leica microsystems · 2016-02-13 · 미세절편제작법 및 파라핀 절편 준비 living up to...

미세절편제작법

및 파

라핀

절편

준비

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미세절편제작법 및 파라핀 절편 준비

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소개

조직병리검사를 위한 고품질 절편 준비는 기술과 경험을 요구한다. 그러나 일단 시작해보자. 이 소책자는 미세절편제작법 및 파라핀 절편 준비에 있어서 초보자를 위한 교육 보조자료 및 보다 경험이 있는 조직병리사를 위한 재교육 자료로 준비되었다. 여기에서는 파라핀 절편 준비를 위한 회전식 Microtome의 설정 및 작동을 위한 필수적인 부분을 다룬다. 절편에서 보여진 보다 일반적인 실수들 중 몇 가지가 예로 보여졌으며 문제해결을 위한 제시가 제공된다.

이 소책자의 사진들은 Leica RM2235 수동 Microtome이지만, 제공된 제안 및 코멘트는 대부분의 최신 Rotary Microtome에도 적용될 수 있다. 다른 Microtome 모델의 기계적 및 안전 기능에 관한 설명 및 사용지침은 특정 기기의 지침 매뉴얼에서 찾을 수 있다.

저자

Geoffrey Rolls기고자

Claudia DorenkampNeville FarmerJan MinshewKerrie Scott-DowellFiona Tarbet

Scientia 지식. 과학. 기술.Leica Microsystems의 Scientia 교육 시리즈는 교육, 훈련 및 과학적 설명을 통한 조직검사 이론 및 실기를 향상하기 위한 저희 임무 중 하나이다.

/ 1

목차1. 표본 고정하기 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3

2. 조직처리하기 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4

3. 표본 포매하기 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5

4. Microtome 설치하기 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6

5. Microtome 안전기능 확인하기 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7

6. 칼날 최적각도 설정하기 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9

7. Blade 수명 최대화하기 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10

8. 표본의 방향 조정하기 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11

9. Microtome의 기능과 사용방법 숙지하기 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13

10. “Trimming(삭정)”, “Facing(미세 삭정)”, 또는 “Roughing(거친 삭정)”할 때 주의하기 . . . . . . . . . . . . . . . . . 14

11. 절편 두께에 영향을 미치는 요소. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16

12. Block 냉각하기. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17

13. 일정한 Cutting, 고품질, 얇은 절편을 위한 기법 . . . . . . . . . . . . . . . 18

14. 올바른 Slide 및 점착제 선택하기. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19

15. 절편을 물에 띄우고 건지기 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20

16. Slide 말리기. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22

17. Microtome을 청결하게 관리하기 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23

18. 일반적인 실수를 수정하는 방법 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24

2 / 미세절편제작법 및 파라핀 절편 준비

/ 3

표본 고정하기

고정은 조직 표본제작 기법에서 가장 중요한 단계이다. 조직처리 및 절편을 아무리 잘 하더라도 올바르게 고정이 되지 않았다면 형태학적인 중요 정보를 얻지 못한다.

• 불충분하게 고정된 표본은 절편하기가 대단히 어렵다.

• 불충분하게 고정된 조직을 조심해서 취급하여 주의깊게 절편하여도 불량한

형태를 나타낸다.

1.


조직처리하기

잘 고정된 표본을 적합한 처리시간으로 올바르게 처리하지 않으면, 파라핀 블록은 절편하기 어렵게 된다.

• 표본은 미비한 처리(표본이 너무 큼, 처리시간이 너무 짧음) 또는 과도한 처리

(표본의 크기 및 성질에 비해 처리시간이 너무 김)가 될 수도 있다. 이 둘 다의

경우에 절편하기가 어렵거나 불가능할 수도 있다.

• 어려운 블록에서 절편을 얻을 때 사용될 수 있는 많은 기법이 있다.

• 만약 조직이 단단하거나 깨지기 쉬어서 블록을 절편하기가 어렵다면, 노출

표면을 차가운 물, 또는 약한 세정제 용액, 섬유 유연제 또는 MollifexTM같은

완화제에 담글 수 있다.

