PRAKTIKUM VI DAN VIIANALISIS TOKSIKOLOGIUJI KONFIRMASI METODE PEMISAHAN OBAT-OBAT GOLONGAN AMFETAMIN DAN OPIAT DALAM URIN DAN UJI KONFIRMATIF NARKOTIKA/PSIKOTROPIKA PADA URINE PENCANDU NARKOBA DENGAN METODE KLT-SPEKTROFOTODENSITOMETER

OLEH :

KELOMPOK VIII

Anggota :Luh Made Ari Mas Purnamasari (P07134011005)Putu Murnitha Sari Rahayu

(P07134011013)Ni Wayan Nenik Prayanti

(P07134011021)I Gede Widyantara

(P07134011031)Coratry Shovariah Premilga

(P07134011039)

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA

POLITEKNIK KESEHATAN DENPASAR

JURUSAN ANALIS KESEHATAN

2013BAB I

PENDAHULUAN

I.1 TujuanA.Uji Konfirmasi Metode Pemisahan Obat-Obat Golongan Amfetamin dan Opiat dalam Urin

I.1.1 Tujuan Umum

Mahasiswa mampu melakukan pemisahan obat-obat golongan amfetamin dan opiat dari sampel urin.I.1.2 Tujuan Khusus

1. Mampu melakukan penyiapan sampel untuk ekstraksi cair-cair dan ekstraksi fase padat.

2. Mampu memisahkan obat-obat golongan amfetamin dan opiat dari sampel urin dengan ekstraksi cair-cair dan ekstraksi fase padat.B.Uji Konfirmatif Narkotika/Psikotropika Pada Urine Pencandu Narkoba Dengan Metode Klt-Spektrofotodensitometer

I.1.1 Tujuan Umum

Mahasiswa mampu melakukan uji konfirmasi senyawa golongan narkotika atau psikotropika ada urin pecandu narkoba dengan metode KLT-Spektrofotodensitometri.I.1.2 Tujuan Khusus1. Mampu melakukan penyiapan plat KLT- Spektrofotodensitometri.

2. Mampu menggunakan alat Spektrofotodensitometri.

3. Mampu melakukan analisis senyawa-senyawa golongan narkotika atau psikotropika berdasarkan hasil uji konfirmasi.

1.3Latar Belakang

A.Uji Konfirmasi Metode Pemisahan Obat-Obat Golongan Amfetamin dan Opiat dalam UrinBanyak wanita yang berlomba-lomba menjadi kurus agar terlihat menarik sehingga mereka memilih jalan pintas, yaitu dengan menggunakan produk pelangsing. Padahal produk pelangsing tersebut belum tentu aman. Beberapa produk pelangsing ditemukan mengandung suatu senyawa yang disebut amfetamin. Amfetamin merupakan senyawa yang cukup banyak ditemukan dalam produk-produk pelangsing (penurun berat badan) yang mengklaim produk tersebut bebas dari senyawa berbahaya. Pada mulanya sekitar tahun 1960-an, amfetamin boleh digunakan secara bebas untuk menurunkan berat badan. Amfetamin menekan nafsu makan, mengontrol berat badan, serta menstimulasi sistem saraf pusat dan sistem kardiovaskular. Efek-efek tersebut dihasilkan diperantarai dengan meningkatkan konsentrasi sinapsis dari norepinefrin dan dopamine melalui stimulasi pelepasan neurotransmitter atau menghambat pengambilannya. Amfetamin merupakan suatu obat yang dapat mempengaruhi sistem saraf pusat. Oleh karena itu, hal ini berbahaya jika digunakan secara tidak terkendali oleh praktisi kesehatan (dokter atau apoteker).

Pada 2011, Afganistan memproduksi 5.800 ton opium, naik dari 3.600 ton pada tahun sebelumnya, menurut laporan PBB yang dirilis Januari lalu. Provinsi Helmand sendiri menjadi penghasil 60 persen opium dunia. Opium merupakan tanaman semusim yang hanya bisa dibudidayakan di pegunungan kawasan subtropis. Tinggi tanaman hanya sekitar satu meter. Daunnya jorong dengan tepi bergerigi. Bunga opium bertangkai panjang dan keluar dari ujung ranting. Satu tangkai hanya terdiri dari satu bunga dnegan kuntum bermahkota putih, ungu, dengan pangkal putih serta merah cerah. Bunga opium sangat indah hingga beberapa spesiesPapaverlazim dijadikan tanaman hias. Buah opium berupa bulatan sebesar bola pingpong bewarna hijau.

