sânge integral, celule ale mucoasei bucale, foliculi piloşi sau probe uscate: pete de sânge sau spermă

Prelevarea şi conservarea probelor biologice pentru analiza ADNCea mai utilizată sursă de ADN este sângele integral proaspăt, recoltat pe anticoagulant: EDTA

Izolarea şi purificarea ADN din probele biologiceCu ajutorul unor procedee chimice, fizice sau combinate, evitându-se contaminarea şi degradarea probei

Genotiparea ADN se poate face în scop de identificare(http://www.ornl.gov/sci/techresources/Human_Genome/elsi/forensics.shtml#2)Se poate realiza prin două tipuri de tehnici: 1. tehnici bazate pe hibridare (tehnica RFLP combinată cu Southern blotting) a fost prima tehnică utilizată în acest scop)2. tehnicile bazate pe reacţia PCR: Tehnica sequence-tagged microsatellite profiling (STMP) pentru evidențierea polimorfismelor SSR (simple sequence repeats)

• Tehnica STR - VNTR (Sequence - Tagged Repeats-VNTR)

Metoda care s-a impus în prezent este metoda bazată pe PCR pentru locii STR (Short Tandem Reapeats) - tehnica (STMP)