kasein yogurt susu kambing sebagai antioksidan pada …
TRANSCRIPT
KASEIN YOGURT SUSU KAMBING SEBAGAI ANTIOKSIDAN PADA TIKUS WISTAR MODEL INTOKSIKASI DIOKSIN (2,3,7,8-TETRACHLORODIBENZO-P-DIOXIN): KAJIAN AKTIVITAS ENZIM ANTIOKSIDAN, PROFIL LEMAK
DARAH, DAN KADAR ENZIM TRANSAMINASE
Tesis Untuk memenuhi sebagian persyaratan
mencapai derajat Sarjana S-2
Program Studi Sain Veteriner
Diajukan Oleh
Ani Setianingrum
15/390313/PKH/00564
PROGRAM STUDI PASCASARJANA SAIN VETERINER FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
UNIVERSITAS GADJAH MADA YOGYAKARTA
2017
ii
iii
PERNYATAAN
Dengan ini saya menyatakan bahwa usulan penelitian ini bukan
merupakan karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di
suatu Perguruan Tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya
atau pendapat yang pernah ditulis oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis
diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Yogyakarta, 21 Desember 2017
Ani Setianingrum
iv
PRAKATA
Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas
bimbingan, berkat, tuntunan, dan penyertaan-Nya sehingga tesis yang berjudul
“Kasein Yogurt Susu Kambing Sebagai Antioksidan pada Tikus Wistar
Model Intoksikasi Dioksin (2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-P-Dioxin): Kajian
Aktivitas Enzim Antioksidan, Profil Lemak Darah, dan Kadar Enzim
Transaminase” telah dapat diselesaikan dengan baik. Tesis ini disusun untuk
memenuhi persyaratan mencapai gelar Magister Sains pada Program Studi
Magister Sain Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gadjah Mada.
Tesis ini dapat diselesaikan dengan baik atas dukungan dan bantuan dari
berbagai pihak, untuk itu penulis mengucapkan terima kasih dan penghargaan
setinggi-tingginya kepada:
1. Dekan Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gadjah Mada
2. Ketua Pengelola Program Studi Sain Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Gadjah Mada
3. Dekan Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Brawijaya, atas kesempatan
yang diberikan kepada penulis untuk menempuh studi lanjutan di Program
Studi S2 Magister Sain Veteriner
4. Dr. drh. R. Gagak Donny Satria, M.P., M.Pd. selaku dosen pembimbing utama
dan Dr. drh. Masdiana C. Padaga, M.App.Sc. selaku dosen pembimbing
pendamping yang telah memberikan kesempatan untuk melaksanakan
penelitian serta meluangkan waktu, pikiran, dan tenaga untuk membimbing,
memberikan arahan dan masukan kepada penulis selama penelitian maupun
selama penulisan tesis.
5. Tim penguji Dr. drh. Doddi Yudhabuntara, Prof. drh. Bambang Hariono,
Ph.D., serta drh. Dyah Ayu Widiasih, Ph.D., yang telah memberi banyak
masukan dan saran demi kebaikan dalam penulisan tesis.
6. Staf dosen Laboratorium Kesmavet Fakultas Kedokteran Hewan Universitas
Brawijaya atas bantuan dan fasilitas selama pelaksanaan penelitian.
7. Staf Laboratorium Institut Biosain Universitas Brawijaya atas bantuan sarana,
waktu, dan tenaga selama pelaksanaan penelitian.
v
8. Rekan penelitian grup Dioksin, drh. Ajeng Erika, Robbie, Melinda, Malinda,
dan Rihma atas bantuan dan kerjasamanya selama penelitian.
9. Keluarga tercinta, Bapak Djarot Soepono, mas Danang Hadi Purwanto, mbak
Rina Septiana Madyarini atas dukungan, semangat, dan doa untuk penulis
selama ini.
10. Teman-teman sainvet khususnya teman teman di minat Kesmavet atas
semangat, kerjasama, dukungan dan keceriaan selama menempuh studi di
Sainvet UGM.
11. Semua pihak yang telah membantu penulis dalam penelitian dan penyusunan
tesis sehingga terselesaikannya tesis ini.
Penulis menyadari segala keterbatasan, pengalaman dan pengetahuan dalam
penyusunan tesis ini. Semoga tesis ini dapat bermanfaat bagi perkembangan ilmu
pengetahuan dan berguna bagi para pembaca.
Yogyakarta, 21 Desember 2017
Penulis
vi
DAFTAR ISI
LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................. ii PERNYATAAN ............................................................................................. iii PRAKATA ..................................................................................................... iv DAFTAR ISI .................................................................................................. vi DAFTAR TABEL .......................................................................................... viii DAFTAR GAMBAR ...................................................................................... ix DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................... x INTISARI ....................................................................................................... xi ABSTRACT ..................................................................................................... xii
BAB I. PENDAHULUAN Latar Belakang ................................................................................ 1 Rumusan Masalah ........................................................................... 6 Tujuan ............................................................................................ 6 Manfaat Penelitian .......................................................................... 6 Keaslian Penelitian ......................................................................... 7
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA Dioksin ........................................................................................... 8 Residu dioksin pada pangan asal hewan (PAH) .......................... 9 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) ............................ 13 Toksisitas TCDD ........................................................................ 14 Efek TCDD pada profil lemak darah dan enzim hati ................... 16 Superoxide dismutase (SOD) .......................................................... 17 Antioksidan .................................................................................... 20 Kasein Yogurt Susu Kambing ........................................................ 21 Susu kambing ............................................................................. 21 Yogurt ....................................................................................... 22 Kasein ........................................................................................ 23 Tikus Putih sebagai Hewan Model Intoksikasi Dioksin ................... 25 Landasan Teori ............................................................................... 27 Hipotesis ......................................................................................... 28
BAB III. MATERI DAN METODE Waktu dan Tempat .......................................................................... 29 Materi ............................................................................................. 29 Populasi dan sampel ................................................................... 29 Bahan ......................................................................................... 29 Peralatan .................................................................................... 30 Metode............................................................................................ 31 Tahapan penelitian ..................................................................... 33 Pengambilan sampel darah dan jaringan ..................................... 36 Pengamatan dan analisis data...................................................... 36
vii
Diagram alur penelitian .............................................................. 37
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN Analisis Yogurt Susu Kambing dan Kasein Yogurt Susu Kambing . 38 Aktivitas Enzim superoxide dismutase (SOD) Hati ......................... 40 Profil Lemak Darah ........................................................................ 43 Enzim Transaminase (AST dan ALT) ............................................. 46
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan ..................................................................................... 49 Saran ............................................................................................ 50
RINGKASAN................................................................................................. 51
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 55
LAMPIRAN ................................................................................................... 66
viii
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Penelitian terkait intoksikasi TCDD dan yogurt susu kambing ....... 7
Tabel 2. Nilai maksimum TEQ (pg/g berat lemak) PCDD/PCDFs pada pangan asal hewan berdasarkan standar berbagai negara ................. 12
Tabel 3. Batas maksimum cemaran dioksin dalam makanan ......................... 13
Tabel 4. Protein prekursor peptida bioaktif dalam susu ................................. 24
Tabel 5. Data biologis tikus Wistar jantan ..................................................... 26
Tabel 6. Rancangan kelompok penelitian ...................................................... 32
Tabel 7. Hasil analisis yogurt susu kambing dan kasein yogurt susu kambing .......................................................................................... 38
Tabel 8. Pengaruh kasein yogurt susu kambing pada aktivitas enzim SOD hati tikus intoksikasi dioksin .................................................. 40
Tabel 9. Pengaruh kasein yogurt susu kambing pada kadar kolesterol serum tikus intoksikasi dioksin ....................................................... 43
Tabel 10. Pengaruh kasein yogurt susu kambing pada kadar trigliserida serum tikus intoksikasi dioksin ....................................................... 44
Tabel 11. Pengaruh kasein yogurt susu kambing pada kadar AST dan ALT serum tikus intoksikasi dioksin....................................................... 47
ix
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Jalur kontaminasi dioksin dari lingkungan pada rantai pangan (Gilbert dan Senyuva, 2005) ......................................................... 10
Gambar 2. Struktur kimia 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (Schecter et al., 2005) ................................................................... 13
Gambar 3. Mekanisme molekuler dari aktivasi ekspresi gen oleh reseptor Ah (Denison dan Nagy, 2003) ............................................................ 16
Gambar 4. Diagram kadar kolesterol dan kadar trigliserida serum tikus Wistar ........................................................................................... 45
x
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Data hasil pengujian klinik serum dan enzim superoxide dismutase organ hati tikus Wistar ................................................... 66
Lampiran 2. Data berat badan harian tikus Wistar selama pemberian perlakuan ....................................................................................... 67
Lampiran 3. Bahan kimia 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) dan starter yogurt ........................................................................... 69
Lampiran 4. Hasil analisis proksimat dan analisis antioksidan pada sampel kasein yogurt susu kambing ........................................................... 70
Lampiran 5. Hasil analisis total BAL dan total protein yogurt susu kambing ...... 71
Lampiran 6. Analisis statistik ............................................................................. 72
Lampiran 7. Sertifikat laik etik (ethical clearence) untuk induk penelitian ......... 82
xi
Kasein Yogurt Susu Kambing Sebagai Antioksidan pada Tikus Wistar
Model Intoksikasi Dioksin (2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin): Kajian Aktivitas Enzim Antioksidan, Profil Lemak Darah,
dan Kadar Enzim Transaminase
INTISARI
Senyawa 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) adalah cemaran
lingkungan yang sifatnya persisten di alam, mengalami bioakumulasi melalui
rantai pangan, dan dapat menyebabkan efek negatif bagi kesehatan. Stres oksidasi
karena paparan TCDD menyebabkan gangguan proses metabolisme dalam tubuh
antara lain metabolisme lemak karena sifat TCDD yang hepatotoksik. Tujuan dari
penelitian ini adalah untuk mengetahui efek pemberian kasein yogurt susu
kambing untuk mencegah stres oksidasi karena intoksikasi TCDD. Hewan coba
tikus Wistar jantan sebanyak 24 ekor dibagi menjadi enam kelompok: (1)
kelompok kontrol negatif dengan tanpa perlakuan, (2) kelompok kontrol plasebo
dengan pemberian kasein yogurt susu kambing dosis 600 mg/kg BB/hari/ekor, (3)
kelompok kontrol positif dengan pemberian TCDD dosis 100 ng/kg BB/hari
dalam pelarut minyak jagung 1 mL/hari/ekor, (4) kelompok perlakuan 1 diberikan
TCDD dosis 100 ng/kg BB/hari dan kasein yogurt dosis 300 mg/kg BB, (5)
kelompok perlakuan 2 diberikan TCDD dosis 100 ng/kg BB/hari dan kasein
yogurt dosis 600 mg/kg BB, (6) kelompok perlakuan 3 dengan pemberian TCDD
dosis 100 ng/kg BB/hari dan kasein yogurt dosis 900 mg/kg BB. Pemberian
TCDD dan terapi dilakukan selama 21 hari. Sampel berupa serum darah untuk
analisis kadar kolesterol, trigliserida, enzim ALT dan enzim AST. Sampel
jaringan hati untuk pengujian aktivitas enzim antioksidan superoxide dismutase
(SOD). Data kuantitatif dianalisis menggunakan one way ANOVA dan
dilanjutkan uji post hoc Tukey test HSD. Hasil menunjukkan pemberian kasein
yogurt susu kambing meningkatkan aktivitas enzim SOD hati pada tikus
intoksikasi dioksin. Peningkatan nyata (P<0,05) pada kelompok pemberian kasein
yogurt susu kambing dosis 600 dan 900 mg/kg BB. Profil lemak darah
menunjukkan nilai normal pada semua kelompok. Pemberian kasein yogurt susu
kambing tidak menunjukkan perbedaan nyata pada kadar kolesterol dan
trigliserida. Berdasarkan kadar enzim transaminase, tidak terdapat perbedaan
nyata pada kadar enzim ALT dan enzim AST. Kasein yogurt susu kambing
mempunyai aktivitas antioksidan yang dapat mencegah terjadinya stres oksidasi
karena intoksikasi TCDD.
Kata kunci : kasein, yogurt, profil lemak, SOD, TCDD, transaminase
xii
Casein Derived from Goat Milk Yogurt as Antioxidant in Dioxin (2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin) Intoxicated Rat Model:
Study on Antioxidant Enzyme Activity, lipid Profile, and Transaminase Enzymes
ABSTRACT
2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) is toxic contaminant which
persistent in the environment. This compound bio accumulate through food chain
and generate adverse effect in human health. Oxidative stress due to TCDD
exposure can interference metabolism process and leads to the development of
hepatotoxicity. The aim of the current study was to explore the role of casein
derived from goat milk yogurt to prevent oxidative stress generate by TCDD
intoxication. The study included 24 Wistar rats divided into 6 groups: (1) control
group, (2) placebo group which given casein 600 mg/kg BW daily, (3) TCDD
group dosed with TCDD 100 ng/kg BW diluted in corn oil daily, (4) group 1 given
casein 300 mg/kg BW and TCDD 100 ng/kg BW daily, (5) group 2 given casein
600 mg/kg BW and TCDD 100 ng/kg BW daily, (6) group 3 given casein 900
mg/kg BW and TCDD 100 ng/kg BW daily. The respective dose were given orally
for 21 days. Blood serum was collected for cholesterol, triglyceride, ALT and AST
level. Liver collected for antioxidant enzyme superoxide dismutase (SOD) activity
assay. Quantitative analysis using one way anova and post hoc Tukey test shows
that casein derived from goat milk yogurt increased SOD activity in TCDD
intoxicated rats. Significant increase (P<0.05) shows from group given with
casein dose 600 and 900 mg/kg BW. Lipid profile shows normal value in all
groups. There are no significant change in serum cholesterol and triglyceride
level. Furthermore, there are no significant change in transaminase enzymes
based on serum ALT and AST. Casein derived from goat milk yogurt has
antioxidant activity and protective effect against oxidative stress induced by
TCDD intoxication.
Keywords : casein, yogurt, lipid profile, SOD, TCDD, transaminase
1
BAB I
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Kontaminasi bahan kimia berbahaya dalam rantai pangan merupakan hal
yang penting karena berkaitan dengan keamanan pangan dan berpengaruh
terhadap kesehatan konsumen (Garcia-regueiro dan Castellari, 2009). Bahan
kimia kontaminan antara lain berupa logam berat dan senyawa pencemar organik
yang sulit terurai yang disebut sebagai persistent organic pollutants (POPs).
Kontaminasi senyawa kimia berbahaya dalam bahan pangan dapat terjadi selama
tahapan proses produksi dan pengolahan. Terdapat beberapa jenis polutan
lingkungan yang bersifat persisten, dan dioksin adalah salah satu kelompok
senyawa yang penting untuk mendapatkan perhatian lebih.
Dioksin merupakan substansi yang toksik karena sangat stabil terhadap
proses degradasi oleh lingkungan maupun oleh proses biologis sehingga bersifat
persisten di lingkungan (Birnbaum, 1994). Dioksin berikatan kuat dengan bahan
organik di lingkungan dan dapat ditemukan di lapisan atas dari tanah (Skene et al.,
1989). Sifat lipofilik dan hidrofobik dari dioksin menyebabkan substansi ini sulit
untuk dimetabolisme di dalam tubuh. Sebagai akibatnya terjadi bioakumulasi dan
biomagnifikasi melalui rantai pangan (Skene et al., 1989; Birnbaum, 1994).
Paparan dioksin dalam jumlah kecil dapat berbahaya bagi kesehatan.
Blümler (2000) menyebutkan, dioksin sudah dapat meracuni tubuh dalam kadar
ppt (part per trillion) atau ppb (part per billion). Organisasi kesehatan dunia
WHO (World Health Organization) menetapkan angka TDI (Tolerable Daily
2
Intake) bagi manusia adalah 1 pg sampai dengan 4 pg Toxic Equivalent (TEQ) per
kilogram berat badan. Angka TDI tersebut diperkirakan berdasarkan paparan
umum dioksin dalam populasi (Van Leeuwen et al., 2000; Brunnberg et al.,
2006). Manusia terpapar dioksin melalui konsumsi makanan seperti ikan, daging,
dan produk susu yang terkontaminasi (US EPA, 2012). Diperkirakan bahwa lebih
dari 90% dioksin yang dikonsumsi oleh manusia berasal dari pangan asal hewan
(Gizzi et al., 2005).
Hewan ternak penghasil daging dan susu terpapar oleh dioksin melalui
pakan ternak dan lingkungan yang tercemar (Gizzi et al., 2005; Rose et al., 2012).
Penggunaan bahan kimia pertanian menyebabkan pelepasan dioksin ke
lingkungan yang kemudian melalui berbagi jalur akan masuk ke dalam tubuh
makhluk hidup (Garcia-regueiro dan Castellari, 2009). Dioksin terdapat dalam
susu sapi melalui pakan ternak yang tercemar (Vartianen dan Hallikainen, 1994;
Malisch, 2000). Informasi mengenai cemaran dioksin di Indonesia berdasarkan
penelitian yang dilakukan Indraningsih dan Sani (2014) menunjukkan adanya
kandungan dioksin dan furan pada sampel daging asal Rumah Pemotongan
Hewan (RPH) Giwangan, RPH kota Kupang, dan RPH Klaten.
Senyawa 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) adalah congener
atau senyawa yang terbentuk dari proses yang sama dan memiliki struktur kimia
yang mirip dengan kelompok senyawa dioksin yang paling toksik. Berdasarkan
evaluasi risiko pada manusia oleh International Agency for Research on Cancer
(IARC), TCDD termasuk dalam grup 1 yang berarti karsinogen bagi manusia
(WHO, 1997). Respon toksik yang ditimbulkan oleh TCDD antara lain kerusakan
3
kulit, imunotoksik, hepatotoksik, karsinogenik, efek pada reproduksi, proses
pertumbuhan, neurobehavioral, dan efek endokrin yang sifatnya spesifik (Van den
Berg et al., 2006). Menurut Lin et al. (2007), TCDD menyebabkan efek
karsinogenik pada mamalia yang diawali oleh induksi reseptor aryl hydrocarbon
(AhR) yang diikuti oleh gangguan ekspresi gen, stres oksidasi, dan inisiasi tumor.
Sakin et al. (2011) menambahkan, paparan TCDD baik dosis rendah maupun
dosis tinggi dapat menginduksi kerusakan oksidatif molekul lemak (lipid
peroxidation) dan menyebabkan penurunan sistem pertahanan pada berbagai
organ.
Secara umum, ketika tubuh dalam kondisi stres oksidasi, keberadaan
radikal bebas dapat menyebabkan berbagai reaksi biokimia yang dapat berakibat
pada perubahan komponen seluler. Stres oksidasi yang ditandai oleh pembentukan
reactive oxygen species (ROS) berperan penting pada kasus intoksikasi TCDD.
Pada mamalia, ROS menyebabkan proliferasi sel, gangguan pertumbuhan, dan
apoptosis (Lin et al., 2007). Interaksi TCDD dengan AhR dan aktivasi sitokrom
P450 (CYP1A dan CYP1B) berkontribusi secara nyata terhadap pembentukan
ROS (Shon et al., 2002; Lin et al., 2007; Sakin et al., 2011).
Efek toksik karena paparan jangka panjang oleh TCDD menurut Safe
(1986) adalah perubahan dalam lemak darah dan enzim penanda fungsi hati yang
ditandai dengan peningkatan pada serum gamma-glutamyl transferase (GGT) dan
serum aspartate aminotransferase (AST). Birnbaum (1994) melaporkan adanya
perubahan morfologis akibat hepatotoksik diikuti dengan peningkatan serum
aspartate aminotransferase (AST) dan serum alanine aminotransferase (ALT)
4
yang merupakan penanda kerusakan hati. Pemberian TCDD per oral dengan dosis
100 ng/kg berat badan pada mencit selama tiga puluh lima hari menunjukkan efek
berupa keradangan, degenerasi hepatosit, dan nekrosis pada jaringan hati serta
menyebabkan peningkatan kadar Malondialdehyde (MDA) (Haskito, 2013).
Penelitian yang dilakukan mengenai pengaruh paparan jangka panjang dioksin
pada pekerja industri menunjukkan terjadi peningkatan kadar kolesterol pada
pekerja dengan paparan dioksin tinggi dibandingkan pekerja dengan paparan
dioksin rendah (Hu et al., 2003).
Tubuh pada dasarnya mempunyai sistem antioksidan alami untuk
menangkal radikal bebas. Meskipun demikian, pada kondisi stres oksidasi yang
berat ketersediaan antioksidan tubuh tidak mencukupi sehingga kerusakan
komponen seluler tubuh masih dapat terjadi (Huang et al., 2005). Asupan
antioksidan dari luar tubuh merupakan salah satu cara untuk mengurangi efek
negatif dioksin. Penelitian membuktikan bahwa konsumsi antioksidan seperti
vitamin A, vitamin E, dan asam lemak omega 3 dapat mencegah toksisitas dari
paparan TCDD (Turkez et al., 2012; Wahba et al., 2012).
