marcha fitoquímica de chuchuhuasi
DESCRIPTION
ÂTRANSCRIPT
Estudio de la Marcha Fitoquima de Maytenus macrocarpa “Chuchuhuasi”
Egoavil Espejo, Rocio del Pilar1
Arévalo Ortiz, Fermín Humberto2
Resumen
En el presente estudio se evalúa la marcha fitoquímica de la corteza de Maytenus macrocarpa
“Chuchuhuasi”, resultando positivas pruebas en aminoácidos, taninos, esteroides-triterpenos,
flavonoides, cardenolidos y alcaloides, por lo que se verificaron usos que tradicionalmente se le
atribuyen, tales como antiinflamatorio, analgésico, antihemorrágico, antiviral y estimulador de
actividad cardiaca. Sin embargo, la medicación inadecuada del extracto de la corteza de esta
planta podría ocasionar efectos colaterales, como la infertilidad en varones, contrario a las
creencias populares.
Palabras clave: Maytenus macrocarpa, plantas medicinales, amazonia, infertilidad, usos
tradicionales
Abstract
In the present research, phytochemical action of the bark of Maytenus macrocarpa “Chuchuhuasi”
was studied, having positive results in tests relating to amino acids, tannins, steroids, flavonoids,
cardenolids and alkaloids, thus its traditional uses were confirm, being a good alternative
medicine for its effects anti-inflammatory, analgesic, anti-hemorrhagic, cardiac stimulator and
antiviral activity. Although, its inadequate use can develop fertility problems in males, contrary to
popular believes.
Key words:
Maytenus macrocarpa, medicinal plants, amazon, infertility, traditional uses
1 Estudiante de 9no ciclo de la Universidad Nacional Agraria La Molina
2 Profesor de Fitoquímica de la Universidad Nacional Agraria La Molina
I. Introducción:
El Perú es un país megadiverso que alberga
alrededor de 25 mil especies diferentes de
plantas, alrededor del 10% del total mundial.
Es el primer país en número de especies de
plantas de propiedades conocidas con 4.400
y el primero en especies nativas
domesticadas con 128 ejemplares (MINAM,
2014). En el caso particular de la amazonia
peruana, existe un organismo dedicado a la
investigación de las mismas, Instituto de
Investigaciones de la Amazonia Peruana (IIAP)
que recopila la información obtenida de
diferentes estudios. Muchos de estos estudios
han comenzado por recopilaciones de
etnobotánicos, los cuales entablan
conversaciones con diferentes etnias
amazónicas para investigar las propiedades y
usos tradicionales de las plantas. Sin embargo
debido a que estos datos pueden ser
tergiversados y las metodologías imprecisas
(Kvist et al, 2001) se requiere un estudio a
nivel químico para poder comprobar las
propiedades de las plantas medicinales de la
amazonia. Diversos estudios de M. macrocarpa
se han desarrollado principalmente por las
propiedades de sus hojas (Rojas et al, 2013;
Alosilla et al, 2013) muy pocos han sido los
estudios sobre su corteza. Bajo esta iniciativa,
el presente artículo presenta los resultados
obtenidos en la marcha fitoquimica de la
corteza de M. macrocarpa, con el propósito de
comprobar los usos tradicionales que se le
atribuyen tanto en la capital como en la
amazonia.
II. Marco teórico
Chuchuhuasi (M. macrocarpa) pertenece a la
familia de las Celastráceas, tenido por
nombres comunes: chuchuasi, chuchasha,
Chocha huasha (shipibo-conibo); Chuchasha,
Chuchu huasca, Chuchuwasha.
Distribución geográfica:
Selva oriental y central del Perú: Loreto
(Tamshiyacu Panguana 1º y 2º zona e Indiana,
río Amazonas, Tahuayo, río Tahuayo,
Ushpacaño, río Itaya; Momón y Padre Cocha,
río Nanay. Llachapa, río Napo, Carretera
Iquitos-Nauta km 15.5 y 45; Corazón de Jesús,
río Mazán) Huánuco. Amazonas. Madre de
Dios, San Martín, Pasco y Ucayali (Contamana);
y también en el Ecuador.