• 칼슘을 함유한 표본에 있어서, 노출 표면에 10분 또는 그 이상 동안 표면

칼슘제거제를 사용하면, 여러 개의 절편을 얻을 수도 있다. 칼슘제거제 흔적은

Blade holder의 압력판을 손상시키므로, Recutting하려면 블록을 장착 전에 잘

헹구어야 한다.(주의: 칼슘제거제는 기기표면을 손상시킬 수 있다)

• Leica Paraffin Tape-Transfer SystemTM은 고정, 처리가 잘 안되어 정상적인 절편

방법으로는 절편이 어려운 블록을 절편하기 위해 권장한다.

• 애초에 표본을 미비하게 처리하여 블록에서 절편을 얻기가 불가능할

경우에는, 재처리를 할 수도 있다.

이 췌장 블록은 고정이 불충분했고 너무 짧은 프로토콜에 의해 처리되었다. 이것은 미숙한 조직처리에 의해서 왁스 주변의 표본이 상당히 수축된 전형적인 결과를 보여준다. 그 조직은 연하고 물러서 절편하기가 불가능했다. 재처리가 필요했다.

2.

/ 5

표본 포매하기

포매는 조심해야 하는 중요한 단계이다. 부주의한 포매는 미세절편제작을 훨씬 어렵게 만든다.

• 카세트에 파라핀을 충분히 충전하지 않으면 블록 Clamping이 불안정하여

Cutting시 “두꺼웠다 얇았다”하는 문제들이 초래된다.

• 카세트에 파라핀을 과충전하면 블록 페이스 정렬을 올바르게 할 수 없으므로

피해야 한다.

• 카세트 외부에 묻은 과도한 왁스는 블록을 확실하게 부착하기 위해 Clamping

전에 제거되어야 한다.

• 표본 방향은 매우 중요하다(페이지 11의 8 참조).

불충분한 충전(왼쪽), 과충전(오른쪽) 그리고 올바로 충전(가운데)된 카세트의 예. 불충분한 충전과 과충전 카세트는 미세절편제작 동안에 문제를 일으킬 수 있다.

3.


Microtome 설치하기

실험실에서 Microtome 위치는 중요하다.

• Microtome은 바람이 부는 곳, 출입구 통로, 사람들이 지나다니는 곳에서

떨어진 안정된 곳에 설치한다. 또한 에어컨이나 기타기기에서 부는 바람은

절편을 다루기 어렵게 만든다.

• 높이조절 벤치와 인체공학적 의자가 좋다.

• 극도로 날카로운 Blade로 인한 부상을 예방하기 위해서 스탭들은 항상

조심하는 것이 매우 중요하다. Microtome을 실험실에 설치할 때에는 다른

스탭들과의 상호 활동 범위도 고려해야 한다.

• 불가피하게, 왁스 파편이 바닥에 떨어져 미끄러운 표면을 만들 수 있으므로

Microtome 가까이에는 미끄럽지 않은 바닥이 선호된다. 많은 실험실은 미끄럼

방지 매트를 이용하여 보다 안전한 환경을 만든다.

4.

/ 7

Microtome 안전기능 확인하기

사용하고 있는 Microtome의 안전 기능을 숙지하고 절편시 몇 가지 기본 규칙을 준수한다.

• Microtome 칼과 Blade는 극도로 날카로워 작업시 주의하지 않으면 심각한

부상을 입을 수 있다. 사고는 작업자의 주의가 산만하여 완전히 집중하지 않을

때 발생한다.

• 절편이나 Wax 조각을 Blade또는 Block Face에서 픽업하기 위해 손가락 대신

집게 또는 브러시를 이용한다.

• Leica 회전식 Microtome은 안전한 작업을 위해 Safety Guard(칼 가드 또는

손가락 가드), Handwheel Lock 및 Handwheel Brake가 갖춰졌다.

• 이 안전 가드는 Cutting 날의 전체 길이를 커버하기 위해 덮어 씌울 수 있다.

• Handwheel Lock 은 Cutting Stroke의 맨 위에서 Locking되며, 블록을 바꿀 때

필히 사용하여야 한다.

• Cassette Clamp에 블록을 장착/제거할 때, 또는 칼날이 장착되어 있는 상태에서

블록을 조작할 때에는 Safety Guard가 반드시 덮여 있어야 하고 Handwheel

Lock은 잠겨있어야 한다. 또한 Microtome을 사용하지 않을 때 Safety Guard는

반드시 덮여있어야 한다.