Manfaat konsumsi antioksidan sebagai penangkal radikal bebas telah
banyak diteliti. Protein sebagai komponen utama dalam pangan diketahui
mempunyai aktivitas biologis yang dapat memberi pengaruh baik pada kesehatan
(Dziuba dan Dziuba, 2014). Susu sebagai bahan makanan yang kaya akan protein
mengandung vitamin dan enzim yang merupakan antioksidan. Peptida yang
berasal dari hasil digesti protein susu dilaporkan mempunyai aktivitas antioksidan
(Pihlanto, 2006).
5
Susu kambing telah dikenal mempunyai manfaat bagi kesehatan.
Umumnya susu kambing dihasilkan oleh ternak kambing peranakan Etawa
(Sutama dan Budiarsana, 1997). Dibandingkan dengan susu sapi, susu kambing
mengandung lebih tinggi total solid dan nutrien (Park et al., 2007). McCullough
(2003) menyatakan bahwa terdapat perbedaan protein secara struktural dan
immunologikal, antara lain lactalbumin. Ukuran globular protein pada susu
kambing lebih kecil dibandingkan susu sapi. Lactalbumin dan kasein pada susu
kambing tidak menyebabkan alergi pada bayi dan anak yang sensitif terhadap susu
sapi (Lamothe et al., 2007).
Kasein merupakan komponen utama dalam protein susu yang mencapai
80% dari total fraksi protein susu. Molekul peptida penyusun kasein tidak hanya
nutrien, terdapat peptida dengan berat molekul rendah yang mempunyai aktivitas
biologis (Lamothe et al., 2007). Molekul peptida yang bersifat bioaktif akan
dilepas melalui proses digesti susu yang terjadi dalam saluran pencernaan, melalui
proses fermentasi susu oleh enzim proteolitik oleh bakteri asam laktat (BAL), atau
melalui proses hidrolisis dengan enzim proteolitik (Mohanty et al., 2016). Salah
satu cara pengolahan susu kambing adalah dengan proses fermentasi menjadi
produk yogurt susu kambing.
Berdasarkan beberapa manfaat susu kambing bagi kesehatan, maka perlu
adanya penelitian lebih lanjut mengenai manfaat peptida antioksidan asal susu
(Milk-derived anti-oxidative peptides) dari produk yogurt susu kambing dalam
kasus intoksikasi TCDD. Kasein yogurt susu kambing diharapkan menjadi salah
6
satu alternatif sumber antioksidan yang berasal dari pangan asal hewan (PAH)
sebagai pangan fungsional (functional foods).
Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang dari penelitian ini, rumusan permasalahan
adalah sebagai berikut:
1. Apakah kasein yogurt susu kambing dapat meningkatkan aktivitas enzim SOD
pada hati tikus putih model intoksikasi dioksin?
2. Apakah pemberian kasein yogurt susu kambing selama 21 hari mempunyai
pengaruh terhadap profil lemak pada hewan model intoksikasi dioksin?
3. Apakah kasein yogurt susu kambing mempunyai potensi untuk memproteksi
dan mencegah kerusakan seluler pada hati akibat paparan TCDD berdasarkan
kadar enzim transaminase AST dan ALT?
Tujuan
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan kasein yogurt susu
kambing sebagai antioksidan untuk mempertahankan kadar enzim SOD, menjaga
nilai normal lemak darah dan enzim transaminase dalam intoksikasi dioksin
(TCDD) pada tikus Wistar.
Manfaat Penelitian
Dari penelitian ini, diharapkan diperoleh hasil yang akan mendukung
pengembangan antioksidan alami berbasis pangan asal hewan yaitu olahan
fermentasi susu kambing sebagai bahan terapi untuk pencegahan terhadap
berbagai gangguan kesehatan karena cemaran bahan kimia berbahaya.
7
Keaslian Penelitian
Penelitian dan publikasi sebelumnya mengenai manfaat yogurt susu
kambing dan dampak intoksikasi 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD)
pada hewan coba disajikan pada Tabel 1 berikut:
Tabel 1. Penelitian terkait intoksikasi TCDD dan yogurt susu kambing
No. Tahun Penulis Judul Persamaan Perbedaan
1. 2011 Sakin et al. Protective Effect of
Lycopene on Oxidative
Stress Induced by Different
Doses of 2,3,7,8-
Tetrechlorodibenzo-p-dioxin
in Brain, liver, Kidney, and
Heart Tissue of Rats
Intoksikasi
TCDD
Pemberian
terapi lycopene
2. 2013 Haskito, A.
E. P.
Aktivitas Vitamin E (α-
Tocopherol) sebagai
Antioksidan pada
Histopatologi dan Kadar
Malondialdehyde (MDA)
Hati Mencit Galur Balb/c
yang Dipapar 2,3,7,8-
Tetrachlorodibenzo-p-
dioxin (TCDD).
Intoksikasi
TCDD
Hewan coba
menggunakan
mencit dan
terapi dengan
vitamin E
3. 2015 Rosinczuk
et al.
Effect of tocopherol and
acetylsalicylic acid on the
biochemical indices of
blood in dioxin-exposed
rats
Efek TCDD
pada
parameter
biokimia
darah
Terapi dengan
tocopherol
4. 2015 Padaga
et al.
Blood Pressure Lowering
Effect and Antioxidative
Activity of Casein Derived
from Goat Milk Yogurt in
DOCA-salt Hypertensive
Rats
Penggunaan
kasein dari
yogurt susu
kambing
Terapi pada
hipertensi
8
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
Dioksin
Kontaminan lingkungan berupa polychlorinated dibenzo-p-dioxin (PCDD)
dan komponen serupa yaitu polychlorinated dibenzofurans (PCDFs), serta
polychlorinated biphenyls (PCBs) menjadi perhatian masyarakat global karena
sifatnya yang persisten di lingkungan (Birnbaum, 1994; Schecter et al., 2005).
Badan kesehatan dunia WHO dan badan perlindungan lingkungan Amerika, US
Environmental Protection Agency (USEPA) menyatakan bahan toksik dioksin dan
dioxin-like compounds (DLC) sebagai persisten organic pollutants (POPs) karena
kandungan bahan berbahaya, masa aktif yang lama, distribusi global, akumulasi,
dan biomagnifikasi dalam rantai pangan (UNEP, 2008; Belin et al., 2016).
Dioksin dan furan tidak digunakan secara komersial tetapi terbentuk secara
tidak disengaja dari berbagai proses termal dan proses kimia seperti pembakaran
sampah, limbah pabrik logam, asap kendaraan bermotor, proses bleaching pada
produk kertas, dan proses sintesis herbisida dan pestisida. Proses pembakaran
bahan berklorinasi serta bahan kimia industrial menyebabkan pembentukan dan
pelepasan bahan toksik ini ke lingkungan (Safe, 1986; Vanden Heuvel dan Lucier,
1993).
Dioksin mengalami evaporasi yang lambat dan tidak mudah larut dalam
air. Sifat lipofilik menyebabkan dioksin dapat larut dalam substansi lemak dan
dalam material organik yang mengandung lemak sehingga dapat ditemukan pada
9
jaringan berlemak dan mengalami bioakumulasi dalam rantai pangan (Birnbaum,
1994; Blümler, 2000). Residu dioksin juga telah dideteksi pada jaringan ikan dan
residu ini berikatan dengan sedimen dan material organik pada sungai atau danau
(Wei et al., 2010). Kontaminasi global pada udara, air, dan tanah terus berlanjut
sehingga terdapat jejak adanya residu material toksik ini dalam bahan pangan
seperti produk susu, ikan, daging, dan kerang (Belin et al., 2016).
Residu dioksin pada pangan asal hewan (PAH)
Paparan dioksin yang utama pada manusia melalui makanan yang
mencapai lebih dari 90% dibandingkan paparan melalui inhalasi atau melalui
kontak kulit (Loutfy et al., 2006). Paparan dioksin mempunyai risiko kesehatan
yang cukup tinggi sehingga WHO menurunkan angka TDI (tolerable daily intake)
untuk TCDD dari 10 pg TEQ/kg BB/hari ke 1-4 pg TEQ/kg berat badan per hari
(Van Leeuwen et al., 2000). Sebagian besar dioksin ditemukan pada daging sapi,
ayam, ikan, telur, susu, dan produk olahannya (Malisch, 2000; Startin dan Rose,
2003; De Vries et al., 2006; Indraningsih dan Sani, 2014).
Nilai TEQ (toxic equivalents) ditentukan berdasarkan dari angka TEF
(toxic equivalent factor) yang ditetapkan oleh WHO. 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-
p-dioxin (TCDD) adalah bahan yang paling toksik, dengan angka TEF = 1. Cara
penentuan TEQ untuk sampel yang diperiksa adalah dengan mengalikan
konsentrasi TCDD terukur dengan angka TEF. Nilai TEQ ini menyatakan jumlah
TCDD dalam sampel yang menyebabkan toksisitas (Van den Berg et al., 2006).
Paparan dioksin harian pada manusia rata-rata 0,1-0,3 pg TCDD/kg/hari, setara
dengan 1-3 pg TEQ/kg/hari (Birnbaum, 1994).
10
Sumber kontaminasi dioksin pada produk ternak umumnya berasal dari
pakan ternak, rumput hijauan, tanah, dan air (De Vries et al., 2006). Tingkat
cemaran dioksin pada jaringan dan lemak hewan terutama berasal dari pakan.
Pakan hewan berasal dari berbagai daerah dan berbagai jalur produksi sehingga
ada kemungkinan pakan hewan tercemar oleh dioksin. Dioksin dan furan dapat
ditemukan pada rumput dan silase yang digunakan sebagai pakan ternak, dan
pada bahan tambahan pakan seperti meat bone meal, mineral, dan minyak ikan
(Gilbert dan Senyuva, 2005). Gambar 1 menunjukkan ilustrasi kontaminasi
dioksin dari lingkungan ke dalam rantai pangan.
Gambar 1. Jalur kontaminasi dioksin dari lingkungan pada rantai pangan
(Gilbert dan Senyuva, 2005)
11
Selain melalui pakan, hewan ternak yang digembalakan dapat terpapar
dioksin melalui tanah. Dioksin terdapat dalam kadar tinggi pada daerah yang
dekat dengan tempat pembuangan limbah (Gilbert dan Senyuva, 2005).
Berdasarkan penelitian Rose (2001), level dioksin pada susu sapi yang dipelihara
di daerah terkontaminasi mencapai 10 kali lebih tinggi daripada sapi yang
dipelihara pada daerah tidak terkontaminasi. Rose et al. (2012) menambahkan
bahwa mendekati umur jual, nilai TEQ pada sampel daging babi yang dipelihara
di kandang outdoor cenderung lebih tinggi daripada yang dipelihara pada kandang
indoor pada umur yang sama. Hal ini kemungkinan karena adanya paparan
tambahan dari tanah tempat ternak dipelihara.
Insiden kontaminasi dioksin pada bahan pangan asal hewan terjadi di
beberapa negara di dunia. Tahun 1989 di Inggris dilaporkan terdapat sampel susu
dari beberapa peternakan dengan kadar dioksin yang tinggi (Ahlborg, 1989).
Peningkatan nilai TEQ dioksin pada susu dan butter serta daging terjadi tahun
1998 di Jerman dengan sumber kontaminasi pakan ternak citrus pulp yang
tercemar oleh dioksin (Malisch, 2000). Insiden yang terjadi di Irlandia pada
Desember 2008 yaitu cemaran dioksin yang mencapai ratusan kali dari batas legal
pada produk daging babi dan daging sapi. Penyebab cemaran ini adalah minyak
yang digunakan pada produksi pakan ternak terkontaminasi dioksin (Dooley,
2009). Beberapa negara telah menetapkan aturan batas maksimum cemaran
dioksin dan furan pada bahan makanan karena tingginya risiko dari cemaran
dioksin pada makanan. Tabel 2 menunjukkan standar maksimum cemaran dioksin
pada pangan asal hewan.
12
Tabel 2. Nilai maksimum TEQ (pg/g berat lemak) PCDD/PCDFs pada pangan asal hewan berdasarkan standar berbagai negara
Bahan pangan
Australia USA Eropa Asia Standar EU
Unggas 0,02-0,53 0,10-5,17 0,6-0,9 0,67 1,75 Ikan 1,56-3,04 2,45-21,1 0,01-8,9 0,002-10,2 3,5 Daging sapi 0,0006-0,24 0,89-2,86 0,6-1 1,0 2,5 Daging babi 0,05-0,22 0,64-3,97 0,2-1,4 0,8 1 Daging domba
0,004-0,25 - - - 2,5
Telur 0,013-0,42 0,8 0,5-2,7 - 2,5 Susu 0,04-0,23 0,3-0,9 0,3-2,5 0,3-1,8 2,5
( EU, 2011; Belin et al., 2016)
Pencemaran dioksin pada bahan pangan masih belum mendapat banyak
perhatian di Indonesia. Informasi dan data mengenai pencemaran serta dampak
negatif dari dioksin sangat sedikit (Winarti dan Munarso, 2005). Deteksi residu
dioksin dan furan pada daging pertama kali dilakukan oleh Indraningsih dan Sani
pada tahun 2014. Sampel daging asal Rumah Pemotongan Hewan (RPH)
Yogyakarta dan RPH di Nusa Tenggara Timur menunjukkan bahwa konsentrasi
residu dioksin lebih dari 13 pg/g melebihi batas maksimum residu yang ditetapkan
oleh Badan Pengawas Obat dan Makanan yaitu sebesar 3 pg/g (BPOM, 2006).
Penelitian tahun berikutnya, pada daging sapi di kota Solo diperoleh konsentrasi
717,13 pg/g dan di kota Yogyakarta berkisar 4.496,66 - 20.642,40 pg/g. hasil
penelitian tersebut menunjukkan bahwa nilai TEQ pada sampel daging jauh
melebihi batas maksimum residu (Sani dan Indraningsih, 2015). Standar untuk
batas maksimum cemaran dioksin pada bahan makanan yang berlaku di Indonesia
ditetapkan oleh Badan Pengawasan Obat dan Makanan (BPOM). Nilai maksimum
cemaran dioksin dan furan disajikan pada Tabel 3.
13
Tabel 3. Batas maksimum cemaran dioksin dalam makanan
No Jenis Bahan Makanan Batas Maksimum
(pg WHO-PCDD/F-TEQ/g lemak)
1 Daging olahan 3
2 Hati olahan 6,1
3 Ikan olahan 3 (pg/g berat basah)
4 Susu olahan, termasuk mentega 3
5 Telur olahan 0,91
(BPOM, 2006)
2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD)
Dioksin dan furan (PCDD/PCDFs) dikenal secara umum sebagai dioksin
adalah dua grup senyawa tricyclic aromatic yang terdiri dari 2 cincin benzene
yang dihubungkan oleh dua atom oksigen dan terdiri dari satu sampai delapan
gugus klorin (Lamiceli et al., 2011). Terdapat 210 senyawa PCDD dan PCDF
yang ada di lingkungan. Badan kesehatan dunia WHO telah menentukan 7 PCDD
dan 10 PCDF berbahaya dan semuanya mempunyai substitusi chlorin pada posisi
2, 3, 7, 8 (Safe, 1986). Senyawa 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD)
ditunjukkan pada Gambar 2, adalah senyawa dioksin yang paling toksik
berdasarkan toksisitasnya pada hewan coba dan efek toksiknya pada manusia
(Ahlborg, 1989; Van Leeuwen et al., 2000).
Gambar 2. Struktur kimia senyawa 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD)
(Schecter et al., 2005)
14
Senyawa 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) disintesis dalam
jumlah sedikit untuk kepentingan riset. Dioksin murni pertama kali disintesis pada
tahun 1968. Bahan ini tidak berwarna atau berwarna kristal putih, titik didih pada
2920C, dan mengalami dekomposisi pada suhu 5000C. Tingkat kelarutan pada
suhu 250C di air kurang dari 1 mg/mL, kelarutan pada benzene mencapai 0,57
mg/mL, kelarutan pada chlorobenzene sebanyak 0,72 mg/mL, kelarutan pada
minyak lard adalah 0,04 mg/mL, dan pada hexane sebanyak 0,28 mg/mL
(Blümler, 2000).
Toksisitas TCDD
Badan riset kanker dunia (IARC) menyatakan bahwa dioksin merupakan
bahan karsinogenik, dan menurut US EPA TCDD dapat menyebabkan efek toksik
yang luas (US EPA, 2012). Paparan TCDD pada manusia dan hewan vertebrata
merupakan salah ratu faktor risiko penyakit kanker, gangguan sistem kekebalan
tubuh, gangguan reproduksi disertai abnormalitas perkembangan janin, gangguan
sistem endokrin, kerusakan organ hati, jantung, dan gangguan sistem saraf
(Schecter et al., 2005).
Paparan TCDD pada manusia terjadi melalui tiga jalur utama, yaitu
pekerjaan, paparan yang tidak disengaja (accidental), dan paparan oleh
lingkungan yang terkontaminasi (Safe, 1986). Jalur masuknya kontaminan ke
tubuh manusia adalah melalui gastrointestinal, dermal, dan absorbsi
transpulmoner (Van den Berg et al., 1994). Paparan pada manusia paling sering
adalah melalui jalur sekunder, yaitu melalui makanan (Gizzi et al., 2005). Setelah
15
mengalami absorbsi, TCDD di dalam sirkulasi akan berikatan dengan kilomikron,
lipoprotein, dan serum protein lainnya, kemudian dengan cepat terdistribusi ke
berbagai organ (Van den Berg et al., 1994).
Toksisitas TCDD tidak berdasarkan oleh banyaknya paparan (rate of
exposure) melainkan tergantung oleh beban tubuh (body burden) karena waktu
paruh dioksin yang lama (Drahushuk, 1997). Waktu paruh dioksin pada tikus
adalah 12-31 hari, mencit 11-24 hari, hamster 11-15 hari, marmut 30-94 hari, sapi
40-50 hari, monyet 391 hari, dan pada manusia selama 11 tahun. Toksisitas
dioksin didasarkan pada pendekatan nilai total dioxin toxic equivalency (TEQ)
yang mengekspresikan toksisitas bahan murni TCDD. Pendekatan TEQ telah
diadopsi secara internasional sebagai cara paling tepat dalam analisa risiko
paparan bahan yang mengandung dioksin (Whitlock, 1993; Schecter et al., 2005).
Efek biologis yang ditimbulkan TCDD diawali melalui ikatan dengan
protein intraseluler yaitu Aryl hydrocarbon receptor (AhR) sampai menimbulkan
gangguan pada ekspresi gen dan respon toksik (Whitlock, 1993). Kompleks AhR-
agonis teraktivasi dan terikat dengan transcription factor pada protein AhR
nuclear translocation (Arnt). Kompleks protein yang baru terbentuk (AhR-
agonis-Arnt) akan ditransfer menuju nukleus. Di dalam nukleus, ligand-AhR-Arnt
kompleks akan berikatan dengan sekuen spesifik DNA pada sekuen promotor di
dalam gen. Ikatan ligan dengan gen ini menyebabkan terjadinya transkripsi gen P-
450 terutama CYP1A1 dan CYP1B1 yang berperan dalam metabolisme oksidatif
dari xenobiotik (Brunnberg et al., 2006). Jalur aktivasi AhR oleh dioksin
16
sehingga memengaruhi ekspresi gen (Gambar 3) digambarkan oleh Denison dan
Nagy (2003).
Gambar 3. Mekanisme molekuler dari aktivasi ekspresi gen oleh reseptor Ah (Denison dan Nagy, 2003)
Efek TCDD pada profil lemak darah dan enzim hati
Paparan jangka panjang TCDD pada manusia menyebabkan perubahan
pada kadar lemak darah dan enzim penanda fungsi hati (Smith et al., 1990). Hasil
penelitian mengenai pengaruh dioksin pada kadar lemak darah dan fungsi hati
menunjukkan hasil yang tidak konsisten. Studi kohort pada pekerja yang terpapar
TCDD melaporkan bahwa paparan TCDD secara signifikan berhubungan dengan
peningkatan serum kolesterol dan trigliserida (Martin, 1984; Triebig et al., 1998;
Hu et al., 2003) serta meningkatkan kadar enzim-enzim penanda fungsi hati
seperti alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST),
enzim γ-glutamyltransferase (GGT), serta total bilirubin (Triebig et al., 1998;
Kitamura et al., 2000; Michalek et al., 2001). Beberapa penelitian menunjukkan
17
hasil sebaliknya, bahwa paparan TCDD tidak berhubungan dengan kolesterol
(Calvert et al., 1998), ALT, AST atau total bilirubin (Calvert et al., 1992; Hu et
al., 2003).
