inseminación artificial con semen congelado en profundidad
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Facultad de Ciencias Veterinarias
-UNCPBA-
Inseminación Artificial con Semen Congelado en
Profundidad con la Utilización de una Pajuela en
Yeguas
Imposti, Cecilia Gabriela; Ambrosius, Bárbara; Mascioli, María del Carmen
Diciembre de 2018
Tandil
Inseminación Artificial con Semen Congelado en Profundidad
con la Utilizacion de una Pajuela en Yeguas
Tesina de la Orientación de Producción Animal, presentada como parte de los
requisitos para optar al grado de Veterinario del estudiante: Imposti, Cecilia
Gabriela
Tutor: Médica Veterinaria, Ambrosius Bárbara
Director: Médica Veterinaria, Mascioli, María del Carmen
Evaluador: Médica Veterinaria, Cantatore, Sofía
DEDICATORIAS Y AGRADECIMIENTOS
En primer lugar, quiero agradecer a mi familia y especialmente a mis
padres que hicieron posible todos mis sueños y lograron mediante mucho
esfuerzo que pudiera estudiar veterinaria, alentando siempre mi amor por los
caballos.
Quiero agradecer también a mi novio por su apoyo incondicional y por
estar presente durante toda mi carrera, ayudándome en todo momento y
haciendo que las cosas siempre resultaran más fáciles.
Además, quiero agradecer a Bárbara Ambrosius por, además de haber
sido una excelente veterinaria guía durante mi residencia, haber despertado en
mi una pasión por la reproducción equina gracias a su propia pasión y
conocimientos, y por haber estado en todo momento para ayudarme con
dedicación y paciencia.
También quiero agradecer a mis grandes amigas Clara Meineri y Sofía
Chierichetti, quienes estuvieron presentes siempre y me acompañaron en todo
momento, no solo en la universidad sino también en la vida.
Quiero dedicar esta tesis a todos ellos y a los caballos, por su honor,
nobleza y confianza incondicional y en especial a uno muy importante en mi
vida, Tyson.
RESUMEN
La inseminación artificial con semen congelado en profundidad en el cuerno
uterino es una técnica en la cual el semen es depositado cerca de la unión
útero tubárica, dentro del cuerno ipsilateral al ovario con el folículo ovulatorio,
precisamente en la papila úterotubal. Esta técnica permite usar bajas dosis de
semen, ya que el mismo es depositado cerca del sitio de fertilización. De esta
forma, es posible la utilización de un menor volumen y concentración de
semen, lo cual mejora la eficiencia en su uso obteniendo resultados
satifactorios y alentadores. La inseminación profunda y el uso de baja dosis
han adquirido fundamental importancia en la mayoría de los establecimientos
de inseminación especialmente cuando el número de pajuelas que se dispone
de un determinado padrillo es limitado, ya sea por una baja disponibilidad
comercial o por el alto costo de las mismas. Es importante el momento
adecuado de inseminación, dado que el semen congelado-descongelado tiene
una viabilidad limitada. Para maximizar la fertilización, y especialmente con la
técnica de profundidad a baja dosis, la inseminación debe ser realizada lo mas
cerca posible en tiempo a la ovulación. Resulta fundamental un buen manejo
reproductivo que incluya un correcto seguimiento ginecológico para determinar
el momento óptimo de inseminación. La presente tesis, describe una revisión
bibliográfica acerca del uso del semen congelado y la técnica de inseminación
en profundidad, así como también el protocolo y los resultados obtenidos del
trabajo realizado en el Haras Henry Jota, durante la temporada 2017. En dicho
trabajo, se realizó inseminación artificial con semen congelado en 12 yeguas
Silla Argentino con la técnica de profundidad guiada por tacto rectal utilizando 1
pajuela por yegua. Los resultados fueron satisfactorios, ya que el porcentaje
de preñez logrado fue muy bueno (66,66%), determinando entonces que la
técnica es conveniente siempre que se trabaje de manera rigurosa y constante.
Palabras clave: semen congelado, técnica de profundidad, 1 pajuela
ÍNDICE
1. INTRODUCCIÓN.......................................................................................1
2. MARCO TEÓRICO....................................................................................4
2.1 Inseminación Artificial con Semen Congelado en Profundidad.......4
2.1.1 Ventajas y Desventajas de la Técninca de Profundidad......................5
2.2 Ventajas y Desventajas de la Inseminación Artificial con Semen
Congelado.....................................................................................................6
2.3 Factores que Afectan el Éxito de la Inseminación Artificial con
Semen Congelado........................................................................................7
2.4 Selección del Padrillo y la Yegua al Utilizar Semen Congelado.......7
2.4.1 Selección del Padrillo............................................................................7
2.4.2 Selección de la Yegua..........................................................................8
2.5 Manejo de Yeguas para Inseminación con Semen Congelado.........8
2.6 Momento de Inseminación....................................................................9
2.7 Principios Básicos de Congelación de Semen...................................12
2.7.1 Capacidad del Semen Equino de ser Congelado.................................13
2.7.2 Principios Básicos de la Técnica de Congelación de Semen Equino. .14
2.7.3 Empaque del Semen Congelado..........................................................15
2.8 Técnica de Inseminación con Semen Congelado en Profundidad...16
2.8.1 Descongelado.......................................................................................16
2.8.2 Evaluación de semen post-descongelado............................................17
2.8.3 Técnica..................................................................................................19
2.9 Dosis Inseminante en Profundidad......................................................21
2.10 Tratamientos Post-inseminación.......................................................23
3. OBJETIVO.................................................................................................26
4. MATERIALES Y MÉTODOS.....................................................................26
5. RESULTADOS...........................................................................................31
6. DISCUSIÓN................................................................................................35
7. CONCLUSIONES......................................................................................37
8. BIBLIOGRAFÍA.........................................................................................39
1. INTRODUCCIÓN
La primera inseminación artificial exitosa en equinos data del año 1322.
