UNIVERSITE DE YAOUNDE 1 THE UNIVERSITY OF YAOUNDE 1 FACULTE DE MEDECINE FACULTY OF MEDECINE ET DES SCIENCES BIOMEDICALES AND BIOMEDICAL SCIENCES

DEPARTEMENT DE BIOCHIMIE ET DES SCIENCES PHYSIOLOGIQUES

NOMS ET MATRICULES DES PARTICIPANTS :

KONLACK MEKONTSO JOEL 10M117KIAR AWOU CARIN GLADY 10M113KEBA FAITH BIH IRENE 10M110

SOUS L’ENCADREMENT DE :Pr JEANNE NGOGANGDr CONSTANT ANATOLE PIEMEDr NKEGOUM AMA VICKYDr JUDITH TORIMIRO

RAPPORT DU TP DE BIOCHIMIE N° 1 SUR LES CONSTITUANTS ANORMAUX DE

L’URINE

ANNEE ACADEMIQUE 2011/2012

Introduction générale

Liquide organique d’élimination de déchets et des toxiques du métabolisme, l’urine est élaborée par les reins et stockée dans la vessie. L'urine est secrétée par les reins par filtration du sang, puis par récupération des molécules de l'urine « primitive » pour former l'« urine définitive », qui sera rejetée. Les néphrons, unités fonctionnelles des reins effectuent donc une filtration sélective du plasma. Au cours de certaines affections, le glomérule rénal laisse filtrer des molécules protéiques, glucidiques, biliaires, et même des corps cétoniques. La recherche de ces dernières dans l’urine peut donc contribuer au diagnostic de certaines pathologies rénales ou même systémiques, d’où l’importance du présent exposé. Dans chacune des expériences, on utilisera d’une part une urine à tester, et d’autre part une urine pathologique connue

I. Recherche des protéines

Normalement l’urine ne contient que des traces de protéines (20-100mg/l) du fait de leur réabsorption tubulaire plus ou moins complète .Il s’agit ici principalement d’albumine et de globuline qu’on groupe sous le nom d’albumine vraie ( 3-60mg/l) mais aussi d’autres protéines comme l’hémoglobine et les glycoprotéines qu’on nommera ici pseudo-albumine ( traces ).on peut donc dire que l’urine normale est pratiquement exemptée de protéines

1. Par l’acide nitrique reaction de heller

Cette réaction est basée sur le fait que les protéines précipitent en présence d’acide nitrique. Au laboratoire on fait couler 1,5 ml d’urine à examiner dans un tube contenant 1,5 ml d’acide nitrique. Le temps de contact est d’environ cinq minutes.

Si l’urine contient de l’albumine vraie on observe un disque blanc au contact de l’acide(1), dans le cas d’une pseudo-albumine il se forme un nuage blanc au-dessus de l’acide(2). L’intensité de la coloration étant proportionnelle à la quantité de protéines que contient l’urine, des techniques de dosage plus spécifiques permettent de déterminer la concentration de protéine. Si l’urine ne contient ni l’une ni l’autre de ces protéines, on observe un disque brun au contact de l’acide(3).

(1) disque brun(3)

2. Par l’acide sulfosalicylique

Cette réaction n’est pas très spécifique, elle permet de détecter des concentrations de protéines urinaires aussi faibles que 100 mg/l. En pratique, on verse 3ml d’acide sulfosalicylique à 3% dans un tube contenant 1ml d’urine à examiner.

Un trouble ou une précipitation suffit pour conclure sur la présence de protéines.

Tube de gauche : urine normale

Tube de droite : urine riche en protéines

II. Recherche des sucres réducteurs par la liqueur de Fehling

Les -oses contiennent les groupements aldéhydes et cétones oxydables qui répondent donc aux réactions d'oxydation. Ils réduisent les oxydes métalliques tel la liqueur de Fehling à chaud en milieu alcalin. Ces propriétés sont utilisées en pratique. Mais du fait que d’autres substances que les –oses exercent une action réductrice (créatinine, morphine etc…), il y a lieu de purifier notre urine pour les éliminer.

En pratique, on porte à ébullition 1,5ml de liqueur de de Fehling contenu dans un tube à essai pendant cinq minutes environ, Puis on y ajoute 1,5ml d’urine à examiner. En présence de corps réducteurs (oses par exemple), il se forme un précipité rouge brique d’oxyde cuivreux.

tube de gauche : urine contenant des corps reducteurs

tube de droite : urine normale

III. Recherche des corps cétonique et de cétogènes Test d’Imbert ou réaction de Légal

Le terme de corps cétoniques urinaires désigne chacun des trois composés acétone, acide acétyl acétique et le bêta-hydroxy butyrate. Comme ils sont de la même origine, il suffit de caractériser dans l’urine la présence de l’acétone pour conclure sur la potentielle présence des autres.la recherche d’acétone est basée sur la réaction colorée de LEGAL qui peut détecter des concentrations d’acétone de l’ordre de 0,05g/l. Au laboratoire, on traite

2ml d’urine à examiner avec une solution de nitroprusside, en présence d’acétate puis de soude ou d’ammoniac (réactif d’MBERT).

Dans un tube contenant 2ml d’urine, on ajoute 2 gouttes d’acide acétique, puis 2 gouttes de nitroprussiate de sodium à 8%, ayant homogénéisé l’ensemble, on y ajoute 4 gouttes d’ammoniac.

Si l’urine contient des corps cétoniques, on observera un nuage rouge-violacé (1), dans le cas contraire (urine normale) on observe une un disque blanc séparant les deux liquides.

Urine normale (1)

Conclusion générale

La maitrise parfaite de la physiologie rénale permet de comprendre les mécanismes physiopathologiques aboutissant à la présence anormale de certains composés dans l’urine, lesquels composés peuvent être mis en évidence par diverses réactions biochimiques de coloration et de précipitation. Ceci présente un grand avantage en clinique car une réaction positive n’est pas spécifique d’une maladie, mais elle permet d’orienter le diagnostic différentiel. La recherche des constituants anormaux de l’urine aide aussi au monitoring de certaines pathologies systémiques.