Toksisitas TCDD pada hewan coba diantaranya adalah kerusakan hati,
secara umum terjadi hepatomegali karena hiperplasia dan hipertrofi pada sel
parenkim. Perubahan morfologis yang diamati pada hati adalah spesies spesifik
dan dapat disertai oleh penurunan fungsi hati dengan peningkatan serum ALT,
AST, dan penurunan aktivitas antioksidan enzim (Birnbaum, 1994; Van den Berg
et al., 2006; Turkez et al., 2012). Menurut Sakin et al. (2011), Paparan TCDD
meningkatkan kadar malondialdehyde (MDA), menurunkan aktivitas enzim
antioksidan antara lain glutathione (GSH), superoxide dismutase (SOD),
glutathione peroxidase (GSH-Px) dan catalase (CAT). Senyawa TCDD
menginduksi peroksidasi lipid dan melemahkan sistem pertahanan antioksidan
pada berbagai organ. Kerusakan hepatosit dan stres oksidasi karena induksi
TCDD mendorong perkembangan berbagai riset pada bahan aktif yang mampu
melindungi hepatosit terhadap stres oksidasi difokuskan pada antioksidan (Turkez
dan Geyikoglu, 2011).
Superoxide dismutase (SOD)
Superoxide dismutase merupakan salah satu enzim antioksidan yang
dihasilkan oleh tubuh. Enzim ini bekerja sebagai pertahanan pertama tubuh
melawan radikal bebas berupa reactive oxigen species (ROS) di dalam sel (Aslani
dan Ghobadi, 2016). Superoxide dismutase merupakan enzim antioksidan
terbanyak di dalam tubuh dan sebagian besar berada pada organ hati. Enzim ini
18
termasuk dalam golongan metalloenzime, yaitu enzim yang mempunyai kofaktor
ion logam sebagai penyusunnya.
Enzim superoxide dismutase pertama kali ditemukan oleh McCord dan
Fridovich pada tahun 1969 pada sel darah merah sapi. Terdapat beberapa isoform
dari SOD yang dibedakan berdasarkan ion logam yang aktif, susunan asam amino,
serta kofaktor. Terdapat tiga jenis SOD pada mamalia dengan lokasi dan distribusi
pada jaringan yang spesifik. Enzim copper zinc superoxide dismutase (CuZn-
SOD) mempunyai berat molekul 32 kDa terletak di dalam sitoplasma dan
organela di hampir semua sel mamalia. Enzim SOD yang kedua adalah
manganese superoxide dismutase (Mn-SOD) mempunyai berat molekul 96 kDa
dan terdapat dalam mitokondria dari semua sel tubuh. enzim Mn-SOD adalah
enzim antioksidan yang mempunyai aktivitas anti tumor. Enzim yang ketiga
adalah extracellular superoxide dismutase (EC-SOD) yang merupakan
glikoprotein tetramerik yang mengandung ion copper dan zinc. Enzim EC-SOD
disintesa oleh fibroblas dan sel endotel dan terdapat dalam cairan ekstraseluler
mamalia (Valko et al., 2006; Aslani dan Ghobadi, 2016).
Enzim SOD adalah antioksidan sekunder, enzim ini bekerja dengan cara
mencegah tahapan inisiasi dalam reaksi berantai radikal bebas. Enzim Superoxide
dismutase mengkatalisasi perubahan superoksida menjadi hidrogen peroksida dan
oksigen. Reaksi digambarkan sebagai berikut:
O2 ⋅− + O2 ⋅− + 2H+ → H2O2 + O2
Hidrogen peroksida yang dihasilkan dari reaksi ini kemudian dikeluarkan dari sel
oleh aktivitas enzim katalase (CAT) atau enzim glutathione peroxidase (GSH-Px)
19
(Aslani dan Ghobadi 2016). Enzim katalase akan mengkatalisasi reaksi yang
merubah hidrogen peroksida menjadi air dan oksigen (McCord, 1999) seperti
yang terlihat pada reaksi berikut:
H2O2 + H2O2 → O2 + 2H2O
Aktivitas SOD diukur berdasarkan laju penghambatan reduksi
ferricytochrome c oleh anion superoksida yang dihasilkan oleh xantin/xantin
oksidase (McCord, 1969). Dasar pengukuran aktivitas SOD adalah kemampuan
enzim ini untuk berkompetisi dengan reaksi standar yaitu reaksi superoxide
dengan molekul indikator ferricytochromme c. Enzim SOD merupakan inhibitor
kompetitif pada reaksi standar xantin oksidase-cytochrome c. Radikal superoxide
dapat menurunkan cytochrome c dan superoxide dismutase menghambat reaksi
reduksi tersebut (McCord dan Fridovich, 1969). Metode ini kemudian
dikembangkan dengan menggunakan nitro blue tetrazolium (NBT). Enzim
superoxide dismutase akan menghambat pembentukan formazan biru yang
merupakan hasil reduksi NBT oleh ion superoxide (Beauchamp dan Fridovich,
1971). Perubahan warna yang terjadi dapat diukur menggunakan spektrofotometri
dengan panjang gelombang 560 nm. McCord dan Fridovich (1969)
menyimpulkan bahwa tingginya aktivitas SOD pada berbagai jaringan mamalia
membuktikan bahwa enzim ini mempunyai peran yang penting dalam melindungi
sel organisme terhadap efek merusak dari radikal superoxide.
20
Antioksidan
Antioksidan merupakan substansi dalam pangan yang secara signifikan
mengurangi dampak buruk dari spesies reaktif seperti oksigen reaktif dan
nitrogen reaktif (Huang et al., 2005). Antioksidan dalam istilah pangan adalah
kandungan dalam makanan yang mampu memperlambat, menghambat, atau
mencegah proses oksidasi yang membuat makanan menjadi rusak (Pihlanto,
2006).
Oksidasi adalah proses vital dalam tubuh organisme walaupun efek
samping dari proses ini adalah terbentuknya radikal bebas. Radikal bebas
dihasilkan secara alami selama proses metabolisme dan selama proses respirasi
pada organisme aerob. Reaksi normal tubuh seperti produksi kalori, degradasi
lipid, dan respon katekolamin yang disebabkan oleh proses stres dan peradangan
menghasilkan produk sampingan berupa radikal bebas (McCord, 2000).
Antioksidan enzimatik dihasilkan dalam tubuh mamaliamyaitu enzim katalase,
superoxide dismutase (SOD), dan glutathione peroxidase membantu tubuh untuk
mengendalikan proses over oksidasi dengan mencegah pembentukan radikal
bebas atau menetralisasi radikal bebas (Huang et al., 2005; Hasanov et al., 2012).
Terbentuknya radikal bebas yang berlebihan dapat menyebabkan sistem protektif
enzim antioksidan tersebut tidak seimbang dan menimbulkan efek destruktif
terhadap sel dengan terjadinya oksidasi lipid, protein, deoxyribo nucleic acid
(DNA), dan berbagai enzim (Pihlanto, 2006).
Antioksidan non-enzimatik berupa metabolik antioksidan atau nutrien
antioksidan. Metabolik antioksidan dihasilkan oleh tubuh melalui jalur metabolik
21
antara lain antioksidan thiol (glutathione, thioredoxin, glutaredoxin, dan lipoic
acid), melatonin, koenzim Q10, asam urat, bilirubin, protein pengikat logam, dan
lainnya (Rizzo et al., 2010; Aslani dan Ghobadi, 2016). Antioksidan nutrien
berasal dari luar tubuh dan terdapat dalam buah buahan dan sayuran seperti
polyphenol, flavonoid, isoflavon, vitamin A, B, C, dan E (Huang et al., 2005).
Menurut (Awemu et al., 2009), antioksidan alami yang bersumber dari
makanan mulai dikembangkan karena dipercaya mampu melindungi tubuh dari
radikal bebas dan menghambat perkembangan berbagai penyakit kronis.
Antioksidan alami dapat berfungsi antara lain sebagai senyawa pereduksi, sebagai
penangkap radikal bebas, pengkelat logam prooksidan, dan sebagai quencher dari
bentuk singlet oksigen (Fereidoon dan Zhong, 2008; Farvin et al., 2010).
Kasein Yogurt Susu Kambing
Susu kambing
Masyarakat Indonesia telah banyak mengenal susu kambing sebagai obat.
Kebanyakan susu kambing dikonsumsi secara langsung tanpa dilakukan
pengolahan terlebih dahulu (Hamidah et al., 2012). Susu kambing merupakan
susu yang dihasilkan oleh kambing peranakan Etawa (PE). Berdasarkan
kandungan nutrisi dibandingkan dengan susu sapi, susu kambing memiliki
kandungan gizi yang lebih unggul (Effendi et al., 2009).
Susu kambing mengandung laktosa dan protein yang mirip dengan susu
sapi. Perbedaan terdapat pada kandungan protein struktural dan protein
imunologik antara lain laktalbumin dan fraksi protein lainnya (McCullough,
2003). Menurut Park et al. (2007), ukuran globula lemak susu kambing lebih kecil
22
dibandingkan susu sapi. Kandungan asam lemak rantai sedang dan rantai pendek
lebih tinggi pada susu kambing daripada susu sapi. Kandungan mineral dan
vitamin pada susu kambing lebih tinggi dari yang terkandung pada susu sapi.
Protein susu kambing merupakan sumber penting peptida bioaktif
angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitor dan peptida yang berfungsi
sebagai antihipertensi. Kandungan taurine pada susu kambing merupakan nutrisi
yang penting untuk pertumbuhan bayi (Park et al., 2007; Donkor et al., 2007).
Yogurt
Definisi yogurt menurut SNI 2981:2009 adalah produk yang diperoleh dari
fermentasi susu atau susu rekonstitusi dengan menggunakan bakteri asam laktat
yang sesuai, dengan/atau tanpa penambahan bahan pangan lain dan bahan
tambahan pangan yang diijinkan (Badan Standardisasi Nasional, 2009).
Fermentasi menggunakan bakteri asam laktat (BAL) adalah teknologi yang cukup
lama digunakan untuk pengawetan dan pengolahan susu (Donkor et al., 2007).
Yogurt merupakan produk probiotik terbuat dari susu yang difermentasi
dengan bantuan bakteri proteolitik antara lain Streptococcus thermophillus,
Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, dan
Lactobacillus bifidum (Lourens-Hattingh dan Viljoen, 2001). Probiotik adalah
campuran dari kultur mikroorganisme yang dikonsumsi yang memberikan
berbagai manfaat dalam saluran pencernaan serta meningkatkan kesehatan
(Rijkers et al., 2011).
Proses pengolahan susu menjadi yogurt meliputi lima tahapan antara
lain: pasteurisasi susu, pendinginan susu yang telah dipasteurisasi, penambahan
23
strater BAL, pemeraman susu yang telah ditambahkan starter BAL, dan
penyimpanan yogurt yang telah jadi pada suhu rendah (Effendi et al., 2009).
Kasein
Protein merupakan komponen esensial pada jaringan organisme dan
berperan dalam berbagai proses fisiologis di dalam sel. Protein dalam bahan
pangan, adalah makronutrien yang penting sebagai sumber energi dan asam amino
yang penting bagi pertumbuhan dan pemeliharaan dalam tubuh. Protein juga
berperan dalam berbagai fungsi fisikokimia dan sensorik dalam makanan dan
dapat berperan fungsional sebagai bahan peningkat kesehatan. Berbagai fungsi
dari protein dipercaya berasal dari peptida yang menyusun dalam molekul protein
(Fereidoon dan Zhong, 2008).
Protein susu terdiri dari dua bagian yaitu kasein dan water soluble extract
(WSE). Kasein dalam jumlah yang cukup tinggi mencapai 80% dari protein susu
(2,7 g/100 g susu) yang terdiri dari αs1-casein, αs2-casein, β-casein, dan κ-casein
(Séverin dan Wenshui, 2005; Korhonen, 2009; Hsieh et al., 2015). Beberapa
penelitian telah menunjukkan bahwa kasein dan whey protein mempunyai
kandungan antioksidan (Farvin et al., 2010).
Kasein merupakan protein prekursor bagi peptida bioaktif. Awemu et al.
(2009) telah berhasil melakukan isolasi dan identifikasi peptida tersebut untuk
diteliti manfaatnya bagi kesehatan. Peptida bioaktif adalah rangkaian pendek dari
2-30 asam amino dengan berat molekul rendah yang dilepaskan dari protein
prekursor melalui 3 cara: hidrolisis enzimatik oleh enzim pencernaan, fermentasi
24
susu dengan kultur starter proteolitik, dan proteolisis oleh enzim yang berasal dari
mikroorganisme atau tanaman (Korhonen, 2009).
Aktivitas peptida bioaktif tergantung dari komposisi dan rangkaian asam
amino. Peptida bioaktif diketahui mempunyai fungsi antimikrobial, antioksidatif,
antitrombotik, antihipertensi, antikarsinogenik, memperbaiki proses regulasi, dan
imunomodulator (Exposito dan Recio, 2006; Di Bernardini et al., 2011; Awemu et
al., 2009). Tabel 4 menunjukkan beberapa fungsi peptida bioaktif yang terdapat
dalam protein susu.
Tabel 4. Protein prekursor peptida bioaktif dalam susu
Fungsi Protein prekursor Mekanisme
Antihipertensi β-kasein,
αs1-kasein, κ-kasein,
β-Laktoglobulin,
α-Laktalbumin
Hambatan aktivitas angiotensin
converting enzyme (ACE)
Penurun kolesterol β-Laktoglobulin Hambatan penyerapan micellar
kolesterol sel epitel usus halus
Antioksidan β-laktoglobulin,
Kasein hidrolisat,
Kaseinofosfopeptida
Aktivitas scavenging radikal
bebas, hambatan oksidasi
liposom, dan hambatan oksidasi
lipid
Antikanker Fraksi hidrofobik yang
diisolasi dari keju
Toksisitas terhadap sel line
tumor
Imunomodulator Whey protein
hidrolisat
β-Laktoglobulin
hidrolisat,
β-Kasein,
αs1-Kasein hidrolisat
Stimulasi produksi antibodi di
limpa, stimulasi proliferasi sel
limpa, meningkatkan aktivitas
fagositik sel neutrofil, dan
menekan sekresi sitokin
(Fereidoon dan Zhong 2008)
25
Tikus Putih sebagai Hewan Model Intoksikasi Dioksin
Hewan coba merupakan hewan yang dikembangkan untuk digunakan
sebagai hewan coba. Tikus (Rattus norvegicus) sering digunakan pada berbagai
macam penelitian medis. Hal ini dikarenakan tikus memiliki karakteristik
fungsional yang baik untuk model mamalia. Hewan coba tikus memberikan
keuntungan sebagai model berbagai penyakit pada manusia dan pengembangan
agen terapi (Hedrich, 2000). Tikus putih merupakan anggota famili rodensia yang
ditunjukkan pada taksonomi dari tikus putih sebagai berikut: Kingdom: Animalia;
Filum: Chordata; Kelas: Mamalia; Ordo: Rodentia; Sub-Ordo: Myomorpha;
Famili: Muridae; Sub-Famili: Murinae; Genus: Rattus; Spesies: Rattus norvegicus
(Hedrich, 2000).
Penelitian untuk mengetahui risiko dari bahan kimia toksik pada manusia
dan lingkungan seperti obat-obatan medis, bahan kimia pertanian, bahan
tambahan makanan, serta bahan toksik lainnya secara in vivo telah menggunakan
hewan coba tikus karena sensitif terhadap berbagai toksikan. Oleh karena itu,
tikus adalah hewan coba yang direkomendasikan dalam berbagai pedoman
penelitian in vivo mengenai bahan kimia dan bahan toksik (Mutai, 2000).
Penggunaan tikus sebagai hewan model dalam percobaan memiliki
beberapa keunggulan antara lain pemeliharaan dan penanganan yang mudah.
Tikus Wistar albino (tikus putih) dikembangkan oleh Wistar Institute pada 1906.
Sifat tikus mudah ditangani dan agresivitas pada tikus jantan relatif lambat. Tikus
merupakan hewan nocturnal dan merupakan spesies omnivora sehingga mampu
menyeimbangkan asupan nutrisinya dari berbagai jenis pakan. Umur dewasa tikus
26
jantan mulai 40-50 hari dengan berat badan rata-rata 150-250 gram (Koolhaas,
2010). Data biologis pada tikus Wistar jantan (Johnson-Delaney, 2008) disajikan
pada Tabel 5.
Tabel 5. Data biologis tikus Wistar jantan
Parameter Biologis Nilai
Berat tikus dewasa Kebutuhan makan Kebutuhan minum Jangka hidup Temperatur tubuh Detak jantung Laju pernafasan Waktu transit gastrointestinal Serum protein Serum glukosa Nitrogen urea darah Serum lipid Trigliserida Kolesterol Alanine transaminase (ALT) Aspartate transaminase (AST)
450-520 gram 10g/100g berat badan/hari 10-12 mL/100g berat badan/hari 2-3,5 tahun 35,9-37,5 0C 250-450/menit 70-115/menit 12-24 jam 5,6-7,6 g/dL 15-135 mg/dL 15-21 mg/dL 70-415 mg/dL 26-145 mg/dL 40-130 mg/dL 17,5-30,2 IU/L 45,7-80,8 IU/L
27
Landasan Teori
Polutan organik persisten adalah substansi kimia di alam yang mengalami
bioakumulasi melalui jaringan pangan dan dapat menimbulkan efek negatif bagi
kesehatan manusia dan lingkungan. Dioksin adalah kelompok senyawa kimia
tricyclic aromatic hidrokarbon dengan satu sampai delapan atom klorin, bersifat
lipofilik, non-polar, dan sangat stabil terhadap proses degradasi lingkungan
(Birnbaum, 1994; Fiedler, 2003). Sifat senyawa yang lipofilik dan waktu paruh
yang panjang menyebabkan dioksin terakumulasi dalam mata rantai pangan
(Startin dan Rose, 2003). Beberapa penelitian menunjukkan bahwa limbah
masyarakat dan limbah pabrik mengandung dioksin dan mencemari lingkungan
(Martunus dan Helwani, 2007; Gufita et al., 2014). Sebesar 90% paparan dioksin
pada manusia berasal dari makanan yang tercemar. Bahan pangan asal hewan
seperti daging, susu, dan telur merupakan jalur utama timbulnya intoksikasi
dioksin pada manusia (De Vries et al., 2006).
Paparan jangka panjang dari dioksin menyebabkan berbagai gangguan
kesehatan karena sifat dioksin yang imunotoksik, neurotoksik, dan hepatotoksik.
Congener dioksin yang paling toksik adalah 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin
(2,3,7,8-TCDD) yang bersifat karsinogenik bagi manusia (Fiedler, 2003). Induksi
sitokrom P450 (CYP1A1 dan CYP1B1) oleh TCDD meningkatkan marker
biologis dari ROS dan menghambat aktivitas enzim antioksidan endogen sehingga
menyebabkan stres oksidasi karena peroksidasi lipid, putusnya untaian DNA, dan
penurunan fluiditas pada membran sel di berbagai jaringan (Karami-mohajeri dan
Abdollahi, 2010; Rosinczuk et al., 2015). Pemberian TCDD dengan dosis 25, 50,
28
100 μg/kg berat badan selama satu hari dapat menghasilkan peningkatan level
peroksidasi lipid dan kerusakan DNA pada hati tikus Sprague Dawley (Yoshida
dan Ogawa, 2000). Beberapa parameter yang menunjukkan intoksikasi TCDD
antara lain: 1) hasil degradasi seperti peroksidasi lipid (MDA); 2) antioksidan
enzimatik yaitu super oxide dismutase (SOD), Catalase (CAT), glutathione
peroxidase (GSH-PX), dan glutathione reductase (GR); 3) peningkatan indikator
fungsi hati yaitu kadar alanine aminotransferase (ALT), aspartate
aminotransferase (AST), γ-glutamyltransferase (GGT), serta total bilirubin
(Triebig et al., 1998; Yoshida dan Ogawa, 2000).
Konsumsi antioksidan telah banyak dianjurkan bagi masyarakat dan telah
banyak penelitian mengenai manfaat antioksidan bagi tubuh. Protein dalam susu
telah diketahui mempunyai aktivitas biologis. Peptida bioaktif yang terdapat
pada kasein sebagai protein prekursor sudah berhasil diisolasi dan
diidentifikasi untuk diteliti manfaatnya bagi kesehatan (Awemu et al., 2009).
Beberapa fungsi biologis peptida bioaktif yang sudah diketahui antara lain sebagai
antioksidan, antimikrobial, antihipertensi, antikolesterolemia, sitomodulator,
dan imunomodulator (Exposito dan Recio, 2006; Awemu et al., 2009).
Hipotesis
Hipotesis dari penelitian ini adalah pemberian kasein yogurt susu kambing
dapat mempertahankan kadar enzim SOD pada hati, mencegah peningkatan kadar
kolesterol dan kadar trigliserida, serta mencegah peningkatan enzim ALT dan
AST serum dalam intoksikasi dioksin (TCDD) pada tikus Wistar.
29
BAB III
MATERI DAN METODE
Waktu dan Tempat
Penelitian dilaksanakan pada bulan Mei sampai dengan Juli 2017.
Pembuatan yogurt susu kambing dilakukan di Laboratorium Kesmavet Fakultas
Kedokteran Hewan Universitas Brawijaya, Malang. Pengujian kasein dilakukan di
Laboratorium Pengujian Mutu dan Keamanan Pangan Fakultas Teknologi
Pertanian Universitas Brawijaya.