La mencionada inseminación se logró recolectando el semen de un padrillo de
raza árabe desde la vagina de una yegua recién apareada y transportándolo en
leche de camello para luego introducirlo en otra yegua (Allen, 2005).
La primera preñez obtenida con el uso de semen congelado equino fue
reportada por Barker y Gandier en el año 1957. Por muchos años, esta
tecnología reproductiva había alcanzado un limitado progreso en los equinos
comparado con otras especies. Esto fue principalmente debido al hecho que
durante mucho tiempo sólo unas pocas asociaciones de registros de razas
equinas permitieron el uso de semen congelado. Hoy en día, casi todas las
asociaciones permiten la implementación de esta técnica reproductiva,
alentando así a los investigadores a enfocarse en la búsqueda de mejores
técnicas de congelación de semen y protocolos más sencillos para la
inseminación (McKinnon, 2011).
Las técnicas de inseminación artificial convencional con semen
congelado (depósito de semen en el cuerpo del útero) y de congelación de
semen se han ido perfeccionando con el objetivo de mejorar la eficiencia,
reducir el número de pajuelas utilizadas por preñez, y reducir el costo y trabajo
del veterinario (Morete, 2017). Nuevos métodos han sido diseñados para lograr
el depósito de semen más cerca del sitio de fertilización. Éste es el caso de la
inseminación profunda en el cuerno del útero (Morris, 2006). Esta técnica
permite a los veterinarios obtener buenos resultados al utilizar bajas dosis de
semen (Schmidt, 2011).
La técnica de profundidad mediante el uso de baja dosis surgió por la
necesidad del uso de menos de una dosis completa de semen congelado
1
debido al costo y la escasez del semen disponible de algunos padrillos
(Squires, 2015).
De este modo, la técnica de profundidad a baja dosis posee el potencial
necesario para realizar un uso más eficiente del semen congelado de algunos
padrillos en particular alcanzando resultados satisfactorios y alentadores (Nie
et al., 2003).
Los porcentajes de preñez obtenidos con la utilización de semen
congelado son de alrededor del 50% en promedio (Samper, 2009). Sin
embargo, la calidad del semen congelado que es comercializada está
mejorando cada vez más y, de esta forma, también los porcentajes de preñez
(Samper, 2009). Para la técnica de depósito de semen en profundidad,
Buchnan y colaboradores alcanzaron un 35% de preñez (Morris, 2006); Squires
y colaboradores reportaron un 40% (Samper y Hankins, 2001); en otro estudio,
Morris y colaboradores lograron un 67% de preñez (Morris et al., 2001); y
Caldevilla y Miragaya obtuvieron un 72,9% (Alonso et al., 2016).
La utilización de técnicas de reproducción como lo es la inseminación
profunda a baja dosis, debe ir precedida de una discusión cuidadosa y
consciente con los propietarios en cuanto a costos económicos y expectativas
de procedimiento (Varner et al., 2014).
Los veterinarios deben estar al tanto de los procedimientos necesarios
para maximizar las preñeces y comprender los factores que afectan la fertilidad
al momento de utilizar semen congelado y, de esta forma, tener expectativas
realistas tanto para ellos como para los propietarios de padrillos y yeguas
(Samper y Hankins, 2001). El éxito de la utilización de semen congelado
requiere que el veterinario esté familiarizado con las técnicas apropiadas de
descongelación, evaluación y manipulación del semen congelado, así como las
2
distintas estrategias de reproducción empleadas para maximizar la fertilidad
(Wolfsdorf, 2012).
Por consiguiente, el objetivo de la presente tesis se concentra en
describir el protocolo y los resultados obtenidos de la inseminación artificial con
semen congelado mediante la técnica de profundidad guiada por tacto rectal
utilizando 1 pajuela por inseminación en yeguas de salto raza Silla Argentino
del Haras Henry Jota.
3
2. MARCO TEÓRICO
2.1. INSEMINACIÓN ARTIFICIAL CON SEMEN CONGELADO EN
PROFUNDIDAD
La inseminación profunda en el cuerno del útero es una técnica en la
cual el semen es depositado próximo a la unión útero tubárica, dentro del
cuerno ipsilateral al ovario con el folículo ovulatorio, precisamente en la papila
úterotubal (Dascanio y McCue, 2014). Dicha papila es la localización en donde
el oviducto conecta con el útero (Brinsko, 2011).
Figura 1: Papila útero tubárica (Dascanio y McCue,2014).
Esta técnica posibilita utilizar baja dosis de semen, ya que el mismo es
depositado cerca del sitio de fertilización (Dascanio y McCue, 2014) y, de esta
forma, permite realizar un uso más eficiente del semen (Nie et al., 2003).
La inseminación profunda es la mejor opción para optimizar los
porcentajes de preñez cuando el número de pajuelas es limitado, cuando el
semen congelado-descongelado de algunos padrillos tiene poca motilidad
postdescongelado o cuando se utilizan padrillos con historia de baja fertilidad
(Dascanio y McCue, 2014). El uso de esta técnica logra minimizar la dosis de
semen permitiendo que los espermatozoides tengan acceso a la papila útero
tubárica en mayores cantidades y con mayor eficacia (Wolfsdorf, 2012). De
esta forma, se maximiza el uso del semen (Samper y Hankins, 2001).
4
2.1.1 Ventajas y Desventajas de la Técnica de Profundidad
El procedimiento de la inseminación artificial profunda es más costoso
que aquel utilizado para la inseminación artificial convencional (en el cuerpo del
útero), requiere más tiempo y el inseminador debe estar experimentado y
familiarizado con la técnica para que los resultados sean satisfactorios.
