l a m p i r a n - repository.ipb.ac.id · primer 8f 10 mm 1 µl ... pembuatan larutan standar asam...

L A M P I R A N

Lampiran 1. Prosedur identifikasi molekuler Lactobacillus sp. Instruksi kerja ekstraksi DNA genom bakteri menggunakan Instagene

Langkah-langkah kerja yang dilakukan adalah mengambil satu koloni isolat yang

sudah tumbuh dan murni. Setelah itu, ditambahkan 1 mL H2O dan melakukan proses

tapping. Setelah dilakukan proses tapping, dilanjutkan dengan Sentrifuge dengan kecepatan

1.200 rpm selama 1 menit. Langkah berikutnya, membuang supernatan dan menambahkan

250 µL Instagene. Setelah ditambahkan Instagene, tahapan yang harus dilakukan adalah

vorteks. Setelah vorteks, inkubasi pada suhu 56 0C selama 30 menit. Selanjutnya, dilakukan

vorteks kembali. Kemudian panaskan pada heat block 100 0C selama 8 menit. Setelah

proses pemanasan, divorteks kembali. Selanjutnya, sentrifuge pada kecepatan 10.000 -

12.000 rpm selama 2 - 3 menit. Langkah yang terakhir, mengambil supernatan untuk PCR.

Amplifikasi PCR

Campuran berikut seperti tertera pada Tabel di bawah ini dibuat dalam tabung

volume 0,2 ml.

Solution Konsentrasi Akhir Volume Sampel

Air 29,75 µl MgCl2 5 µl 10X PCR Buffer 1 X 5 µl dNTP Mix 0,2 mM 4 µl Primer 8F 10 mM 1 µl Primer 1492R 10 mM 1 µl Taq Polimerase 1,5 U 0,25 µl Template 100-200 ng 2 µl Total Volume 50 µl Pertama-tama, air dicampurkan dengan tapping pelan-pelan. Setelah tercampur,

larutan dilakuan sentrifugasi. Kemudian mesin thermal cycler diatur sesuai program yang

diinginkan. Setelah proses pengaturan selanjutnya PCR dijalankan.

Elektroforesis produk PCR

Langkah pertama yang dilakukan untuk elektroforesis produk PCR adalah agarose

ditimbang sebanyak 1% (w/v). Selanjutnya agarose dimasukkan ke dalam tabung

erlenmeyer yang berisi buffer TAE 1X. Selanjutnya larutan agarose dipanaskan dalam

12

microwave sampai benar-benar larut. Setelah larut, larutan didinginkan sampai suhu 40-

500C. Larutan ditambahkan syber safe 10.000 X. Setelah ditambahkan syber safe, larutan

dituang dalam cetakan gel dengan memastikan tidak ada gelembung udara. Larutan

dibiarkan sampai beku. Setelah beku, dilepaskan dari cetakan gel. Kemudian dimasukkan

cetakan dalam tangki elektroforesis (seluruh bagian gel dipastikan terendam dalam buffer

TAE 1X). Selanjutnya dimasukkan marker DNA yang mengandung loading dye 6X ke

dalam sumuran pada gel. Setelah itu, sampel DNA yang mengandung loading dye 6X

dimasukkan ke dalam sumuran pada gel. Selanjutnya dijalankan elektroforesis pada 100V

selama 30 menit. Pita DNA divisualisikan diatas UV Transluminator dan didokumentasikan

dengan gel documentation system.

Purifikasi gel produk PCR dengan gene aid

Tahapan pertama yang harus dilakukan adalah tabung 1,5 ml kosong yang akan

digunakan untuk Purifikasi Gel Produk PCR dengan Gene Aid ditimbang. Tahapan

selanjutnya, agarose yang mengandung filamen DNA dipotong dengan scapel. Setelah itu,

dimasukkan ke dalam tabung yang sudah ditimbang. tabung yang sudah berisi gel ditimbang

kembali. Dihitung selisih berat, tabung berisi gel dengan berat kosong (berat gel ± 300mg).

Kemudian, ditambahakan 500 µl buffer DF pada sampel dan campur dengan cara divorteks.

Proses Inkubasi dilakukan pada suhu 55-600C selama 10-16 menit sampai semua agarose

larut dengan membolak-balik tabung setiap 2-3 menit. Setelah gel larut, selanjutnya

didinginkan sampai suhu ruang. Langkah selanjutnya, DF kolom ditempatkan pada tabung 2

ml, kemudian sampel dipindahkan ke DF kolom (lebih dari 700 µl). Tahapan selanjutnya

disentrifuge pada kecepatan 13000 rpm selama 1 menit. Setelah sentrifuge selama 1 menit,

larutan dibuang dari tabung 2 ml kemudian ditempatkan kembali DF kolom pada tabung 2

ml. Setelah ditempatkan, ditambahkan 600 µl wash buffer dan sentrifuge pada kecepatan

13000 rpm selama 1 menit. Larutan dibuang kembali dari tabung 2 ml, kemudian

ditempatkan kembali DF kolom pada tabung 2 ml. Setelah itu dilakukan tahapan sentrifuge

pada kecepatan 13000 rpm selama 3 menit. Selanjutnya dipindahkan DF kolom ke tabung

1,5 ml yang baru. Tahapan berikutnya, DNA dielusi dengan menambahkan 15-50 µl di

tengah-tengah membran DF kolom. Kemudian diinkubasi selama 2 menit. Setelah

diinkubasi selama 2 menit, Sentrifuge pada kecepatan 13000 rpm selama 3 menit dan

selanjutnya tahapan terkhir, simpan DNA pada suhu 40C.

101

Amplifikasi PCR cycle sekuensing

Campuran seperti yang tertera pada Tabel berikut dibuat dalam dalam tabung

volume 0,2 ml.

SOLUTION VOLUME SAMPEL 5 X Buffer Sekuensing 2 µl Primer (1,6 pmol/ µl) 2 µl Big Dye V.3.1 1 µl Template (10-40ng/µL) 2 µl ddH2O 3 µl

Total Volume 10 µl

Tahap selanjutnya adalah mencampurkan dengan tapping secara pelan-pelan.

Kemudian, melakukan spindown larutan dengan sentrifugasi. Kemudian mesin thermal

cycler diatur sesuai program yang diinginkan. Setelah mesin thermal cycler telah di set,

PCR dijalankan dengan pengaturan sebagai berikut.

Purifikasi produk cycle sekuensing

Untuk purifikasi produk cycle sekuensing, sampel hasil PCR cycle sekuensing

ditambah 10 µl air bebas DNA dan RNA (sampai 20 µl). Selanjutnya tambahkan 5 µl

larutan EDTA 125mM, tambahkan juga 5 µl larutan natrium asetat 3M dan 60 µl etanol

absolut. Setelah itu, sampel diinversi sebanyak 4 kali dan selanjutnya diinkubasi pada suhu

ruang selama 15 menit dengan ditutup alumunium foil. Setelah itu Sentrifuge dengan

kecepatan 3000g selama 30 menit. Selanjutnya supernatan dibuang, lalu pelet ditambah 70

µl etanol 70%. Lakukan lagi tahapan Sentrifuge dengan kecepatan 3000g selama 30 menit,

dan buang kembali supernatan. Setelah itu, lakukan spind down untuk menghilangkan sisa

etanol 70%. Kemudian dikeringkan dengan menggunakan vacum desikator selama 10

menit. Selanjutnya Elusi dengan 10 µl air bebas DNA dan RNA. Kemudian panaskan

dengan heat block digital pada suhu 420C selama 5 menit, dan tapping perlahan setiap 2

menit. Setelah itu, Spindown larutan dengan sentrifugedan sampel siap disekuensing.

Program PCR 960C : 2 menit 960C :10 menit 550C : 5 menit 600C : 4 menit 40C : ∞

102

Sekuensing

Untuk sekuensing, langkah pertama adalah komputer dihidupkan AB 3130. Setelah

lampu hijau menyala, RUN DATA COLLECTION dipilih dan menunggu sampai semua

kotak berwarna hijau. Kemudian, PROTOKOL MANAGER dipilih yang dilanjutkan kotak

NEW dipilih. Dilakukan pengisian nama, type (reguler), Run Module (Fastseq

50_pop_1/standart50_POP1)Dye(Z-BigDye V.3.1), kemudian OK dipilih . Setelah itu,

PLATE MANAGER dipilih dan dilanjutkan dengan NEW. plate dialog diisi dan diklik

OK. Plate Record SEQ ANALYSIS PLATE EDITOR diisi kemudian RUN SCHEDULER

dipilih dan FIND ALL. Selanjutnya plate name dipilih dari daftar, dan POS ISI PLATE

untuk LINK dipilih. Pada posisi START DIALOG BOX, tanda panah warna hijau dipilih

dan OK. Komputer running dan didapatkan basa nukleotida.

Analisa data hasil sequensing

Untuk menganalisa data hasil Sequensing tahap pertama yaitu membuat software

sequensing analysis Ver 5.2. Kemudian diklik FILE, dipilih ADD SAMPLE, selanjutnya

dipilih data yang akan dianalisis. Diklik ADD SELECTED SAMPLE, kemudian diklik OK.

Kualitas hasil sequensing diperiksa dengan melihat indikator QV yang tertera dalam

software dan dipastikan kualitas hasil sequensing memenuhi standar QV yaitu nilai QV

diatas 20 atau QV Bar berwarna biru. Selanjutnya data hasil sequensing digabung dengan

software ATGCTM.

Penggabungan data hasil sequensing dengan software ATGC

Langkah-langkah untuk menggabungkan data hasil sequensing dengan software

ATGC adalah software ATGC dibuka, kemudian diklik FILE, dipilih NEW PROJECT,

selanjutnya diberi nama PROJECT dan diklik SAVE. Setelah disimpan, masukkan data

dengan diklik ADD atau ADD from FOLDER, kemudian diklik IMPORT. Setelah itu,

diklik ANALYZE. Kemudian dipilih ASSEMBLY. Disalin sekuen hasil analisis ke dalam

NOTEPAD dan Data sekuens hasil penggabungan.