Kedua golongan obat tersebut dapat membahayakan banyak orang jika digunakan karena menyebabkan kecanduan. Maka dari itu diperlukan pemeriksaan untuk mengetahui ada tidaknya golongan tersebut pada tubuh seseorang. Pemeriksaan konfirmasi dapat digunakan setelah uji skrining dimana pemeriksaan konfirmasi ini merupakan suatu pemeriksaan lanjutan yang lebih akurat karena hasil yang dikeluarkan sudah definitif menunjukkan jenis zat narkotika psikotropika yang terkandung di dalam sampel tersebut. Pemeriksaan dilakukan apabila hasil pemeriksaan pendahuluan (screening test) memberi hasil positif (BNN, 2008).

B.Uji Konfirmatif Narkotika/Psikotropika Pada Urine Pencandu Narkoba Dengan Metode Klt-SpektrofotodensitometerNarkotika merupakan masalah yang sangat menjadi momok masyarakat dimana penyalahgunaan Narkotika, Psikotropika dan Zat Adiktif lainya (NAPZA) memerlukan upaya penanggulangan secara komprehensif dengan melibatkan kerja sama multidispliner, multisektor, dan peran serta masyarakat secara aktif yang dilaksanakan secara berkesinambungan, konsekuen dan konsisten. Narkotika dan Psikotropika dapat yang disalah gunakan penggunaannya ini memiliki banyak sekali efek samping , dimana efek samping yang diberikan paling berat adalah efek kecanduan. Seseorang yang telah kecanduan narkotika akan susah terlepas dan berujung pada meningkatnya kadar kriminalitas yang dilakukan, hingga menyebabkan kematian karena over dosis.

Meskipun dalam Kedokteran, sebagian besar golongan Narkotika, Psikotropika dan Zat Adiktif lainnya (NAPZA) masih bermanfaat bagi pengobatan, namun bila disalahgunakan atau digunakan tidak menurut indikasi medis atau standar pengobatan terlebih lagi bila disertai peredaran dijalur ilegal, akan berakibat sangat merugikan bagi individu maupun masyarakat luas khususnya generasi muda. Dari data yang ada, penyalahgunaan NAPZA paling banyak berumur antara 1524 tahun. Tampaknya generasi muda adalah sasaran strategis perdagangan gelap NAPZA. Peyalahgunaan ini dapat diketahui melalui pemeriksaan yang dilakukan secara objektif, dimana terdiri dari beberapa prosedur ketat. Dimana pemeriksaan laboratorium yang dilakukan saat awal terduga seseorang menjadi pecandu narkoba dengan skrining test kemudian jika hasilnya positif maka dilakukan test konfirmasi untuk mengetahui zat yang dikonsumsi oleh pecandu tersebut sehingga diharapkan dengan hasil test ini dapat menegakkan hukum yang diberikan sesuai dengan peraturan perundang-undangan yang berlaku.BAB II

DASAR TEORIA.Uji Konfirmasi Metode Pemisahan Obat-Obat Golongan Amfetamin dan Opiat dalam Urin1.Uji Konfirmasi

Pemeriksaan konfirmasi adalah suatu pemeriksaan lanjutan yang lebih akurat karena hasil yang dikeluarkan sudah definitif menunjukkan jenis zat narkotika psikotropika yang terkandung di dalam sampel tersebut. Pemeriksaan dilakukan apabila hasil pemeriksaan pendahuluan (screening test) memberi hasil positif (BNN, 2008).