Sin embargo, los beneficios de su utilización son superiores, ya que
permite el uso de una dosis de menor volumen y concentración espermática de
semen maximizando su utilidad, lo que reduce significativamente los gastos
económicos para el cliente (Malagón et al., 2013) y permite conservar mayor
cantidad de pajuelas para otra inseminación (Schmidt, 2011).
La técnica de profundidad y el uso de baja dosis de semen poseen una
fundamental importancia en especial cuando el número de pajuelas es limitado.
Ésto puede deberse a (Dascanio y McCue, 2014):
A. Una baja disponibilidad comercial por:
- Haber muerto el padrillo
- Haber resultado enfermo el padrillo
- Edad avanzada del padrillo
- Ser el semen del padrillo popular y estar sobrevendido
- Oferta limitada del semen (Dascanio y McCue, 2014).
B. Un alto costo por:
- Alto valor genético del padrillo
- Ser el semen importado (Dascanio y McCue, 2014).
5
Por otro lado, diferentes estudios han demostrado que con la técnica de
profundidad utilizando baja dosis, un 80% del semen permanece en el oviducto,
en comparación con un 50% cuando el semen es depositado
convencionalmente en el cuerpo uterino (Samper et al., 2005).
2.2 VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA INSEMINACIÓN ARTIFICIAL CON
SEMEN CONGELADO
Las ventajas de la utilización de semen congelado incluyen acceso a
semen de padrillos: 1) que se encuentran en otros países, 2) que se
encuentran en competición, 3) que resultaron enfermos, heridos o adquirieron
alguna enfermedad infecciosa, 4) cuando la yegua está en el momento óptimo
para ser inseminada (McKinnon, 2011); y otras ventajas como: 5) disponibilidad
contínua de semen, 6) disminución del riesgo de transmsión de enfermedades
venéreas, 7) aumento del pool genético (Samper, 2009), 8) menor costo para
transportar un tanque de nitrógeno que para transportar una yegua y 9) el
semen congelado correctamente almacenado es viable por muchas décadas
(Samper y Hankins, 2001).
Sin embargo, existen algunas desventajas al momento de la utilización
de semen congelado como: 1) alto costo económico para el dueño de la yegua
debido al gran número de revisaciones ginecológicas que debe realizar el
veterinario, 2) mayor esfuerzo y trabajo, 3) bajos porcentajes de preñez por
parte de algunos padrillos, 4) reducción de la fertilidad del semen en gran
proporción de los padrillos durante el proceso de criopreservación (Samper,
2009) y 5) alta variación en las diferentes calidades de semen (Samper y
Hankins, 2001).
6
2.3 FACTORES QUE AFECTAN EL ÉXITO DE LA INSEMINACIÓN
ARTIFICIAL CON SEMEN CONGELADO
El correcto manejo de ciertos factores es fundamental para lograr un
programa de inseminación satisfactorio. Estos factores incluyen:
1) Correcto manejo e identificación de la calidad del semen luego del
descongelado
2) Estricta selección del padrillo y de la yegua
3) Correcto manejo reproductivo de las yeguas (Samper y Hankins, 2001)
4)Habilidades y experiencia del veterinario (Schmidt, 2011).
5) Correctas estrategias de inseminación utilizadas para maximizar la fertilidad
(McKinnon, 2011).
2.4 SELECCIÓN DEL PADRILLO Y LA YEGUA AL UTILIZAR SEMEN
CONGELADO
2.4.1 Selección del Padrillo
Existen líneas paternas conocidas por su buena calidad de semen
congelado-descongelado. El semen de algunos de estos padrillos y sus hijos
han resultado en una excelente calidad post-descongelado, obteniendo
porcentajes de preñez de más del 60% (Samper y Hankins, 2001).
Desafortunadamente, la fertilidad de padrillos usados para semen fresco
no es buen indicador de su fertilidad para semen congelado-descongelado.
(Samper y Hankins, 2001).
Existe una amplia variación en la capacidad de los padrillos
individualmente de tolerar el proceso de congelado-descongelado del semen y
aún no se sabe la causa de esta variación. Entre otras razones, se encuentran
los constituyentes del plasma seminal o moléculas del propio semen los cuales
7
podrían ser responsables (Samper, 2009).
2.4.2 Selección de la Yegua
Los porcentajes de preñez tienden a ser menores en yeguas
inseminadas con semen congelado en comparación con aquellas inseminadas
con semen fresco o que han recibido servicio natural (Samper y Hankins,
2001). Los porcentajes de preñez en yeguas inseminadas con semen
congelado son en promedio del 50% (Samper, 2009). Para la técnica de
depósito de semen en profundidad, Buchnan y colaboradores alcanzaron un
porcentaje de preñez del 35%(Morris, 2006); Squires y colaboradores
reportaron 40% (Samper y Hankins, 2001); Morris y colaboradores lograron un
67% de preñez (Morris et al., 2001); y Caldevilla y Miragaya obtuvieron un
72,9% (Alonso et al., 2016).
Es importante que el veterinario concientice al cliente de que no todas
las yeguas son aptas para ingresar a un programa de inseminación con semen
congelado (Alonso et al., 2016). La selección de la yegua influye en el éxito de
los porcentajes obtenidos. Generalmente se obtienen peores resultados en
yeguas con historia de subfertilidad, yeguas con historia de clearence uterino
retardado y yeguas seniles (Dascanio y McCue, 2014). Las yeguas
consideradas mejores candidatas para la inseminación con semen congelado
son yeguas jóvenes de entre 3 y 8 años, sanas, fértiles y/o productoras
comprobadas (Samper y Hankins, 2001).
2.5 MANEJO DE YEGUAS PARA INSEMINACIÓN CON SEMEN
CONGELADO
Las yeguas que serán inseminadas con semen congelado deben
demostrar un comportamiento normal de celo. Archivos de inseminaciones
pasadas deben ser evaluados en caso de estar disponibles, para determinar
8
duración del estro, tamaño folicular con el cual la yegua tiende a ovular, y si
acumula fluído intrauterino luego de ser inseminada (Samper y Hankins, 2001).