Descripción botánica
Árbol grande con ramas verticiladas; ramitas
foliares anguladas. Hojas alternas, oblongas
lanceoladas o elípticas, enteras, acuminadas y
marginadas, coriáceas y lustrosas en el haz, de
10 a 20 cm de largo, con pecíolo de 4 mm de
largo. Inflorescencia axilar. Flores pentámeras
diminutas, numerosas en las axilas, cáliz
colorido con dientes desiduos y pétalos
obovados de color blanquecino. El fruto es
una cápsula obovoide. Semillas oblongas con
arilo blanco.
Hábitat, Ecología y Cultivo
Crece en suelos arenosos, francos y arcillosos,
conteniendo buena cantidad de materia
orgánica.
Habita en áreas no inundables (suelos de
altura), inundables anualmente o sólo en
creciente alta, alejada o cerca de los cuerpos
de agua, purmas y bosques primarios, con
intensidad lumínica de intermedia a
sombreada. Comparte su hábitat con las
siguientes especies: pona, castaña, umarí,
espintana, cetico, bijao, carahuasca, caña brava,
amasisa, lupuna, papaya, caña de azúcar, huito,
pájaro bobo, gramalote, uvilla, charichuelo,
malva, guayaba, ubos, aguaje, pijuayo,
pandisho, ojé, capinuri, ayahuasca, yarina,
huacapú, huamansama-na, zancudo caspi,
rifari, irapay, pituca.
Época de siembra: De preferencia en la época
de mayor precipitación pluvial, para asegurar
su prendimiento en campo definitivo.
Propuesta de asociación de cultivos: En suelos
de tierra firme, puede compartir el estrato
superior con especies como la castaña, el
cedro, el tornillo o el aguano; en el estrato
medio puede establecerse uña de gato y clavo
huasca. El estrato inferior y temporal puede
estar formado por los cultivos de pan llevar.
En un sistema inundable, en las restingas
medias y altas, puede combinarse con
especies que soportan el sombreamiento y la
inundación, como el ubos, el huito, el
shimbillo y el pandisho. No se han observado
enemigos naturales
Propagación: Mediante semilla botánica, así
como por estacas de raíz y tallo. Su
disponibilidad varía entre los meses de junio y
setiembre. (IIAP, 2011).
Usos
Los usos más comunes de esta planta según
la literatura, y específicamente de derivados de
la corteza son: como anti disentérico,
antidiarreico, antihemorroidal, antinflamatorio,
antirreumático, afrodisiaco, en las fisuras de
los pezones, resfríos y bronquitis (Flores, 2013).
El uso de esta planta varía de acuerdo a la
zona del país: los chamanes en Lima le
confieren propiedades mayormente ligadas a
la cura del asma y antirreumático, como a
problemas de fertilidad, hecho contrariado
con estudios de Acosta et al, 2014, en el cual
el extracto de corteza y material seco
interfiere con la espermatogénesis de forma
significativa; en la etnia Bora-Bora se utiliza
como analgésico, anti disentérico y
antihemorrágico (Salazar et al, 2013).
III. Materiales y métodos
Se tomo como base la guía de Marcha
Fitoquímica (Arévalo et al, 2013)
Se tomó una muestra de corteza de M.
macrocarpa y se empleó una garlopa para
obtener viruta. Se pesó 10g y se colocó en un
balón de 250 ml, se añadió 100ml de metanol
al 10% al balón que contiene la muestra y se
dejó macerando por 20 horas. Posteriormente
se reflujo con ayuda de un matraz de 250ml
con la muestra macerada en el interior, un
tapón de jebe y un tubo refrigerante en el
extremo superior. Se calentó en hornilla sin
llegar al punto de ebullición del metanol y
refrigerar el tubo con un paño húmedo para
condensar el solvente y se reflujo durante 2
horas.