• Handwheel Brake는 핸들이 어떠한 위치에 있든 Microtome을 잠글 수 있으며

블록 페이스를 재정렬할 때 또는 빠른 접근을 할 때 사용한다.

이 사진에서 Leica RM2235 Microtome의 빨강색 Safety Guard는 위로 덮여 제자리에 놓여졌다. 이것은 Blade의 날을 완벽하게 커버한다.

여기서 Handwheel Lock은 12시 방향에 있고 Lock은 채워져 있다. 이 Lock은 Cutting Stroke 맨 위에서만 잠겨진다.

5.


Leica RM2235의 Handwheel Brake가 잠김 위치에 놓여있다. Brake는 Handwheel이 어느 위치에 있든 작동된다. Handwheel Lock이나 Handwheel Brake는 Microtome을 움직이지 않게 하기 위해 사용된다.

• 기기를 사용하지 않거나 기기를 청소할 때는 Knife또는 Blade는 제거되어야

한다. 이는 Blade Clamp를 푼 후에, 가드의 왼쪽에 있는 Blade Ejector를

사용하여 Clamp에서 Blade를 옆으로 움직이기 시작한다. 그런 후 핀셋

(손가락이 아니라)으로 잡거나 Leica 브러시 끝에 있는 자석으로 픽업하여

안전하게 제거한다. 사용한 Blade는 “칼날보관” 용기 또는 Blade Dispenser

바닥에 있는 “사용한 Blade” 구멍에 적합하게 버린다.

• 벤치 위에나 상자 안에서 칼이나 Blade의 Cutting 날을 위로 향하게 하여 놓지

않는다. 우연히 Blade를 놓치면, 그냥 떨어지게 한다. 어떠한 이유로도 잡으려고

하지 않는다(절대로 하지 말아야 할 자연 반사 행동).

/ 9

칼날 최적각도 설정하기

Blade 각도는 조절가능하며 가장 잘 절편 되도록 설정되어야 한다.

• 조절가능각도는 칼날 끝의 측면과 블록 면 간의 접촉을 방지한다.

• 측면 각도는 커팅 날을 만드는 두 개의 측면 사이의 각도이다. 일반적인 칼과

일회용 Blade 는 약 35°의 측면 각도로 만들어졌지만, 이 각도는 Blade 유형과

제조회사 마다 다양할 수 있다.

• 그러므로 각각의 Blade 유형에 따라 조절가능각은 최적으로 정해져야 한다.

• 권장된 각도를 설정하기 위해 Microtome 제조회사의 가이드라인을 따른다.

Leica 칼과 Blade Holder는 1° - 5° 사이에서 설정할 것을 권장한다.여 유 각

측 면 각

6.


Blade 수명 최대화하기

Blade의 수명을 최대화하기 위한 몇 가지의 간단한 전략이 있다.

• Blade를 청소할 때 Cutting날을 따라 문지르지 마시오. 심지어 셀룰로스 섬유도

Blade에 손상을 일으킬 수 있다.

• Forceps 또는 Brush 같은 어떠한 단단한 물체로 날을 터치하는 것을 피한다.

• 한쪽 끝에서부터 다른 쪽 끝으로 Blade를 차례차례 사용한다. 이렇게 하면

Blade의 모든 부분의 수명이 최대화 된다.

• Trimming시 Blade의 한쪽 부분을 사용하고 최종 절편시에는 다른 부분을

사용한다. 또는 이 두 과정을 위해서 각각의 Blade를 사용할 수도 있다.

• Retracting Microtome은 표본이 Upstroke할 때에 Blade와 표본 사이에 간격이

생기면서 작동되므로 Blade 뒷면에 부스러기들이 쌓이는 것을 방지하게 되어

Blade수명을 연장한다.

7.

/ 11

표본의 방향 조정하기

Cutting Stroke 하면서 Block면과 Blade와의 상하 좌우 방향을 맞추는 것은 좋은 리본을 만드는 방법이며 절편 품질에 직접적인 영향을 미친다.

• 대부분의 실험실에서 모든 Cassette는 Cassette Clamp에 동일한 방향으로

장착된다(예. 동서 방향은 왼쪽 라벨 또는 남북 방향은 상단 라벨). 이것은

고품질 절편을 준비하기 전에 여러 블록을 쉽게 다듬기 하고 과도한 조직 손실

없이 깊은 Cutting이나 Recutting을 하기 위한 것이다. 그러므로 표본 방향을

Blade에 맞추는 것은 포매 단계에서 고려되어야 한다. 이 요구조건은 종종

간과된다.