Las yeguas que acumulan fluído intrauterino antes de ser inseminadas o
que tienen alguna bacteria aislada del útero, deben recibir un apropiado
tratamiento intrauterino antes de ser inseminadas con semen congelado.
Debido a que el semen es frecuentemente vendido por dosis, y los propietarios
suelen comprar sólo 1 o 2 dosis para una yegua en particular, puede ser una
buena opción avisar al cliente que otra yegua puede ser elegida si la cantidad
de semen es limitada (Samper y Hankins, 2001).
2.6 MOMENTO DE INSEMINACIÓN
Un factor importante en la aplicación del uso del semen congelado, y en
especial en la técnica de profundidad, es el dedicado trabajo asociado con el
manejo intenso de las yeguas a inseminar (Loomis y Squires, 2005).
El tracto reproductivo de las yeguas debe ser examinado diariamente
durante los primeros días del estro y más frecuentemente cuando la ovulación
esté por ocurrir (Samper y Hankins, 2001). Es importante el momento
adecuado de inseminación, ya que el semen congelado-descongelado tiene
una viabilidad limitada, por lo cual la yegua debe ser inseminada entre las 12
horas previas a la ovulación y 6-8 horas posteriores a la misma (Dascanio y
McCue, 2014). Para maximizar la fertilización, es recomendable realizar la
inseminación lo más cerca posible en tiempo a la ovulación. Los porcentajes de
preñez son mejores cuando las yeguas son inseminadas entre las 2 y las 4
horas postovulación. Para lograr esto, las yeguas deben ser revisadas cada 2 a
4 horas, ya que no existe ningún parámetro clínico o ultrasonográfico que
determine exáctamente cuán reciente es la ovulación. Deben realizarse
revisaciones repetidas para identificar cambios en la apariencia
9
ultrasonográfica del útero, crecimiento folicular y cambios en la ecogenicidad
del borde folicular. De esta forma, resulta imprescindible el trabajo dedicado y
constante del veterinario (Samper y Hankins, 2001).
Durante el estro, el útero de la yegua resulta marcadamente edematoso,
mostrando un típico patrón conocido como "rueda de carro". Durante los
primeros días del estro, el grado de edema endometrial aumenta
concomitantemente con el tamaño folicular hasta que alcanza un nivel máximo.
A medida que se acerca el momento de la ovulación, el grado de edema se
reduce en una yegua normal. El folículo preovulatorio justo antes de la
ovulación se torna blando, deformado, doloroso al tacto y sus bordes
hiperecogénicos (Samper y Hankins, 2001).
Los inductores de ovulación son administrados en combinación con las
revisaciones ginecológicas para regular el momento de la ovulación y reducir
entonces el número de examinaciones. Dos agentes de inducción de ovulación
están hoy en día disponibles, gonadotrofina coriónica humana (hCG) y un
análogo de la GnRH, el acetato de deslorelina. Ambos productos son efectivos
e inducen la ovulación. Estos agentes son administrados cuando la yegua
demuestra comportamiento estral y tiene un folículo de un diámetro mayor a
35mm. Con la hCG, la mayoría de las yeguas ovulan entre las 36 y 48 horas;
sin embargo, algunas pueden ovular a las 24 horas, mientras que otras pueden
tardar hasta 60 horas. Las yeguas tratadas con acetato de deslorelina, tienden
a ovular en un rango más estrecho, de 36 a 42 horas luego de la adminitración
(Samper y Hankins, 2001).
Independientemente del inductor de ovulación utilizado, el momento
ideal de inseminación es determinado preferiblemente por las revisaciones
ultrasonográficas de rutina, que determinan ecotextura uterina y folicular
(Samper y Hankins, 2001).
10
Figura 2: Edema uterino. Típico de estro temprano (Dascanio y McCue, 2014).
Figura 3: Edema uterino, “rueda de carro”. Típico de estro medio, notado 1 o 2 días
previos a la ovulación (Dascanio y McCue, 2014).
Figura 4: Imágen ultrasonográfica de un típico folículo preovulatorio. Paredes engrosadas y
deformado (Brinsko, 2011).
11
Figura 5: Ovulación reciente, cuerpo lúteo primitivo (McKinnon, 2011).
Figura 6: Ultrasonografía de ovario y útero en estro temprano. El folículo dominante tiene
aproximadamente 32 mm de diámetro y se presenta edema uterino (McKinnon, 2011).
Figura 7: Ultrasonografía de ovario y útero en estro tardío (McKinnon, 2011).
2.7 PRINCIPIOS BÁSICOS DE CONGELACIÓN DE SEMEN
Spallanzani fue el primero en intentar congelar semen equino en 1776.
Polge y sus colegas descubrieron la acción crioprotectora del glicerol, el cual
fue un gran progreso en el desarrollo de las técnicas para criopreservación de
semen (McKinnon, 2011).
12
2.7.1 Capacidad del Semen Equino de ser Congelado
Es importante evaluar la calidad del semen del padrillo antes de
comenzar con un programa de criopreservación, ya que no todos los padrillos
logran cumplir con los requisitos necesarios de calidad para ser un buen
candidato y que el semen pueda ser congelado. Congelar semen de padrillos al
azar puede provocar malos resultados debido a que la calidad del mismo al ser
congelado-descongelado puede no ser la adecuada (McKinnon, 2011).
No todos los padrillos son buenos candidatos para congelación de
semen. Comunmente se cree que la clave para que la criopreservación sea
exitosa está en el padrillo mismo. Los padrillos demuestran un alto grado
particular de variación individual con respecto a la criosupervivencia del semen.