Analisis Blast

Tahapan pertama yang harus dilakukan adalah mengedit urutan DNA hasil

sekuensing dengan menterjemahkan N menjadi basa sesuai elektroferogram. Kemudian,

disalin urutan DNA ke program NotePad. Selanjutnya, website

http://www.ncbi.nih.nlm.gov dibuka dan diklik icon BLAST. Sesudah di klik, di layar

103

monitor akan muncul window hasil blast yang berisi diagram similarity sequens kita dengan

sequens yang di NCBI. Selanjutnya, dipilih sequen yang memiliki TOP Similarity dan

ditentukan identifikasi contoh sesuai dengan TOP Similarity.

Analisis Clustal-X

Tahapan awalnya, membuat data sequens spesies yang memiliki TOP Similarity

dalam bentuk fasta (<) ke program NotePad. Buka Software CLUSTAL-X, kemudian diklik

FILE, pilih Load Sequens. Selanjutnya data dimasukkan fasta sampel pertama, kemudian

dipilih Append Sequens untuk memasukkan data selanjutnya. Dipilih Bootstrap N-J Tree.

Pilih Branch Similarity 100. Selanjutnya diklik Alignment, pilih Do Complete Alignment.

Proses Alignment ditunggu sampai selesai. Setelah itu data hasil alignment diedit dengan

program GENEDOC.

Lampiran 2: Penentuan Kadar Asam Linoleat Metode HPLC

Analisis penentuan kadar asam linoleat dilakukan dengan metode HPLC.

Pelarut : Akuades dengan 15% CH3COOH : Asetonitril (25:75)

Detektor : UV 120 nm

Kecepatan alir : 1,5 ml/menit

Kolom : Hypersil MOS (C8)

Sebanyak 5 ml sampel diekstraksi dengan pelarut heksana selama 10 menit dalam

corong pisah 25 ml dan ditepatkan sampai batas dengan heksana. Fase heksana selanjutnya

diuapkan sampai fase heksan habis, kemudian ditambahkan asetonitil sebanyak 2,5 ml.

Selanjutnya diinjeksikan ke dalam alat HPLC sebanyak 1 µl dan hasilnya dibandingkan

dengan standar asam linoleat.

Pembuatan Larutan Standar Asam Linoleat

Sebanyak 100 mg asam linoleat dilarutkan dengan 10 ml pelarut heksana lalu

dimasukkan ke dalam labu ukur 25 ml dan ditepatkan sampai batas dengan heksana. Fase

heksana selanjutnya diinjeksikan ke dalam alat HPLC sebanyak 1 μl.

104

Kurva standar HPLC analitik untuk penentuan konsentrasi Omega-6

Untuk menentukan konsentrasi omega-6 maka dihitung berdasarkan kurva standar

yaitu dengan pendekatan persamaan regresi Y :114,4 x + 487,7.

Sebagai contoh perhitungan konsentrasi omega-6 pada fermentasi dengan menggunakan

medium komplek skala pilot plan 75 L pada jam ke 18 berdasarkan gambar Kromatogram

di bawah ini.

Diperoleh retention time : 5,37 dan luas area : 118.898 sehingga diperoleh konsentrasi

omega-6 sebesar : (118.898 – 114,4) / (487,7) * (1) = 1.034, 33 ppm.

y = 114,4x + 487,7R² = 0,999

0

10.000

20.000

30.000

40.000

50.000

60.000

70.000

0 100 200 300 400 500 600

Luas

Are

a

Konsentrasi (mg/L)

5,37

; 11

8.89

8

105

Lampiran 3. Analisa Kadar Glukosa dan Asam Laktat Metode HPLC

Kondisi HPLC

Kolom : Aminex HPX-87H volume injek : 10 µl fase gerak : 0.008 N H2SO4 Kecepatan alir : 1 ml/menit Temperature detektor : 35°C Temperature kolom : 35°C Detector : Refractive Index (RI)

Pembuatan Kurva Standar Gula Reduksi

Standar glukosa sebanyak 0,0250 gr ditimbang kemudian dilarutkan dengan fase

gerak sebanyak 10 ml dengan labu takar. Larutan disaring dengan kertas membran millipore

0,45 µm. Larutan tersebut adalah larutan standar glukosa stok dengan konsentrasi 0,25 %.

Dibuat pengenceran dari larutan stok dengan memipet 200 µl, 400 µl, 600µl, 800 µl dan

melarutkan fase gerak sampai volume 1 ml. Larutan deret standar yang telah dibuat

kemudian diinjek kedalam alat HPLC.

Pembuatan Kurva Standar Asam Laktat

Dipipet sebanyak 200 µl larutan standar asam laktat 10 % kemudian diencerkan

dengan fase gerak sampai volume 10 ml. Larutan tersebut adalah larutan standar stok 0,2 %.

Dibuat pengenceran dari larutan stok dengan memipet 200 µl, 400 µl, 600µl, 800 µl dan

dIlarutkan fase gerak sampai volume 1 ml. Larutan deret standar yang telah dibuat

kemudian diinjek kedalam alat HPLC.

Preparasi Sampel

Sampel disentrifugasi dengan kecepatan 400 rpm selama 15 menit kemudian

supernatan disaring dengan kertas membran millipore 0,45 µm. Larutan sampel diencerkan

sebanyak 10x dengan fase gerak. Larutan sampel kemudian diinjek kedalam alat HPLC.

106

Kurva standar HPLC analitik untuk penentuan konsentrasi Glukosa

Untuk menentukan konsentrasi asam laktat maka dihitung berdasarkan kurva standar yaitu

dengan pendekatan persamaan regresi Y :288,9 x - 4128.

Sebagai contoh perhitungan konsentrasi asam laktat pada fermentasi dengan menggunakan


di bawah ini.

Diperoleh retention time : 5.716 dan luas area : 541.790 sehingga diperoleh konsentrasi

glukosa sebesar : 1,89 %.

Name Migration Time

Area Kons. (%)

Sample Glukosa Jam ke

5.716 541.790 1,89

Name Migration Time

Area

Standar glukosa 0,15%

5.741 441.943

Y = 288,9x - 4128R² = 0,999

-100.000

0

100.000

200.000

300.000

400.000

500.000

600.000

700.000

800.000

0 500 1.000 1.500 2.000 2.500 3.000

Luas

Are

a

Konsentrasi Standar Glukosa (ppm)

MV

-20.00

0.00

20.00

40.00

60.00

Minutes1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00

5.74

1

5,74

1

MV

-20.00

-10.00

0.00

10.00

20.00

30.00

40.00

50.00

60.00

70.00

Minutes1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00

4.08

5

5.11

15.

716

8.14

2

9.71

5

5.71

6

107

Kurva standar HPLC analitik untuk penentuan konsentrasi Asam Laktat

Untuk menentukan konsentrasi asam laktat maka dihitung berdasarkan kurva standar yaitu

dengan pendekatan persamaan regresi Y :187,6 x + 12,18.

Sebagai contoh perhitungan konsentrasi asam laktat pada fermentasi dengan menggunakan


di bawah ini.

Diperoleh retention time : 8,142 dan luas area : 250.819 sehingga diperoleh konsentrasi

asam laktat sebesar : (Luas area – slope )/ (Intersep) x (faktor pengenceran) = 1,34 %.

Name Migration Time

Area

Standar Asam laktat 0,08%

7.815 152497

Name Migration Time

Area Kons. (%)

Asam laktat

8.142 250819 1.34

Y = 187,6x + 12,18R² = 0,999

0

50.000

100.000

150.000

200.000

250.000

300.000

350.000

400.000

0 500 1.000 1.500 2.000 2.500

Luas

Are

a

Konsentrasi Standar Asam Laktat (ppm)

MV

-20.00

0.00

20.00

40.00

60.00

Minutes1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00

7.81

57,81

5

MV

-20.00

-10.00

0.00

10.00

20.00

30.00

40.00

50.00

60.00

70.00

Minutes1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00

4.08

5

5.11

15.

716

8.14

2

9.71

5

8.14

2

108

Lampiran 4. Peremajaan dan pembuatan starter. Peremajaan galur Lactobacillus sp. dan L. bulgaricus FNCC41 (Fardiaz, 1989). Disiapkan kultur liofilisasi Lactobacillus sp. , Lactobacillus bulgaricus FNCC41 dan

media MRS agar cawan dan miring steril. Kultur liofilisasi disegarkan pada MRS agar

cawan dengan dilakukan pengenceran lebih dulu hingga 103. Dua pengenceran terakhir

dispread pada permukaan agar cawan, kemudian diinkubasi 2 x 24 jam suhu 37 °C. Koloni

tunggal yang tumbuh diremajakan kembali dengan mengambil 1 ose koloni dan digoreskan

pada MRS agar miring secara strik. Kemudian diinkubasi pada suhu 37 °C selama 1 x 24

jam. Peremajaan dilakukan pada MRS Broth selama 1 x 24 jam suhu 37 °C, sebelum

digunakan sebagai inokulum.

Pembuatan starter Lactobacillus sp. (Modifikasi Sulandari, dkk, 2001).

Susu segar steril sebanyak 50 ml ditambah laktosa monohydrat sebanyak 3% dari

volume susu, dihomogenkan dan dipasteurisasi pada suhu 80 °C selama 5 menit. Kemudian

didinginkan hingga suhu 37 - 40 °C dan diinokulasikan dengan Lactobacillus sp JR64

sebanyak 1% dari volume susu (atau 0,5 ml inokulum). Selanjutnya diinkubasikan pada

suhu 37 ºC hingga pertumbuhan bakteri berada pada fase log (18 - 24 jam). Demikian juga

untuk pembuatan stater Lactobacillus bulgaricus FNCC41.