• 페이지 12의 사진은 전형적인 표본의 선호방향을 보여준다. 특정 표본 유형에

대한 최선의 방향에 대해 의견이 다를 것이지만, 방향은 중요하고 반드시

고려되어야 한다.

• 예 A. 창자: Blade가 점막 쪽을 마지막에 Cutting하도록 방향을 조정한다.

• 예 B. 자궁 경관: 직선 가장자리 보다는 밀도가 높은 조직의 뾰쪽한 끝을 Blade

로 향하게 하는 것이 더 좋다.

• 예 C. 피부: Blade가 표피를 마지막에 Cutting하도록 방향을 조정한다.

• Leica RM2235와 같은 Microtome은 Specimen 방향정밀조정 장치를 갖고 있다

(Option). 이러한 성능은 조직의 불필요한 손실을 방지하고 다른 실험실이나

다른 Microtome에서 절편되었던 블록을 Recutting할 때 매우 유용하다.

통상적으로 많은 블록을 Cutting할 때, 절편을 시작하기 전에 Specimen Holder

방향을 Zero 위치 또는 측정된 X/Y축에 놓는 것이 중요하다. 이것은 빨간 표식,

Click Stop 및 Indicator Markings를 이용하여 쉽게 할 수 있다.

8.


Blade

A. 창자 B. 자궁 경관 C. 피부

/ 13

Microtome의 기능과 사용방법 숙지하기

Retracting Microtome은 표본이 Upstroke될 때에 Blade에서 멀리 떨어지게 설계되었다. Microtome에 이 성능을 갖고 있는지 여부를 아는 것은 중요하다.

• Retraction은 절편하는 동안에 확실한 장점을 제공하고 Blade 수명을

연장하도록 특별히 설계 되었다.

• Retraction 기능이 있는 Microtome을 사용할 때, 블록 면을 칼 날에 정렬하는

것은 Down-Stroke에서 수행되어야 한다 (Retraction 위치가 아닌 전진된 위치).

• Specimen Arm이 Retraction 구간(upstroke)에 있을 때 블록을 칼 날에 아주

가깝게 접근시키면, Down-Stroke시에 블록은 선택된 절편두께에 Retraction

값이 포함된 두께만큼 전진한 후 절편된다 (예 : RM2235일 경우에 Retraction 값

60um+절편두께 5um 설정 = 65um). 이것은 두껍게 잘리는 결과가 되어서 표본과

Blade 둘 다를 손상시킬 수 있다.

• Microtome은 수동, 반자동 또는 완전자동이 있다.

• 자동화 기기는 근-골장애를 일으킬 수 있는 반복동작을 줄여준다.

9.


“Trimming(삭정)”, “Facing(미세 삭정)”, 또는 “Roughing(거친 삭정)”할 때 주의하기

미세절편제작에서 이 단계는 진단상 중요성을 갖는 조직이 쉽게 손실되거나 블록 표면이 손상되므로 대단한 주의를 요구한다.

• Trimming을 시작하기 전에 모든 Clamping Mechanism이 완전하게 조여졌는지

항상 확인한다.

• 블록을 적합하게 Trimming하는 것의 목적은 조직의 중요한 절편을 얻을 수

있는 수준까지 신중하게 잘라내기 위한 것이다.

• Trimming은 대개 10또는 30 µm의 두께에서 이뤄진다.

• 망가지기 쉬운 조직을 빠르고 거칠게 Trimming하는 것은 표본 표면에 손상을

일으킬 위험이 있다. 30 µm에서 기계적 Trimming할 때는 특별한 주의가

필요하다.

• 마지막 단계로서, 몇 개의 얇은 절편을 서서히 Cutting하여 Block Face를

형성시킨다. 이렇게 하면 페이지 24 - 18B에서 보여지는 문제는 피할 것이다.

10.

/ 15

AB

C

Blade Holder Base고정장치 A, 측면 이동 클램프 B, 그리고 x-y 방향 클램프 C는 블록을 트리밍하기 전에 확실히 잠겨야 한다. 이렇지 않으면 블록과 blade 둘 다 손상될 수 있다.