Umumnya uji pemastian menggunakan teknik kromatografi yang dikombinasi dengan teknik detektor lainnya, seperti: kromatografi gas - spektrofotometri massa (GC-MS), kromatografi cair kenerja tinggi (HPLC) dengan diode-array detektor, kromatografi cair - spektrofotometri massa (LC-MS), KLT-Spektrofotodensitometri, dan teknik lainnya. (Wirasuta, 2008)2. Amfetamin

Amphetamine merupakan salah satu obat dari golongan psikotropika golongan II. Istilah amphetamine digunakan untuk sekelompok obat yang secara struktural mempunyai keterbatasan dalam penggunaan klinis tetapi sangat potensial untuk menjadi toksik adiksi dan disalah gunakan.(Japardi, 2008)

Amfetamin adalah kelompok obat psikoaktif sintetis yang disebut sistem saraf pusat (SSP) stimulan. Amfetamin dapat berupa bubuk putih, kuning, maupun coklat, atau bubuk putih kristal kecil (Purwanti, 2009).

Senyawa ini memiliki nama kimia methylphenethylamine merupakan suatu senyawa yang telah digunakan secara terapetik untuk mengatasi obesitas,attention-deficit hyperactivity disorder(ADHD), dan narkolepsi. Amfetamin memiliki banyak efek stimulan diantaranya meningkatkan aktivitas dan gairah hidup, menurunkan rasa lelah, meningkatkanmood, meningkatkan konsentrasi, menekan nafsu makan, dan menurunkan keinginan untuk tidur. Akan tetapi, dalam keadaan overdosis, efek-efek tersebut menjadi berlebihan. Target analisis dari Amphetamin adalah methampetamine (MA), amphetamine (A), methylenedioxymethamfetamin / MDMA, dan methylenedioxyamfetamine (MDA). (Purwanti, 2009)

3.Opiat

Opiat adalah obat-obatan yang mempengaruhi kerja otak. Pengguna opiat sering bermimpi yang indah-indah, merasakan seakan-akan terbang (fly). Yang termasuk golongan opiat ialah : (1) obat yang berasal dari opium-morfin ; (2) senyawa semisintetik morfin ; (3) senyawa sintetik yang berefek seperti morfin. Didalam klinik opioid dapat digolongkan menjadi lemah (kodein) dan kuat (morfin). (Sardjono, 1995)Berdasarkan jalur metabolisme heroin dan asetil kodein, terlihat bahwa kodein (narkotika golongan III) akan termetabolisme membentuk morfin (narkotika golongan II). Demikian juga apabila seseorang telah mengkonsumsi heroin ilegal pada waktu tertentu mungkin untuk mendeteksi kombinasi yang hampir sama pada penggunaan kodein. Sedangkan menurut UU no 22 tentang Narkotika, penyalahgunaan narkotika golongan I, II, dan III mempunyai konsekuensi hukum yang berbeda. Oleh karena itu interpretasi temuan analisis pada penyalahgunaan narkotika, khususnya merunut balik sumber narkotika yang telah dikonsumsi adalah mutlak (Wirasuta 2009).

4.Urin

Urine sangat berguna dalam skrining racun karena obat, racun dan metabolit terdapat dengan konsentrasi yang lebih besar pada urin dibandingkan dalam darah. Urine, tidak seperti plasma, bebas dari protein dan lipida, karena itu umumnya dapat langsung diekstraksi dengan pelarut organik. Dibandingkan dengan plasma atau serum, komposisinya bervariasi cukup besar yang dapat dilihat dari warna gelap urine malam dibandingkan dengan warna yang pucat dari urine yang dikumpulkan pada siang hari. (Wirasuta, 2008)

Urin segar berwarna kuning atau kuning-hijau, namun pada penyimpanan sebagai larutan yang bersifat asam warna urin akan berubah menjadi kuning-coklat akibat terjadinya oksidasi dari urobilinogen menjadi urobilin. Sampel urin tahan selama beberapa minggu jika disimpan pada suhu 2-80 C. Namun jika dibekukan (-200 C), sampel urin yang diasamkan akan tahan sampai jangka waktu yang panjang, tapi sebelumnya dilakukan sentrifugasi terlebih dahulu (Flanagan et al., 2007)