Lampiran 5. Prosedur analisis dan pengujian sample fermentasi

Penghitungan jumlah sel bakteri secara SPC (Standar Plate Count) (Fardiaz, 1989)

Diambil 0,1 ml sampel perlakuan dan dibuat seri pengenceran menggunakan

eppendorf dengan penambahan air pepton 0,9 ml. Banyaknya pengenceran yang dilakukan

disesuaikan dengan perkiraan jumlah sel yang mungkin tumbuh. Pengenceran terakhir

diplating secara spread plate pada MRS agar, kemudian diinkubasikan pada suhu 37 °C

selama 2 x 24 jam. Dihitung koloni yang tumbuh dengan colony counter dan data yang

diperoleh dihitung secara SPC.

109

Pengukuran pH (Fardiaz, 1989)

Kalibrasi pH Meter

Elektroda dimasukkan ke dalam buffer pH 7, lalu ditekan tombol cal. Ditunggu

hingga muncul ‘ready CFM’ pada layer pH meter. Lalu tekan tombol CFM, dilayar akan

muncul pH 7. Kemudian elektroda dimasukan ke dalam buffer pH 4,02. Ditunggu hingga

muncul ‘ready CFM’ pada layer pH meter. Lalu tekan tombol CFM, dilayar akan muncul

pH 4,02. pH meter siap digunakan. Setelah dikalibrasi dengan larutan buffer standar,

elektroda-elektroda harus dicuci bersih dengan akuades, kemudian bilas beberapa kali

dengan larutan yang akan diperiksa sebelum pembacaan pH.

Pengukuran pH

Diambil sampel dari media fermentasi sebanyak 5 ml secara aseptis. pH meter

digital dihidupkan, ujung elektroda dibersihkan dengan akuades dan dimasukan ke dalam

sampel. Angka yang terbaca pada alat adalah besarnya pH yang terukur.

Pengukuran kadar protein metode Kjeldahl

Pembakuan HCl 0,05

Natrium karbonat (Na2CO3) anhidris yang telah dikeringkan pada 105 ºC, ditimbang

sebanyak 0,200 g dan dimasukkan ke dalam labu ukur 100 ml, kemudian diencerkan dengan

akuades sampai batas. Sebanyak 10 ml larutan dipipet dan dimasukkan ke dalam

erlenmeyer, lalu ditambahkan 3 tetes indikator metilen merah, kemudian dititrasi dengan

HCl 0,05 N sampai larutan menjadi kuning. Normalitas HCl dihitung dengan rumus:

V1N1=V2N2

Penentuan kadar protein metode Kjeldahl

Sampel ditimbang sebanyak 1 g dalam tabung destruksi, ditambahkan 1 butir

selenium tablet sebagai katalis dan 10 ml H2SO4 pekat. Kemudian didestruksi selama 2 jam

hingga sampel berwarna jernih. Selanjutnya didestilasi dan uapnya ditampung dalam

erlenmeyer berisi 25 ml asam borat 4 %. Dilakukan titrasi dengan HCl 0,05 N (yang sudah

dibakukan) hingga titik akhir (abu-abu). Dihitung ml HCl 0,05 N yang digunakan untuk

titrasi dengan rumus :

110

Kadar N total = (Vs-Vb) x NHCl x14,01 x 100 % Berat contoh (mg) Vs = volume HCl yang digunakan pada titrasi sampel

Vb = volume HCL yang digunakan pada titrasi blangko

NHCl = normalitas HCl

Kadar Protein total = N total x f

f = faktor konversi untuk protein dari makanan (6,38)

Lampiran 6. Pembuatan krem probiotik (Modifikasi Susilorini, 2006)

Tahapan proses pembuatan krim probiotik meliputi tahapan formulasi bahan dan

pencampuran. Formulasi bahan dilakukan dengan mencampurkan butter, icing sugar dan

Yogurt probiotik dengan komposisi perlakuan seperti yang tertera pada Tabel berikut.

Kemudian dilakukan pencampuran menggunakan mixer selama 10 menit. Untuk lebih

jelasnya tahapan pembuatan krim dapat dilihat pada Gambar di bawah ini.

Butter dan gula dicampur, lalu diaduk hingga rata. Kemudian dimasukkan kaldu

fermentasi dan diaduk dengan menggunakan mixer hingga tercampur sempurna.

Selanjutnya dihitung jumlah sel BAL pada hari ke-0, 7, 14, 21, 28. Kemudian diambil

formulasi yang memiliki jumlah sel BAL paling banyak, selanjutnya dianalisis kadar asam

laktat, gula reduksi, protein dan asam linoleat pada hari ke-0, 7, 21, 14, 28.

Formula Krem Komposisi (gr) Butter Icing sugar Probiotik

A 10 20 15 B 20 20 15 C 30 20 15 D 40 20 15 E 50 20 15

Kontrol cair 0 0 15

111

Butter, icing sugar

Butter, icing sugar

Probiotik

Krem probiotik Uji viabilitas

Krem probiotik Uji viabilitas

Lampiran 7. Pengujian asimilasi kolesterol

Uji asimilasi kolesterol menggunakan prosedur seperti yang dilakukan Usman dan

Hosono (1999). Pada prosedur tersebut konsentrasi kolesterol ditentukan dengan

menggunakan reagen 0-Ftalaldehida (0,5 mg 0-ftalaldehida tiap ml asam asetat glasial).

Untuk uji kemampuan mangasimilasi kolesterol, MRSB yang mengandung 2%

natrium tioglikolat, 0,3% oxgal dan kolesterol murni sebanyak 0,1% (b/v) dilakukan

sterilisasi 121oC 15 menit. Sebanyak 10 ml campuran tersebut diinokulasi dengan 100 µl

sampel broth fermentasi dari galur Lactobacillus sp JR64, sedangkan untuk kontrol tidak

dilakukan inokulasi dengan broth fermentasi kemudian dilakukan inkubasi pada suhu 37oC

selama 20 jam. Selanjutnya sel dipisahkan dari larutan dengan sentrifugasi selama 10 menit

pada 12.000 g, suhu 4oC. Konsentrasi kolesterol supernatan diukur dengan metode OF

(0-Ftalaldehida) sebagai berikut.

Supernatan sebanyak 0,5 ml diletakkan dalam tabung reaksi (dibuat duplo untuk

masing-masing sampel). Selanjutnya ke dalam tabung tersebut ditambahkan 3 ml etanol

95%, dikocok ditambah 2 ml KOH 50% dan dikocok kembali. Tabung dipanaskan di atas

pemanas air bersuhu 60% selama 10 menit, dibiarkan sampai suhu kamar dan ditambah 5

ml heksan. Setelah penambahan heksan tabung divortex selama 20 detik, selanjutnya

ditambah dengan 3 ml akuades dan kembali dikocok. Tabung dibiarkan selama 15 menit

pada suhu kamar supaya terjadi pemisahan.

Penyimpanan Suhu refrigerator

Pencampuran dg mixer, 10 mnt

112

Lapisan heksan sebanyak 2,5 ml yang terpisah dipindahkan ke dalam tabung reaksi

lain, kemudian dilakukan evaporasi ke dalam masing-masing tabung ditambahkan 4 ml

reagen 0-Ftalaldehida. Tabung dibiarkan 10 menit pada suhu kamar kemudian ditambah 2

ml asam sulfat pekat (dipipet secara perlahan). Selanjutnya isi tabung dikocok segera

menggunakan vortex dan dibiarkan kembali selama 10 menit pada suhu kamar. Setelah itu

larutan dibaca absorbansinya menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 550

nm menggunakan reagen sebagai blanko.

Kurva standar dibuat dengan prosedur yang sama tetapi sampel digantikan dengan

kolesterol (standar 99% untuk kromatografi, Sigma). Konsentrasi kolesterol untuk kurva

standar adalah 0, 10, 20, 30, 40, dan 50. Selisih konsentrasi kolesterol yang terdeteksi pada

sampel broth fermentasi dengan kontrol dinyatakan sebagai kolesterol yang diasimilasi oleh

asam laktat dalam µ/ml.

Lampiran 8. Berbagai perlakuan terhadap hewan coba tikus putih

Penyiapan asupan konsentrasi sel dan kaldu fermentasi

Penyiapan konsentrasi sel dilakukan dengan cara sentrifugasi broth fermentasi pada

7000 rpm selama 10 menit pada suhu 4°C. Supernatan dibuang, sel dicuci dengan

larutan Bufer Fosfat pH 7, kemudian disentrifugasi sekali lagi dan dicuci lagi dengan

larutan Bufer Fosfat. Selanjutnya ke dalam endapan sel ditambahkan susu skim 10% (10

ml susu skim 10% untuk setiap endapan sel yang dihasilkan dari 1.000 ml media

kultivasi) dan dikocok hingga homogen. Mengingat probiotik harus dikonsumsi dalam

keadaan hidup, maka kondisi penyimpanan krem biskuit probiotik perlu mendapat

perhatian untuk mempertahankan viabilitasnya.

Untuk asupan kaldu, broth hasil fermentasi hanya ditambahkan bubuk susu skim agar

menjadi padat.

113

Asupan Perlakuan Kelompok Tikus

Kelompok

Perlakuan

Taraf Perlakuan

A Lima ekor diberi pakan standar sebanyak 20 g/hari dan dicekok

akuades 60 mg/kg BB/hari (rata-rata 2 ml).

B Lima ekor diberi pakan kolesterol sebanyak 20 g/hari dan dicekok PTU

(propil tiourasil) 60 mg/kg BB/hari dalam larutan CMCNa 0,5 %.