Ha sido estimado que sólo un 20% de los padrillos producen semen capaz de
ser congelado-descongelado exitosamente, un 60% produce semen que puede
ser medianamente aceptabe, y un 20% produce semen que congela-
descongela de manera pobre (McKinnon, 2011).
Según Tischner, los padrillos pueden agruparse en categorías basadas
en su motilidad post-descongelado:
- Buenos: más de 40% de motilidad progresiva
- Medianamente aceptables: 20-40% de motiliad progresiva
- Pobres: menos del 20% de motilidad progresiva (McKinnon, 2011).
Vidament et al. consideraron como "rápidos" a los espermatozoides
post-descongelados con más de 35% de motilidad progresiva, haciendo al
semen aceptable para un programa de congelación (McKinnon, 2011).
Muchos padrillos que son fértiles en condiciones a campo pueden
producir semen que luego de ser congelado y descongelado no obtenga
buenos porcentajes de preñez. Los mecanismos subyacentes a las diferencias
13
en la criosensibilidad aún no han sido dilucidados completamente. Estas
diferencias podrían tener un orígen genético y la selección genética de los
padrillos para un congelado/descongelado de semen exitoso podría ser una
posibilidad. Sin embargo, la causa también podría no ser genética (McKinnon,
2011).
Muchas veces el semen es rechazado de programas de
criopreservación cuando su motilidad pre-congelado es menor a 50%
(McKinnon, 2011).
2.7.2 Principios Básicos de la Técnica de Congelación de Semen Equino
Cuando se comparan protocolos de diferentes países, los métodos
utilizados para la congelación de semen equino no están estandarizados
totalmente (McKinnon, 2011).
Los protocolos comúnmente utilizados incluyen típicamente dos
diluciones del semen. La primera con un extender de centrifugación, seguida
por una centrifugación y luego una segunda dilución con un extender de
congelación, la cual contiene crioprotectores. La primera dilución contiene, ya
sea extender de sales/azúcares, o extender a base de leche. Éstos se utilizan
para diluir el semen fresco y para mantener a los espermatozoides durante la
centrifugación. La relación de la dilución puede ser 1:1 o el semen puede
diluirse a una concentración específica. Los crioprotectores son sustancias que
al ser agregadas a las células espermáticas previo a la criopreservación,
mejoran la criosupervivencia de las mismas. Los más comúnmente utilizados
para preservar semen equino son etilenglicol, glicerol y dimetilsulfóxido
(McKinnon, 2011).
Un enfoque estandar y utilizado en la mayoría de los protocolos para el
proceso de congelación de semen es el siguiente:
14
- Diluir el eyaculado libre de gel con extender (en este caso, un extender de
centrifugación)
- Centrifugar el semen con el extender a 400-600g/8-15 minutos.
- Remover el sobrenadante y colocar sobre el pellet de semen el extender de
congelación que contiene el crioprotector.
- Empacar el semen (generalmente se hace en pajuelas de 0,5ml)
- Llevar las pajuelas con semen desde temperatura ambiente a 5 grados
centígrados.
- Congelar el semen en vapor de nitrógeno líquido o en una cámara
automatizada de congelación.
- Almacenar las pajuelas de semen congelado en nitrógeno líquido (McKinnon,
2011).
2.7.3 Empaque del Semen Congelado
Hoy en día, el empaque más comúnmente utilizado para la
criopreservación de los espermatozoides equinos son las pajuelas tubulares de
polipropileno o cloruro de polivinilo debido a su facilidad de identificación y
almacenamiento. La capacidad de las pajuelas puede variar de 0,25ml a 5ml,
siendo más comúnmente utilizadas las de 0,5ml (McKinnon, 2011).
Cada unidad debe tener información básica como identidad del padrillo
(nombre y número de identificación), nombre o número de registro del centro
de manufactura y fecha de recolección del semen (McKinnon, 2011).
Figura 8: Pajuela de 0,5ml con su correcta identificación (Dacanio y McCue, 2014).
15
El laboratorio que comercializa el semen debe enviar junto con las
pajuelas datos de concentración espermática del semen e instrucciones de
descongelado (Dascanio y McCue, 2014). Por lo general, para la inseminación
convencional, una dosis de semen que varía entre 4 y 8 pajuelas de 0,5ml
(Loomis y Squires, 2005), posee entre 400 y 800 millones de espermatozoides
(Brinsko, 2011). Para la inseminación profunda a baja dosis, una dosis de
semen generalmente consiste en 1 o 2 pajuelas de 0,5ml y posee 50 a 100
millones de espermatozoides (McKinnon, 2011).
2.8 TÉCNICA DE INSEMINACIÓN CON SEMEN CONGELADO EN
PROFUNDIDAD
2.8.1 Descongelado
La temperatura a la cual el semen debe ser descongelado depende del
tipo de pajuela en la cual fue congelado. El semen que se encuentra empacado
en pajuelas de 0,25ml o 0,5ml es generalmente descongelado a 37 grados
centígrados por un mínimo de 30 segundos. El semen congelado en pajuelas
de 2,5ml, 4ml, o 5ml generalmente es descongelado a 50 grados centígrados
por 45 segundos (Samper y Hankins, 2001).
Cuando se descongelan múltiples pajuelas de 0,5ml al mismo tiempo,
las mismas deben ser sumergidas en el agua individualmente una por una para
evitar que se adhieran entre ellas (Samper y Hankins, 2001). Luego que todas
las pajuelas son descongeladas, se retiran del agua una por una y se secan
completamente, ya que el remanente de agua puede contaminar el contenido
de la pajuela y ser espermicida. Mientras se sujeta cada pajuela verticalmente,
de modo que la burbuja de aire quede en la parte superior, se corta el extremo
sellado (McKinnon, 2011).