Se filtró el extracto resultante se usando un
matraz Kitasato, un embudo buchner con
papel filtro a medida y una bomba de vacío y
se lavó las paredes del balón con metanol (10-
20ml) para recoger la muestra restante y
filtrarlo, recogiendo 100ml adicionando
metanol con ayuda de una probeta. De este
volumen, reservo 10ml en un matraz de 25ml,
tapar con papel aluminio y se refrigero. Luego,
se colocó los 90ml restantes en un matraz de
250ml para ser secados en estufa a 40°C.
De estos procedimientos se obtuvo la fracción
A (metanólica): Se separó 4ml de los 10ml
almacenados en refrigeración y se distribuyó
1ml en 5 tubos de ensayo (uno para el control)
para las siguientes pruebas:
a) Determinación de Taninos
Utilizando el Reactivo de Gelatina y el
reactivo de Cloruro Férrico para detectar
taninos en la muestra. Reactivo de Gelatina:
Añadir 5 gotas de reactivo de gelatina a la
muestra sin calentar, pues la gelatina puede
desnaturalizarse. Seguidamente añadir 5 gotas
de NaCl al 5% para hacer más visible la
reacción y se dejar reposar unos minutos.
Reacción positiva, precipitado blanquecino o
turbidez.
Reactivo de Cloruro férrico, añadiendo 2 gotas
del reactivo a un tubo muestra y
comparándolo con el control, se debe
observar una reacción rápida (2 segundos).
Reacción positiva, viraje a verde oscuro que no
cambia al añadirse más gotas de reactivo.
b)Determinación de Aminoácidos
Reacción de la nihidrina, utilizando el reactivo
de nihidrina para detectar aminoácidos en la
muestra, para lo cual se agregó 2 gotas de
reactivo de nihidrina al 1% y llevar a baño
maría por unos minutos. Reacción positiva,
viraje a azul-violeta
c)Determinación de Flavonoides
Reacción de Shinoda: Se agregó una cinta de
magnesio puro metálico al tubo con la
muestra. Seguidamente se añadió 5 gotas del
reactivo de Shinoda y 5 gotas de HCl puro.
Reacción positiva, viraje a naranja con
formación de espuma.
Obtención de la Solución Acida y la Fracción
Insoluble (B): Se secó el restante de la fracción
metanólica (90ml) en una estufa a 40°C hasta
evaporar todo el metanol y se resuspendió la
muestra con 30ml de HCl. Luego se calentó en
la plancha durante 1:30hrs a una temperatura
inferior a 50°C y se filtró la muestra con ayuda
de papel de filtro, embudo y matraz. De este
proceso resultaron la Fracción Insoluble y la
Solución Ácida.
Tratamiento de la fracción insoluble) que es el
residuo que permanece en el papel de filtro al
filtrar la solución acida. Se lavó el papel de
filtro con agua destilada y se secó el papel en
la estufa a 45°C por 2 días, se retiró de la
estufa y conservar en un desecador hasta el
momento de uso. Luego, se colocó el papel
de filtro con la fracción insoluble en un beaker
y se agregó 10ml de triclorometano para
disolver el máximo posible de solutos
adheridos. Posteriormente se movió
constantemente con una bagueta y calentar
en la plancha sin evaporar y se filtró con
ayuda de un embudo y papel de filtro y secar
con sulfato sódico. Se mezcló 5ml de volumen
final con triclorometano. Luego de estos
procesos obtenemos la fracción B, de la cual
se distribuyeron 4 tubos de ensayo para
realizar las siguientes reacciones:
a)Determinación de Esteroides:
Se agregó 5 gotas del reactivo de
Liebermann-Burchard más 5 gotas de ácido
acético por las paredes del tubo y se llevó a
baño maria para visualizar mejor la reacción.