5.Ekstraksi Fase Padat

Jika dibandingkan dengan ekstraksi cair-cair, ekstraksi fase padat yang biasa disebut Solid Phase Extraction(SPE) merupakan teknik yang relatif baru akan tetapi SPE cepat berkembang sebagai alat yang utama untuk pra-perlakuan sampel atau untuk clean-up sampel-sampel yang kotor, misal sampel-sampel yang mempunyai kandungan matriks yang tinggi seperti garam-garam, protein, polimer, resin, dll. (Rohman, 2007)

Keunggulan SPE dibandingkan dengan ekstraksi cair-cair adalah: proses ekstraksi lebih sempurna, pemisahan analit dari penganggu yang mungkin ada menjadi lebih efisien, mengurangi pelarut organik yang digunakan, fraksi analit yang diperoleh lebih mudah dikumpulkan, mampu menghilangkan partikulat, lebih mudah diotomatisasi. (Rohman, 2007)

6.Ekstraksi Cair Cair

Prinsip metode ini didasarkan pada distribusi zat terlarut dengan perbandingan tetentu antara dua pelarut yang tidak saling bercampur seperti benzene dan kloroform. Ekstraksi cair-cair digunakan sebagai cara untuk praperlakuan sampel atauclean-upsampel untuk memisahkan analit-analit dari komponen-komponen matriks yang mungkin menganggu pada saat kuantifikasi atau deteksi analit. Kebanyakan prosedur ekstraksi cair-cair melibatkan ekstraksi analit dari fasa air kedalam pelarut organic yang bersifat non-polar atau agak polar seperti n-heksana, metil benzene atau diklorometana. Meskipun demikian, proses sebaliknya juga mungkin terjadi.Analit-analit yang mudah tereksitasi dalam pelarut organic adalah molekul-molekul netral yang berikatan secara kovalen dengan konstituen yang bersifat non-polar atau agak polar. (Rohman, 2007)

B.Uji Konfirmatif Narkotika/Psikotropika Pada Urine Pencandu Narkoba Dengan Metode Klt-Spektrofotodensitometer

1.Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Kromatografi lapis tipis (KLT) adalah suatu metode pemisahan campuran analit dengan mengelusinya melalui fase diam yang datar pada plat penyangga. Dalam KLT, fase gerak ini berupa cairan. Pemisahan akan terjadi jika salah satu komponen dari campuran diadsorpsi lebih kuat dari komponen yang lainnya. Karena adsorpsi merupakan fenomena permukaan, maka derajat pemisahan dipengaruhi oleh luas permukaan yang ada atau secara tidak langsung dipengaruhi oleh ukuran partikel fase diam (adsorben).Walaupun demikian koefisien distribusi/partisi senyawa antara kedua fase dalam sistem merupakan faktor kunci setiap bentuk kromatogram (Widjaja dkk., 2008). Metode ini dapat digunakan untuk memisahkan senyawa-senyawa yang tidak volatil atau senyawa yang sifat volatilitasnya rendah, senyawa dengan polaritas rendah hingga tinggi, bahkan untuk memisahkan senyawa-senyawa ionik (Hahn-Deinstrop, 2007).

Fase diam pada KLT adalah adsorben dengan partikel halus yang dilapiskan pada lempeng penyangga kaca, logam, atau plastik.Adsorben yang dapat digunakan diklasifikasi berdasarkan sifat kimia atau daya ikatannya (Widjaja dkk., 2008). Fase diam yang digunakan dalam KLT merupakan penjerap berukuran kecil dengan diameter partikel antara 10-30m. Semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase diam dan semakin sempit kisaran ukuran fase diam, maka semakin baik kinerja KLT dalam hal efisiensi dan resolusinya (Gandjar dan Rohman, 2007).Plat mengandung suatu indikator fluoresensi sehingga komponen yang mengabsopsi UV dapat ditempatkan sebagai spot yang gelap dengan latar belakang yang berfluoresensi (dengan bantuan reagen visualisasi jika diperlukan) (Flanagan et al., 2007)

Fase gerak ialah medium angkut dan terdiri atas satu atau beberapa pelarut. Fase gerak bergerak di dalam fase diam, yaitu suatu lapisan berpori, karena ada gaya kapiler. Yang digunakan hanyalah pelarut bertingkat mutu analitik dan bila perlu, sistem pelarut miltikomponen ini harus berupa suatu campuran sesederhana mungkin yang terdiri atas maksimum tiga komponen. Angka banding campuran dinyatakan dalam bagian volum sedemikian rupa sehingga volume total 100, misalnya benzen-kloroform-asam asetat 96% (50:40:10) (Stahl, 1985).2.Instrumen Spektrodensitometri