C

Lima ekor dengan diberi pakan kolesterol 20 g/hari, dicekok PTU 60

mg/kg BB/hari dalam larutan CMCNa 0,5 % dan sampel broth

probiotik Lactobacillus sp. 108 CFU.

D


mg/kg BB/hari dalam larutan CMC Na 0,5 % sampel broth probiotik

Lactobacillus bulgaricus FNCC41 108 CFU.

E


mg/kg BB/hari dalam larutan CMCNa 0,5 % dan sampel sel

Lactobacillus sp. 108 CFU.

F


mg/kg BB/hari dalam larutan CMC Na 0,5 % sampel sel Lactobacillus

bulgaricus FNCC41 108 CFU.

Lampiran 9. Metoda pengukuran kadar kolesterol total, trigliserida, HDL dan LDL

Metode pengukuran kolesterol dan trigliserida dianalisis dengan metode CHOD-

PAP (Cholesterol Oxydase Phenol Amino Phenazon).

Dipipet ke kuvet Blanko sampel/standar Sampel/standar - 10 µl Air Destilata 10 µl - Reagen 1000 μl 1000 µl

Blanko atau sampel dicampur diinkubasi selama 20 menit pada suhu ruang, lakukan

pengukuran absorbannya pada panjang gelombang 546 nm.

114

Pengukuran trigliserida menggunakan metode GPO (Glycerol Phosphat Oxydase).

Kadar High Density Lipoprotein (HDL) Kolesterol ditentukan dengan prinsip

pengendapan lipoprotein yang berdensitas rendah. Sebanyak 200 µl sampel/standard

ditambahkan pada 500 µl larutan pengendap (Posphotungstic acid dan Magnesium chloride)

kemudian didiamkan selama 15 menit lalu disentrifuse dengan kecepatan 2500 rpm selama

20 menit pada suhu ruang. Sebanyak 0,1 ml supernatan (filtrat HDL) diambil kemudian

ditambah 1000 µl reagen kolesterol, dicampur, didiamkan 15 menit pada suhu ruang

kemudian diukur absorbannya dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 546 nm.

Berdasarkan prosedur Randox kadar LDL dihitung berdasarkan rumus :

LDL = Kolesterol total – Trigliserida - HDL

5

Analisa proksimat penentuan kadar lemak dalam feses

Analisa proksimat dilakukan untuk mengetahui lemak yang diabsorpsi dan

diekskresikan melalui feses. Feses tikus diambil setelah 35 hari perlakuan dan dikeringkan

dalam oven ± 400 C, kemudian setelah kering digerus dan dilakukan analisis serta dihitung

berdasarkan rumus:

Kadar lemak pakan kolesterol - kadar lemak pada feses

Membersihkan labu penyari dan mengeringkan dalam oven selama 1 jam pada suhu

100° C - 105°C, kemudian didinginkan dalam eksikator selama 20 menit, selanjutnya

ditimbang (a = gram). Mengeringkan sampel dalam oven 40° C, digerus dan ditimbang = X

(gram). Menyiapkan selongsong yang dibuat dari kertas saring, pada bagian bawahnya

ditutup dengan kapas yang tidak berlemak. Sampel dimasukkan dalam tabung ekstraksi

soxhlet dan diberi pemberat, lalu dipasang labu penyari di bawahnya. Ke dalam tabung

ekstraksi dimasukkan solven petrolium benzen secukupnya, dipasang pada alat destilasi

soxhlet. Kemudian air pendingin dialirkan dan dipanaskan pada suhu 60°C di atas penangas

air selama 4 jam. Setelah penyarian selesai dilakukan destilasi untuk mengeluarkan pelarut

agar terpisah dari lemak, di atas penangas pada suhu 100°C. Labu penyari yang berisi lemak

dikeringkan dalam oven pada suhu 100°C - 105°C selama 1 jam . Kemudian didinginkan

dalam eksikator selama 20 menit dan ditimbang sampai berat konstan (b= gram).

115

Lampiran 10. Hasil Pengujian kemampuan tumbuh Lactobacillus sp. pada berbagai konsentrasi garam empedu.

Lampiran 11. Hasil Pengujian kemampuan tumbuh Lactobacillus sp. pada pH Rendah

Lampiran 12. Hasil penentuan urutan basa (sekuensing) fragmen 16S rDNA dan

kedekatan (homology) isolat genus Lactobacillus sp. JR64 yang dibandingkan dengan gen spesies lainnya.

GCTCCGTAGAATATCCGGCCAATACACATCTTGGACTGCATGGTCCGAGCTGAGAAGTTGCCTCGCTTATTCCACTTTGAATGGTCCCGCGGCGTATTAGTCTAGATGTGGGTAACGGCTCACCATGGCAATGATACGTAGCCGACCTGAGAGGGTAATCGGCCCACCATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTTACCGGGAGGCCAGCAGTAGGGAATTCTTCCACAATGGACGAAAGTCTGATGGAGCCACGCCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTGGCCTCGTAAAACTTCTGTTGTAAAGAAGAACCATATTTGAGGAGTAACTGTTCAGGTATGGCCGGTATTTACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCTTGGGCTCAACCGAAGAAGTGCATCGGAAACTGGGAAACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGTATGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATACCGTAAACGATGAATGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATACTATGCAAATCTAAGAGATTAGACGTTCCCTTCGGGGACATGGATACAGGTGGTGCATGGTTTCGTCAGCTTTCGTGGTCTCCCAACGTTA

No Sumber Kode

isolat

Sarter Kemampuan tumbuh pada pH rendah

pH 3,5 pH 3,0 pH 2,5 pH 2,0

1 Buah Mengkudu Matang

JR17

JR10

1,26 x 108

7,60 x 106

2,47 x 104

2,18 x 106

1,11 x 103

9,80 x 104

1,68 x 102

4,80 x 103

3,50 x 101

7,50 x 101

2 Badeg

Pace

JR64

JR19

JR92

8,00 x 108

1,32 x 109

1,76 x 109

2,80 x 107

1,08 x 107

7,20 x 106

2,20 x 106

8,00 x 106

1,92 x 106

1,10 x 105

1,20 x 103

6,00 x 102

1,80 x 103

4,60 x 101

5,50 x 101

3 Kontrol 9,50 x 108 1,30 x 107 1,70 x 106 8,00 x 105 9,80 x 103

0,50% 1% 5% 10%JR17 8,1 4,2 3,1 2,2 1,2JR10 6,9 6,1 5,8 3,6 1,3JR64 8,9 7,1 6,1 4,0 3,1JR19 9,1 6,0 5,8 3,1 1,4JR92 9,2 6,1 5,3 2,8 1,4

FNCC419,0 7,2 6,2 5,9 3,8

Konsentrasi Garam EmpeduIsolat Starter

116

Keterangan : • Accesion No : Nomor urut • Max score : Nilai kesamaan (identik) pasang basa • Total Score : Nilai keseluruhan pasang basa

• Query coverage : Persentase keseluruhan analisis • E value : Persentase kesalahan dalam proses • Max Identify : Persentase keakuratan proses identifikasi

Lampiran 13. Hasil BLAST Urutan Fragmen 16S rDNA isolat Lactobacillus sp JR64

terhadap data base 16S rDNA

117

Lampiran 14. Lactobacillus plantarum strain UK-3 16S ribosomal RNA gene, partial

sequence.

GenBank: JF266589.1 LOCUS JF266589 1017 bp DNA linear BCT 22-MAR-2011 DEFINITION Lactobacillus plantarum strain UK-3 16S ribosomal RNA gene, partial sequence. ACCESSION JF266589 VERSION JF266589.1 GI:326378236 KEYWORDS . SOURCE Lactobacillus plantarum ORGANISM Lactobacillus plantarum Bacteria; Firmicutes; Lactobacillales; Lactobacillaceae; Lactobacillus. REFERENCE 1 (bases 1 to 1017) AUTHORS Oh,K.H. and Um,S.J. TITLE Antibacterial Effects of Lactobacillus plantarum UK-3 Isolated from Female Genitalia JOURNAL Unpublished REFERENCE 2 (bases 1 to 1017) AUTHORS Oh,K.H. and Um,S.J. TITLE Direct Submission JOURNAL Submitted (26-JAN-2011) Biotechnology, Korea Soonchunhyang University, Sinchang-Myeon, Asan-Si, Chungcheongnam-Do, Chungnam 336-745, Korea FEATURES Location/Qualifiers source 1..1017 /organism="Lactobacillus plantarum" /mol_type="genomic DNA" /strain="UK-3" /isolation_source="female genitalia" /db_xref="taxon:1590" /note="PCR_primers=fwd_name: 8F, rev_name: 1492R" rRNA <1..>1017 /product="16S ribosomal RNA" ORIGIN 1 tatctgagag taactgttca ggtatgacgg tatttaacca gaaagcacgg ctaactacgt 61 gccagcagcc gcggtaatac gtaggtggca agcgtgtccg gatttattgg gcgtaaagcg 121 agcgcaggcg gttttttaag tctgatgtga aagccttcgg ctcaaccgaa gaagtgcatc 181 ggaaactggg aaacttgagt gcagaagagg acagtggaac tccatgtgta gcggtgaaat 241 gcgtagatat atggaagaac accagtggcg aaggcggctg tctggtctgt aactgacgct 301 gaggctcgaa agtatgggta gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca taccgtaaac 361 gatgaatgct aagtgttgga gggtttccgc ccttcagtgc tgcagctaac gcattaagca 421 ttccgcctgg ggagtacggc cgcaaggctg aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac 481 aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag ctacgcgaag aaccttacca ggtcttgaca 541 tactatgcaa atctaagaga ttagacgttc ccttcgggga catggataca ggtggtgcat 601 ggttgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt 661 attatcagtt gccagcatta agttgggcac tctggtgaga ctgccggtga caaaccggag 721 gaaggtgggg atgacgtcaa atcatcatgc cccttatgac ctgggctaca cacgtgctac 781 aatggatggt acaacgagtt gcgaactcgc gagagtaagc taatctctta aagccattct 841 cagttcggat tgtaggctgc aactcgccta catgaagtcg gaatcgctag taatcgcgga 901 tcagcatgcc gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc acaccatgag 961 agtttgtaac acccaaagtc ggtggggtaa ccttttagga accagccgcc taagtga

118

Lampiran 15. Kurva hubungan berat sel kering dengan jumlah sel (log cfu/ml) pada

fermentasi skala laboratorium.