Roughing시, 특히 30 µm의 기계적인 Trimming 장치(..) 설정은 주의하여 사용해야 한다.

Coarse Feed Wheel은 표본 표면을 의도하지 않은 두꺼운 두께로 Cutting또는 손상을 일으킬 수 있으므로 이를 피하기 위해 Roughing 할 때 주의하여 사용할 필요가 있다.


절편 두께에 영향을 미치는 요소

Microtome을 원하는 두께로 설정을 하지만 실제 절편 두께를 결정하는 여러 가지 요소가 있다는 것에 유의해야 한다.

• 4 µm의 점착력 있는 절편은 심하게 분열된 2 µm 절편보다 더 많은 정보를

제공할 수도 있다.

• 차가운 블록을 Cutting(아래에 있는 1, 2 & 3 절편들)할 때 열팽창3, 4에 의해서

실제 두께는 설정된 두께보다 더 두꺼울 수도 있다.

• 절편 속도, 칼날조절각도 설정 및 칼날 상태와 같은 다른 요소들이 절편의 실제

두께에 영향을 미칠 수 있다.

11.

/ 17

Block 냉각하기

일반적으로 절편은 표본과 Wax의 경도가 잘 어울리면 향상된다. 이것은 절편이 Cutting될 때 대부분의 파라핀 Block이 차가워야 하는 이유이다. 블록을 차갑게 하는 방법이 중요하다.

• 차가운 Wax는 표본 안에 있는 단단한 성분을 지탱하여 보다 얇은 절편을 얻게

한다.

• 블록을 차가운 플레이트 또는 차가운 젖은 표면에 수 분 동안 놓는다(녹은 얼음

표면과 같은).

• 물을 블록 면 안으로 약간 침투시켜, 조직을 불어나게 하면 Cutting하기가 더욱

쉽게 된다. 이것은 과탈수 되고, 건조하고 또는 부서지기 쉬운 조직에 특히

중요하다.

• 블록을 냉장고에 두면 표면 Crack을 일으킬 수 있는데, 이로 인해 조직은

둘러싼 왁스에서 분리된다. 이것은 점착력 있는 절편을 얻는 데에 더 어려울 수

있다.

왼쪽 절편들은 비교적 따뜻한 블록에서 Cutting 한 것. 오른쪽 절편들은 같은 블록을 녹는 얼음 위에서 차갑게 한 후 Cutting 한 것.

12.


일정한 Cutting, 고품질, 얇은 절편을 위한 기법

경험이 매우 중요하지만 작업을 더 쉽게 해주는 몇 가지 원칙이 있다.

• Trimming에 사용하지 않았던 부분의 칼날을 이용하라.

• 의도하지 않은 두꺼운 절편은 Blade와 Block Face를 손상시킬 수 있으므로

Coarse Feeding시 이를 조심해야 한다.

• 블록 면이 따뜻해지거나 또는 더 깊이 Cutting할 필요가 있으면 블록을 다시

차갑게 하는 것이 요구될 수도 있다.

• 일반적으로, 느리고 일정한 Cutting Stroke는 최고의 결과를 가져오고 압축은

최소화한다.

• Cutting Stroke 도중에 멈추거나 재시작하면 절편에 가로로 다른 두께의

줄무늬가 생기게 되므로 도중에 멈추지 마시오.

• 각 절편을 자르기 직전에 차갑게 한 Block Face에 부드럽게 입김을 부는 것은

일부 실험실에서 일반적으로 하는 것이다. 따뜻하고, 습기가 있는 입김을 부는

것은 절편을 보다 점착력 있게 만들지만, 이것은 또한 열 팽창의 요인으로

절편을 더 두껍게 만들기도 한다3.

• 블록의 위, 아래 가장자리 또는 Blade의 뒷면에 붙은 부스러기들은, 점착력있는

리본을 얻기 힘들게 하고 Upstroke를 따라 리본이 blade 위로 따라 올라가게 될

수 있다. 부스러기가 있으면 청소하고, 블록을 차갑게 하여 다시 시작한다.

이 리본은 잘 처리되고, 충분히 차갑게 된 블록으로 느리고, 한결같은 Stroke로 Cutting되었다. 절편은 부유 전에도 압축이 매우 적은 것을 보여준다.