Reacción positiva: presencia de anillo color
verde.
b)Determinación de Quinonas
Se agregó 5 gotas del reactivo de Borntrager,
preparado a partir de 5g de NaOH disueltos
en 100ml de agua destilada (5%). Reacción
positiva: se visualiza en la interfase la
formación de anillo de color rojo.
Tratamiento de la Solución Acida: Es el líquido
resultante del filtrado. Se agregó amoniaco en
cantidad suficiente para alcanzar un pH de
aproximadamente 9, el cual se evaluó con
colorante fenolftaleína. Se pasó la solución
alcalina a una pera de decantación de 250ml
sujeta a un soporte universal y se añadió 25ml
de triclorometano. Se agito y dejo reposar
hasta que se formaron las fases. La fase
superior de es el extracto alcalinizado, la
inferior es el triclorometano. Se decantó la
fase clorofórmica y reservo en un matraz. Se
realizó una segunda extracción en la pera con
otros 25ml de triclorometano, decantar y
reservar en el mismo matraz.
Se trató la fase clorofórmica (en el matraz)
llevándola nuevamente a la pera y se agregó
15ml de agua destilada. Se agito y dejo
reposar. Se formó una capa intermedia con la
grasa emulsionada que debe ser agitada con
movimientos envolventes para que las
burbujas de grasa regresen a la fase
clorofórmica. El fenómeno mediante el cual las
gotas de grasa se van juntando una a una y
aumentan de tamaño se llama coalescencia.
Se decantó la pera y reservar la fase acuosa
para añadirla al matraz de Fase Acuosa. Se
lavó con otros 15ml de agua y seguir el
procedimiento anterior. Se secó la fase
clorofórmica con sulfato de sodio anhidro y se
filtró para obtener la fracción C, se separaron
3 tubos de ensayo con 1ml de muestra. Se
concentró en los dos primeros tubos por
evaporación en el baño maría y se añadió 1ml
de cloroformo para diluir y poder visualizar
mejor los ensayos de Kedde y Liebermann-
Burchard
a)Determinación de Cardenólidos
Se agregó 5 gotas de reactivo de Kedde por
las paredes y se adiciono unas gotas de KOH
5.7%. Reacción positiva: formación de un anillo
rosado en la interfase y de la fase superior de
un tono rosado claro.
b) Determinación de Esteroides:
Se agregó 5 gotas del reactivo de
Liebermann-Burchard por las paredes más 10
gotas de ácido acético. Reacción positiva,
formación de anillo de color verde.
Secar por evaporación la fracción restante y se
añadio 2ml de HCl al 1% para realizar las
pruebas de alcaloides.
c)Determinacion de Alcaloides
Reacción de Scott: Con un capilar, se adsorbió
la solución acida en el interior y se concentró
gota a gota en un papel filtro o de capa fina.
Se colocó el papel con la solución
concentrada en un soporte de un cartón y
rociar con el reactivo de Scott. Reacción
positiva, formación halo de color turqueza-
celeste.
Tratamiento de la Fase Acuosa: Se saturo con
sulfato de sodio anhidro (0.1 g de sal por
cada ml de solución). Se filtró y se pasó el
contenido a una pera de decantación de
250ml para luego realizar dos extracciones de
25 Ml con una solución de
triclorometano/etanol (3:2). La fase acuosa
estará encima de la fase triclorometano. Se
decantó la fase clorofórmica en un matraz y se
guardó. Se llevó a cabo una segunda
extracción con 25ml del solvente anterior.
Después de las dos extracciones se procedió
a separar las fases. La fase acuosa será la
fracción E. La fase clorofórmica debe
almacenarse en un matraz de 250ml.