Lampiran 16. Kurva hubungan berat sel kering dengan jumlah sel (Log cfu/ml) pada

fermentasi skala pilot plan 75 L pada substrat glukosa 20 g/l.

Y20 = 3,707x + 5,157R² = 0,898

Y30 = 3,530x + 4,300R² = 0,866

Y40 = 3,050x + 5,292R² = 0,893

0

3

6

9

12

15

18

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0

Jum

lah

Sel (

Log

cfu

/ml)

Berat Sel Kering (gr)

y = 3,583x + 5,280R² = 0,896

0

3

6

9

12

15

18

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0

Jum

lah Se

l (Lo

g cfu

/ml)

Berat Sel Kering (gram)

119

Lampiran 17. Data hasil pengukuran berat badan tikus

0 7 14 21 28 35

A1 257,2 241,0 236,0 233,6 238,6 231,2

A2 254,0 235,2 233,2 232,8 248,2 239,6

A3 247,8 226,2 225,8 223,6 237,4 229,6

A4 248,2 220,0 222,6 220,6 237,0 229,0

A5 257,0 239,0 231,6 229,2 234,6 227,4Rata-rata 252,8 232,3 229,8 228,0 239,2 231,4

B1 261,0 234,8 231,8 230,2 234,6 224,4

B2 262,2 249,8 249,4 255,4 260,8 245,0

B3 261,4 227,4 214,2 218,4 223,6 206,8

B4 264,4 240,6 231,8 229,0 231,4 220,8

B5 250,4 222,6 222,8 219,0 271,4 202,6

Rata-rata 259,9 235,0 230,0 230,4 244,4 219,9

C1 272,8 250,2 244,5 237,5 240,1 228,0

C2 233,1 220,2 206,5 202,0 206,3 194,0

C3 263,1 196,5 226,0 223,5 228,5 220,4

C4 282,5 243,0 241,0 235,5 230,1 223,8

C5 252,8 231,2 221,6 218,0 219,2 216,2

Rata-rata 260,9 228,2 227,9 223,3 224,8 216,5

D1 252,8 231,2 221,6 218,0 219,2 216,2

D2 238,6 225,0 205,6 207,0 187,2 180,4

D3 241,2 230,8 216,8 216,8 192,4 192,2

D4 235,2 215,0 207,4 208,2 195,8 190,8

D5 262,2 245,4 231,6 234,4 220,0 216,0

Rata-rata 246,0 229,5 216,6 216,9 202,9 199,1

E1 273,0 250,0 244,6 237,6 240,2 227,8

E2 233,0 220,8 206,6 202,0 206,4 193,8

E3 263,2 196,6 225,6 223,0 228,8 212,4

E4 282,8 242,8 240,8 235,6 230,0 223,8

E5 297,2 256,8 241,6 245,0 230,6 230,2

Rata-rata 269,8 233,4 231,8 228,6 227,2 217,6

F1 297,2 256,8 241,6 245,0 230,6 216,4

F2 238,6 225,0 205,6 207,0 187,2 184,4

F3 241,2 230,8 216,8 216,8 192,4 216,0

F4 235,2 215,0 207,4 208,2 195,8 199,6

F5 262,2 245,4 231,6 234,4 220,0 200,4Rata-rata 254,9 234,6 220,6 222,3 205,2 203,4

Kelompok UlanganHari ke-

Bro

th L.

plantar

um JR

64Kon

trol P

ositif

Kon

trol N

egatif

Sel L

. Bulga

ricus

FNCC41

Sel L

. plan

taru

m J

R64

Bro

th L.

Bulga

ricus

FNCC41

120

Lampiran 18. Data hasil pengukuran konsumsi pakan

0 7 14 21 28 35

A1 19,00 18,17 19,00 18,16 18,96 18,20

A2 15,97 17,68 19,08 19,18 19,88 19,40

A3 18,23 17,71 19,00 18,17 19,64 19,22

A4 14,00 17,28 19,06 20,00 18,84 18,44

A5 19,20 16,54 19,04 19,08 17,98 20,00

Rata-rata 17,28 17,48 19,04 18,92 19,06 19,05

B1 9,34 13,43 13,86 11,11 12,40 11,86

B2 8,03 12,17 18,28 12,17 10,17 14,17

B3 7,37 10,17 14,97 10,40 12,57 12,88

B4 9,77 10,77 14,28 10,46 11,54 14,91

B5 8,74 13,80 12,57 9,74 12,34 12,77

Rata-rata 8,65 12,07 14,79 10,78 11,80 13,32

C1 11,20 11,36 13,34 10,91 11,82 13,51

C2 11,68 7,44 11,83 9,66 11,74 12,88

C3 6,11 10,00 13,63 10,46 12,71 12,22

C4 7,46 7,24 11,40 10,23 13,68 14,17

C5 11,08 8,88 13,82 12,28 14,34 13,08

Rata-rata 9,51 8,98 12,80 10,71 12,86 13,17

D1 14,88 19,47 12,11 12,71 14,54 14,68

D2 13,05 16,14 11,74 12,71 11,74 13,20

D3 11,74 13,74 10,34 12,84 9,68 12,84

D4 10,88 16,31 11,00 17,04 11,54 17,04

D5 11,54 16,43 13,08 13,68 12,65 13,68

Rata-rata 12,42 16,42 11,65 13,80 12,03 14,29

E1 11,60 13,31 11,37 15,11 11,82 13,51

E2 14,34 15,02 8,68 11,74 11,74 12,88

E3 10,17 14,60 15,28 13,91 12,71 12,22

E4 15,17 13,82 14,65 14,62 13,68 14,17

E5 12,25 11,68 11,34 13,45 14,34 13,08

Rata-rata 12,71 13,69 12,26 13,77 12,86 13,17

F1 12,51 12,94 12,11 12,71 14,54 15,11

F2 12,22 13,81 11,74 12,71 11,74 11,74

F3 9,85 12,57 10,34 12,84 9,68 13,91

F4 11,45 12,17 11,00 17,04 11,54 14,62

F5 13,11 14,17 13,08 13,68 12,65 13,45

Rata-rata 11,83 13,13 11,65 13,80 12,03 13,77


Kon

trol N

egatif

Sel L

. Bulga

ricus

FNCC41

Broth

L. B

ulga

ricus

FNCC41

Sel L

. plan

taru

m J

R64

Broth

L. plantar

um JR

64Kon

trol P

ositif

121

Lampiran 19. Data hasil pengukuran kolesterol total serum darah tikus

0 7 14 21 28 35

A1 66,67 71,93 69,15 69,15 69,42 72,65

A2 64,24 87,89 85,08 76,67 71,93 73,27

A3 69,09 76,32 78,31 76,42 75,18 76,23

A4 78,49 70,18 68,71 66,91 68,67 75,07

A5 68,79 67,02 65,76 71,40 75,44 74,04

Rata-rata 69,46 74,67 73,40 72,11 72,13 74,25

B1 64,85 69,75 89,47 66,10 82,46 96,80

B2 73,25 82,56 81,93 82,03 84,21 97,77

B3 89,39 81,85 75,44 94,07 86,32 95,24

B4 83,03 92,53 82,03 86,10 90,18 96,50

B5 73,64 97,58 87,19 93,73 95,44 96,50

Rata-rata 76,83 84,85 83,21 84,41 87,72 96,56

C1 84,75 99,57 96,49 91,65 76,12 80,12

C2 90,68 98,19 92,63 97,48 71,17 85,09

C3 68,79 71,10 72,52 67,02 75,76 74,40

C4 95,44 96,67 99,42 98,86 93,22 74,70

C5 64,85 66,10 82,46 96,80 85,96 82,46

Rata-rata 80,90 86,33 88,70 90,36 80,45 79,35

D1 69,53 95,65 93,08 76,67 69,35 69,15

D2 74,68 98,55 92,52 95,76 81,31 85,08

D3 88,67 90,82 99,63 94,95 84,74 78,31

D4 87,54 92,37 94,95 84,69 84,95 68,71

D5 96,95 94,06 86,58 84,69 82,35 65,76

Rata-rata 83,47 94,29 93,35 87,35 80,54 73,40

E1 75,30 88,90 116,50 98,77 86,32 82,51

E2 83,33 105,42 121,36 101,75 95,96 88,30

E3 87,58 99,57 112,62 103,25 86,84 77,89

E4 88,30 99,62 106,80 99,25 87,72 87,89

E5 84,85 98,29 119,42 112,81 102,26 98,93

Rata-rata 83,87 98,36 115,34 103,17 91,82 87,10

F1 74,85 118,15 90,29 85,09 73,68 71,06

F2 69,70 79,72 119,42 97,37 86,84 85,20

F3 70,91 87,54 125,24 101,75 98,25 93,27

F4 83,64 105,34 133,98 114,04 109,65 107,62

F5 73,64 78,29 122,33 105,26 100,88 101,35

Rata-rata 74,55 93,81 118,25 100,70 93,86 91,70


Kon

trol P

ositi

fK

ontro

l Neg

atif

Bro

th L.