13.

/ 19

올바른 슬라이드 및 점착제 선택하기

차후에 적용할 Staining 방법에 따라서 그것에 알맞은 Slide 및 점착제를 선택한다.

• Slide는 항상 기름기와 먼지가 없이 올바르게 보관되고 취급되어야 한다.

• 만약 Staining이 항원 복원(IHC), 효소 선처리(ISH), 또는 연장된 배양 단계를

포함해야 하면, 아미노알킬시레인(AAS)과 같은 점착제 또는 Charged slide가

사용되어야 한다. 일부 특수 Stain, 특히 알카라인 시약을 사용하는 것은 또한

절편을 들뜨게 할 수 있다.

• Slide는 규정에 의해서 정확하고 적합하게 라벨이 붙여져야 한다.

14.


절편을 물에 띄우고 건지기

Flotation(물에 띄우기)는 절편을 원래의 크기로 팽창시켜야 하고 완전히 편평하게 해야 한다.

• 온도를 주의 깊게 관찰해야 한다. 온도는 Wax의 용해점에서 5 - 9 ˚C이하여야 할

것이다.

• 물이 깨끗하고 거품과 절편 부스러기가 없음을 확실히 한다(교차오염을

피하기 위함).

• 절편은 반질반질한(빛나는) 쪽을 아래쪽으로 향해서 띄운다.

• 부드럽게 빗자루질 하는 동작으로 절편을 물 표면에 띄운다.

• 절편은 Brush나 Forcep으로 주름 또는 거품을 제거할 때 쉽게 손상을 입는다.

• 결함을 쉽게 볼 수 있게 물 위에 뜬 절편을 검사한다.

• 충분히 편평해질 만큼 오랫동안 절편을 물 위에 놔둔다. 과팽창은 민감한

절편을 형태학적으로 망가뜨린다.

• 물이 효과적으로 빠지고 절편이 Slide에서 미끄러져 내리지 않게 하기 위해,

Slide를 물에서 수직으로 꺼낸다.

15.

/ 21

두 개의 다른 블록에서의 절편들을 동시에 Float Out 하지 않아야 한다. 비록 표본이 다른 유형일지라도, 교차오염 및 혼란이 있을 수 있다. 그러므로 이것은 항상 피해야 한다.

• Slide를 Slide Warmer 또는 Oven에 놓기 전에 과도한 물기를 제거하기 위해 잠시

수직으로 세워 물을 뺀다.

• 교차오염 가능성을 피하기 위해 각 블록의 절편을 건져낸 후 다음 블록 작업

사이에 물 표면을 보풀이 없는 티슈로 걷어낸다.

• 뒤섞일 가능성을 피하기 위해서 한 번에 한 블록씩 절편을 띄우고 건져낸다.


Slide 말리기

적합한 건조는 절편이 완전히 탈수되고, 열 손상이 없이 편평하며 Staining 동안에 들뜨지 않게 하는 것이다.

• 건조 전에 절편 밑에 과도한 물을 빼낸다. 이것은 Slide를 Hotplate에서 편평하게

말리려면 절대적으로 필요하다.

• Slide는 Rack에 수직으로 세워 보관하여 오븐에서 건조할 수 있다.

• 일반적으로 건조 온도는 65 ˚C를 넘지 않아야 한다.

• 과도한 열은 절편 아래 작은 물방울을 끓게 하고 이것은 손상을 일으킨다.

• 절편을 10 - 30분 동안 건조시킨다.

• 일부 연약한 표본은 더 오랜 시간 동안 (수 시간에서 밤새까지) 37 ˚C에서

건조될 때 최고의 결과를 가져온다.

16.

/ 23

Microtome을 청결하게 관리하기

사용 후 축적된 조직 부스러기 및 왁스를 제거하는 것이 중요하다. 정기적으로는 미리 유지관리하는 것이 중요하다.

• 기기를 매일 청소한다.

• 청소 전에는 항상 칼 또는 Blade를 제거한다.

• 청소시 접근을 용이하게 하기 위해 Knife Holder는 쉽게 제거될 수 있다.

• 절편 부스러기는 마른 그림붓으로 잘 제거 된다.