16
2.8.2 Evaluación de Semen Post-descongelado
Durante el proceso de congelado, los espermatozoides experimentan
una serie de cambios físicos y químicos que pueden reducir irreversiblemente
su capacidad de fertilizar un ovocito (McKinnon, 2011). Estos cambios incluyen
deshidratación parcial, penetración de las células espermáticas por parte de los
crioprotectores, reorganización de los lípidos y proteínas de las membranas
plasmáticas y exposición a altas concentraciones de sales y cristales formados
intra y extracelularmente. Los protocolos de criopreservación están diseñados
para minimizar estos efectos negativos que generan un estrés en los
espermatozoides (Loomis y Squires, 2005).
El proceso de descongelado expone a los espermatozoides al mismo
tipo de estrés pero en sentido inverso. Las células espermáticas se rehidratan a
medida que el líquido reingresa a través de la membrana plasmática para
estabilizar el desequilibrio osmótico creado cuando el líquido extracelular
congelado se descongela. Los crioprotectores utilizados para la congelación de
semen, durante el descongelado, difunden fuera de las células logrando que
las proteínas y lípidos de la membrana plasmática se reorganicen (McKinnon,
2011).
En una gran proporción de padrillos el proceso de criopreservación
resulta en la reducción de la fertilidad del semen. Los espermatozoides de
semen que ha sido congelado tienen una habilidad deteriorada de alcanzar el
oviducto o el sitio de fertilización (Samper, 2009).
Las células espermáticas se unen al epitelio oviductual a través de una
compleja interacción de los carbohidratos presentes en la membrana
plasmática. No está claro si el semen que ha sido congelado y descongelado
tiene una reducción en su capacidad para unirse al epitelio oviductual como
17
resultado de interacciones entre el extender y los carbohidratos, o porque se
producen cambios en la composición de los carbohidratos alrededor de las
membranas como consecuencia de un estrés físico por el congelado y
descongelado. Cualquiera sea la causa, existe una disminución de la
capacidad por parte de los espermatozoides de alcanzar el oviducto en donde
deben penetrar el ovocito. Además, las células espermáticas que han sido
congeladas y descongeladas experimentan cambios en sus niveles de calcio, lo
que es también un factor importante al momento en que las mismas necesitan
prepararse para la ferilización. Los altos niveles de calcio intracelular en el
semen congelado-descongelado, comparado con el semen fresco, es otra de
las razones por las cuales la inseminación con semen congelado debe
realizarse lo más cerca posible en tiempo a la ovulación. Todos estos cambios
que ocurren por el congelado-descongelado del semen, afectan la habilidad de
la yegua de formar un reservorio espermático, lo que normalmente ocurriría en
yeguas inseminadas con semen fresco o servidas naturalmente. Estas son
algunas de las razones por las cuales es importante, al utilizar semen
congelado, inseminar a las yeguas lo más cerca posible en tiempo de la
ovulación para maximizar la fertilización (Samper, 2009).
Un descongelado de semen incorrecto (muy rápido o muy lento), puede
reducir la viabilidad de los espermatozoides y la chance de obtener una preñez
(McKinnon, 2011).
Es controversial cómo interpretar los resultados de la evaluación del
semen luego de ser descongelado, ya que no hay pruebas aceptadas que se
correlacionen bien con la fertilidad del semen congelado. Además, no existen
stándares que describan una mínima cantidad de motilidad progresiva
necesaria para una dosis inseminante (Samper y Hankins, 2001).
La evaluación de la motilidad del semen luego del descongelado es la
18
prueba más común y más frecuentemente utilizada. Desafortunadamente, la
motilidad, además de ser un parámetro bastante subjetivo de calidad, es un
pobre predictor de fertilidad (Samper y Hankins, 2001).
La morfología espermática también debe tenerse en cuenta,
particularmente cuando el uso repetido de semen de un padrillo en particular
resulta en bajos porcentajes de preñez. Los defectos espermáticos que afectan
la penetración y fijación al ovocito, (pero no motilidad) deben ser identificados.
El semen congelado de algunos padrillos puede tener buena motilidad pero
mala morfología, lo que puede resultar en un bajo porcentaje de preñez
(Samper y Hankins, 2001).
Debido a la falta de estandarización, la mayoría de los laboratorios que
congelan semen concuerdan en que el mínimo aceptable para una dosis
inseminante luego del descongelado debe incluir lo siguiente: por lo menos 30-
35% de motilidad progresiva y un mínimo de 50% de espermatozoides
morfológicamente normales (Samper y Hankins, 2001).
Debido a las dificultades para determinar la calidad del semen luego del
descongelado y a la falta de stándares comerciales, es crítica una correcta
selección del padrillo y la yegua y un correcto manejo reproductivo (Samper y
Hankins, 2001).
2.8.3 Técnica
Hoy en día, existen tres técnicas comunes para inseminar yeguas con
semen congelado: inseminación en el cuerpo del útero o inseminación
convencional, inseminación profunda en el cuerno del útero guiada por
palpación rectal, inseminación profunda en el cuerno del útero guiada
endoscópicamente (Samper, 2009).
19
Figura 9: Útero de la yegua mostrando los sitios de depósito de semen. A:Cuerpo del útero, B:
Extremo del cuerno del útero (Samper, 2009).
Inseminación Profunda en el Cuerno del Útero Guiada por Palpación Rectal
Técnica:
Con el uso de guantes, se debe preparar la yegua higienicamente
limpiando y secando el periné con la cola vendada y atada. Las heces deben
ser removidas del recto previamente (Dascanio y McCue, 2014).
Figura 10: Área perineal preparada higiénicamente y lista para ser inseminada (Samper, 2009).
Se utiliza una pipeta de inseminación flexible, con punta roma y lo
suficientemente larga como para alcanzar el cuerno del útero. La misma se
introduce sostenida por una mano con guante de tacto por la vulva y se la hace
20
avanzar a través del cérvix hasta el cuerpo del útero. La mano con guante del
inseminador se retira de la vagina y se localiza luego en el recto de la yegua.