Bul

garic

us F

NC

C41

Bro

th L.

pla

ntar

um JR

64Se

l L. B

ulga

ricus

FN

CC

41Se

l L.

plan

taru

m J

R64

122

Lampiran 20. Data hasil pengukuran Trigliserida serum darah tikus

0 7 14 21 28 35

A1 75,00 48,46 67,47 44,92 58,88 42,17

A2 71,25 48,85 68,81 40,39 40,61 39,17

A3 76,25 50,00 74,69 61,45 42,64 42,17

A4 74,25 40,39 60,23 46,99 35,53 34,94

A5 78,75 43,27 45,75 48,19 42,64 49,88

Rata-rata 75,10 46,19 63,39 48,39 44,06 41,67

B1 85,00 83,65 74,07 68,46 71,08 69,16

B2 84,35 77,89 68,42 63,65 65,75 62,17

B3 73,75 71,15 64,41 57,69 59,27 70,72

B4 81,25 79,00 66,16 63,27 62,51 62,65

B5 72,50 69,62 70,06 67,69 68,10 69,88

Rata-rata 79,37 76,26 68,62 64,15 65,34 66,92

C1 28,92 33,87 30,51 30,77 46,15 33,52

C2 30,17 43,27 67,80 35,17 54,81 38,55

C3 58,75 48,46 46,05 43,27 35,75 48,19

C4 46,93 78,85 55,37 46,93 26,51 47,50

C5 85,00 48,46 71,08 49,16 65,92 62,94

Rata-rata 49,95 50,58 54,16 41,06 45,83 46,14

D1 68,96 51,06 51,25 54,55 47,62 67,47

D2 48,27 32,62 43,75 38,79 48,28 68,81

D3 102,07 58,16 47,50 31,52 52,41 74,69

D4 68,96 73,76 51,25 43,64 56,55 60,23

D5 59,31 63,83 50,00 38,79 55,17 45,75

Rata-rata 69,51 55,89 48,75 41,46 52,01 63,39

E1 82,50 76,93 61,81 38,55 36,87 35,53

E2 87,50 83,65 57,63 34,94 40,22 30,46

E3 93,75 50,04 58,76 55,42 43,58 40,61

E4 88,24 69,04 63,28 32,53 44,69 35,53

E5 78,75 45,35 52,94 62,65 35,75 45,69

Rata-rata 86,15 65,00 58,88 44,82 40,22 37,56

F1 62,50 68,31 45,81 27,71 46,93 35,53

F2 58,75 70,19 56,50 57,83 35,75 33,50

F3 50,00 83,66 75,88 56,63 58,10 50,76

F4 61,25 57,69 63,28 33,73 72,63 49,75

F5 57,50 55,77 61,02 51,81 33,52 38,58

Rata-rata 58,00 67,12 60,50 45,54 49,39 41,62


Kon

trol P

ositi

fK

ontro

l Neg

atif

Bro

th L.

Bul

garic

us F

NC

C41

Bro

th L.

pla

ntar

um JR

64Se

l L. B

ulga

ricus

FN

CC

41Se

l L.

plan

taru

m J

R64

123

Lampiran 21. Data hasil pengukuran HDL serum darah tikus

0 7 14 21 28 35

A1 47,53 47,11 48,09 52,80 55,88 55,01

A2 45,63 41,70 47,56 55,13 56,66 57,57

A3 45,37 46,13 43,72 50,19 52,57 54,12

A4 43,73 45,87 53,75 52,74 54,74 54,28

A5 44,49 50,17 50,10 51,33 53,12 57,92

Rata-rata 45,35 46,20 48,64 52,44 54,59 55,78

B1 42,97 46,56 45,09 49,89 49,02 48,44

B2 53,99 44,55 52,57 49,35 47,60 42,74

B3 57,79 52,36 55,98 64,08 49,62 54,14

B4 56,27 36,36 40,84 43,10 46,50 49,20

B5 41,06 52,00 41,23 59,76 48,32 49,85

Rata-rata 50,42 46,37 47,14 53,24 48,21 48,87

C1 64,48 52,79 21,72 34,39 53,27 57,79

C2 68,12 46,27 27,96 28,93 54,55 74,52

C3 44,49 54,55 47,18 50,17 56,10 51,33

C4 79,78 60,56 25,27 26,29 62,36 57,45

C5 42,97 49,89 55,02 61,44 67,76 67,44

Rata-rata 59,97 52,81 35,43 40,24 58,81 61,71

D1 42,97 50,77 63,50 59,03 59,27 48,09

D2 53,99 44,89 52,09 44,79 58,55 47,56

D3 57,79 50,46 56,27 44,44 52,73 43,72

D4 56,27 49,85 64,64 55,56 61,82 53,75

D5 41,06 42,41 47,53 55,90 59,64 50,10

Rata-rata 50,42 47,68 56,81 51,94 58,40 48,64

E1 39,92 47,40 50,18 63,02 52,95 65,61

E2 47,53 42,79 74,91 60,97 62,25 63,58

E3 51,71 38,53 72,36 68,49 67,12 71,68

E4 68,44 36,76 62,18 57,92 52,53 53,95

E5 46,01 38,67 69,82 76,14 55,59 75,15Rata-rata 50,72 40,83 65,89 65,31 58,09 65,99

F1 44,87 46,20 78,36 59,02 60,89 62,86

F2 46,39 40,82 59,64 56,83 56,65 64,76

F3 39,16 51,96 71,64 55,01 57,80 67,54

F4 68,06 49,56 60,34 58,67 75,14 65,87

F5 60,08 40,51 59,27 60,15 59,64 62,95

Rata-rata 51,71 45,81 65,85 57,94 62,02 64,80


Kon

trol P

ositi

fK

ontro

l Neg

atif

Bro

th L.

Bul

garic

us F

NC

C41

Bro

th L.

pla

ntar

um JR

64Se

l L. B

ulga

ricus

FN

CC

41Se

l L.

plan

taru

m J

R64

124

Lampiran 22. Data hasil pengukuran LDL serum darah tikus

0 7 14 21 28 35

A1 14,14 15,13 7,57 17,37 11,76 19,21

A2 14,36 26,42 23,76 13,46 17,15 17,87

A3 8,47 20,19 19,65 13,94 14,08 13,68

A4 19,91 16,23 2,91 14,77 16,82 13,80

A5 8,55 8,20 6,51 10,43 10,79 6,14

Rata-rata 13,09 17,23 12,08 13,99 14,12 14,14

B1 4,88 6,47 29,57 2,52 19,22 34,52

B2 2,39 22,43 15,68 19,96 23,46 42,59

B3 16,85 15,26 6,58 18,45 24,84 26,95

B4 10,51 40,37 27,95 30,35 31,17 34,77

B5 18,07 31,66 31,95 20,43 33,49 32,68

Rata-rata 10,54 23,24 22,35 18,34 26,44 34,30

C1 14,48 40,01 63,83 55,95 13,62 15,63

C2 16,53 43,26 55,96 56,67 5,66 2,86

C3 12,55 6,86 16,14 8,20 12,51 13,43

C4 6,27 20,34 62,52 63,74 25,56 7,75

C5 14,88 6,52 13,22 25,53 15,02 12,43

Rata-rata 12,94 23,40 42,33 42,02 14,47 10,42

D1 5,46 34,67 2,92 23,14 9,80 7,57

D2 7,59 47,14 34,92 39,98 13,10 13,76

D3 16,80 0,00 29,18 48,88 21,52 19,65

D4 12,05 27,77 9,80 30,67 11,82 7,91

D5 12,46 38,88 27,16 22,92 11,67 11,51

Rata-rata 10,87 29,69 20,80 33,12 13,58 12,08

E1 18,88 26,11 53,96 28,04 26,00 9,79

E2 18,30 45,90 34,92 33,79 25,67 18,63

E3 17,12 51,03 28,51 23,68 11,00 11,91

E4 12,21 49,05 31,96 34,82 26,25 26,83

E5 13,09 50,55 39,01 24,14 39,52 14,64

Rata-rata 15,92 44,53 37,67 28,89 25,69 16,36

F1 17,48 58,29 32,77 30,53 23,40 21,09

F2 11,56 24,86 48,48 28,97 23,04 13,74

F3 21,75 18,85 38,42 35,41 28,83 15,58

F4 13,33 44,24 50,98 48,62 19,98 31,80

F5 12,06 26,63 50,86 34,75 34,54 30,68

Rata-rata 15,24 34,57 44,30 35,66 25,96 22,58

Kon

trol N

egat

if Kelompok Ulangan

Hari ke-K

ontro

l Pos

itif

Bro

th L.

Bul

garic

us F

NC

C41

Bro

th L

. pla

ntar

um JR

64Se

l L. B

ulga

ricus

FN

CC

41Se

l L.p

lant

arum

JR

64

125

Lampiran 23 : Rancangan peralatan produksi probiotik Lactobacillus plantarum JR64 penghasil omega-6 dan penurun kolesterol.

Bahan Baku Tertimbang

Bioreaktor 37oC

100 rpm 48 jam

Tank Starter

37oC 24 jam

Pemanenan & Formulasi

Packing & Gudang

Unit Pekerjaan Lab

37oC 24 jam

Slant

MRS Agar MRS Broth

Inokulasi (5% Volume Kerja

Bioreaktor

Inokulasi (3% Volume Kerja

Bioreaktor

Persediaan Bahan Baku

126

Lampiran 24. Keluaran sistem simulasi analisis kelayakan investasi probiotik dan omega 6 pada kondisi awal.