Obtención de la Fase acuosa remanente, que
es el resultante de la separación de la fase
acuosa del paso anterior. De esta se obtiene la
Fracción E., la cual se Separo en 3 tubos de
ensayo 1ml de solución acuosa (El tercer tubo
es el control) y se llevo a cabo los siguientes
ensayos:
a)Determinación de Flavonoides
Se utilizar el reactivo de Shinoda.
b)Determinación de Leucoantocianidinas
Mediante la reacción de Rosemheim. Se
agregó 5 gotas de HCl 2N y se colocó en
baño maría durante media hora. Reacción
positiva, coloración verde intenso.
c)Determinación de Alcaloides
Reacción de Dragendorff: Se agregó HCl 1% al
matraz que contiene los sólidos de la fracción
D. Se movió con ayuda de una bagueta y con
un capilar, se recogió esta solución en el
interior. Se concentró gota a gota de esta
solución en un papel filtro o de capa fina. Se
colocó el papel con la solución concentrada
en un soporte de un cartón. Se roció con el
reactivo de Dragendorff. Reacción positiva,
formación de un anillo marrón alrededor de la
concentración de la muestra.
-Reacción de Mayer: Se separó en un tubo un
poco de la solución concentrada y se agregó
unas gotas del reactivo de Mayer. Reacción
positiva, formación de una turbidez lechosa.
-Reacción de Wagner: Se agregó HCl 1% al
matraz que contenía los sólidos de la fracción
E. Se movió con ayuda de una bagueta y con
un capilar, para luego recoger esta solución en
el interior. Se concentró gota a gota de esta
solución en un papel filtro o de capa fina. Se
colocó el papel con la solución concentrada
en un soporte de un cartón. Se roció con el
reactivo de Wagner. Reacción positiva,
formación de un anillo azul-turquesa
alrededor de la concentración de la muestra.
Si se colora antes de 5 segundos es cocaína, si
se colora luego de 5 segundos es otro
anestésico (aplicable a muestras purificadas).
Obtención de la Fracción Clorofórmica: Se
devolver la solución clorofórmica del matraz a
la pera de decantación y se lavó con 10 ml de
solución de sulfato sódico. Se agito y se
separaron las fases. La fase acuosa se eliminó
y la orgánica se llevó a un matraz. Se secó la
solución orgánica con sulfato sódico y se filtró
y guardo en un matraz. Con ello se obtuvo la
Fracción D, de la cual se evaporo la solución
clorofórmica sequedad con ayuda de la estufa
y se resuspendió en 2.5mL de etanol.
Posteriormente se separó equitativamente en
6 tubos de ensayo y realizar los siguientes
ensayos:
a)Determinación de Flavonoides
Reacción de Shinoda
b)Determinación de Leucoantocianidinas
Mediante la reacción de Rosemheim. Se
agrego 5 gotas de HCl 2N y colocar en baño
maría durante media hora. Reacción positiva,
coloración verde intenso.
c)Determinación de Cardenólidos:
Se agregó 5 gotas de reactivo de Kedde por
las paredes y adicionar 5 gotas de KOH 5.7%.
Reacción positiva, formación de un anillo
rosado en la interfase y de la fase superior de
un tono rosado claro.
d)Determinación de Esteroides y Triterpenos
Se agregó 5 gotas del reactivo de
Liebermann-Burchard más 5 gotas de ácido
acético por las paredes del tubo. Se llevó a
baño maría para visualizar mejor la reacción.
Reacción positiva, presencia de anillo color
verde.
e) Determinación de Alcaloides:
Reacciones de Mayer, Dragendorff y Wagner.
IV. Resultados
En la siguiente tabla se muestra de manera
simplificada los resultados de las pruebas
realizadas en cada fracción. En la fracción A
(metanolica), en taninos, las reacciones con
reactivo de gelatina y gelatina con NaCl
dieron positivo, mientras que la reacción con
FeCl3 al 1% dio negativo, por lo que hay
determinados tipos de flavonoides que están
ausentes en la muestra. En el caso de la
fracción B, se detectó una fuerte presencia de
triterpenos, en contra posición con las
fracciones C y D que en ambos casos resulta
negativo. En el caso de los alcaloides, en la
fracción D dio como positivo las reacciones de
Mayer, Drangedorff y Wagner, en contraste
con el reactivo de Scott que dio negativo. En
la fracción E todas las dieron positivo.