Pemeliharaan dan perlakuan hewan coba dilaksanakan di Laboratorium
Hewan Eksperimental Institut Biosains Universitas Brawijaya, Malang. Pengujian
sampel darah dan jaringan dilakukan di Laboratorium Klinik Pattimura Malang
dan Laboratorium Faal Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang.
Materi
Populasi dan sampel
Sampel penelitian menggunakan hewan coba tikus putih (Rattus
norvegicus) jantan galur Wistar berumur 8-12 minggu, berat badan 120-150 gram.
Tikus putih diperoleh dari penyedia hewan laboratorium D’wistar Bandung. Masa
adaptasi dilakukan selama 7 hari dengan masa perlakuan selama 21 hari.
Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus putih (Rattus
norvegicus) jantan galur Wistar, sekam, pakan komersil konsentrat pemula (calf
starter), air minum, susu kambing peranakan Etawa (PE) segar, starter yogurt
30
yang mengandung tiga jenis bakteri asam laktat yaitu Lactobacillus bulgaricus,
Streptococcus thermophilus, dan Lactobacillus acidophilus (Yόgourmet Lyo-SAN
INC: 500 Aeroparc, C.P. 589, Lachute, QC. Canada, J8H, 464). Bahan kimia
dioksin adalah TCDD 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (Supelco, Cat nomor
48599). Pelarut yang digunakan untuk dioksin adalah minyak jagung dan pelarut
kasein digunakan air distilasi RO (Reverse Osmosis). Nitrogen cair digunakan
untuk preparasi jaringan hati. Bahan penelitian adalah serum darah dan jaringan
hati tikus (Rattus norvegicus). Bahan yang digunakan untuk penanganan spesimen
jaringan adalah NaCl fisiologis dingin.
Peralatan
Peralatan yang digunakan untuk pembuatan kasein yogurt susu kambing
antara lain peralatan gelas, neraca analitik (Kern), pH meter (Eutech pH Spear),
autoclave (All American Model 1941x), tabung polipropilen 50 mL (Falcon),
inkubator (Memmert Ine500), sentrifus dingin (Hermle), kompor gas, dan
penangas air. Peralatan untuk pemeliharaan hewan coba antara lain kandang tikus
terbuat dari plastik berukuran 35 x 30 x 20 cm dengan penutup kandang yang
terbuat dari kawat kasa. Setiap kandang berisi 2 ekor tikus. Tiap kandang
dilengkapi dengan botol minum dan alas kandang menggunakan serutan kayu.
Peralatan lainnya adalah sonde lambung, timbangan digital (Camry), botol kaca
Schott 100 mL (Duran), kontainer nitrogen cair, disposable syringe, mikropipet
dan mikrotip, dissecting set, pot plastik untuk spesimen, kertas label, alumunium
foil, kertas saring Whatman No. 40, kantung plastik, parafilm, microhematocrit,
vacutainer plain 3 mL, dan microtube.
31
Metode
Penelitian ini bersifat eksperimental laboratoris. Rancangan penelitian
yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang terdiri atas enam
kelompok perlakuan dengan ulangan masing-masing 4 ekor tikus putih. Penentuan
besar sampel untuk jumlah ulangan dalam penelitian ini menggunakan rumus
penentuan replikasi untuk RAL (Kusriningrum, 2010) sebagai berikut:
Berdasarkan hasil perhitungan, jumlah minimum ulangan yang diperlukan adalah
4 kali. Ulangan pada penelitian ini digunakan n = 4 sehingga hewan coba yang
diperlukan adalah 24 ekor.
Penentuan kelompok perlakuan adalah sebagai berikut: kelompok 1
merupakan kelompok kontrol tanpa perlakuan dengan pemberian makan dan
minum normal. Kelompok 2 sebagai kontrol normal dengan pemberian kasein
yogurt susu kambing dengan dosis 600 mg/kg BB/hari/ekor dalam air distilasi.
Kelompok 3 adalah kelompok kontrol positif yaitu dengan pemberian TCDD
dosis 100 ng/kg BB/hari dalam pelarut minyak jagung 1 mL/hari/ekor. Kelompok
4 adalah kelompok perlakuan 1 dengan pemberian TCDD dosis 100 ng/kg
BB/hari dalam pelarut minyak jagung sebanyak 1 mL/hari/ekor dan kasein yogurt
dosis 300 mg/kg BB. Kelompok 5 adalah kelompok perlakuan 2 dengan
pemberian TCDD dosis 100 ng/kg BB/hari dalam pelarut minyak jagung
t (n-1) ≥ 15
6 (n-1) ≥ 15
6n-6 ≥ 15
6n ≥ 21
n ≥ 3,5 ~ 4
Keterangan :
t = jumlah kelompok (terdiri dari enam kelompok)
n = jumlah ulangan yang diperlukan
32
sebanyak 1 mL/hari/ekor dan kasein yogurt dosis 600 mg/kg BB. Kelompok 6
adalah kelompok perlakuan 3 dengan pemberian TCDD dalam pelarut minyak
jagung dosis 100 ng/kg BB/hari sebanyak 1 mL/hari/ekor dan kasein yogurt dosis
900 mg/kg BB. Kelompok kontrol dan kelompok perlakuan pada penelitian ini
disajikan pada Tabel 6.
Tabel 6. Rancangan kelompok penelitian
Kelompok Keterangan Kelompok 1
Kontrol normal, pemberian pakan dan minum selama 21 hari.
Kelompok 2
Kontrol sehat dengan pemberian kasein yogurt dosis 600 mg/kg BB dalam air distilasi selama 21 hari.
Kelompok 3 Kontrol sakit dengan pemberian TCDD dosis 100 ng/kg BB/hari dalam pelarut minyak jagung 1 mL/hari/ekor selama 21 hari.
Kelompok 4 Perlakuan 1, pemberian TCDD dosis 100 ng/kg BB/hari dalam pelarut minyak jagung 1 mL/hari/ekor dan kasein yogurt dosis 300 mg/kg BB selama 21 hari.
Kelompok 5 Perlakuan 2, pemberian TCDD dosis 100 ng/kg BB/hari dalam pelarut minyak jagung 1 mL/hari/ekor dan kasein yogurt dosis 600 mg/kg BB selama 21 hari.
Kelompok 6 Perlakuan 3, pemberian TCDD dosis 100 ng/kg BB/hari dalam pelarut minyak jagung 1 mL/hari/ekor dan kasein yogurt dosis 900 mg/kg BB selama 21 hari.
Penelitian ini terdiri dari tiga tahapan. Tahap pertama adalah pembuatan
yogurt susu kambing. Yogurt susu kambing yang dihasilkan dilakukan pengujian
total bakteri asam laktat (BAL) dan pemisahan kasein yang selanjutnya akan
digunakan untuk perlakuan pada hewan coba. Tahap kedua adalah uji aktivitas
antioksidan pada kasein yogurt susu kambing. Tahapan ketiga adalah pemberian
perlakuan pada hewan coba intoksikasi dioksin. Dioksin yang digunakan adalah
senyawa 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin karena diketahui merupakan jenis
dioksin yang memiliki aktivitas toksisitas tertinggi. Dosis TCDD yang digunakan
33
adalah 100 ng/kg berat badan/hari/ekor (Haskito, 2013). Menurut Saragih (2005)
dosis oral TCDD pada tikus putih 0,1 µg/kg berat badan selama 27 hari
mampu menyebabkan hepatotoksisitas. Dosis pemberian kasein yogurt susu
kambing sebanyak 300 mg/kg berat badan/hari, 600 mg/kg berat badan/hari, dan
900 mg/kg berat badan/hari (Padaga et al., 2015).
Tahapan penelitian
1. Pembuatan kasein yogurt susu kambing
Pembuatan starter cair (mother working culture). Susu kambing
sebanyak 70 mL dilakukan pasteurisasi pada suhu 720C selama 5 menit,
kemudian susu kambing didinginkan hingga mencapai suhu antara 450C.
Tahap selanjutnya, susu kambing diinokulasi dengan starter powder
sebanyak 0,35 gram dan dihomogenisasi kemudian diinkubasikan pada suhu
450C selama 4 jam, sampai terbentuk starter yogurt pada pH 4,4 - 4,5.
Starter cair disimpan di dalam lemari es sampai digunakan untuk pembuatan
yogurt.
Pembuatan yogurt. Susu kambing sebanyak 500 mL dipasteurisasi
pada suhu 720C selama 5 menit dan didinginkan hingga mencapai suhu antara
450C. Inokulasi starter cair sebanyak 3% ke dalam 480 mL susu kambing
yang sudah dipasteurisasi. Proses inkubasi susu kambing dilakukan pada suhu
450C selama 4-8 jam dan diperoleh pH 4,5 sampai 5 selanjutnya yogurt
disimpan ke dalam refrigerator (Posecion et al., 2005). Jumlah bakteri asam
laktat (BAL) yang terkandung dalam yogurt didapatkan dengan cara
penghitungan coloni forming unit (cfu) BAL melalui metode penanaman pada
34
media de man Rogosa Sharpe Agar (MRSA) dengan teknik pour plate.
Pemisahan kasein dengan sentrifugasi yogurt pada kecepatan 1.200 rpm
selama 10 menit pada suhu 50C dan disaring untuk memisahkan kasein
dengan water soluble extract (WSE).
2. Uji aktivitas antioksidan kasein (modifikasi Pinela et.al., 2012)
Kasein diekstrak dengan konsentrasi 10.000 ppm menggunakan
metanol, kemudian disiapkan ekstrak kasein dengan 4 konsentrasi. Sebanyak
1 mL sampel ekstrak ditambah dengan 7 mL metanol dan 2 mL larutan 2,2-
diphenyl-1-picrylhydrazil (DPPH) 0,2 nM. Campuran selanjutnya divorteks
dan diinkubasi selama 30 menit dalam kondisi gelap. Pembuatan larutan
blangko dengan mereaksikan 7 mL metanol dengan 2 mL DPPH 0,2 nM dan
divorteks serta didiamkan selama 30 menit. Absorbansi sampel dan blangko
diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 521 nm.
Aktivitas antioksidan sebagai IC50 dihitung dengan membuat kurva antara
konsentrasi sampel dan kapasitas antioksidan sehingga diperoleh persamaan
berikut: y = ax + b. Nilai kapasitas absorbansi dalam persen (%) dihitung
dengan rumus:
Kapasitas antioksidan = � ��������� ������
� ������� � 100%
Berdasarkan persamaan y = ax +b, nilai IC50 (x) dapat dihitung dengan rumus
berikut:
IC50 = ����
�
35
3. Perlakuan menggunakan hewan coba
Berdasarkan perhitungan jumlah pengulangan untuk 6 kelompok
perlakuan, diperlukan pengulangan paling sedikit sebanyak empat kali.
Penelitian ini menggunakan 4 ekor tikus putih untuk tiap kelompok, sehingga
digunakan hewan coba sebanyak 24 ekor. Sebelum mendapatkan perlakuan
hewan diadaptasikan dengan kondisi kandang dan pakan selama tujuh hari.
Hewan diberi ransum basal yang komposisinya disusun berdasarkan standar
association of official analytical chemist (AOAC) (2005). Kandang tikus
berukuran 35 x 30 x 20 cm dengan lantai kandang yang mudah dibersihkan.
Hewan coba tikus putih jantan galur Wistar diberikan TCDD per oral
menggunakan sonde lambung selama 21 hari dengan dosis 100 ng/kg berat
badan/hari/ekor. Pemberian TCDD dilakukan pada pagi hari setiap hari.
Penentuan dosis tersebut berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Xu et al.
(2008) dan Haskito (2013).
Penentuan dosis pemberian kasein yogurt susu kambing yang
digunakan dalam penelitian ini berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh
Padaga et al. (2015) dengan menggunakan dosis kasein yogurt susu kambing
300 mg/kgBB/hari, 600 mg/kgBB/hari, dan 900 mg/kgBB/hari dalam pelarut
air distilasi. Pemberian dosis kasein yogurt susu kambing secara per oral
selama 21 hari dengan menggunakan sonde lambung (Contreras et al., 2011)
dilakukan pada siang hari, 4 jam setelah pemberian TCDD.
36
Pengambilan sampel darah dan jaringan
Darah diambil setelah tikus dilakukan eutanasi dengan cara dislokasi
cervicalis. Pengambilan darah melalui jantung dengan cardiac puncture sebanyak
kurang lebih 1-2 mL, dimasukkan ke dalam tabung vacutainer dan didiamkan
sampai serum terpisah, setelah itu dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan 3.000
rpm selama 15 menit. Supernatan yang terbentuk dipisahkan dan kembali
dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan 3.000 rpm selama 15 menit, kemudian
setelah sentrifugasi yang kedua, serum dipisahkan dan dipindahkan ke tabung
microtube baru dan bersih, lalu disimpan di dalam freezer sampai dilakukan
analisis profil lemak dan kimia darah.
Organ hati tikus yang digunakan untuk pemeriksaan aktivitas enzim
superoxide dismutase (SOD) dicuci terlebuih dahulu menggunakan NaCl
fisiologis. Sampel hati dibungkus dengan alumunium foil kemudian dicelupkan
pada nitrogen cair, setelah itu dimasukkan dalam plastik klip yang telah diberi
kertas label dan disimpan pada suhu -800C sampai dilakukan pemeriksaan.
Pengamatan dan analisis data
Data kuantitatif yang diperoleh dari hasil perlakuan untuk kadar kolesterol,
trigliserida, serum ALT, serum AST, dan aktivitas enzim SOD ditabulasi
menggunakan Microsoft Office Excel. Analisis statistik antar kelompok perlakuan
dengan analisis varian (ANOVA) dan dilanjutkan dengan uji post hoc Tukey HSD
menggunakan SPSS Statistics 17.0 for windows (Padaga et al., 2015).
37
Diagram Alur Penelitian
Air distilasi
PO
Hewan coba tikus putih galur Wistar (24 ekor)
(+) TCDD
PO
(+) kasein dosis 600
mg/kg BB/hari
PO
Kelompok 1 Kelompok 2 Kelompok 3
Kelompok 4
Adaptasi 7 hari
Analisis data
Kelompok 5
(+) TCDD (+) Kasein dosis 300
mg/kg BB/hari
(+) TCDD (+) Kasein dosis 600
mg/kg BB/hari
Perlakuan selama 21 hari
Euthanasi dengan dislokasi cervicalis, pengambilan sampel
Analisis trigliserida, kolesterol, AST, ALT
serum
Kelompok 6
(+) TCDD (+) Kasein dosis 900
mg/kg BB/hari
Kontrol normal
kontrol sakit
Placebo Perlakuan 1 Perlakuan 3 Perlakuan 2
Analisis kadar SOD hati
Hasil analisis
Uji aktivitas
antioksidan
metode DPPH
Analisis
proksimat
kasein yogurt
susu kambing
Perlakuan dengan
hewan coba
Fermentasi susu dengan
penambahan BAL
Penghitungan
total BAL
yogurt susu
kambing
Analisa kadar
protein total
Susu kambing PE
Pemisahan kasein dari WSE
Kasein yogurt susu kambing
Pasteurisasi susu
38
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Analisis Yogurt Susu Kambing dan Kasein Yogurt Susu Kambing
Kandungan nutrisi pada sampel yogurt susu kambing dan kasein yogurt
susu kambing dianalisis di Laboratorium Pengujian Mutu dan Keamanan Pangan
Fakultas Teknologi Pertanian Universitas Brawijaya. Hasil pengujian dapat dilihat
pada Tabel 7 berikut ini:
Tabel 7. Hasil analisis yogurt susu kambing dan kasein yogurt susu kambing
Yogurt susu kambing dibuat menggunakan starter yang mengandung
bakteri asam laktat Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus thermophillus, dan
Lactobacillus acidophilus. Kandungan total bakteri asam laktat (BAL) pada
sampel yogurt adalah 3,4 x 107 cfu/mL. Jumlah total BAL ini sesuai dengan SNI
2981:2009 bahwa jumlah minimal total BAL yang terdapat pada yogurt adalah
107 cfu/mL (Badan Standardisasi Nasional, 2009). Total BAL dalam produk
probiotik agar dapat memberikan manfaat bagi kesehatan menurut Ranadheera et
al. (2012) adalah 105-106 cfu/g. Jumlah minimum bakteri asam laktat dalam
produk probiotik merupakan hal yang penting agar bakteri mampu bertahap
Bahan Parameter uji Nilai
Yogurt susu kambing Total BAL 3,4 x 107 cfu/mL
Protein 3,58%
Kasein yogurt susu kambing Protein 4,85%
Lemak 9,32%
Air 78,85%
Abu 0,73%
Karbohidrat 6,25%
Antioksidan IC50 2543,00 mg/mL
39
selama masa penyimpanan makanan maupun pada saat transit makanan pada
saluran pencernaan dari pengaruh enzim hidrolitik dan garam empedu di usus
halus (Kailasapathy dan Chin, 2000).
Kandungan utama protein susu adalah kasein dan whey dengan kadar
minimum protein susu dalam yogurt sebesar 2,7% (Dziuba dan Dziuba, 2014;
Oliveira, 2014). Hasil analisis protein pada sampel yogurt susu kambing adalah
3,57% dan pada sampel kasein yogurt susu kambing terdapat 4,85% protein.
Proses sentrifugasi yogurt akan memisahkan whey dari kasein sehingga produk
yang dihasilkan mengandung kadar protein lebih tinggi dan lebih rendah
karbohidrat (Oliveira, 2014). Hasil uji proksimat untuk nutrisi lainnya dari kasein
yogurt susu kambing adalah kandungan lemak sebesar 9,32%, kandungan air
sebesar 78,85%, kandungan abu sebesar 0,73%, dan kandungan karbohidrat
sebesar 6,25%.
Pengujian aktivitas antioksidan kasein yogurt susu kambing sebagai
pengikat radikal bebas (free radical scavenging) menggunakan metode uji radikal
bebas 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil (DPPH). Metode ini menggunakan senyawa
DPPH sebagai radikal bebas yang stabil (Unal dan Akalin, 2012). Parameter yang
digunakan untuk menginterpretasikan hasil pengujian dari metode DPPH adalah
IC50 (inhibitor concentration 50%) dimana semakin kecil nilai IC50 artinya
aktivitas antioksidan semakin tinggi (Molyneux, 2004). Hasil pengujian IC50
kasein yogurt susu kambing adalah sebesar 2543,00 mg/mL yang merupakan
konsentrasi kasein yang diperlukan untuk mereduksi 50% radikal bebas DPPH.
Kasein susu mempunyai aktivitas antioksidan sebagai pengikat logam (metal
40
chelator) dan pengikat radikal bebas (Farvin et al., 2010; Alenisan et al., 2017).
Awemu et al., (2009) menambahkan bahwa strain tertentu dari bakteri asal laktat
L. acidophilus mempunyai kemampuan mengikat radikal bebas DPPH.
Aktivitas Enzim superoxide dismutase (SOD) Hati
Aktivitas enzim antioksidan superoxide dismutase (SOD) pada hati tikus
Wistar diukur dalam satuan U/mL. Berdasarkan Tabel 8 dapat dilihat pemberian
TCDD menurunkan aktivitas enzim SOD pada hati secara nyata (P<0,05)
dibandingkan kontrol. Kelompok perlakuan TCDD dan kasein pada dosis 300,
600, dan 900 mg/kg BB menunjukkan adanya peningkatan aktivitas enzim SOD
dibandingkan dengan kelompok TCDD. Kelompok perlakuan TCDD dengan
kasein yogurt susu kambing dosis 900 mg/kg BB menunjukkan aktivitas enzim
SOD yang paling tinggi dengan persentase peningkatan adalah 75,99%
dibandingkan kelompok TCDD.
Tabel 8. Pengaruh kasein yogurt susu kambing pada aktivitas enzim SOD hati tikus intoksikasi dioksin
Kelompok Aktivitas SOD
(mean + SD) U/mL
Penurunan aktivitas enzim SOD dibanding
kontrol (%)
Peningkatan aktivitas enzim SOD
dibanding kelompok TCDD (%)
Kontrol 5,6915 + 1,076bc - -
TCDD 3,6918 + 0,146a 35,14 -
kasein 4,7333 + 1,003ab 16,84 28,21
TCDD + kasein 300 4,8165 + 0,667ab 15,37 30,47
TCDD + kasein 600 5,6363 + 0,539bc 0,97 52,67
TCDD + kasein 900 6,4973 + 0,468c - 75,99 Notasi yang berbeda menunjukkan perbedaan nyata pada P<0,05
Perubahan aktivitas pada enzim antioksidan dapat digunakan sebagai alat
ukur tidak langsung adanya stres oksidasi yang disebabkan oleh bahan tertentu
(Yoshida dan Ogawa, 2000). Enzim superoxide dismutase (SOD) merupakan
41
pertahanan pertama tubuh dalam menangkal efek negatif dari radikal bebas.