SISTEM SIMULASI ANALISIS KELAYAKAN INVESTASI PROBIOTIK & OMEGA-6

Ketik INPUT Black Box

Variabel Harga Bahan Baku Utama

MRSA 1.300.000 Kg MRS Broth 1.350.000 Kg

Laktosa Monohidrat 2.200.000 Kg Jagung 1.000 Kg

Mengkudu 300 Kg Susu Segar 4.000 Kg

Butter 15.000 Kg Gula 6.000 Kg

Harga Produk Probiotik

Harga Probiotik 13.000 Kg Basis Volume Kerja 2.500 Kg/Batch Hari Operasi 300 Hari/Tahun

Silahkan Ketik Angkanya

PARAMETER KEUANGAN INDUSTRI PROBIOTIK OUTPUT

Investasi 7.640.244.620 IDR HPP 11.420 IDR/Kg NPV 1.666.053.869 IDR IRR 20,74% B/C Ratio 1,22 Payback Period 4,44 Tahun Produk 5377,50 Kg/Batch

127

Lampiran 25. Keluaran sistem simulasi analisis kelayakan investasi probiotik dan

omega 6 pada kondisi terjadi kenaikan harga jagung dan mengkudu 100 %.













128

Lampiran 26. Keluaran sistem simulasi analisis kelayakan investasi probiotik

dan omega 6 pada kondisi penurunan produksi 30 persen








Harga Produk Probiotik Harga Probiotik 14.000 Kg Basis Volume Kerja 2.000 Kg/Batch Hari Operasi 300 Hari/Tahun




129

Lampiran 27. Keluaran sistem simulasi analisis kelayakan investasi probiotik dan

omega 6 pada kondisi penurunan harga probiotik













130

Lampiran 28 : Analisis Kelayakan Investasi

Produksi (kg/tahun) 1.613.250 Pendapatan (Rp/kg) 20.488.275.000

Uraian Tahun 0 Tahun 1 Tahun 2 Tahun 3 Tahun 4 Tahun 5 Tahun 6 Tahun 7 Tahun 8 Tahun 9 Tahun 10Arus MasukHasil penjualan produk 0 10.244.137.500 15.366.206.250 20.488.275.000 20.488.275.000 20.488.275.000 20.488.275.000 20.488.275.000 20.488.275.000 20.488.275.000 20.488.275.000 - Nilai sisa aktiva 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 -

Jumlah Arus masuk 0 10.244.137.500 15.366.206.250 20.488.275.000 20.488.275.000 20.488.275.000 20.488.275.000 20.488.275.000 20.488.275.000 20.488.275.000 20.488.275.000 Arus Keluar- Biaya Investasi 7.640.244.620 - 0 0 0 0 0 0 0 0 0- Biaya Produksi 0 8.065.774.546 12.098.661.819 16.131.549.092 16.131.549.092 16.131.549.092 16.131.549.092 16.131.549.092 16.131.549.092 16.131.549.092 16.131.549.092 - Penyusutan 582.484.610 582.484.610 582.484.610 582.484.610 582.484.610 582.484.610 582.484.610 582.484.610 582.484.610 582.484.610

695.262.260 650.137.066 605.011.871 559.886.676 514.761.481 469.636.286 424.511.092 379.385.897 236.428.016 217.372.624 198.317.232 179.261.839 160.206.447

8.648.259.156 12.681.146.429 17.645.723.979 17.581.543.392 17.517.362.804 17.453.182.217 17.389.001.630 17.183.669.988 17.138.544.794 17.093.419.599 1.595.878.344 2.685.059.821 2.842.551.021 2.906.731.608 2.970.912.196 3.035.092.783 3.099.273.370 3.304.605.012 3.349.730.206 3.394.855.401

- Pajak dan lain-lain 0 478.763.503 805.517.946 852.765.306 872.019.483 891.273.659 910.527.835 929.782.011 991.381.503 1.004.919.062 1.018.456.620 Jumlah Arus Keluar 7.640.244.620 9.127.022.659 13.486.664.375 18.498.489.285 18.453.562.874 18.408.636.463 18.363.710.052 18.318.783.641 18.175.051.492 18.143.463.856 18.111.876.219 Arus Kas bersih/tahun (7.640.244.620) 1.117.114.841 1.879.541.875 1.989.785.715 2.034.712.126 2.079.638.537 2.124.564.948 2.169.491.359 2.313.223.508 2.344.811.144 2.376.398.781

Rp1.741.068.724 20,89% 1,23 4,33 Tahun

HPP 11.315

Pay Back Period

Susu Probiotik

NPV DF 15 %IRR

B/C ratio

ANALISIS KELAYAKAN INVESTASI

- cicilan pinjaman investasi ke bank- cicilan pinjaman modal kerja ke bankJumlah Kas Keluar sebelum PajakMargin Sebelum Pajak

Uraian

131

Lampiran 29 : Asumsi data perhitungan neraca masa dan harga peralatan

Asumsi& Data Neraca Bahan&Energi % KeteranganKonversi Jagung Menjadi susu Jagung 35%Konversi Mengkudu Menjadi Juice Mengkudu 55%Konversi Substart menjadi Probiotik 22,20% Data PercobaanPerbandingan inokulasi starter 5,00% volume/volume kerjaPerbandingan inokulasi MRS broth 3,00% volume/volume kerja

Asumsi & Data Harga PeralatanPersamaan index marshal yang digunakan Persamaan Harga

No Nama Alat Persamaan1 Bak Cuci Harga(Rp) = 18.375*Kapasitas (kg)2 pemipil jagung Harga (Rp)= 23.000*Kapasitas(kg)3 steamer Harga (Rp)= 36.750*kapasitas(kg)4 pulper Harga (Rp)= 36.750*kapasitas(kg)5 filter Y=0,442X+360,93 (Y: Harga ($),X : Kapasitas) (Ft3/min)6 pompa Y=2,326X+326,31 (Y: Harga ($),X : Kapasitas)(Ft3/min)7 PHE Harga = 625*Luas pemanas (m2) ($)8 Tangki Susu Y=2,296X+500 (Y: Harga ($),X : Kapasitas) (Galon)9 pompa Y=2,326X+326,31 (Y: Harga ($),X : Kapasitas)(Ft3/min)

No Nama Alat Persamaan1 Bak cuci Harga(Rp) = 18.375*Kapasitas (kg)2 pulper Harga (Rp)= 23.000*Kapasitas(kg)3 filter Y=0,442X+360,93 (Y: Harga ($),X : Kapasitas) (Ft3/min)4 pompa Y=2,326X+326,31 (Y: Harga ($),X : Kapasitas)(Ft3/min)5 PHE Harga = 625*Luas pemanas (m2) ($)6 Tangki Juice Mengkudu Y=2,296X+500 (Y: Harga ($),X : Kapasitas) (Galon)7 pompa Y=2,326X+326,31 (Y: Harga ($),X : Kapasitas)(Ft3/min)

No Nama Alat Persamaan1 PHE Harga = 625*Luas pemanas (m2) ($)2 Tangki Penyimpan Susu Y=2,296X+500 (Y: Harga ($),X : Kapasitas) (Galon)3 pompa Y=2,326X+326,31 (Y: Harga ($),X : Kapasitas)(Ft3/min)

No Nama Alat Persamaan1 Tangki Starter Y=5,54X+525(Y: Harga ($),X : Kapasitas) (galon)2 Bioreaktor Y=12X+900(Y: Harga ($),X : Kapasitas) (galon)3 Tangki Formulasi Y=5,54X+525(Y: Harga ($),X : Kapasitas) (galon)4 Pompa vacuum Y=0,3X+90 (Y: Harga ($),X : Kapasitas)(Ft3/min)5 Mesin Pengemasan Y=3,5X+156(Y: Harga ($),X : Kapasitas) (Kg)

No Nama Alat Persamaan1 Timbangan Harga = 2*Kapasitas (kg) ($)2 Genset Y=41,911X+1469 (Y: Harga($),X : Kapasitas)(Kva)3 Boiler Y=3,725X+1866 (Y: Harga($),X : Kapasitas) (Lb/jam)4 Chiller Harga = 5*Kapasitas (kg) ($)

Kelebihan desain alat 20%Luas perpindahan panas 0,05 m2/Kg bahanKebutuhan Listrik 0,2 kW/KgKebutuhan Steam 1 Kg/KgKebuthan Chiller 0,5 Kg/Kg

Unit Utilitas

Y=23,2X-45259,08 (Y: index, X : Tahun)

Unit Pembuatan Susu Jagung

Unit Pembuatan Juice Mengkudu

Unit Penyimpanan Susu Segar

Unit Proses Probiotik

132

Lampiran 30 : Daftar harga bahan baku dan asumsi perhitungan kelayakan

1. Hari Kerja 300 hari2. Harga Bahan Baku

MRSA 910.000 IDRMRS Broth 945.000 IDR

Laktosa Monohidrat 1.540.000 IDR Jagung 700 IDR

Mengkudu 210 IDRSusu Segar 2.800 IDR

Butter 10.500 IDRIcing sugar 4.200 IDR

3. Harga Produk 12.700 IDR4. Index 2011 1396,125. Index 2005 1256,926. Biaya - Biaya a. Biaya administrasi dan komunikasi 2,50% /tahun*penjualan b. Biaya promosi dan pemasaran 2,5% /tahun*penjualan c. Biaya Quality Control 2% /tahun*penjualan d. Biaya bahan bakar, B.Kimia & Pelumas 2,5% /tahun*investasi e. Biaya kemasan 800,00 Rp/pcs/liter7. Biaya Perbaikan dan dan Perawatan - Bangunan 0,5% pertahun*investasi bangunan - Mesin dan peralatan 0,5% pertahun*investasiperalatan8. Kebutuhan Investasi - Modal sendiri 35% - Modal pinjaman 65% 9. Kebutuhan Modal Kerja - Modal sendiri 35% - Modal pinjaman 65%10. Jangka waktu masa konstruksi 1 tahun11. Jangka waktu masa produksi 10 tahun12. Bunga Bank 13,5% pertahun13. Asumsi Kenaikan bunga Bank 0,0% pertahun14. Lama Angsuran Modal Kerja 5 tahun15. Lama Angsuran Modal Investasi 8 tahun16. Tenggat waktu pembayaran 3 tahun18. Nilai Rupiah terhadap dolar 9.500 Rp/$19. Nilai akhir investasi 10%20. Umur Bangunan 20 Tahun21.Umur peralatan 10 Tahun22. Kapasitas produksi - Tahun I 50% - Tahun II 75% - Tahun III -Tahun XII 100%Pajak 30%