Podemos determinar que en tanto en la
fracción C (orgánica) como en la Fracción D
(diclórica-etanólica) se encuentran cardenólido.
Por otro lado, la fracción D diclórica-etanólica)
es donde se encuentran concentrados los
flavonoides, mientras que en la fase acuosa
remanente no están presentes.
Tabla 1:
Compuesto/Frac
ciones
A B C D E
Aminoacidos ++
+
Taninos + /
++
/ -
Flavonoides + ++ -
Esteroides ++
+
- -
Quinonas +
Cardenolidos + +
Alcaloides +/+
/+
+/+
/+
Leucoantocianidi
na
- -
Esteroides
triterpenos
-
Tabla 1: Resultados de las pruebas realizadas en cada una
de las fracciones. En el caso de alcaloides, la primera cruz
corresponde a la reacción de Mayer, la segunda a la
reacción de Dragendorff y la tercera a la reacción de
Wagner.
V. Discusiones
En la fracción A encontramos la fuerte
presencia de aminoácidos, por lo que M.
macrocarpa puede sugerir una alternativa a
tratamientos que necesiten síntesis de
proteínas y ácidos nucleicos. En el caso de las
pruebas realizadas para taninos, estudios
previos han demostrado que el género
Maytenus presenta proantocianidinas, la cual
tiene propiedades antihemorragicas, por lo
que se sugiere tendría una actividad efectiva
en contra de la disentería e incluso,
anticancerígenas. En estudios previos (Flores,
2013) se citó la presencia de cumarinas. No se
especifico en este estudio el tipo de cumarinas,
sin embargo, queda descartado la dicumarol,
debido a que es anticoagulante (). Se
determinó, además, una presencia débil de
flavonoides, por lo cual se le podría atribuir
(en determinadas dosis) actividades anti
fúngicas y antivirulentas, por lo que podría ser
útil en el tratamiento de ciertas enfermedades
respiratorias. Por otro lado, también ejerce una
propiedad antiinflamatoria, interactuando con
las protaglandinas y evitando su acción. Una
propiedad que podría favorecer a Maytenus
macrocarpa es que generalmente para ciertos
tipos de inflamaciones, como en el caso de la
parodentosis, los medicamentos más usados,
como los corticoides, producen
desangramiento, en contraste de que M
macrocarpa contiene antihemorrágicos, por lo
que podría ser una excelente alternativa para
el tratamiento de esta enfermedad.
En la fracción B se encontró una presencia
intensa de esteroides. En la reacción
Liebermann-Burchard es el colesterol el que
reacciona y da ese color verde intenso. Este
resultado nos podría sugerir una posible
efectiva terapia hormonal, por lo mismo que
este compuesto es utilizado como tratamiento
de la fertilidad. Sin embargo, en el caso de M
macrocarpa destaca principalmente los
triterpenos con actividad antiinflamatoria, la
cual inhibe a que intervienen en la actividad
de la ciclooxigenasa 2 (COX-2) molécula
relacionada a la síntesis de prostaglandina,
moléculas importantes en la movilidad de los
espermatozoides, pudiendo generar
infertilidad en varones. En el caso de la prueba
de quinonas, resulto positivo. Estas, son
efectivos antibióticos y purgantes.
En la fracción C se comprobó la presencia de
cardenolidos, los cuales son compuestos
principales para el tratamiento de
insuficiencias cardiacas, alterando la actividad
de la ATPasa Na-K dependiente y generando
una mayor contractibilidad cardiaca
(Universidad Complutense de Madrid;
Izquierdo et al, 2010) Además, se realizaron
pruebas de alcaloides y como resultado las
tres pruebas resultaron positivas, todas ellas
en bajas concentraciones, por lo que
podríamos sugerir una actividad analgésica,
incluida para el tratamientos antireumaticos y
antiinflamatorios. En contraparte, estos
alcaloides inhibirían la actividad de la proteína
kinasa C, causando falta de movilidad en
espermatozoides.