Enzim SOD mengubah superoksida (O2-) menjadi hidrogen peroksida (H2O2)
yang kemudian akan diubah menjadi H2O dan O2 oleh aktivitas enzim catalase
(Rizzo et al., 2010). Penurunan aktivitas SOD menunjukkan adanya stres oksidasi
yang disebabkan oleh TCDD (Turkez et al., 2012). Menurut Turkez dan
Geyikoglu (2011), intoksikasi TCDD menyebabkan peningkatan produksi ROS
dan peroksidasi lipid pada berbagai jaringan. Hal ini dapat disebabkan oleh
adanya hambatan aktivitas enzim antioksidan. Berdasarkan hasil penelitian ini,
pemberian TCDD dengan dosis 100 ng/kg BB setiap hari selama 21 hari pada
tikus Wistar menyebabkan penurunan aktivitas enzim SOD sebesar 35,14%
dibandingkan kontrol. Tingginya produksi radikal bebas menyebabkan aktivitas
enzim proteksi seperti SOD dan enzim antioksidan lainnya tidak mampu
mengimbangi dan menyebabkan kerusakan selular yang berlanjut pada kematian
sel (Pihlanto, 2006). Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa paparan TCDD
dapat menyebabkan stres oksidasi dengan meningkatkan ROS dan menurunkan
aktivitas enzim antioksidan seperti superoxide dismutase (SOD), glutathione
peroxidase (GSH-PX), glutathione, dan catalase pada jaringan hati tikus (Alsharif
dan Hassoun, 2004; Sakin et al., 2011).
Kelompok perlakuan TCDD dengan pemberian kasein yogurt susu
kambing dosis 300, 600, dan 900 mg/kg BB berturut-turut sebesar 4,8165 U/mL,
5,6363 U/mL, dan 6,4973 U/mL memiliki aktivitas enzim SOD lebih tinggi
dibandingkan kelompok TCDD. Berdasarkan hasil uji post hoc Tukey HSD,
kelompok TCDD + kasein 900 mg/kg BB menunjukkan aktivitas yang berbeda
42
nyata (P<0,05) dibandingkan dengan kelompok TCDD. Berdasarkan uji statistik,
kelompok perlakuan TCDD + kasein 600 tidak menunjukkan perbedaan nyata
dengan kelompok kontrol. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian kasein yogurt
susu kambing dengan dosis 600 mg/kg BB sudah dapat mempertahankan kadar
enzim SOD pada intoksikasi TCDD.
Pemberian kasein yogurt susu kambing 4 jam setelah pemberian TCDD
menunjukkan efek protektif terhadap stres oksidasi yang disebabkan oleh TCDD.
Menurut Pihlanto (2006), kasein mempunyai aktivitas antioksidan antara lain
sebagai radical scavenger dan cation chelator yang dapat menghambat oksidasi
lipid. Proses fermentasi susu oleh bakteri asam laktat (BAL) melepaskan peptida
bioaktif dari protein utama susu. Peptida antioksidan yang berasal dari susu terdiri
dari lima sampai sebelas asam amino hidrofobik antara lain prolin, histidin,
tyrosine atau tryptophan yang terdapat dalam kasein susu yang dapat berfungsi
sebagai scavenger atau mencegah pembentukan radikal bebas dan menghambat
proses peroksidasi lipid (Korhonen, 2009; Mohanty et al., 2016). Pihlanto (2006)
menambahkan bahwa bakteri asam laktat mempunyai aktivitas antioksidan.
Bakteri asam laktat mampu mengurangi akumulasi ROS pada saat proses
pencernaan makanan serta mempunyai kemampuan untuk mendegradasi anion
superoxide dan hidrogen peroksida.
Berdasarkan aktivitas enzim superoxide dismutase (SOD) pada hati,
pemberian kasein yogurt susu kambing mampu mencegah intoksikasi dioksin
(2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin) pada tikus Wistar dan pemberian kasein
yogurt susu kambing mempuyai efek protektif terhadap efek negatif dari TCDD.
43
Profil Lemak Darah
Hasil analisis kadar kolesterol serum pada kelompok kontrol dan
kelompok perlakuan menunjukkan masih dalam nilai normal kadar kolesterol
tikus Wistar jantan. Johnson-Delaney (2008) menyatakan nilai normal kolesterol
pada tikus Wistar jantan adalah 40-130 mg/dL. Peningkatan kadar kolesterol
terjadi pada kelompok TCDD dan pada kelompok perlakuan TCDD + kasein 300
sebesar 5,52% dibandingkan kadar kolesterol kelompok kontrol seperti
ditunjukkan pada Tabel 9. Kadar kolesterol terendah adalah pada kelompok
kontrol plasebo kasein yaitu 85,0 mg/dL. Uji statistika analisis varian (ANOVA)
pada kadar kolesterol total tidak menunjukkan perbedaan nyata (P>0,05).
Tabel 9. Pengaruh kasein yogurt susu kambing pada kadar kolesterol serum tikus intoksikasi dioksin
Kelompok kadar kolesterol
(mean + SD) mg/dl
Peningkatan kadar kolesterol dibanding
kontrol (%)
Penurunan kadar kolesterol dibanding
kelompok TCDD (%)
Kontrol 90,5 + 9,00 - -
TCDD 95,5 + 9,47 5,52 -
Kasein 85,0 + 7,16 - 10,99
TCDD + kasein 300 95,5 + 16,03 5,52 0
TCDD + kasein 600 90,0 + 9,93 - 5,76
TCDD + kasein 900 87,75 + 5,38 - 8,12
Tabel 10 menunjukkan kadar trigliserida serum setelah perlakuan selama
21 hari. Kadar trigiserida serum dari kelompok kontrol dan kelompok perlakuan
masih dalam nilai normal. Nilai normal kadar trigliserida pada tikus Wistar jantan
adalah 26-245 mg/dL (Johnson-Delaney, 2008). Kadar trigliserida kelompok
TCDD adalah yang paling tinggi yaitu sebesar 127,5 mg/dL. Kadar tersebut
meningkat 114,29 % dibandingkan kadar trigliserida kelompok kontrol.
Kelompok perlakuan TCDD yang diberikan kasein yogurt susu kambing dengan
44
dosis 300, 600, dan 900 mg/kg BB menunjukkan kadar trigliserida berturut turut
sebesar 87,25 mg/dL, 57,25 mg/dL, dan 70,75 mg/dL. Hasil ini menunjukkan
bahwa kadar trigliserida mengalami penurunan dibandingkan kelompok TCDD.
Uji statistik pada kadar trigliserida tidak menunjukkan perbedaan nyata antar
kelompok pada P<0,05.
Tabel 10. Pengaruh kasein yogurt susu kambing pada kadar trigliserida serum tikus intoksikasi dioksin
Kelompok Kadar trigliserida
(mean + SD) mg/dl
Peningkatan kadar trigliserida
dibanding kontrol (%)
Penurunan kadar trigliserida
dibanding kelompok TCDD (%)
Kontrol 59,5 + 11,82 - -
TCDD 127,5 + 45,18 114,29 -
Kasein 65,5 + 22,58 10,08 48,63
TCDD + kasein 300 87,25 + 40,12 46,64 31,57
TCDD + kasein 600 57,25 + 20,32 - 55,10
TCDD + kasein 900 70,75 + 42,11 18,91 44,51
Paparan TCDD merupakan faktor risiko pada berbagai penyakit metabolik.
Penelitian yang dilakukan pada pekerja insinerator menunjukkan terdapat asosiasi
antara paparan dioksin 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) dengan
peningkatan serum kolesterol dan serum trigliserida (Hu et al., 2003). Pemberian
TCDD dengan dosis 100 ng/kg BB selama 21 hari pada tikus Wistar jantan
menyebabkan peningkatan kadar kolesterol serum sebesar 5,52% dan peningkatan
kadar trigliserida sampai dengan 114,29%. Pengaruh intoksikasi TCDD pada
kadar kolesterol dan kadar trigliserida serum ini sesuai dengan yang dilaporkan
oleh Boverhof et al. (2006). Senyawa TCDD adalah salah satu dari kelompok
senyawa persisten ogranic pollutan (POPs) yang dapat menginduksi perubahan
metabolisme pada hati dan menyebabkan gangguan pada metabolisme kolesterol
(Calkosinski et al., 2013). Paparan TCDD menyebabkan gangguan pada gen yang
45
0
20
40
60
80
100
120
140
Kontrol TCDD kasein TCDD + kasein300
TCDD + kasein600
TCDD + kasein900
Kadar Kolesterol dan Trigliserida kelompok kontrol dan kelompok perlakuan (mg/dL)
kolesterol (mg/dL) trigliserida(mg/dL)
berperan dalam proses signaling asam empedu di hati. Penurunan ekspresi enzim
CYP7A1 yang berperan dalam proses biosintesis asam empedu dari kolesterol
dapat menyebabkan hambatan pada ekspresi protein membran yang mengatur
ekskresi kolesterol dari sel hati (Ambolet-camoit et al., 2015).
Gambar 4. Diagram kadar kolesterol dan kadar trigliserida serum tikus Wistar
Gambar 4 menunjukkan kadar kolesterol dan trigliserida serum pada
kelompok dengan pemberian kasein yogurt susu kambing mengalami penurunan
dibandingkan kelompok TCDD. Profil lemak darah pada kondisi intoksikasi
TCDD pada kelompok perlakuan TCDD + kasein 600 menunjukkan penurunan
dibandingkan kelompok TCDD dan tidak mengalami peningkatan dibandingkan
kelompok kontrol. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian kasein yogurt susu
kambing dengan dosis 600 mg/kg BB sudah dapat mempertahankan profil lemak
darah pada kondisi intoksikasi dioksin (TCDD).
46
Penurunan kadar kolesterol dan trigliserida menunjukkan adanya aktivitas
antioksidan kasein yogurt susu kambing berperan dalam mencegah terjadinya
gangguan metabolisme lemak karena akumulasi ROS akibat pemberian TCDD.
Bakteri asam laktat pada yogurt mampu menurunkan kadar kolesterol di dalam
usus halus. Penurunan pH karena produksi asam laktat oleh BAL dapat
meningkatkan presipitasi kolesterol dan asam empedu terkonjugasi di dalam usus
halus. Bakteri L. acidophilus mampu mengonjugasi asam empedu menjadi asam
empedu bebas yang dapat segera diekskresikan dari saluran pencernaan. Menurut
Awemu et al., (2009) bakteri L. bulgaricus menghasilkan exopolysaccharide yang
mampu mengikat asam empedu sehingga mencegah penyerapan kembali asam
empedu dan kolesterol di dalam usus halus. Ekskresi asam empedu bebas dari
tubuh akan memengaruhi proses sintesis asam empedu dari kolesterol dan
menurunkan konsentrasi total kolesterol dari tubuh (Kailasapathy dan Chin, 2000;
Lourens-Hattingh dan Viljoen, 2001).
Kandungan mineral pada produk susu mempunyai pengaruh dalam
memperbaiki kondisi gangguan metabolik. Sebagian besar kalsium susu berikatan
dengan protein kasein. Asupan kalsium harian dari susu memberi manfaat
terutama pada penurunan berat badan dan penurunan kadar lemak tubuh (Scholz-
Ahrens dan Schrezenmeir, 2006; Majid, 2016).
Enzim Transaminase (AST dan ALT)
Hasil pengujian kadar enzim aspartate aminotransferase (AST) dan enzim
alanine aminotransferase (ALT) dari Laboratorium Klinik Pattimura Malang
dengan menggunakan Automatic Analyser Hitachi 902 disajikan pada Tabel 11.
47
Tabel 11. Pengaruh kasein yogurt susu kambing pada kadar AST dan ALT serum tikus intoksikasi dioksin
Kelompok kadar AST serum (mean + SD) U/l
kadar ALT serum (mean + SD) U/l
Kontrol 219,50 + 15,02b 181,00 + 33,21
TCDD 175,00+ 15,25ab 158,00 + 18,97
kasein 198,00 + 30,80ab 177,25 + 21,53
TCDD + kasein 300 166,75 + 15,32a 126,50 + 35,91
TCDD + kasein 600 170,75 + 33,02ab 161,25 + 19,72
TCDD + kasein 900 158,25 + 23,89a 130,75 + 48,86
Notasi yang berbeda menunjukkan perbedaan nyata pada P<0,05
Hasil pengujian serum menunjukkan kadar enzim transaminase pada
semua kelompok tikus melebihi nilai normal. Kadar normal enzim AST tikus
jantan adalah 45,7-80,8 IU/L sedangkan kadar normal enzim ALT tikus Wistar
jantan adalah 17,5-30,2 IU/L (Johnson-Delaney, 2008). Berdasarkan hasil
tersebut, pemberian TCDD dosis 100 ng/kg BB pada tikus Wistar tidak
menunjukkan adanya perubahan yang nyata pada kadar AST maupun ALT serum.
Kadar AST dan ALT pada kelompok TCDD berturut turut adalah 175,00 U/L dan
158,00 U/L. Uji ANOVA menunjukkan terdapat perbedaan nyata (P<0,05) pada
kadar AST serum, dan uji post hoc Tukey HSD menunjukkan terdapat perbedaan
nyata antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan yang diberikan TCDD
serta kasein dosis 300 dan 900 mg/kg BB. Kadar AST serum pada kelompok
TCDD yang diberi kasein dosis 300, 600, dan 900 mg/kg BB menunjukkan
adanya sedikit penurunan dibandingkan kelompok TCDD. Kadar ALT serum
menunjukkan penurunan dibandingkan kelompok TCDD terjadi pada kelompok
perlakuan TCDD dengan pemberian kasein 300 dan 900 mg/kg BB.
Toksisitas hepatik karena pengaruh paparan TCDD dapat diamati melalui
perubahan enzim transaminase. Peningkatan kadar enzim ALT terjadi pada
48
populasi penduduk dengan tingkat paparan dioksin yang tinggi dan dalam jangka
waktu yang lama (Watanabe et al., 1998; Michalek et al., 2001). Abnormalitas
pada enzim hepatik antara lain AST, ALT, Gamma GT, dan bilirubin
menunjukkan peningkatan pada kelompok pekerja limbah dengan paparan TCDD
yang tinggi (Hu et al., 2003). Pemberian TCDD pada hewan percobaaan tikus
menunjukkan tidak adanya pengaruh pada kadar ALT serum (Boverhof et al.,
2006) sedangkan Rosinczuk et al (2015) melaporkan adanya peningkatan kadar
serum ALT dan serum AST pada tikus dengan komplikasi pleuritis dan paparan
TCDD.
Perbedaan tidak nyata dalam kadar enzim transaminase pada penelitian ini
disebabkan karena pada tikus enzim ALT mempunyai aktivitas intrahepatik yang
rendah dan half life yang pendek di sirkulasi dibandingkan pada anjing, monyet,
dan manusia (O’Brien et al., 2002). Toksisitas oleh bahan xenobiotik yang
memengaruhi sistem metabolisme cytochrome P450 seperti TCDD akan
menyebabkan kerusakan bagian sentrilobular pada hati (Panteghini et al., 2006).
Enzim AST terdistribusi homogen pada acinus hati dan ALT sebagian besar pada
periportal hati. Menurut O’Brien et al. (2002) spesifisitas jaringan merupakan hal
yang perlu dipertimbangan pada analisis enzim transaminase sebagai penanda
fungsi hati. Enzim ALT dan AST terdapat juga pada jaringan otot sehingga
kerusakan pada jaringan otot dapat menyebabkan peningkatan yang memengaruhi
hasil pengujian.
49
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan
Pemberian kasein yogurt susu kambing dosis 300, 600, dan 900 mg/kg BB
dapat meningkatkan aktivitas enzim antioksidan superoxide dismutase (SOD)
pada hati tikus yang mengalami intoksikasi dioksin (TCDD). Peningkatan
aktivitas enzim SOD secara nyata (P<0,05) terlihat pada kelompok dengan
pemberian kasein yogurt susu kambing dosis 600 mg/kg BB (52,67%) dan dosis
900 mg/kg BB (75,99%). Dosis terbaik kasein yogurt susu kambing pada tikus
model intoksikasi dioksin adalah 600 mg/kg BB.
Profil lemak darah tidak menunjukkan peningkatan dalam kondisi
intoksikasi dioksin (TCDD). Terdapat penurunan kadar kolesterol maupun kadar
trigliserida pada kelompok dengan pemberian kasein yogurt susu kambing
meskipun tidak berbeda nyata. Penurunan kadar kolesterol serum sebesar 5,76%
pada kelompok kasein yogurt susu kambing dosis 600 mg/kg BB dan 8,12% pada
kelompok dosis 900 mg/kg BB. Kadar trigliserida serum mengalami penurunan
pada kelompok perlakuan kasein yogurt susu kambing dosis 300 mg/kg BB
(31,57%), dosis 600 mg/kg BB (55,10%), dan dosis 900 mg/kg BB (44,51%).
Pemberian kasein yogurt susu kambing pada tikus model intoksikasi
dioksin (TCDD) berdasarkan enzim aspartate aminotransferase (AST) dan
enzim alanine aminotransferase (ALT) tidak menunjukkan perbedaan nyata.
Kadar enzim AST mengalami sedikit penurunan pada kelompok dengan
pemberian kasein yogurt susu kambing dosis 300, 600, dan 900 mg/kg BB, dan
50
kadar enzim ALT mengalami penurunan pada kelompok tikus dengan pemberian
kasein yogurt susu kambing dosis 300 dan 900 mg/kg BB.
Saran
Produk susu fermentasi seperti yogurt telah diketahui mempunyai
kandungan bioaktif yang bermanfaat bagi kesehatan. Perlu dilakukan penelitian
lanjutan mengenai kandungan peptida bioaktif pada kasein yogurt susu kambing
dan penggunaan peptida bioaktif asal susu kambing sebagai alternatif pencegahan
penyakit metabolik karena paparan bahan kimia berbahaya seperti dioksin.
51
RINGKASAN
Dioksin adalah kontaminan lingkungan yang menimbulkan dampak toksik
yang luas. Senyawa toksik ini terbentuk dari proses pembakaran bahan kimia yang
mengandung klorin, pembakaran sampah, industri logam, asap kendaraan
bermotor, proses bleaching kertas, sintesa herbisida, dan pestisida. Congener
dioksin yang paling toksik adalah 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD).
Efek toksik TCDD pada manusia dapat menyebabkan gangguan sistem saraf,
kerusakan kulit, gangguan pertumbuhan dan reproduksi, menurunkan sistem imun
tubuh, gangguan sistem endokrin, bersifat karsinogen, dan menyebabkan
gangguan metabolisme yang disebabkan oleh stres oksidasi.
Sumber kontaminasi TCDD pada bahan pangan asal hewan berasal dari
lingkungan dan pakan ternak yang tercemar. Telah banyak dilaporkan adanya
kontaminasi TCDD pada susu, daging, dan telur konsumsi. Senyawa TCDD
bersifat lipofilik dan mengalami akumulasi dalam jaringan lemak sehingga sulit
diurai secara biologis maupun kimiawi. Waktu paruh yang lama dan paparan
TCDD secara terus menerus menyebabkan gejala klinis akibat efek toksisitas yang
akan timbul setelah beberapa tahun.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan kasein yogurt susu
kambing yang diketahui mempunyai potensi sebagai antioksidan dalam mencegah
kerusakan pada tubuh karena pengaruh toksik TCDD. Parameter yang dianalisis
adalah aktivitas enzim antioksidan, profil lemak darah, dan kadar enzim
transaminase. Kasein merupakan protein prekursor bagi peptida bioaktif yang
diketahui mempunyai fungsi sebagai antimikrobial, antioksidatif, antitrombotik,
52
antihipertensi, antikarsinogenik, memperbaiki proses regulasi, dan sebagai
imunomodulator.
Penelitian ini menggunakan dua puluh empat ekor tikus putih jantan galur
Wistar yang dibagi menjadi enam kelompok perlakuan. Kelompok 1 merupakan
kelompok kontrol tanpa perlakuan dengan pemberian makan dan minum normal.
Kelompok 2 sebagai kontrol normal dengan pemberian kasein yogurt susu
kambing dengan dosis 600 mg/kg berat badan/hari/ekor dalam air destilasi.
Kelompok 3 adalah kelompok kontrol sakit dengan diberi TCDD dosis 100 ng/kg
berat badan/hari dalam pelarut minyak jagung 1 mL/hari/ekor. Kelompok 4 adalah
kelompok perlakuan 1 dengan pemberian TCDD dosis 100 ng/kg berat badan
dalam pelarut minyak jagung sebanyak 1 mL/hari/ekor dan kasein yogurt dosis
300 mg/kg berat badan. Kelompok 5 adalah kelompok perlakuan 2 dengan
pemberian TCDD dosis 100 ng/kg BB/hari dalam pelarut minyak jagung
sebanyak 1 mL/hari/ekor dan kasein yogurt dosis 600 mg/kg berat badan.
Kelompok 6 adalah kelompok perlakuan 3 dengan pemberian TCDD dalam
pelarut minyak jagung dosis 100 ng/kg berat badan/hari sebanyak 1 mL/hari/ekor
dan kasein yogurt dosis 900 mg/kg berat badan. Lama perlakuan adalah dua
puluh satu hari dan kemudian dilakukan eutanasi serta pengambilan sampel darah
dan organ.