133

Lampiran 31 : Data hasil perhitungan modal kerja

HARGA TOTAL Indeks SATUAN/BULAN NILAI Harga

(Rp) (%)

Modal Kerja (1 bulan kerja) A. Bahan Baku Kebutuhan Bahan Baku / 25 Hari 41.818.136 Rp. 1.045.453.388 1.568.180.082 77,77%

Sub Total B. Biaya - Biaya 1. Biaya administrasi dan komunikasi 42.683.906 64.025.859 3,18% 2. Biaya promosi dan pemasaran 42.683.906 64.025.859 3,18% 3. Biaya perbaikan dan pemeliharaan 32.360.256 48.540.384 2,41% 4. Biaya Quality Control 34.147.125 51.220.688 2,54% 5. Biaya BBM, bahan kimia dan pelumas 15.917.176 23.875.764 1,18% 6. Biaya kemasan 107.550.000 161.325.000 8,00%

Sub Total C. Biaya Gaji/Upah 1. Tenaga kerja 12 Orang 23.500.000 35.250.000 1,75%

Sub TotalTOTAL MODAL KERJA 2.016.443.637 1,00

MODAL SENDIRI 35% 705.755.273 MODAL BANK 65% 1.310.688.363,75

U R A I A N JUMLAH SATUAN

134

Lampiran 32 : Data rincian perhitungan modal kerja

Bahan Baku Harga(Rp/Kg) Jumlah (Kg) Total (Rp)

MRSA 910.000 4 3.385.883 MRS Broth 945.000 4 3.516.109 Laktosa Monohidrat 1.540.000 4 6.167.431 Jagung 700 4.571 3.200.000 Mengkudu 210 727 152.727 Susu Segar 2.800 1.022 2.862.986 Butter 10.500 1.850 19.425.000 Icing sugar 4.200 740 3.108.000

41.818.136

Biaya BiayaNilai Investasi Perawatan/th Perawatan

(%) Pertahun

Bangunan 1.887.140.421 0,5% 9.435.702 Mesin dan Peralatan 2.053.959.011 0,5% 10.269.795 Utilitas 2.530.951.786 0,5% 12.654.759

32.360.256

Jumlah Gaji/Orang Gaji/Bulan(orang) (Rp) (Rp)

Pekerjaan 1. Manager produksi 1 4.000.000 4.000.000 2. Kepala Produksi 1 2.500.000 2.500.000 3. Analis 2 2.000.000 4.000.000 4. Laboran 2 1.500.000 3.000.000 5. Utilitas 1 2.000.000 2.000.000 6. Operator 6 2.000.000 12.000.000

Sub Total 12 23.500.000

Total

RINCIAN BIAYA GAJI/UPAH KARYAWAN

Jabatan

KEBUTUHAN BAHAN BAKU/BATCH

Fasilitas

TOTAL BIAYA BAHAN BAKU

RINCIAN BIAYA PERBAIKAN DAN PEMELIHARAAN

135

Lampiran 33 : Data perhitungan biaya peralatan

No Nama Alat Kapasitas Ukuran Harga Tahun Index ($) Harga Tahun 2011(Rp) Jumlah Total

1 Bak Cuci 4571,43 Kg 84.000.000 93.302.740 1 93.302.7402 Pemipil jagung 4571,43 Kg 105.142.857 116.787.103 1 116.787.1033 Steamer 1600 Kg 58.800.000 65.311.918 1 65.311.9184 Pulper 1600 Kg 58.800.000 65.311.918 1 65.311.9185 Filter 1600 Kg 385,90 4.072.072 1 4.072.0726 Pompa 1600 Kg 457,72 4.829.931 1 4.829.9317 PHE 1600 kg 50.000 527.604.780 1 527.604.7808 Tangki Susu 4000 liter 2.520 26.593.788 1 26.593.7889 Pompa 9600 liter/jam 1.114,78 11.763.313 1 11.763.313

915.577.563

No Nama Alat Kapasitas Ukuran Harga Tahun Index Harga Jumlah Total1 Bak cuci 727,27 Kg 13.363.636 14.843.618 1 14.843.6182 Pulper 400 Kg 14.700.000 16.327.980 1 16.327.9803 Filter 400 Kg 367,17 3.874.444 1 3.874.4444 Pompa 400 kg 359,16 3.789.923 1 3.789.9235 PHE 400 kg 12.500 131.901.195 1 131.901.1956 Tangki Juice Mengkudu 1000 Liter 1.005 10.605.483 1 10.605.4837 Pompa 2400 liter/jam 523,43 5.523.269 1 5.523.269

186.865.911

No Nama Alat Kapasitas Ukuran Harga Tahun Index Harga Jumlah Total1 PHE 1022,50 kg 31.953 337.170.839 1 337.170.8392 Tangki Penyimpan Susu 6334,95 liter 3.700 39.037.761 1 39.037.7613 pompa 3800,97 liter/jam 638,49 6.737.453 1 6.737.453

382.946.053

No Nama Alat Kapasitas Ukuran Harga Tahun Index Harga Jumlah Total1 Tangki Stater 345,00 liter 945 9.976.326 1 9.976.3262 Bioreaktor 3345,00 liter 9.730 102.669.151 2 205.338.3023 Tangki Formulasi 6453,00 liter 8.389 88.521.242 1 88.521.2424 Pompa vacuum 20070 liter/jam 6.111 64.483.856 1 64.483.8565 Mesin Pengemasan 5377,50 liter 18.977 200.249.756 1 200.249.756

568.569.483

No Nama Alat Kapasitas Ukuran Harga Tahun Index Harga Jumlah Total1 Timbangan 100000 Kg 200.000 2.110.419.120 1 2.110.419.1202 Genset 500 Kva 22.425 236.625.468 1 236.625.4683 Boiler 2500 Kg 11.179 117.956.601 1 117.956.6014 Chiller 1250 Kg 6.250 65.950.597 1 65.950.597

2.530.951.786

4.584.910.796

Unit Pembuatan Susu Jagung

JUMLAH TOTAL HARGA ALAT

Unit Pembuatan Juice Mengkudu


Unit Penyimpanan Susu Segar


Unit Proses Probiotik


Unit Utilitas

Jumlah


136

Lampiran 34 : Data hasil perhitungan penyusutan peralatan

Biaya BiayaNilai Investasi Perawatan/th Perawatan

(%) Pertahun

Bangunan 1.887.140.421 0,5% 9.435.702 Mesin dan Peralatan 2.053.959.011 0,5% 10.269.795 Utilitas 2.530.951.786 0,5% 12.654.759

32.360.256

UMUR ALAT NILAI NILAI AKHIR PENYUSUTAN/(TAHUN) AWAL TAHUN

(Rp) (Rp) (Rp)

- Bangunan dan pekerjaan sipil 20 1.887.140.421 188.714.042 169.842.638 - Mesin dan peralatan 10 2.053.959.011 205.395.901 184.856.311 - Utilitas 10 2.530.951.786 253.095.179 227.785.661

3.941.099.432 647.205.122 582.484.610

Fasilitas

Fasilitas

RINCIAN BIAYA PENYUSUTAN

TOTAL

Total

137

Lampiran 35: Rencana pembayaran cicilan modal investasi dan modal kerja

Lampiran 36 : Struktur pembiayan investasi peralatan produksi

Pembiayaan Bank (65%)Modal Investasi 7.640.244.620 4.966.159.003Modal Kerja 2.091.258.105 1.359.317.768

Struktur Pembayaran Modal Investasi Cicilan Pokok Pokok Bunga Besar AngsuranTahun 3 620.769.875 4.966.159.003 670.431.465 1.291.201.341Tahun 4 620.769.875 4.345.389.128 586.627.532 1.207.397.408Tahun 5 620.769.875 3.724.619.252 502.823.599 1.123.593.474Tahun 6 620.769.875 3.103.849.377 419.019.666 1.039.789.541Tahun 7 620.769.875 2.483.079.501 335.215.733 955.985.608Tahun 8 620.769.875 1.862.309.626 251.411.800 872.181.675Tahun 9 620.769.875 1.241.539.751 167.607.866 788.377.742Tahun10 620.769.875 620.769.875 83.803.933 704.573.809

Struktur Pembayaran Modal Kerja Cicilan Pokok Bunga Besar AngsuranTahun 3 271.863.554 183.507.899 455.371.452Tahun 4 271.863.554 146.806.319 418.669.873Tahun 5 271.863.554 110.104.739 381.968.293Tahun 6 271.863.554 73.403.159 345.266.713Tahun 7 271.863.554 36.701.580 308.565.133

1.909.841.465JUMLAH

No Investasi Jumlah

1 Penyiapan Tanah dan AMDAL 508.076.2672 Bangunan dan Pekerjaan Sipil 1.887.140.4213 Mesin dan Peralatan 2.053.959.0114 Peralatan Laboratorium QC 391.180.5255 Utilitas 2.530.951.7866 Kegiatan Pembangunan 391.180.5257 Engineering Consultant & Project Management 203.230.507

7.640.244.620

2.674.085.61735

4.966.159.00365

TOTAL INVESTASI

MODAL SENDIRI (IDR)

MODAL BANK (IDR)

Komposisi : ( %)

Komposisi : ( %)

138

Lampiran 37 : Dokumentasi Proses Pengujian Pilot Plant 75 L

139

l a m p i r a n - repository.ipb.ac.id · primer 8f 10 mm 1 µl ... pembuatan larutan standar asam...

Documents