Analisis kuantitatif dari suatu senyawa yang telah dipisahkan dengan KLT biasanya dilakukan dengan densitometer langsung pada lempeng KLT (atau secara in situ). Densitometer dapat bekerja secara serapan atau fluoresensi. Kebanyakan densitometer mempunyai sumber cahaya, monokromator untuk memilih panjang gelombang yang cocok, sistem untuk memfokuskan sinar pada lempeng, pengganda foton, dan recorder.(Gandjar dan Rohman, 2007).

Instrumen spektrodensitometer terdiri dari sumber cahaya dalam rentang panjang gelombang 200-800 nm yaitu lampu deuterium (rentang spektra 200-400 nm), lampu tungsten (rentang spektra 400-800 nm, slit (celah) monokromator untuk memilih panjang gelombang yang sesuai, sistem untuk memfokuskan sinar pada plat, filter fluoresensi, pengganda foton (photomultiplier) dan rekorder. (Ganjar dan Rohman, 2007 ; Schmutz, 1980)Prinsip kerja spektrofotodensitometri berdasarkan interaksi antara radiasi elektromagnetik dari sinar UV-Vis dengan analit yang merupakan noda pada plat. Radiasi elektromagnetik yang datang pada plat diabsorpsi oleh analit, ditransmisi atau diteruskan jika plat yang digunakan transparan. Radiasi elektromagnetik yang diabsorpsi oleh analit atau indikator plat dapat diemisikan berupa flouresensi dan fosforesensi (Sherma and Fried, 1994). Pemadaman flouresensi indikator F-254 dapat terjadi akibat adanya noda pada plat sehingga teramati di bawah lampu UV sebagai noda hitam (Mulja dan Sukarman, 1995).Suatu campuran zat dapat dipisahkan dengan teknik KLT berdasarkan perbedaan afinitas masing-masing komponen terhadap fase gerak dan fase diamnya. Komponen yang telah terpisah, besar serapannya dapat diukur dengan spektrofotodensitometer. Kadar dari sampel dapat ditentukan dari perbandingan antara serapan dan bakunya (Widjaja dan Laksmiani, 2010).Analisis KLT dengan menggunakan spektrofotodensitometri dapat dilakukan dengan menggunakan mode absorbsi atau flouresensi. Pada umumnya yang paling sering digunakan adalah mode absorbsi dengan menggunakan sinar UV pada 190-300 nm. (Sherma and Fried, 1994)3.Uji Konfirmasi terhadap Narkotika dan Psikotropika

Pemeriksaan konfirmasi adalah suatu pemeriksaan lanjutan yang lebih akurat karena hasil yang dikeluarkan sudah definitif menunjukkan jenis zat narkotika psikotropika yang terkandung di dalam sampel tersebut. Pemeriksaan dilakukan apabila hasil pemeriksaan pendahuluan (screening test) memberi hasil positif (BNN, 2008).Pada uji konfirmasi dengan KLT, setiap senyawa yang terlarut dalam fase gerak memiliki hambatan yang berbeda saat bergerak pada fase diam. Besar hambatan ini dapat dinyatakan dengan nilai RF atau hRf (hRf = 100 Rf). (Sherma and Fried, 1996).

Data yang diperoleh dari KLT adalah nilai Rf yang berguna untuk identifikasi senyawa. Nilai Rf untuk senyawa murni dapat dibandingkan dengan nilai Rf dari senyawa standar. Nilai Rf dapat didefinisikan sebagai jarak yang ditempuh oleh senyawa ( Underwood, 1986: 186 ).

Nilai Rf diperoleh dari membagi jarak pusat kromatografik dari titik awal dengan jarak pergerakan pelarut dari titik awal. Penghitungan nilai hRf ditunjukkan dengan persamaan dibawah ini.