Analisis total BAL dan total protein dilakukan pada sampel yogurt susu
kambing, sedangkan pada sampel kasein yogurt susu kambing dilakukan analisis
prosimat dan uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH. Pengambilan sampel
darah pada hewan coba tikus untuk analisis profil lemak darah berupa kadar
53
kolesterol dan trigliserida dan analisis kadar enzim transaminase yaitu alanine
aminotransferase (ALT) dan enzim aspartate aminotransferase (AST). Sampel
jaringan hati untuk pengujian aktivitas enzim antioksidan superoxide dismutase
(SOD). Data kuantitatif dianalisis menggunakan one way ANOVA dan
dilanjutkan uji post hoc Tukey HSD.
Analisis pada sampel yogurt susu kambing menunjukkan total bakteri
asam laktat (BAL) 3,4 x 107 cfu/mL sesuai dengan minimal total BAL yang
diperlukan pada produk probiotik agar dapat memberikan manfaat bagi kesehatan.
Hasil pengujian aktivitas antioksidan pada kasein yogurt susu kambing
menunjukkan IC50 sebesar 2543,00 mg/mL yang artinya kasein yogurt susu
kambing mempunyai kemampuan mengikat radikal bebas.
Aktivitas enzim antioksidan superoxide dismutase (SOD) hati, pada
kelompok perlakuan TCDD dan kasein dosis 300, 600 dan 900 mg/kg BB
menunjukkan adanya peningkatan aktivitas enzim SOD dibandingkan dengan
kelompok TCDD. Kelompok perlakuan TCDD dan yang diberikan kasein yogurt
susu kambing dosis 900 mg/kg BB menunjukkan aktivitas enzim SOD yang
paling tinggi, yaitu sebesar 75,99 % dibandingkan kelompok TCDD. Pemberian
kasein yogurt susu kambing menunjukkan efek protektif terhadap stres oksidasi
yang disebabkan oleh TCDD.
Hasil analisis profil lemak darah menunjukkan peningkatan kadar
kolesterol dan trigliserida pada kelompok perlakuan TCDD dibandingkan kontrol.
Uji statistika tidak menunjukkan perbedaan yang nyata pada kelompok kontrol
maupun kelompok perlakuan. Kelompok kasein yogurt susu kambing dengan
54
dosis 600 mg/kg BB menunjukkan penurunan kadar kolesterol serum sebesar
5,76% dan pada kelompok dosis 900 mg/kg BB mengalami penurunan sebesar
8,12% dibandingkan kelompok TCDD. Kadar trigliserida serum mengalami
penurunan pada kelompok perlakuan kasein yogurt susu kambing dosis 300
mg/kg BB (31,57%), dosis 600 mg/kg BB (55,10%), dan dosis 900 mg/kg BB
(44,51%).
Pemberian kasein yogurt susu kambing pada tikus intoksikasi dioksin
2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) berdasarkan kadar enzim aspartate
aminotransferase (AST) dan enzim alanine aminotransferase (ALT) tidak
menunjukkan hasil yang konsisten. Kadar enzim AST mengalami sedikit
penurunan pada kelompok dengan pemberian kasein yogurt susu kambing dosis
300, 600, dan 900 mg/kg BB, sedangkan kadar enzim ALT mengalami penurunan
pada kelompok tikus dengan pemberian kasein yogurt susu kambing dosis 300
dan 900 mg/kg BB.
Kasein yogurt susu kambing mempunyai aktivitas antioksidan yang dapat
mencegah terjadinya kerusakan sel dan efek buruk lebih lanjut karena intoksikasi
2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD). Kasein yogurt susu kambing
berpotensi sebagai pangan fungsional dan antioksidan alami yang berasal dari
produk pangan asal hewan. Perlu dilakukan penelitian lanjutan mengenai
kandungan peptida bioaktif pada kasein yogurt susu kambing dan penggunaan
peptida bioaktif asal susu kambing sebagai alternatif pencegahan penyakit
metabolik karena paparan bahan kimia berbahaya seperti dioksin.
55
DAFTAR PUSTAKA
Ahlborg, U.G. 1989. Nordic Risk Assessment of PCDDs and PCDFs.
Chemosphere. 19: 603–608.
Alenisan, Modi A., Hanan H. Alqattan, Lojayn S. Tolbah, dan Amal B. Shori. 2017. Antioxidant Properties of Dairy Products Fortified with Natural Additives : A Review. Journal of the Association of Arab Universities for Basic and Applied Sciences. http://dx.doi.org/10.1016/j.jaubas.2017.05.001
Alsharif, Naser Z dan Hassoun, Ezdihar A. 2004. Protective Effects of Vitamin A and Vitamin E Succinate against 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-P-Dioxin (TCDD)-Induced Body Wasting, Hepatomegaly, Thymic Atrophy , Production of Reactive Oxygen Species and DNA Damage in C57BL / 6J Mice. Basic & Clinical Pharmacology & Toxicology. 95: 131–38.
Ambolet-camoit, A., Ottolenghi, C., Leblanc, A., Ji, M., dan Cagnard, N. 2015. Two Persistent Organic Pollutants Which Act through Different Xenosensors (Alpha-Endosulfan and 2,3,7,8 Tetrachlorodibenzo-P- Dioxin) Interact in a Mixture and Downregulate Multiple Genes Involved in Human Hepatocyte Lipid and Glucose Metabolism. Biochimie. 116: 79–91.
AOAC. 2005. Official Methods of Analysis. Association of Official Analytical Chemists. Editor: Horwitz, W and G. W. Latimer, Jr. Published by AOAC International. 18th Edition. USA
Aslani, B. A. dan Ghobadi, S. 2016. Studies on oxidants and antioxidants with a brief glance at their relevance to the immune system. Life Sciences, 146, 163–173.
Awemu, E.M.I., Liu, J.R., Zhao, X. 2009. Bioactive Components in Yogurt Products, in: Bioactive Components in Milk and Dairy Products. Wiley-Blackwell, pp. 235–250.
Badan Standardisasi Nasional. 2009. SNI 2981:2009. Yogurt.
Badan Standardisasi Nasional. 2011. SNI CAC/CRP 1:201. Rekomendasi Nasional Kode Praktis - Prinsip Umum Higiene Pangan.
Beauchamp, C, dan Fridovich, I. 1971. “Superoxide Dismutase: Improved Assays and an Assay Applicable to Acrylamide Gels.” Analitical Biochemistry. 287(44): 276–87
Belin, S., Sany, T., Narimani, L., Soltanian, F.K., Hashim, R., Rezayi, M., Karlen, D.J., Mahmud, H.N.M.E. 2016. An overview of detection techniques for monitoring dioxin-like compounds : latest technique trends and their applications. RSC Advances. 6: 55415–55429.
56
Birnbaum, L.S. 1994. The Mechanism of Dioxin Toxicity : Relationship to Risk Assessment. Environmental Health Perspectives. 102: 157–167.
Blümler, P. 2000. Dioxin : Seveso , Vietnam and everyday exposure, in: PH 307: Disasters. School of Physical Sciences, University of Kent, Canterbury, pp. 1–16.
Boverhof, D. R., Burgoon, L. D., Tashiro, C., Sharratt, B., Chittim, B., Harkema, J. R., dan Zacharewski, T. R.. 2006. Comparative Toxicogenomic Analysis of the Hepatotoxic Effects of TCDD in Sprague Dawley Rats and C57BL/6 Mice. Toxicological Sciences. 94(2): 398–416.
BPOM. 2006. Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia Nomor HK.00.06.1.52.4011 tentang Penetapan Batas Maksimum Cemaran Mikroba dan Kimia dalam Makanan. Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, Indonesia.
Brunnberg, S., Andersson, P., Lindstam, M., Paulson, I., Poellinger, L., Hanberg, A. 2006. The constitutively active Ah receptor (CA-AhR) mouse as a potential model for dioxin exposure: Effects in vital organs. Toxicology. 224, 191–201.
Calkosinski, I., Rosinczuk-Tonderys, J., Bazan, J., Dzierzba, K., Calkosinska, M., Majda, J., dan Bronowicka-szyde 2013. The Influence of 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-Dioxin (TCDD) on Hematological Parameters During Experimentally Induced Pleuritis in Rats. Inflammation. 36(2).
Calvert, G.M., Hornung, R.W., Sweeney, M.H., Fingerhut, M.A., Halperin, W.E. 1992. Hepatic and Gastrointestinal Effects in an Occupational Cohort Exposed to 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-Para-Dioxin. The Journal of American Medical Association. 267: 2209–2214.
Calvert, G.M., Wall, D.K., Sweeney, M.H., Fingerhut, M.A. 1998. Evaluation of Cardiovascular Outcomes among U.S. Workers Exposed to 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin. Environmental Health Perspectives. 106: 635–643.
Contreras, M. del M., Sevilla, M.A., Monroy-Ruiz, J., Amigo, L., Gómez-Sala, B., Molina, E., Ramos, M., Recio, I. 2011. Food-grade production of an antihypertensive casein hydrolysate and resistance of active peptides to drying and storage. International Dairy Journal. 21: 470–476.
Denison, M.S., Nagy, S.R. 2003. Activation of The Aryl Hydrocarbon Receptor by Structural Diverse Exogenous and Endogenous Chemicals. Annual Review of Environment and Resources. 28: 359–399.
57
De Vries, M., Kwakkel, R.P., Kijlstra, A. 2006. Dioxins in organic eggs: a review. Journal of Life Sciences. 54: 207–221.
Di Bernardini, R., Harnedy, P., Bolton, D., Kerry, J., O'Neill, E., Mullen, A.M., Hayes, M. 2011. Antioxidant and antimicrobial peptidic hydrolysates from muscle protein sources and by-products. Food Chemistry. 124:1296–1307.
Donkor, O.N., Henriksson, A., Singh, T.K., Vasiljevic, T., Shah, N.P., 2007. ACE-inhibitory activity of probiotic yoghurt. International Dairy journal. 17: 1321–1331.
Dooley, E.E. 2009. The Beat: Dioxin Found in Irish Meat. Environmental Health Perspectives. 117: A18.
Drahushuk, A.T. 1997. Induction of CYP1A1 and CYP1A2 by Dioxin in Rats and Humans and Their Potential Use as Biomarkers. [Thesis]. University of New York.
Dziuba, Bartłomiej, dan Dziuba, Marta. 2014. Milk Proteins-Derived Bioactive Peptides In Dairy Products : Molecular , Biological And Methodological Aspects. Acta Scientiarum Polonorum Technologia Alimentaria. 13: 5–25.
Effendi, M.H., Hartini, S., Lusiastuti. 2009. Peningkatan Kualitas Yoghurt Dari Susu Kambing Dengan Penambahan Bubuk Susu Skim. Jurnal Penelitian Media Eksakta 8: 185–192.
EU. 2011. Amending Regulation (EC) No 1881/2006 as Regards Maximum Levels for Dioxins, Dioxin-like PCBs and Non Dioxin-like PCBs in Foodstuffs. Commission Regulation (EU) No 1259/2011. 8(2005): 18–23.
Exposito, I.L., Recio, I. 2006. Antibacterial activity of peptides and folding variants from milk proteins. International Dairy Journal 16: 1294–1305.
Farvin, K.H.S., Baron, C.P., Nielsen, N.S., Jacobsen, C. 2010. Antioxidant activity of yoghurt peptides : Part 1- in vitro assays and evaluation in x -3 enriched milk. Food Chemistry. 123: 1081–1089.
Fereidoon, S., Zhong, Y. 2008. Bioactive Peptides. Journal of AOAC International. 91: 914–932.
Fiedler, H. 2003. Dioxins and Furans (PCDD/PCDF). Environmental Chemistry. 3(26): 11–13.
Garcia-regueiro, J.A., Castellari, M. 2009. Polychlorinated Biphenyls: Environmental Chemical Contaminants in Muscle Food, in: Nollet, L.M.L., Toldra, F. (Eds.), Handbook of Processed Meats and Poultry Analysis. CRC Press, pp. 636–645.
58
Gilbert, J., Senyuva, H. 2005. Environmental contaminants and pesticides in animal feed and meat, improving the Safety of Fresh Meat. Woodhead Publishing Limited.
Gizzi, G., Hoogenboom, L.A.P., Holst, C. Von, Rose, M., Anklam, E. 2005. Determination of dioxins (PCDDs/PCDFs) and PCBs in food and feed using the DR CALUX ® bioassay : Results of an international validation study. Food Additives and Contaminants. 22: 472–481.
Gufita, F., Herawati, D., Hamdani, S. 2014. Analisis Kandungan Dioksin, Daya Serap Dan Kandungan Klorin (Cl2) Dalam Pembalut Wanita. Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology. 3: 1–8.
Hamidah, E. I., Sukada, M., Swacita, I.B.N. 2012. Kualitas Susu Kambing Peranakan Etawah post-Thawing Pada Penyimpanan Suhu Kamar. Indonesia Medicus Veterinus, 1(3): 361–369.
Hasanov, A., Yotova, L., Hasanov, H., Boboev, A., Hasanov, A., Yotova, L., Hasanov, H. 2012. Antioxidant Activity of Peptides Obtained from Wheat and Cottonseed Proteins. Bulgarian Journal of Agricultural Science 18: 103–111.
Haskito, A.E.P. 2013. Aktivitas Vitamin E (α-Tocopherol) Sebagai Antioksidan Pada Histopatologi Dan Kadar Malondialdehyde (MDA) Hati Mencit Galur Balb/c Yang Dipapar 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-P-Dioxin (TCDD). [TESIS]. Universitas Airlangga, Surabaya.
Hedrich, H.J. 2000. History, Strains and Models, in: Krinke, G.J. (Ed.), The Laboratory Rat. pp. 3–16.
Hsieh, C., Hernández-ledesma, B., Fernández-tomé, S., Weinborn, V., Barile, D., María, J., Nobrega, L., Bell, D.M. 2015. Milk Proteins , Peptides , and Oligosaccharides : Effects against the 21st Century Disorders. BioMed Research International 2015. Article ID 146840
Huang, D., Ou, B., Prior, R.L., Rior, R.O.L.P. 2005. The Chemistry behind Antioxidant Capacity Assays. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 53: 1841–1856.
Hu, S., Changchien, G., Chan, C. 2003. Association between Dioxins / Furans Exposures and Incinerator Workers’ Hepatic Function and Blood Lipids. Journal Of Occupational And Environmental Medicine. 45: 601–608.
Indraningsih, Sani, Y. 2014. Deteksi Dioksin Trichloro dibenzo-p-dioxins dan Trichloro dibenzofurans pada Daging Sapi dengan Gas Chromatography Tandem Mass Spectrometry. Jurnal Ilmu Ternak dan Veteriner 19: 302–314.
59
Johnson-Delaney, C. A. (2008). Exotic Companion Medicine Handbook for Veterinarians. Zoological Education Network. Lake Worth, Florida, pp 11-20
Kailasapathy, K., dan Chin, J. 2000. Survival and Therapeutic Potential of Probiotic Organisms with Reference to Lactobacillus Acidophilus and Bifidobacterium Spp. Immunology and Cell Biology. 78(1): 80–88.
Karami-mohajeri, S., Abdollahi, M. 2010. Toxic influence of organophosphate, carbamate , and organochlorine pesticides on cellular metabolism of lipids, proteins, and carbohydrates : A systematic review. Human & Experimental Toxicology. 30(9): 1119–1140.
Kitamura, K., Kikuchi, Y., Watanabe, S., Waechter, G., Sakurai, H., Takada, T. 2000. Health effects of chronic exposure to polychlorinated dibenzo-P-dioxins (PCDD), dibenzofurans (PCDF) and coplanar PCB (Co-PCB) of municipal waste incinerator workers. Journal of Epidemiology. Japan Epidemiological Association 10: 262–70.
Koolhaas, J.M. 2010. The laboratory rat, in: R. Hubrecht, J.K. (Ed.), The UFAW Handbook on the Care and Management of Laboratory and Other Research Animals. pp. 311–326.
Korhonen, H. 2009. Milk-derived bioactive peptides : From science to applications. Journal of Functional Food. 1: 177–187.
Kusriningrum, R. 2010. Perancangan Percobaan, Edisi kedua. Airlangga University Press, Surabaya.
Lamiceli, A. L, Fochi, I., Brambilla, G., Domenico, A. di. 2011. Determination of Persistent Organic Pollutants in Meat, in: Nollet, L.M.L., Toldra, F. (Eds.), Safety Analysis of Food of Animal Origin. CRC Press, pp. 349–398.
Lamothe, S., Robitaille, G., St-Gelais, D., Britten, M. 2007. Short communication: extraction of beta-casein from goat milk. Journal of Dairy Science. 90:5380–5382.
Lin, P., Lin, C., Huang, C., Chuang, M., Lin, P. 2007. 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) induces oxidative stress, DNA strand breaks, and poly(ADP-ribose) polymerase-1 activation in human breast carcinoma cell lines. Toxicology Letter. 172: 146–158.
Lourens-Hattingh, A., Viljoen, B.C. 2001. Yogurt as probiotic carrier food. International Dairy Journal 11: 1–17.
Loutfy, N., Fuerhacker, M., Tundo, P., Raccanelli, S., El Dien, A.G., Ahmed, M.T. 2006. Dietary intake of dioxins and dioxin-like PCBs, due to the
60
consumption of dairy products, fish/seafood and meat from Ismailia city, Egypt. Science of the Total Environment. 370: 1–8.
Majid, S. 2016. Bioactive Components in Milk and Dairy Products. Independent Project in Biology- Bachelor Thesis. Swedish University of Agricultural Sciences.
Malisch, R. 2000. Increase of the PCDD/F-contamination of milk, butter and meat samples by use of contaminated citrus pulp. Chemosphere. 40: 1041–1053.
Martin, J. V. 1984. Lipid abnormalities in workers exposed to dioxin. British Journal of Industrial Medicine. 41: 254–256.
Martunus, H.Z. 2007. Ekstraksi Dioksin Dalam Limbah Air Buangan Industri Pulp Dan Kertas Dengan Pelarut Toluen. Jurnal Sains dan Teknologi. 6: 1–4.
McCord, J. M. 1999. Analysis of Superoxide Dismutase Activity. In Current Protocols in Toxicology, John Wiley & Sons, Inc. 7.3.1-7.3.9.
McCord, J. M., dan Irwin Fridovich. 1969. Superoxide Dismutase An Enzymic Function for Erythrocuprein (Hemocuprein). The Journal of Biological Chemistry. 244(22): 6049–55.
McCullough, F.S.W. 2003. Nutritional evaluation of goat's milk. British Food Journal. 105: 239–251.
Michalek, J.E., Ketchum, N.S., Longnecker, M.P. 2001. Serum Dioxin and Hepatic Abnormalities in Veterans of Operation Ranch Hand. Annals of Epidemiology. 11: 304–311.
Mohanty, D.P., Mohapatra, S., Misra, S., Sahu, P. 2016. Milk derived bioactive peptides and their impact on human health – A review. Saudi Journal of Biological Sciences. 23: 577–583.
Molyneux, P. 2004. The Use of the Stable Free Radical Diphenylpicryl-Hydrazyl (DPPH) for Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin Journal of Science and Technology. 26: 211–19.
Mutai, M. 2000. International Guidelines for the Conduct of Chemical Safety Studies: Choice of Strains, in: Krinke, G.J. (Ed.), The Laboratory Rat. Academic Press, pp. 17–27.
O’Brien, P J, Mark R Slaughter, S R Polley, and K Kramer. 2002. Advantages of Glutamate Dehydrogenase as a Blood Biomarker of Acute Hepatic Injury in Rats. Laboratory animals 36(3): 313–21.
61
Oliveira, M N. 2014. Fermented Milks and Yogurt. In Encyclopedia of Food Microbiology, Elsevier. pp 908–922.
Padaga, C., Aulanni’am, A., Sujuti, H., Widodo. 2015. Blood Pressure Lowering Effect and Antioxidative Activity of Casein Derived from Goat Milk Yogurt in DOCA-salt Hypertensive Rats. International Journal of PharmTech Research. 8: 322–330.
Panteghini, M., Bais, R., dan van Solinge, W.W. 2006. “Enzymes.” In TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, eds. Carl A. Burtis and Edward R Ashwood. Elsevier Saunders. pp 604–7.
Park, Y.W., Ju, M., Ramos, M., Haenlein, G.F.W. 2007. Physico-chemical characteristics of goat and sheep milk. Small Ruminant Research. 68: 88–113.
Pihlanto, A. 2006. Antioxidative peptides derived from milk proteins. International Dairy Journal. 16: 1306–1314.
Pinela, J., Barros, L., Carvalho, A.M., dan Ferreira, I C F R. 2012. Nutritional Composition and Antioxidant Activity of Four Tomato (Lycopersicon Esculentum L.) Farmer’ Varieties in Northeastern Portugal Homegardens. Food and Chemical Toxicology. 50(3–4): 829–34.