La punta de la pipeta es localizada por palpación rectal y se la hace avanzar
hacia el cuerno uterino correcto. Se utiliza la curvatura de la pipeta y la
manipulación manual para guiar la pipeta. La pipeta debe avanzar hasta
alcanzar el extremo del cuerno uterino, confirmado por palpación rectal
(Dascanio y McCue, 2014). Una vez que la pipeta se encuentra en el sitio
deseado, se inserta la primera pajuela de semen en la misma, con el tapón de
algodón hacia el exterior de la pipeta. Se utiliza un émbolo de metal para
expulsar el contenido de la pajuela hacia el exterior de la pipeta. Se repite el
procedimiento con el número de pajuelas que conformen la dosis (Samper,
2009).
Figura 11: Pipeta de inseminación para semen congelado (Dascanio y McCue, 2014).
Figura 12: Embolo metálico (Dascanio y McCue, 2014).
2.9 DOSIS INSEMINANTE EN PROFUNDIDAD
Dada la variedad de criterios para determinar la dosis inseminante y los
diferentes factores en los distintos sistemas, durante años, ha sido difícil
estandarizar este parámetro (Alonso et al., 2016). Se considera que una dosis
21
inseminante convencional puede ser de entre 400 y 800 millones de
espermatozoides totales. Si luego del descongelado se logra un 35% motilidad
progresiva (entre 140 y 280 millones de espermatozoides), este resultado
optimiza la fertilidad (Brinsko, 2011).
El número de pajuelas que conforman una dosis inseminante varía
dependiendo del laboratorio que congela el semen y del padrillo en particular.
Generalmente, un dosis para inseminación artificial convencional en el cuerpo
del útero consiste en 4 a 8 pajuelas de 0,5ml (Loomis y Squires, 2005).
En los últimos años, diferentes investigadores han intentado mejorar los
procedimientos de inseminación para poder depositar un menor número de
espermatozoides y lograr porcentajes de preñez comparables con la
inseminación artificial convencional. La inseminación en profundidad en el
cuerno del útero guiada por palpación rectal o endoscópicamente permiten la
utilización de dosis inseminantes con bajo volumen y número de
espermatozoides, permitiendo mejorar la eficiencia del uso del semen
(McKinnon, 2011).
La baja dosis de semen congelado que se utiliza en la inseminación en
profundidad consiste generalmente en la utilización de 1 o 2 pajuelas de 0,5ml
con un total de entre 50 y 100 millones de espermatozoides (McKinnon, 2011).
La dosis mínima para obtener resultados aceptables en la inseminación
profunda puede ser particular en cada caso y depende de varios factores, tales
como la fertilidad del padrillo y la yegua, el protocolo de congelamiento, el
manejo reproductivo de las yeguas y la experiencia y destreza del inseminador
(Alonso et al., 2016).
22
2.10 TRATAMIENTOS POST-INSEMINACIÓN
La revisación ginecológica post-inseminación es un componente crucial
en el proceso de inseminación con semen congelado. La misma debe ser
realizada no más de 12 horas posteriores a la inseminación. El objetivo de esta
revisación es confirmar que la yegua haya ovulado, en el caso de haberse
realizado inseminación preovulatoria, y determinar si la yegua acumuló fluido
intrauterino postinseminación. Esta revisación es particularmente importante en
yeguas con clearence uterino retardado y yeguas susceptibles a infecciones
uterinas (Samper y Hankins, 2011).
Figura 13: Gran volumen de fluído ecogénico en una yegua 24hs postinseminación
(McKinnon,2011)
En este momento se deben realizar tratamientos como lavajes uterinos,
administración de oxitocina, infusiones uterinas con antibióticos y sutura de
vulva a las yeguas con mala conformación vulvar (Samper y Hankins, 2011).
Los lavajes uterinos facilitan la eliminación mecánica del fluido intraluminal; la
administración de oxitocina promueve la contracción miometrial y, en
consecuencia, el drenaje uterino y la eliminación del fluido. Las infusiones
intrauterinas con antibióticos de amplio espectro previenen cualquier
23
crecimiento bacteriano introducido durante el proceso de inseminación
(McKinnon, 2011). No es necesario realizar tratamiento en todas las yeguas
que se inseminan con semen congelado, sino tratar aquellas basándose en
signología clínica e historia reproductiva (Samper y Hankins, 2001).
La acumulación de fluido intrauterino es la causa más común de falla
reproductiva en yeguas. Se produce un ambiente inadecuando en el interior
uterino el cual no es apto para el conceptus en desarrollo (McKinnon, 2011).
Esta acumulación luego de la inseminación es una respuesta inflamatoria que
ayuda a limpiar el útero de material extraño, como espermatozoides, plasma
seminal y bacterias (McKinnon, 2011). Una pequeña cantidad de fluido
intrauterino post-inseminación es normal (Samper y Hankins, 2001). Las
yeguas reproductivamente normales logran expulsar el fluido rápidamente
luego de la inseminación, mientras que las yeguas susceptibles tienden a
acumularlo por más de 12 horas luego de la inseminación. La utilización de
semen congelado, conduce a una mayor acumulación de fluido intrauterino
comparado con la inseminación con semen fresco o el servicio natural.
Kotilainen et al. demostraron que la intensidad de la reacción inflamatoria
depende de la concentración del semen. De esta forma, el semen concentrado,
el cual es el caso del semen congelado, induce una mayor reacción
inflamatoria en el útero en comparación con semen fresco (McKinnon, 2011).
Además, el plasma seminal retrasa la reacción inflamatoria, ya que inhibe la
quimiotaxis neutrofílica y la fagocitosis espermática y, como durante el proceso
de congelación de semen gran parte del plasma seminal se remueve, esta
puede ser otra razón por la cual la reacción inflamatoria es mayor con semen
congelado (McKinnon, 2011, Samper, 2015).