Pada prakteknya, nilai hRf bervariasi karena pengaruh faktor lingkungan seperti kejenuhan bejana kromatografi (chamber), pH medium, suhu penguapan fase gerak pada plat, kadar analit yang ditotolkan. (Sherma and Fried, 1996).

BAB III

PROSEDUR KERJAA.Uji Konfirmasi Metode Pemisahan Obat-Obat Golongan Amfetamin dan Opiat dalam Urin

3.1Medium Analit

Urine

Target

Derivat Amfetamin : Amfetamin (AM), Metamfetamin (MA), dan Metilendioksimetanfetamin (MDMA)

Golongan Opiat : Morfin, Codein

3.2 Alat dan Bahana. Alat :

1. Alat sentrifugasi

2. Alat vortex

3. Gelas ukur

4. Pipet volume dan Ballfilter

5. Pipet tetes

6. Gelas beaker

7. Botol vial

8. Labu ukur

9. Tabung reaksi

10. Plat silica GF 254

11. Chamber

12. Camag Nanomat 4

13. Spektrofotometer

b. Bahan :

1. Amfetamin (AM)

2. Metamfetamin (MA)

3. Metillendioksimetanfetamin (MDMA)

4. Morfin

5. Codein

6. Buffer pospat pH 10,5

7. Metanol

8. Kloroform

9. Aquades

10. Eluent :TAEA dan TB

3.3Prosedur Kerja

Ekstraksi sampel dengan menggunakan ekstraksi cair-cair

Ekstraksi sampel dengan menggunakan SPE (Solid Phase Exstraction)

Menggunakan fase diam kolom SPE Accubond II Evidex Catridge

Amfetamin

B.Uji Konfirmasi Metode Pemisahan Obat-Obat Golongan Amfetamin dan Opiat dalam Urin3.1 Alat dan Bahan

A. Alat yang digunakan

1. Pipet tetes

2. Botol vial

3. Aluminium foil

4. Termos dingin

5. Kulkas/freezer

6. Pipet ukur

7. Gelas beaker

8. Tabung reaksi

9. Bejana kromatografi vertical (camag-Muttenz-Switzerland)

10. Ballfiller

11. Tabung eppendorf

12. Oven

13. Striptes benzodiazepine

14. THC

15. Metamfetamin dan opiate (Bio-Rad)

16. Strip pH ( Machery-Nagel)

17. Pemanas (Caorning-PC 420D)

18. Catridge SPE ACCOUBOND dan CHROMABOND

19. Plat Al-TLC Si 60 GF254 (Merk-Germany)

B. Bahan yang digunakan ( Pro-analisis)1. Metanol

2. Kloroform

3. Sikloheksana

4. Toluena

5. Dietilamin

6. HCl

7. NaOH

8. Amonia 25%

9. Aseton

10. Etanol

11. Senyawa standar pembanding (Larutan morfin, kodein, kafein, papaverin, bromheksi, teofilin, dan dekstrometorfan)

3.2 Prosedur Kerja

3.2.1 Sistem kromatografi

a. Penyiapan Fase Diam

b. Penyiapan Larutan Pengembang

1. Larutan Pengembang TB

2. Larutan Pengembang TAEA

c. Penjenuhan Bejana Kromatografi

3.2.2 Larutan Standar Pembanding

Larutan standar pembanding berbeda untuk setiap system fase gerak. Larutan standar pembanding digunakan ntuk menghitung hRfc.

a. Fase Gerak Sistem TB

b. Fase Gerak Sistem TAEA

3.2.3 Pemisahan Hasil Ekstraksi Sampel Dengan KLT

3.2.4 Deteksi dan Penetapan Hasil

BAB IV

DATA HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN

A.Uji Konfirmasi Metode Pemisahan Obat-Obat Golongan Amfetamin dan Opiat dalam Urin

1.Identitas Sampel

a. Jenis Sampel :Urine

b. Warna:Kuning Pias

c. Tanggal/Waktu Pengambilan:26 April 2013

d. Tanggal/Waktu Pemeriksaan:17 Mei 2013

e. Volume urine:5 mL

f. Identitas Petugas:Kelompok V

B.Uji Konfirmatif Narkotika/Psikotropika Pada Urine Pencandu Narkoba Dengan Metode Klt-Spektrofotodensitometer

a. Ukuran plat : 10 x 10 cm

b. Sistem yang digunakan adalah TB

c. Larutan pengembang TB sebanyak 10 mL yang terdiri dari :