Posecion, N.C., Crowe, N.L., Robinson, A.R., Asiedu, S.K. 2005. The development of a goat’s milk yogurt. Journal of the Science of Food and Agriculture. 85: 1909–1913.
Ranadheera, C.S, Evans ,C.A., Adams, M.C., dan Baines, S.K. 2012. In Vitro Analysis of Gastrointestinal Tolerance and Intestinal Cell Adhesion of Probiotics in Goat’s Milk Ice Cream and Yogurt. Food Research International. 49(2): 619–25.
Rijkers, G.T., de Vos, W.M., Brummer, R.-J., Morelli, L., Corthier, G., Marteau, P. 2011. Health benefits and health claims of probiotics: Bridging science and marketing. The British Journal of Nutrition. 106: 1291–1296.
Rizzo, A.M., Berselli, P., Zava, S., Montorfano, G., Negroni, M., Corsetto, P., Berra, B. 2010. Endogenous Antioxidants and Radical Scavengers, in: Maria Teresa Giardi, Giuseppina Rea, B.B. (Ed.), Bio-Farms for Nutraceuticals: Functional Food and Safety Control by Biosensors. Landes Bioscience and Springer Science Business Media.
Rose, M. 2001. Studies made to assess risk concerning a “dioxin” contamination incident near Bolsover, Derbyshire, UK. Food Additives and Contaminants. 18: 1094–1099.
62
Rose, M., Fernandes, A., Foxall, C., Dowding, A., Fernandes, A., Foxall, C., dan Transfer, A. D. (2012). Food Additives & Contaminants : Part A Transfer and uptake of polychlorinated dibenzo-p- dioxins and furans (PCDD/Fs) and polychlorinated biphenyls (PCBs) into meat and organs of indoor and outdoor reared pigs. Food Additives & Contaminants: Part A. 29, 431–448.
Rosinczuk, J., Całkosinski, I., Rosi, J., Całkosi, I. 2015. Effect of tocopherol and acetylsalicylic acid on the biochemical indices of blood in dioxin-exposed rats. Environmental Toxicology and Pharmacology. 40: 1–11.
Safe, S.H. 1986. Comparative Toxicology and Mechanism of Action of Polychlorinated Dibenzo-P-Dioxins and Dibenzofurans. Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 26: 371–399.
Sakin, F., Bulmus, F.G., Servi, K., Popa, L. 2011. Protective Effect of Lycopene on Oxidative Stress Induced by Different Doses of 2,3,7,8-Tetrechlorodibenzo-p-dioxin in Brain, liver, Kidney, and Heart Tissue of Rats. Farmacia. 59: 462–470.
Sani, Y., Indraningsih. 2015. Pathological Changes of Suspected Tetrachloro dibenzo- p - dioxins / Tetrachloro dibenzofurans Toxication in Beef Cattle. Jurnal Ilmu Ternak dan Vet. 20: 214–223.
Saragih, H.T.S. 2005. [Tesis]. Pengaruh Ekstrak etanol Propolis (EEP) Terhadap Hepetotoksisitass dan Stress Oksidasi Akibat Pemberian 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) Secara Kronis Pada Tikus Albino (Sprague Dawley). Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Schecter, A., Birnbaum, L., Ryan, J. J., dan Constable, J. D. (2005). Dioxins : An overview. Environmental Reasearch. 1: 1-10.
Scholz-Ahrens, K.E., dan Schrezenmeir, J. 2006. Milk Minerals and the Metabolic Syndrome. International Dairy Journal. 16: 1399–1407.
Séverin, S., Wenshui, X., 2005. Milk Biologically Active Components as Nutraceuticals : Review. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 45: 645–656.
Shon, Y., Park, I., Moon, I., Chang, H.W., Park, I., Nam, K.-S. 2002. Effect of Chitosan Oligosaccharide on 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo- p-dioxin-Induced Oxidative Stress in Mice. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 25: 1161–1164.
Skene, S.A., Dewhurst, I.C., Greenberg, M. 1989. Polychlorinated dibenzo-p-dioxins and polychlorinated dibenzofurans: the risks to human health. A review. Human Toxicology. 8: 173–203.
63
Smith, A.H., Kurland, L.T., S.Shindell. 1990. Epidemiology, in: Safe, S., O.Hutzinger, Hill, T.. (Eds.), Environmental Toxin Series 3: Polychlorinated Dibenzo-P-Dioxms and -Furans (PCDDs/PCDFs): Sources and Environmental Impact, Epidemiology, Mechanisms of Action, Health Risks. Springer-Verlag Berlin. pp. 27–54.
Startin, J.R., Rose, M.D. 2003. Dioxins and dioxin-like PCBs in food, in: Schecter, A., TA, G. (Eds.), Dioxins and Health. Wiley-Interscience, New York, USA, pp. 89–136.
Sutama, I.K., Budiarsana, I. 1997. Kambing peranakan etawah penghasil susu sebagai sumber pertumbuhan baru sub-sektor peternakan di Indonesia, in: Seminar Nasional Peternakan dan Veteriner.
Triebig, G., Werle, E., Papke, O., Heim, G., Broding, C., Ludwig, H. 1998. Effects of Dioxins and Furans on Liver Enzymes, Lipid Parameters, and Thyroid Hormones in Former Thermal Metal Recycling Workers. Environmental Health Perspective. 106: 697–700.
Turkez, H., Geyikoglu, F. 2011. The effect of laurel leaf extract against toxicity induced by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin in cultured rat hepatocytes. Archives of Industrial Hygiene and Toxicology. 62: 309–15.
Turkez, H., Geyikoglu, F., Yousef, M.I. 2012. Ameliorative effect of histological changes, oxidative stress, and DNA damage in rat liver. Toxicology and Industrial Health. 28: 687–696.
Unal, G, dan Akalin, A.S. 2012. Antioxidant and Angiotensin-Converting Enzyme Inhibitory Activity of Yoghurt Fortified with Sodium Calcium Caseinate or Whey Protein Concentrate. Dairy Science and Technology. 92(6): 627–39.
UNEP. 2008. United Nations Environmental Programme: The 12 initial POPs under the Stockholm Convention. Retrieved November 8, 2016, from http://chm.pops.int/TheConvention/ThePOPs/The12InitialPOPs/tabid/296/Default.aspx.
US EPA. 2012. Dioxins and Furans Factsheet. Retrieved November 8, 2016, from https://www.epa.gov/dioxin.
Valko, M., Rhodes, C. J., Moncol, J., Izakovic, M., dan Mazur, M. 2006. Free Radicals , Metals and Antioxidants in Oxidative Stress-Induced Cancer. Chemico-Biological Interactions. 160: 1–40.
Van den Berg, M., Birnbaum, L.S., Denison, M., De Vito, M., Farland, W., Feeley, M., Fiedler, H., Hakansson, H., Hanberg, A., Haws, L., Rose, M., Safe, S., Schrenk, D., Tohyama, C., Tritscher, A., Tuomisto, J., Tysklind,
64
M., Walker, N., Peterson, R.E. 2006. The 2005 World Health Organization Reevaluation of Human and Mammalian Toxic Equivalency Factors for Dioxins and Dioxin-Like Compounds. Toxicological Sciences. 93: 223–241.
Van den Berg, M., De Jongh, J., Poiger, H., Olson, J.R.R. 1994. The toxicokinetics and metabolism of polychlorinated dibenzo-p-dioxins (PCDDs) and dibenzofurans (PCDFs) and their relevance for toxicity. Critical Reviews in Toxicology. 24: 1–74.
Vanden Heuvel, J.P., Lucier, G. 1993. Environmental toxicology of polychlorinated dibenzo-p-dioxins and polychlorinated dibenzofurans. Environmental Health Perspective. 100: 189–200.
Van Leeuwen, F.X.R., Feeley, M., Schrenk, D., Larsen, J.C., Farland, W., Younes, M. 2000. Dioxins: WHO’s tolerable daily intake (TDI) revisited. Chemosphere. 40: 1095–1101.
Vartianen, T., Hallikainen, A. 1994. Polychlorodibenzo-P-Dioxin and Polychlorodibenzofuran Levels in Cow Milk Samples, Egg Samples and Meat in Finland. Fresenius' Journal of Analytical Chemistry. 348: 150–153.
Wahba, N.S., Amer, M.G., Karam, R.A., Mohamed, R.H. 2012. Pathology Effect of Persistent Organic Pollutants (Dioxins) on Rat Myocardium and Amelioration with Antioxidant Vitamins (Role of Aryl Hydrocarbon Receptors and Cytochrome P450). Journal of Clinical & Experimental Pathology. 2.
Watanabe, S., Kitamura, K., dan Nagahashi, M. 1998. Effects of Dioxins on Human Health : A Review. Journal of Epidemiology 9(1): 1–13.
Wei, X., Ching, L.Y., Cheng, S.H., Wong, M.H., Wong, C.K.C. 2010. The detection of dioxin- and estrogen-like pollutants in marine and freshwater fishes cultivated in Pearl River Delta, China. Environmental pollution (Barking, Essex : 1987). 158: 2302–9.
Whitlock, J.J. 1993. Mechanistic Aspects of Dioxin Action. Chemical Research in Toxicology. 6: 754–763.
WHO. 1997. 69 IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans: Polychlorinated Dibenzo- Para -Dioxins and Polychlorinated Dibenzofurans.
Winarti, C., Munarso, S.J. 2005. Kajian Kontaminasi Dioksin pada Bahan Pangan, in: Prosiding Seminar Nasional Teknologi Inovatif Pascapanen Untuk
65
Pengembangan Industri Berbasis Pertanian. Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Pascapanen Pertanian.
Yoshida, R., dan Ogawa, Y. 2000. Oxidative Stress Induced by 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo- p-dioxin: An Application of Oxidative Stress Markers to Cancer Risk Assessment of Dioxins. Industrial Health. 38: 5–14.
Xu, J P,. Yin, Y P., dan Zhou, X Q. 2008. Effect of Vitamin E on Reproductive Function in the Mice Treated with 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-P-Dioxin. Toxicology and Industrial Health. 24(9): 595–601.
66
Lampiran 1. Data hasil pengujian klinik serum dan enzim superoxide dismutase organ hati tikus Wistar
Kode kolesterol trigliserida AST ALT SOD
sampel mg/dL mg/dL U/L U/L U/mL
K-21 96 52 206 197 5.456
K-11 78 74 216 134 7.233
K-27 98 64 241 183 4.733
K-24 90 48 215 210 5.344
90.5 59.5 219.5 181 5.692
K+3 90 93 181 150 3.900
K+1 85 111 168 144 3.678
K+35 103 194 193 152 3.622
K+33 104 112 158 186 3.567
95.5 127.5 175 158 3.692
KP30 90 97 168 182 4.733
KP14 77 64 222 195 5.178
KP18 81 57 227 186 3.344
KP19 92 44 175 146 5.678
85 65.5 198 177.25 4.7333
P1 15 83 98 157 119 5.344
P1 17 119 39 170 82 4.622
P1 20 89 135 187 168 5.344
P1 6 91 77 153 137 3.956
95.5 87.25 166.75 126.5 4.817
P2 8 82 83 170 148 6.011
P2 13 104 60 141 143 6.122
P2 4 90 52 155 168 5.456
P2 7 84 34 217 186 4.956
90 57.25 170.75 161.25 5.636
P3 26 93 22 134 59 6.344
P3 29 86 57 183 144 6.622
P3 10 91 82 174 152 7.067
P3 2 81 122 142 168 5.956
87.75 70.75 158.25 130.75 6.497
67
Lampiran 2. Data berat badan harian tikus Wistar selama pemberian perlakuan
Kode hewan
Berat Badan (gram)
Minggu ke-1 Minggu ke-2
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
27 116.00 134.00 124.00 136.00 133.00 132.00 133.00 139.00 143.00 143.00 144.00
21 130.00 139.00 143.00 140.00 146.00 147.00 153.00 156.00 158.00 164.00 172.00
11 139.00 149.00 153.00 160.00 164.00 165.00 164.00 174.00 173.00 182.00 187.00
24 157.00 167.00 172.00 176.00 180.00 180.00 185.00 192.00 191.00 205.00 206.00
Rata2 135.50 147.25 148.00 153.00 155.75 156.00 158.75 165.25 166.25 173.50 177.25
33 221.00 212.00 218.00 224.00 232.00 216.00 218.00 210.00 202.00 210.00 212.00
3 212.00 219.00 217.00 224.00 236.00 229.00 232.00 236.00 241.00 243.00 250.00
1 180.00 181.00 174.00 173.00 177.00 176.00 179.00 183.00 186.00 189.00 186.00
35 192.00 198.00 202.00 202.00 208.00 210.00 213.00 217.00 219.00 221.00 228.00
Rata2 201.25 202.50 202.75 205.75 213.25 207.75 210.50 211.50 212.00 215.75 219.00
30 138.00 143.00 142.00 147.00 147.00 149.00 149.00 146.00 154.00 156.00 164.00
19 150.00 155.00 155.00 156.00 155.00 161.00 163.00 165.00 164.00 166.00 169.00
14 157.00 159.00 164.00 163.00 163.00 165.00 178.00 165.00 171.00 174.00 177.00
18 163.00 172.00 179.00 177.00 171.00 174.00 167.00 176.00 187.00 190.00 195.00
Rata2 152.00 157.25 160.00 160.75 159.00 162.25 164.25 163.00 169.00 171.50 176.25
17 169.00 167.00 165.00 170.00 173.00 172.00 176.00 175.00 177.00 178.00 163.00
20 167.00 165.00 170.00 176.00 174.00 179.00 182.00 187.00 188.00 195.00 196.00
15 177.00 171.00 172.00 173.00 171.00 171.00 176.00 176.00 181.00 185.00 180.00
6 182.00 186.00 184.00 185.00 188.00 195.00 200.00 199.00 206.00 205.00 213.00
Rata2 173.75 172.25 172.75 176.00 176.50 179.25 183.50 184.25 188.00 190.75 188.00
7 156.00 157.00 155.00 159.00 164.00 166.00 154.00 159.00 163.00 163.00 166.00
4 171.00 172.00 170.00 171.00 175.00 182.00 179.00 182.00 189.00 192.00 195.00
13 178.00 176.00 179.00 176.00 184.00 187.00 181.00 182.00 183.00 188.00 190.00
8 178.00 175.00 180.00 178.00 183.00 185.00 193.00 191.00 196.00 199.00 204.00
Rata2 170.75 170.00 171.00 171.00 176.50 180.00 176.75 178.50 182.75 185.50 188.75
2 188.00 176.00 180.00 182.00 182.00 188.00 186.00 186.00 195.00 193.00 201.00
26 174.00 176.00 181.00 181.00 176.00 165.00 167.00 167.00 175.00 175.00 181.00
29 162.00 161.00 158.00 165.00 167.00 170.00 173.00 167.00 174.00 186.00 190.00
10 161.00 162.00 162.00 164.00 168.00 163.00 169.00 169.00 174.00 175.00 185.00
Rata2 171.25 168.75 170.25 173.00 173.25 171.50 173.75 172.25 179.50 182.25 189.25
68
Kode hewan
Berat Badan (gram)
Minggu 2 Minggu 3
12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
27 142.00 152.00 152.00 157.00 167.00 165.00 166.00 171.00 169.00 171.00
21 173.00 175.00 176.00 179.00 185.00 183.00 186.00 198.00 202.00 195.00
11 193.00 196.00 201.00 206.00 212.00 215.00 217.00 214.00 224.00 227.00
24 211.00 208.00 216.00 218.00 222.00 210.00 225.00 233.00 239.00 240.00
Rata2 179.75 182.75 186.25 190.00 196.50 193.25 198.50 204.00 208.50 208.25
33 211.00 219.00 218.00 222.00 227.00 229.00 211.00 238.00 239.00 242.00
3 251.00 231.00 216.00 235.00 229.00 233.00 216.00 243.00 251.00 254.00
1 190.00 195.00 193.00 197.00 189.00 192.00 190.00 184.00 187.00 190.00
35 230.00 235.00 237.00 240.00 228.00 244.00 238.00 233.00 243.00 246.00
Rata2 220.50 220.00 216.00 223.50 218.25 224.50 213.75 224.50 230.00 233.00
30 165.00 172.00 179.00 180.00 186.00 182.00 193.00 194.00 203.00 206.00
19 171.00 178.00 176.00 177.00 186.00 185.00 190.00 191.00 190.00 196.00
14 178.00 183.00 184.00 186.00 187.00 191.00 195.00 195.00 195.00 198.00
18 195.00 201.00 203.00 206.00 207.00 207.00 214.00 216.00 213.00 219.00
Rata2 177.25 183.50 185.50 187.25 191.50 191.25 198.00 199.00 200.25 204.75
17 150.00 142.00 132.00 147.00 153.00 157.00 158.00 163.00 164.00 166.00
20 180.00 194.00 205.00 210.00 211.00 214.00 220.00 214.00 218.00 233.00
15 187.00 187.00 190.00 194.00 198.00 193.00 195.00 202.00 207.00 201.00
6 213.00 215.00 218.00 216.00 226.00 221.00 233.00 235.00 234.00 233.00
Rata2 182.50 184.50 186.25 191.75 197.00 196.25 201.50 203.50 205.75 208.25
7 165.00 172.00 168.00 170.00 176.00 173.00 182.00 179.00 182.00 129.00
4 201.00 206.00 218.00 218.00 228.00 227.00 231.00 234.00 239.00 243.00
13 198.00 204.00 206.00 206.00 216.00 215.00 218.00 220.00 229.00 232.00
8 200.00 207.00 206.00 210.00 217.00 234.00 219.00 223.00 225.00 224.00
Rata2 191.00 197.25 199.50 201.00 209.25 212.25 212.50 214.00 218.75 207.00
2 200.00 208.00 206.00 212.00 216.00 214.00 223.00 229.00 225.00 232.00
26 181.00 184.00 187.00 185.00 191.00 188.00 187.00 186.00 165.00 159.00
29 189.00 202.00 205.00 209.00 215.00 207.00 221.00 231.00 229.00 230.00
10 182.00 184.00 187.00 188.00 197.00 192.00 197.00 206.00 209.00 206.00
Rata2 188.00 194.50 196.25 198.50 204.75 200.25 207.00 213.00 207.00 206.75
69
Lampiran 3. Bahan kimia 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) dan starter yogurt
2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD)
Starter yogurt
70
Lampiran 4. Hasil analisis proksimat dan analisis antioksidan pada sampel kasein yogurt susu kambing
71
Lampiran 5. Hasil analisis total BAL dan total protein yogurt susu kambing
72
Lampiran 6. Analisis statistik
1. Aktivitas enzim SOD
Lower
Bound
Upper
Bound
Kontrol Positif 4 3,6918 ,14604 ,07302 3,4594 3,9241 3,57 3,90
Kontrol Negatif 4 5,6915 1,07566 ,53783 3,9799 7,4031 4,73 7,23
Kontrol Plasebo 4 4,7333 1,00339 ,50169 3,1366 6,3299 3,34 5,68
Perlakukan 1 4 4,8165 ,66703 ,33352 3,7551 5,8779 3,96 5,34
Perlakukan 2 4 5,6363 ,53902 ,26951 4,7786 6,4939 4,96 6,12
Perlakukan 3 4 6,4973 ,46784 ,23392 5,7528 7,2417 5,96 7,07
Total 24 5,1778 1,11169 ,22692 4,7083 5,6472 3,34 7,23
Levene Statistic df1 df2 Sig.
1,551 5 18 ,224
Sum of Squares df
Mean
Square F Sig.
Between Groups 19,006 5 3,801 7,265 ,001
Within Groups 9,419 18 ,523
Total 28,425 23
Post Hoc Tests
Lower
Bound
Upper
Bound
Kontrol Negatif -1,99975* ,51149 ,011 -3,6253 -,3742
Kontrol Plasebo -1,04150 ,51149 ,361 -2,6670 ,5840
Perlakukan 1 -1,12475 ,51149 ,285 -2,7503 ,5008
Perlakukan 2 -1,94450* ,51149 ,014 -3,5700 -,3190
Perlakukan 3 -2,80550* ,51149 ,000 -4,4310 -1,1800
Kontrol Positif 1,99975* ,51149 ,011 ,3742 3,6253
Kontrol Plasebo ,95825 ,51149 ,448 -,6673 2,5838
Perlakukan 1 ,87500 ,51149 ,542 -,7505 2,5005
Perlakukan 2 ,05525 ,51149 1,000 -1,5703 1,6808
Perlakukan 3 -,80575 ,51149 ,624 -2,4313 ,8198
Descriptives
SOD
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence
Interval for Mean
Minimum Maximum
Test of Homogeneity of Variances
SOD
ANOVA
SOD
Multiple Comparisons
Dependent Variable: SOD
(I) Kategori Perlakukan
Mean
Difference
(I-J) Std. Error Sig.