En la fracción D se obtuvieron positivas las
reacciones de flavonoides como las de
alcaloides. Esto nos indica la diversidad de
tipos de estos compuestos.
En la fracción E todas las reacciones resultaron
negativas Esto se puede deber a la poca
concentración de metabolitos en esta fracción.
VI. Conclusiones:
M. macrocarpa es una excelente opción para
el tratamiento de parodentosis, debido a que,
además de tener un significativo efecto
antiinflamatorio (tanto de triterpenos, taninos
como de alcaloide). Puede ser utilizado como
antihemorrágico, estimulador cardiaco,
analgésico y antiviral. Sin embargo, faltan
realizarse estudios mas exhaustivos para poder
prescribir una correcta dosis, sobre todo en el
caso de los varones, para evitar la infertilidad
que estos mismos compuestos podrían
ocasionar.
VII. Bibliografia.
- MINAM. Proyecto de reglamento único de
acceso a los recursos genéticos. 2014.
Disponible en linea
<http://www.minam.gob.pe/consultaspublicas/
wp-
content/uploads/sites/52/2014/02/reglamento_
acceso_recursos_geneticos.pdf>
- Vidaurre Martinez, Milagros F.; Queravalu
Garcia, Laura M.; de los Rios Martinez, Elena;
Ruiz Reyes, Segundo G. Características
farmacognósticas de las hojas de Capparis
avicennifolia. Revista Medica Vallejiana. Vol. 4
Nº 2 En linea
[http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/rmv/v0
4n2/pdf/a04v4n2.pdf]
-Universidad Complutense de Madrid.
Heterosidos Cardiotonicos. En línea
[http://ucmfarmaciadatos.netai.net/Tercero/far
macognosia/temas%20clase%20B1/Tema%201
2%20fin.pdf]
- Izquierdo, Yovanny; Naivy Pérez-Alonso;
Jiménez, Elio. Metabolismo de cardenólidos y
transformación genética de Digitalis.
Potencialidades y retos. Biotecnología Vegetal
Vol. 10, No. 3: 131 - 141, julio - septiembre,
2010.
- Instituto de Investigacion de Plantas
Amazonicas. Plantas Medicinales de la
Amazonia Peruana. 2011. En línea
http://www.iiap.org.pe/cdpublicaciones2011/do
cumentos/pdf/libros/34.pdf ]
-Normas de Vancouver. En línea
[http://www.upch.edu.pe/vrinve/doc/nvanco.ht
m]
- Acosta, Layonal; Vásquez, Jonathan; Núñez,
Victor; Pino, Jose; Shiga, Betty. Efecto de
Maytenus macrocarpa “Chuchuhuasi” en el
sistema reproductor masculino del ratón (Mus
musculus). Rev. peru. biol. 20(3): 223 - 226
(Marzo 2014)
-Salazar, Alberto; Loja, Berta; Rabanal,
Alberto; Meztanza, Silvio.; Herigman, Kevin;
Pinedo, Donalvo; Alvardo, Angel; Castaneda,
Benjamin. Comparacion de los usos de
Chuchuhuasi (Maytenus macrocarpa) entre
indígenas Bora- Bora de Loreto y chamanas
de Lima (Peru) . Revista Fitoterapia 13 (1). 61-
69. 2013.
-Arevalo, Fermin . Casaño Vera, Luz,Danós
Díaz, Pierina; Gómez Zamudio, Diana; Márquez
Montesinos, José ; Nieto Palacios, Diego;
Reátegui Ochoa, Kevin; Tafur Tembladera,
Abigail; Torres Muñoz, Cecilia. Guia de
Practicas de Fitoquimica. 2013.
-Flores, Mercedes. Plantas Medicinales
Amazonicas. 2013. Formato ppt.