7,5 mL sikloheksana

1,5 mL toluen 1,0 mL dietilamind. Pengenceran senyaea standar :

Konsentrasi senyawa standar = 1 mg/ml = 1000 ng/l

Dibuat senyawa standar 50 ng/l sebanyak 5 ml

Perhitungan :

V1 . M1=V2 . M2

x . 1000 ng/l=5 ml . 50 ng/l

1000x=250 ml

x=0,25 mlJadi, dipipet 0,25 ml senyawa standar 1 mg/ml dan di-add dengan methanol sampai 5 ml dalam labu ukur 5 ml.

e.Larutan standar pembanding TB

0,5 ml Papaverin 1 mg/ml 0,5 ml Teofilin 1 mg/ml

0,5 ml Dextrometorfan 1 mg/ml

0,5 ml Bromheksin 1 mg/ml

Konsentrasi Dextrometorfan yang ada adalah 2 mg/ml, dan dibuat 1 mg/ml V1 . M1=V2 . M2

x . 2 mg/ml=5 ml . 1 mg/ml

2x=5 ml

x=2,5 ml

Jadi, dipipet 2,5 ml Dextrometorfan 2 mg/ml dan di-add dengan metanol sampai 5 ml dalam labu ukur 5 ml.

f.Sampel

Residu Amfetamin (SPE) + 25 l metanol Residu Opiat (SPE) + 25 l metanol

Residu X (LLE) + 25 l metanol

g.Penotolan pada plat dengan metode semi kuantitatif (Linomart)

Keterangan :1:4 l standar amfetamin opiat 50 ng/l = 200 ng/l

2:8 l standar amfetamin opiat 50 ng/l = 400 ng/l

3:12 l standar amfetamin opiat 50 ng/l = 600 ng/l

4:16 l standar amfetamin opiat 50 ng/l = 800 ng/l

5:20 l standar amfetamin opiat 50 ng/l = 1000 ng/l

6:ekstrak sampel amfetamin (SPE) 50 l

7:ekstrak sampel opiat (SPE) 25 l8:ekstrak sampel X (LLE) 25 l9:standar pembanding TB 25 l

DAFTAR PUSTAKA

BNN. 2008. Pedoman Pemeriksaan Laboratorium Narkotika, Psikotropik, dan Obat Berbahaya. Jakarta : BNN.

Flanagan, R. J., A. Taylor, I. D. Watson, R. Whelpton. 2007. Fundamentals of Analytical Toxicology. John Wiley and Sons Ltd: West Sussex.

Gandjar, Ibnu Gholib dan Abdul Rohman. 2007. Kimia Analisis Farmasi . Yogyakarta : Pustaka Pelajar.Japardi I. 2008. Efek Neurologi Dari Ecstasi dan shabu-shabu. Fakultas Kedokteran Bagian Bedah [Online] 2002 [cited 2008 April 23]; Available from: URL:http://www.usu.ac.idLia, Purwanti. 2009. Amfetamin. Diakses dari : http://narkobaamphetamin. blogspot.com/2011/11/amfetamin.htmlMulja, M. dan Sukarman. 1995. Analisis Instrumental. Surabaya: Airlangga University Press.Ningrum. 2009. Keracunan Opiat-catatan kecil. Diakses dari pada tanggal 13 Mei 2013

Rohman, Abdul.2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka PelajarSardjono, Santoso dan Hadi rosmiati D,farmakologi dan terapi, bagian farmakologi FK-UI, Jakarta, 1995 ; hal ; 189-206.

Underwood.1980. Analisis Kuantitatif. Jakarta : Erlangga.