95% Confidence
Interval
Tukey HSD Kontrol Positif
Kontrol Negatif
73
Kontrol Positif 1,04150 ,51149 ,361 -,5840 2,6670
Kontrol Negatif -,95825 ,51149 ,448 -2,5838 ,6673
Perlakukan 1 -,08325 ,51149 1,000 -1,7088 1,5423
Perlakukan 2 -,90300 ,51149 ,510 -2,5285 ,7225
Perlakukan 3 -1,76400* ,51149 ,029 -3,3895 -,1385
Kontrol Positif 1,12475 ,51149 ,285 -,5008 2,7503
Kontrol Negatif -,87500 ,51149 ,542 -2,5005 ,7505
Kontrol Plasebo ,08325 ,51149 1,000 -1,5423 1,7088
Perlakukan 2 -,81975 ,51149 ,607 -2,4453 ,8058
Perlakukan 3 -1,68075* ,51149 ,040 -3,3063 -,0552
Kontrol Positif 1,94450* ,51149 ,014 ,3190 3,5700
Kontrol Negatif -,05525 ,51149 1,000 -1,6808 1,5703
Kontrol Plasebo ,90300 ,51149 ,510 -,7225 2,5285
Perlakukan 1 ,81975 ,51149 ,607 -,8058 2,4453
Perlakukan 3 -,86100 ,51149 ,559 -2,4865 ,7645
Kontrol Positif 2,80550* ,51149 ,000 1,1800 4,4310
Kontrol Negatif ,80575 ,51149 ,624 -,8198 2,4313
Kontrol Plasebo 1,76400* ,51149 ,029 ,1385 3,3895
Perlakukan 1 1,68075* ,51149 ,040 ,0552 3,3063
Perlakukan 2 ,86100 ,51149 ,559 -,7645 2,4865
Homogeneous Subsets
1 2 3
Kontrol Positif 4 3,6918
Kontrol Plasebo 4 4,7333 4,7333
Perlakukan 1 4 4,8165 4,8165
Perlakukan 2 4 5,6363 5,6363
Kontrol Negatif 4 5,6915 5,6915
Perlakukan 3 4 6,4973
Sig. ,285 ,448 ,559
Tukey HSD Kontrol Plasebo
Perlakukan 1
Perlakukan 2
Perlakukan 3
Tukey HSDa
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4,000.
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
SOD
Kategori Perlakukan N
Subset for alpha = 0.05
74
2. Kadar Kolesterol
Oneway
Lower
Bound
Upper
Bound
Kontrol Positif 4 95,5000 9,46925 4,73462 80,4323 110,5677 85,00 104,00
Kontrol Negatif 4 90,5000 9,00000 4,50000 76,1790 104,8210 78,00 98,00
Kontrol Plasebo 4 85,0000 7,16473 3,58236 73,5993 96,4007 77,00 92,00
Perlakukan 1 4 95,5000 16,03122 8,01561 69,9908 121,0092 83,00 119,00
Perlakukan 2 4 90,0000 9,93311 4,96655 74,1942 105,8058 82,00 104,00
Perlakukan 3 4 87,7500 5,37742 2,68871 79,1933 96,3067 81,00 93,00
Total 24 90,7083 9,71543 1,98315 86,6059 94,8108 77,00 119,00
Levene Statistic df1 df2 Sig.
1,071 5 18 ,409
Sum of Squares df
Mean
Square F Sig.
Between Groups 351,208 5 70,242 ,695 ,634
Within Groups 1819,750 18 101,097
Total 2170,958 23
Post Hoc Tests
Lower
Bound
Upper
Bound
Kontrol Negatif 5,00000 7,10975 ,979 -17,5950 27,5950
Kontrol Plasebo 10,50000 7,10975 ,682 -12,0950 33,0950
Perlakukan 1 0,00000 7,10975 1,000 -22,5950 22,5950
Perlakukan 2 5,50000 7,10975 ,969 -17,0950 28,0950
Perlakukan 3 7,75000 7,10975 ,879 -14,8450 30,3450
Kontrol Positif -5,00000 7,10975 ,979 -27,5950 17,5950
Kontrol Plasebo 5,50000 7,10975 ,969 -17,0950 28,0950
Perlakukan 1 -5,00000 7,10975 ,979 -27,5950 17,5950
Perlakukan 2 ,50000 7,10975 1,000 -22,0950 23,0950
Perlakukan 3 2,75000 7,10975 ,999 -19,8450 25,3450
Kontrol Positif -10,50000 7,10975 ,682 -33,0950 12,0950
Kontrol Negatif -5,50000 7,10975 ,969 -28,0950 17,0950
Descriptives
kolesterol
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence
Interval for Mean
Minimum Maximum
Test of Homogeneity of Variances
kolesterol
ANOVA
kolesterol
Multiple Comparisons
Dependent Variable: kolesterol
(I) Kategori Perlakukan
Mean
Difference
(I-J) Std. Error Sig.
95% Confidence
Interval
Tukey HSD Kontrol Positif
Kontrol Negatif
Kontrol Plasebo
75
Perlakukan 1 -10,50000 7,10975 ,682 -33,0950 12,0950
Perlakukan 2 -5,00000 7,10975 ,979 -27,5950 17,5950
Perlakukan 3 -2,75000 7,10975 ,999 -25,3450 19,8450
Kontrol Positif 0,00000 7,10975 1,000 -22,5950 22,5950
Kontrol Negatif 5,00000 7,10975 ,979 -17,5950 27,5950
Kontrol Plasebo 10,50000 7,10975 ,682 -12,0950 33,0950
Perlakukan 2 5,50000 7,10975 ,969 -17,0950 28,0950
Perlakukan 3 7,75000 7,10975 ,879 -14,8450 30,3450
Kontrol Positif -5,50000 7,10975 ,969 -28,0950 17,0950
Kontrol Negatif -,50000 7,10975 1,000 -23,0950 22,0950
Kontrol Plasebo 5,00000 7,10975 ,979 -17,5950 27,5950
Perlakukan 1 -5,50000 7,10975 ,969 -28,0950 17,0950
Perlakukan 3 2,25000 7,10975 ,999 -20,3450 24,8450
Kontrol Positif -7,75000 7,10975 ,879 -30,3450 14,8450
Kontrol Negatif -2,75000 7,10975 ,999 -25,3450 19,8450
Kontrol Plasebo 2,75000 7,10975 ,999 -19,8450 25,3450
Perlakukan 1 -7,75000 7,10975 ,879 -30,3450 14,8450
Perlakukan 2 -2,25000 7,10975 ,999 -24,8450 20,3450
Homogeneous Subsets
Subset for
alpha =
0.05
1
Kontrol Plasebo 4 85,0000
Perlakukan 3 4 87,7500
Perlakukan 2 4 90,0000
Kontrol Negatif 4 90,5000
Kontrol Positif 4 95,5000
Perlakukan 1 4 95,5000
Sig. ,682
Kontrol Plasebo 4 85,0000
Perlakukan 3 4 87,7500
Perlakukan 2 4 90,0000
Kontrol Negatif 4 90,5000
Kontrol Positif 4 95,5000
Perlakukan 1 4 95,5000
Sig. ,682
Tukey HSD Kontrol Plasebo
Perlakukan 1
Perlakukan 2
Perlakukan 3
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4,000.
kolesterol
Kategori Perlakukan N
Student-Newman-
Keulsa
Tukey HSDa
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
76
3. Kadar trigliserida
Oneway
Lower
Bound
Upper
Bound
Kontrol Positif 4 127,5000 45,18481 22,59240 55,6009 199,3991 93,00 194,00
Kontrol Negatif 4 59,5000 11,81807 5,90903 40,6948 78,3052 48,00 74,00
Kontrol Plasebo 4 65,5000 22,57580 11,28790 29,5769 101,4231 44,00 97,00
Perlakukan 1 4 87,2500 40,11961 20,05981 23,4107 151,0893 39,00 135,00
Perlakukan 2 4 57,2500 20,32035 10,16018 24,9158 89,5842 34,00 83,00
Perlakukan 3 4 70,7500 42,10602 21,05301 3,7499 137,7501 22,00 122,00
Total 24 77,9583 38,18090 7,79364 61,8360 94,0807 22,00 194,00
Levene Statistic df1 df2 Sig.
1,350 5 18 ,289
Sum of
Squares df
Mean
Square F Sig.
Between Groups 14069,708 5 2813,942 2,603 ,061
Within Groups 19459,250 18 1081,069
Total 33528,958 23
Post Hoc Tests
Lower
Bound
Upper
Bound
Kontrol Negatif 68,00000 23,24940 ,082 -5,8874 141,8874
Kontrol Plasebo 62,00000 23,24940 ,131 -11,8874 135,8874
Perlakukan 1 40,25000 23,24940 ,530 -33,6374 114,1374
Perlakukan 2 70,25000 23,24940 ,068 -3,6374 144,1374
Perlakukan 3 56,75000 23,24940 ,194 -17,1374 130,6374
Kontrol Positif -68,00000 23,24940 ,082 -141,8874 5,8874
Kontrol Plasebo -6,00000 23,24940 1,000 -79,8874 67,8874
Perlakukan 1 -27,75000 23,24940 ,834 -101,6374 46,1374
Perlakukan 2 2,25000 23,24940 1,000 -71,6374 76,1374
Perlakukan 3 -11,25000 23,24940 ,996 -85,1374 62,6374
Kontrol Positif -62,00000 23,24940 ,131 -135,8874 11,8874
Kontrol Negatif 6,00000 23,24940 1,000 -67,8874 79,8874
Perlakukan 1 -21,75000 23,24940 ,932 -95,6374 52,1374
Descriptives
trigliserida
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence
Interval for Mean
Minimum Maximum
Test of Homogeneity of Variances
trigliserida
ANOVA
trigliserida
Multiple Comparisons
Dependent Variable: trigliserida
(I) Kategori Perlakukan
Mean
Difference
(I-J) Std. Error Sig.
95% Confidence
Interval
Tukey HSD Kontrol Positif
Kontrol Negatif
Kontrol
Plasebo
77
Perlakukan 2 8,25000 23,24940 ,999 -65,6374 82,1374
Perlakukan 3 -5,25000 23,24940 1,000 -79,1374 68,6374
Kontrol Positif -40,25000 23,24940 ,530 -114,1374 33,6374
Kontrol Negatif 27,75000 23,24940 ,834 -46,1374 101,6374
Kontrol Plasebo 21,75000 23,24940 ,932 -52,1374 95,6374
Perlakukan 2 30,00000 23,24940 ,786 -43,8874 103,8874
Perlakukan 3 16,50000 23,24940 ,978 -57,3874 90,3874
Kontrol Positif -70,25000 23,24940 ,068 -144,1374 3,6374
Kontrol Negatif -2,25000 23,24940 1,000 -76,1374 71,6374
Kontrol Plasebo -8,25000 23,24940 ,999 -82,1374 65,6374
Perlakukan 1 -30,00000 23,24940 ,786 -103,8874 43,8874
Perlakukan 3 -13,50000 23,24940 ,991 -87,3874 60,3874
Kontrol Positif -56,75000 23,24940 ,194 -130,6374 17,1374
Kontrol Negatif 11,25000 23,24940 ,996 -62,6374 85,1374
Kontrol Plasebo 5,25000 23,24940 1,000 -68,6374 79,1374
Perlakukan 1 -16,50000 23,24940 ,978 -90,3874 57,3874
Perlakukan 2 13,50000 23,24940 ,991 -60,3874 87,3874
Homogeneous Subsets
Subset for
alpha =
0.05
1
Perlakukan 2 4 57,2500
Kontrol Negatif 4 59,5000
Kontrol
Plasebo
4 65,5000
Perlakukan 3 4 70,7500
Perlakukan 1 4 87,2500
Kontrol Positif 4 127,5000
Sig. ,068
Tukey HSD Kontrol
Plasebo
Perlakukan 1
Perlakukan 2
Perlakukan 3
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4,000.
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
trigliserida
Kategori Perlakukan N
Tukey HSDa
78
4. Kadar enzim ALT (SGPT)
Oneway
Lower
Bound
Upper
Bound
Kontrol Positif 4 158,0000 18,97367 9,48683 127,8087 188,1913 144,00 186,00
Kontrol Negatif 4 181,0000 33,21646 16,60823 128,1452 233,8548 134,00 210,00
Kontrol Plasebo 4 177,2500 21,53099 10,76549 142,9894 211,5106 146,00 195,00
Perlakukan 1 4 126,5000 35,91193 17,95596 69,3561 183,6439 82,00 168,00
Perlakukan 2 4 161,2500 19,72097 9,86049 129,8695 192,6305 143,00 186,00
Perlakukan 3 4 130,7500 48,86290 24,43145 52,9982 208,5018 59,00 168,00
Total 24 155,7917 35,16542 7,17811 140,9426 170,6407 59,00 210,00
Levene Statistic df1 df2 Sig.
,987 5 18 ,452
Sum of
Squares df
Mean
Square F Sig.
Between Groups 10462,708 5 2092,542 2,095 ,113
Within Groups 17979,250 18 998,847
Total 28441,958 23
Post Hoc Tests
Lower
Bound
Upper
Bound
Kontrol Negatif -23,00000 22,34779 ,902 -94,0220 48,0220
Kontrol Plasebo -19,25000 22,34779 ,951 -90,2720 51,7720
Perlakukan 1 31,50000 22,34779 ,721 -39,5220 102,5220
Perlakukan 2 -3,25000 22,34779 1,000 -74,2720 67,7720
Perlakukan 3 27,25000 22,34779 ,822 -43,7720 98,2720
Kontrol Positif 23,00000 22,34779 ,902 -48,0220 94,0220
Kontrol Plasebo 3,75000 22,34779 1,000 -67,2720 74,7720
Perlakukan 1 54,50000 22,34779 ,195 -16,5220 125,5220
Perlakukan 2 19,75000 22,34779 ,946 -51,2720 90,7720
Perlakukan 3 50,25000 22,34779 ,265 -20,7720 121,2720
Kontrol Positif 19,25000 22,34779 ,951 -51,7720 90,2720
Kontrol Negatif -3,75000 22,34779 1,000 -74,7720 67,2720
Descriptives
SGPT
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence
Interval for Mean
Minimum Maximum
Test of Homogeneity of Variances
SGPT
ANOVA
SGPT
Multiple Comparisons
Dependent Variable: SGPT
(I) Kategori Perlakukan
Mean
Difference
(I-J) Std. Error Sig.
95% Confidence
Interval
Tukey HSD Kontrol Positif
Kontrol
Negatif
Kontrol
Plasebo
79
Perlakukan 1 50,75000 22,34779 ,256 -20,2720 121,7720
Perlakukan 2 16,00000 22,34779 ,977 -55,0220 87,0220
Perlakukan 3 46,50000 22,34779 ,339 -24,5220 117,5220
Kontrol Positif -31,50000 22,34779 ,721 -102,5220 39,5220
Kontrol Negatif -54,50000 22,34779 ,195 -125,5220 16,5220
Kontrol Plasebo -50,75000 22,34779 ,256 -121,7720 20,2720
Perlakukan 2 -34,75000 22,34779 ,636 -105,7720 36,2720
Perlakukan 3 -4,25000 22,34779 1,000 -75,2720 66,7720
Kontrol Positif 3,25000 22,34779 1,000 -67,7720 74,2720
Kontrol Negatif -19,75000 22,34779 ,946 -90,7720 51,2720
Kontrol Plasebo -16,00000 22,34779 ,977 -87,0220 55,0220
Perlakukan 1 34,75000 22,34779 ,636 -36,2720 105,7720
Perlakukan 3 30,50000 22,34779 ,746 -40,5220 101,5220
Kontrol Positif -27,25000 22,34779 ,822 -98,2720 43,7720
Kontrol Negatif -50,25000 22,34779 ,265 -121,2720 20,7720
Kontrol Plasebo -46,50000 22,34779 ,339 -117,5220 24,5220
Perlakukan 1 4,25000 22,34779 1,000 -66,7720 75,2720
Perlakukan 2 -30,50000 22,34779 ,746 -101,5220 40,5220
Homogeneous Subsets
Subset for
alpha =
0.05
1
Perlakukan 1 4 126,5000
Perlakukan 3 4 130,7500
Kontrol Positif 4 158,0000
Perlakukan 2 4 161,2500
Kontrol
Plasebo
4 177,2500
Kontrol
Negatif
4 181,0000
Sig. ,195
Tukey HSD Kontrol
Plasebo
Perlakukan 1
Perlakukan 2
Perlakukan 3
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4,000.
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
SGPT
Kategori Perlakukan N
Tukey HSDa
80
5. Kadar enzim AST (SGOT)
Oneway
Lower
Bound
Upper
Bound
Kontrol Positif 4 175,0000 15,25341 7,62671 150,7284 199,2716 158,00 193,00
Kontrol Negatif 4 219,5000 15,02221 7,51110 195,5963 243,4037 206,00 241,00
Kontrol Plasebo 4 198,0000 30,80043 15,40022 148,9896 247,0104 168,00 227,00
Perlakukan 1 4 166,7500 15,32699 7,66350 142,3613 191,1387 153,00 187,00
Perlakukan 2 4 170,7500 33,02903 16,51451 118,1934 223,3066 141,00 217,00
Perlakukan 3 4 158,2500 23,89386 11,94693 120,2295 196,2705 134,00 183,00
Total 24 181,3750 29,81073 6,08509 168,7870 193,9630 134,00 241,00
Levene Statistic df1 df2 Sig.
1,904 5 18 ,144
Sum of
Squares df
Mean
Square F Sig.
Between Groups 10528,375 5 2105,675 3,824 ,016
Within Groups 9911,250 18 550,625
Total 20439,625 23
Post Hoc Tests
Lower
Bound
Upper
Bound
Kontrol Negatif -44,50000 16,59254 ,128 -97,2317 8,2317
Kontrol Plasebo -23,00000 16,59254 ,734 -75,7317 29,7317
Perlakukan 1 8,25000 16,59254 ,996 -44,4817 60,9817
Perlakukan 2 4,25000 16,59254 1,000 -48,4817 56,9817
Perlakukan 3 16,75000 16,59254 ,909 -35,9817 69,4817
Kontrol Positif 44,50000 16,59254 ,128 -8,2317 97,2317
Kontrol Plasebo 21,50000 16,59254 ,784 -31,2317 74,2317
Perlakukan 1 52,75000* 16,59254 ,050 ,0183 105,4817
Perlakukan 2 48,75000 16,59254 ,080 -3,9817 101,4817
Perlakukan 3 61,25000* 16,59254 ,018 8,5183 113,9817
Kontrol Positif 23,00000 16,59254 ,734 -29,7317 75,7317
Kontrol Negatif -21,50000 16,59254 ,784 -74,2317 31,2317
Descriptives
SGOT
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence
Interval for Mean
Minimum Maximum
Test of Homogeneity of Variances
SGOT
ANOVA
SGOT
Multiple Comparisons
Dependent Variable: SGOT
(I) Kategori Perlakukan
Mean
Difference
(I-J) Std. Error Sig.
95% Confidence
Interval
Tukey HSD Kontrol Positif
Kontrol
Negatif
Kontrol
Plasebo
81
Perlakukan 1 31,25000 16,59254 ,442 -21,4817 83,9817
Perlakukan 2 27,25000 16,59254 ,583 -25,4817 79,9817
Perlakukan 3 39,75000 16,59254 ,209 -12,9817 92,4817
Kontrol Positif -8,25000 16,59254 ,996 -60,9817 44,4817
Kontrol Negatif -52,75000* 16,59254 ,050 -105,4817 -,0183
Kontrol Plasebo -31,25000 16,59254 ,442 -83,9817 21,4817
Perlakukan 2 -4,00000 16,59254 1,000 -56,7317 48,7317
Perlakukan 3 8,50000 16,59254 ,995 -44,2317 61,2317
Kontrol Positif -4,25000 16,59254 1,000 -56,9817 48,4817
Kontrol Negatif -48,75000 16,59254 ,080 -101,4817 3,9817
Kontrol Plasebo -27,25000 16,59254 ,583 -79,9817 25,4817
Perlakukan 1 4,00000 16,59254 1,000 -48,7317 56,7317
Perlakukan 3 12,50000 16,59254 ,972 -40,2317 65,2317
Kontrol Positif -16,75000 16,59254 ,909 -69,4817 35,9817
Kontrol Negatif -61,25000* 16,59254 ,018 -113,9817 -8,5183
Kontrol Plasebo -39,75000 16,59254 ,209 -92,4817 12,9817
Perlakukan 1 -8,50000 16,59254 ,995 -61,2317 44,2317
Perlakukan 2 -12,50000 16,59254 ,972 -65,2317 40,2317
Homogeneous Subsets
1 2
Perlakukan 3 4 158,2500
Perlakukan 1 4 166,7500
Perlakukan 2 4 170,7500 170,7500
Kontrol Positif 4 175,0000 175,0000
Kontrol
Plasebo
4 198,0000 198,0000
Kontrol
Negatif
4 219,5000
Sig. ,209 ,080
Tukey HSD Kontrol
Plasebo
Perlakukan 1
Perlakukan 2
Perlakukan 3
Tukey HSDa
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4,000.
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
SGOT
Kategori Perlakukan N
Subset for alpha =
0.05
82
Lampiran 7. Sertifikat laik etik (ethical clearence) untuk induk penelitian