• Alcohol이나 Xylene에 내성이 없으므로 외부 표면을 이러한 용제로 닦으면

안되고 Xylene에 노출을 피해야 한다. Paraffin제거제, 연한 가정용 세정제 또는

비눗물 등을 추천한다.

• 청소하는 동안에 액체가 기기내부에 들어가지 말아야 한다.

• 전문 서비스 기술자에 의해 최소한 일년에 한 번 검사를 받는다.

• 추천된 윤활제를 사용하여 지침 매뉴얼대로 윤활 지침을 따른다.

17.


일반적인 실수를 수정하는 방법

파라핀 절편에서 가장 흔히 발생되는 실수 몇 가지와 그 원인:

A. 절편이 너무 두껍다

• 잘못된 두께설정

• 절편을 쉽게 하기 위한 차가운 Block에 따뜻한 호흡 불기

• 리본에서 선택한 첫번째 절편

• 너무 빠른 절편속도

• 빈약한 조직처리

• Microtome 재조정 필요

B. 거친 Trimming으로 인한 구멍

• Block을 너무 빠르게 Trim

• Roughing후 Thin Section을 하지 않은 Block 표면

• Trimming시 부적합한 두께

• 부스러지기 쉬운 (과처리된) Block 또는 Trim시 너무 차가워진 Block

18.

/ 25

C. 칼 자국 (절편에 난 수직 줄무늬)

• Knife 또는 Blade의 손상


• Block에 칼슘 같은 단단한 물질내포

• 여과되지 않은 Wax내에 찌꺼기

• 표본에 침전된 완충제 소금

D. 분열

• Grossing 할 때 표본을 거칠게 취급

• 빈약한 조직처리(불완전한 탈수, 투명, 침투)

• Flotation 동안에 주름을 제거하기 위해 과도한 처리

• Flotation Out을 너무 오래하거나 너무 뜨거운 물 사용


E. 미세한 금과 극소의 떨림 자국

• 과처리된 조직

• 너무 차가운 Block

• 너무 빠르게 Cutting

• Clamping Machanism이 완전하게 채워지지 않음

• 칼각도 조절이 필요

F. 거친 떨림 자국

• Clamping Machanism이 완전하게 채워지지 않음

• 매우 단단하거나 큰 표본


• 부적당한 칼날각도

• 너무 빠른 절편

• 낡은 Microtome

/ 27

G. 접어짐

• 빈약한 Flotation 기법

• 빈약한 고정 및/또는 조직처리(불충분한 지탱)

• 따뜻한 block

• 너무 얇은 절편

• 칼날각도가 너무 크다

• Water Bath가 너무 뜨겁다

H. 과도한 압축

• 빈약한 조직처리(불충분한 지탱)

• 따뜻한 Block

• 너무 빠르게 Cutting

• 무딘 칼 날

• 너무 큰 칼각도

• 저질 Wax


I. 절편 밑에 거품

• Water Bath의 바닥과 옆에 붙은 거품

• 절편 밑에 거품이 붙는 미숙한 Flotation 기법

J. Flotation 동안의 과도한 팽창

• 너무 높은 Water Bath 온도

• 절편을 물 위에 너무 오래 둠

• 미비한 고정 및/또는 조직처리 (잔존 용해제)

/ 29

K. 절편이 편평하지 않음(빈약한 점착)

• 저품질 절편(주름, 거품)

• Water Bath가 너무 차가움

• 비코팅 Slide 사용

• Flotation 후 물이 완전히 빠지지 않은 절편

• 불충분한 건조 시간

• 건조 온도 너무 낮음

L. 먼지 존재

• 더러운 Slide

• Water Bath의 찌꺼기를 걷어내지 않았거나 오염됨

• Slide를 먼지가 많은 환경에서 물을 빼고 건조하거나 보관

• Labelling시 연필 흑연 조각


참고문헌

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2. Rolls GO, Farmer NJ, Hall JB. Artifacts in Histological and Cytological Preparations. Melbourne: Leica Microsystems, 2008;106.

3. Rolls G. 101 Steps to Better Histology. Melbourne: Leica Microsystems, 2008.

4. Culling CFA, Allison RT, Barr WT. Cellular Pathology Technique. 4th ed. London: Butterworths, 1985.

5. Santoianni RA, Hammami A. Nuclear Bubbling an Overlooked Artifact. The Journal of Histotechnology, 1990;13;135-136.

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