Wirasuta, 2008. Analisis Toksikologi Forensik Dan Interpretasi Temuan Analisis. Jakarta : Universitas Udayana Press.Wirasuta. 2009. Buku Ajar Toksikologi Umum. Bali : Universitas Udayana Press

Widjaja,I.N.K. dan N.P.L.Laksmiani. 2010. Petunjuk Praktikum Kimia Analisis. Bukit-Jimbaran : Jurusan Farmasi F.MIPA Unud.Plat Al-TLC Si 60 GF254

Dipotong

Plat Sesuai Ukuran (10 cm x 10 cm)

Dicuci

Dielusi Metanol

Aktivasi pada suhu 120oC/30 menit

Plat siap digunakan

Sikloheksana : toluene : dietilamin (75:15:10)

Dimasukkan ke dalam labu ukur

Dihomogenkan

Larutan Pengembang TB

Toluen : Aseton : etanol : amonia (45:45:7:3)

Dimasukkan ke dalam labu ukur

Dihomogenkan

Larutan Pengembang TAEA

Larutan pengembang TB

Dimasukkan ke dalam bejana yang dilapisi kertas saring

Diamkan 30 menit

Bejana jenuh

Larutan teofilin konsentrasi 1 mg/ml

Larutan papaverin konsentrasi 1 mg/ml

Larutan dekstrometorfan konsentrasi 1 mg/ml

Larutan bromheksin konsentrasi 1 mg/ml

Dicampurkan dan dihomogenkan

Larutan standar

Larutan morfin konsentrasi 1 mg/ml

Larutan kodein konsentrasi 1 mg/ml

Larutan kafein konsentrasi 1 mg/ml

Larutan papaverin konsentrasi 1 mg/ml

Larutan bromheksin konsentrasi 1 mg/ml

Dicampurkan dan dihomogenkan

Larutan standar

2 Plat Al-TLC Si 60 GF254

Ditotolkan standar pembanding & 25 L larutan ekstrak

Dimasukkkan ke bejana kromatografi yang jenuh

Elusi dengan fase gerak TAEA dan TB

Dikeringkan pada oven 60oC/10 menit

Plat terelusi

Jenis Zat

Dicocokkan harga hRfc

Dibuat spectrum dari setiap noda (190-400 nm)

Dipindai dengan TLC scanner

Kromatogram

Plat terelusi

Fase air

Sampel hasil sentrifuge

Disentrifuge dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit

Terbentuk emulsi sempurna

Divortek dengan kecepatan 2500 rpm selama 30 menit

Sampel

+ 1 ml buffer fosfat pH 9,3

+ 2 ml campuran kloroform : isopropanol = (3;1)

Dimasukkan ke dalam tabung sentrifuge

1 ml sampel urine dalam tabung sentrifuge

1 ml sampel urine

Fase kloroform

Diambil dan ditampung

Diambil dan ditampung

Fraksi A yang mengandung morfin

Fraksi Air

Fraksi Air (fraksi B)

Fraksi A yang mengandung morfin

Sampel siap dianalisa

Residu

Diuapkan pada suhu 60-70 0 C

Campuran fraksi A dan fraksi B

Fraksi Air (fraksi B)

Fraksi Air (fraksi B)

Divortex dengan kecepatan 2500 rpm selama 30 menit

Disentrifuge dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit

+ buffer fosfat pH 10,5

+kloroform : isopropanol (3:1)

Dilarutkan dalam 25 L metanol

Sample preparation

Sample hasil preparation

+ 3 ml K2HPO4 0,1 M pH 6

5 ml urine

+ 6 metanol

+ 6 ml K2HPO4 0,1 M pH 6

SPE Accubond II Evidex Catridge telah dikondisikan

SPE Accubond II Evidex Catridge

SPE condition

Rinse

SPE Accubond II Evidex Catridge telah dikondisikan

Diisi dengan sampel

+ 3 ml air

+ 3 ml 0,1 M asam asetat

+ 3 ml metanol

SPE Accubond II Evidex Catridge hasil Rinse

Elution

SPE Accubond II Evidex Catridge hasil Rinse

+ 3 ml kloroform isopropil alkohol HCl (60/40/1)

Sampel hasil elution (eluat)

Diuapkan pada suhu 65 oC

residu

Direkonstruksi dengan metanol sebanyak 25 L metanol

Sampel siap dianalisa

Dicampur dalam 1 botol vial

1

2

3

4

5

6

7

8

9