Algunos de los factores que hacen que la acumulación de fluido
intrauterino persista son contracciones miometriales reducidas, pobre drenaje
24
linfático, cambios degenerativos uterinos e incompetencia cervical con falta de
drenaje a través del cuello uterino (McKinnon, 2011).
Debido a estas razones, se concluye que es de fundamental importancia
la examinación ultrasonográfica postinseminación y, de esta forma, la
posibilidad de realizar eventuales tratamientos que resulten necesarios
(McKinnon, 2011).
25
3. OBJETIVO
El objetivo de la presente tesis es describir el protocolo y los resultados
obtenidos de la inseminación artificial con semen congelado mediante la
técnica de profundidad guiada por tacto rectal utilizando 1 pajuela por
inseminación en yeguas de salto raza Silla Argentino.
4. MATERIALES Y MÉTODOS
Este estudio se realizó en un haras ubicado en el Partido de General Las
Heras, Provincia de Buenos Aires, Argentina. Dicho establecimiento se dedica
a la cría, entrenamiento y venta de caballos de salto de raza Silla Argentino.
El establecimento cuenta con 2 mangas donde las yeguas se revisan
ginecológicamente e inseminan, 1 laboratorio, 4 corrales (de los cuales uno se
encuentra a pocos metros de las mangas), 3 potretros, 3 padrilleras, 40 boxes y
600 hectáreas de campo natural destinadas exclusivamente a la cría de
caballos.
El haras posee un total de 120 yeguas madre y 5 padrillos propios.
El equipo de trabajo del haras estaba formado por una veterinara jefa,
dos veterinarias residentes con vivienda en el haras, un encargado y dos
peones.
El trabajo se realizó con un lote de 12 yeguas de raza Silla Argentino por
un período total de 6 meses (Septiembre de 2017 a Febrero de 2018).
Las mismas fueron inseminadas con semen congelado importado de
diferentes padrillos de salto con la técnica de depósito de semen en
profundidad en el cuerno uterino guiada por palpación rectal con la utilización
de 1 pajuela por yegua. Al utilizar semen importado y realizar la técnica de
26
profundidad se buscó incrementar y acelerar el mejoramiento genético del
haras.
Cuadro N°1: Información Padrillos
PADRILLO ORIGEN
N° DEPAJUELAS
COMERCIALI-ZADAS POR
DOSIS
ESPERMA-TOZOIDESTOTALES
POR DOSIS
ESPERMA-TOZOIDESTOTALES
PORPAJUELA
(0,5ml)
N° DEPAJUE-
LASUTILIZA-
DASPOR
YEGUA
Montender Francia 7 400 millones 57 millones 1
L'Arc the Triumph
Francia 7 500 millones 71 millones 1
Challenger Francia 7 600 millones 85 millones 1
Se decidió dividir la dosis y utilizar 1 pajuela por yegua con el fin de
maximizar el uso del semen aumentando la eficacia del mismo, reduciendo de
esta forma los gastos económicos y reservando más cantidad de pajuelas, ya
que al realizar la técnica de profundidad es posible usar un bajo volumen de
semen. Diferentes factores fueron considerados al momento de decidir la
utilización de 1 pajuela por yegua, ya sea la buena fertilidad del semen de los
padrillos y las yeguas, el correcto manejo reproductivo de las yeguas, la técnica
de inseminación implementada y la experiencia del inseminador.
La elección de las yeguas para la inseminación con este protocolo fue
considerada minuciosamente y se realizó teniendo en cuenta yeguas jóvenes,
de entre 3 y 10 años, ya sea con potrillo al pie o vacías, sanas y fértiles con
historias de buenos porcentajes de preñez anteriores. En el caso de las yeguas
paridas, se les dejaba pasar el primer celo postparto para comenzar con el
programa de inseminación.
27
PROTOCOLO DE TRABAJO:
Se comenzó revisando ginecológicamente (por medio de palpación
rectal y ultrasonografía) las yeguas para determinar cuáles se encontraban en
estro y cuáles no. Aquellas que no presentaban estro, se les administraba 2ml
intramuscular de cloprostenol y se las volvía a revisar a las 48 horas.
Una vez que las yeguas se encontraban en estro, se revisaba día por
medio su tracto reproductivo por medio de palpación rectal y ultrasonografía
evaluando las siguientes características:
- PALPACIÓN RECTAL:
A. Cérvix: tono – abierto/cerrado
B. Útero: tono
C. Ovarios: actividad folicular, textura (blandos/duros) y dolor.
- ULTRASONOGRAFÍA; se observaron cambios en la ecotextura de:
A. Útero (cuerpo y cuernos): grado de edema y cantidad de fluido intraluminal
B. Ovarios: crecimiento, tamaño y grosor de la pared folicular
Cuando se detectaban folículos de 35 milímetros o más, las yeguas se
encerraban en un corral cerca de la manga para ser revisadas más
continuamente y se les administraba un inductor de ovulación, ya sea
gonadotrofina coriónica humana (500 UI/ml - 5ml intravenoso) o acetato de
deslorelina (1,8mg/ml - 1ml intramuscular). Estos inductores se administraban a
última hora del día de trabajo (generalmente a las 19 hs PM) y se estimaba que
la yegua podía ovular aproximadamente a las 36 horas luego de su
administración. De esta forma, a medida que el momento de la ovulación se
acercaba, las examinaciones ginecológicas se realizaban cada 3 horas. Las
inseminaciones se realizaron de manera postovulatoria en todas las yeguas.
28
Muchas veces, las revisaciones ginécológicas coinicidían con horario
nocturno, el cual se realizaba de forma estipulada de la siguiente manera:
24.00hs PM, 3.00hs AM y 6.00hs AM. Cuando se debía revisar de noche, las
yeguas se encerraban en un corral a pocos metros de la manga y las tres
veterinarias se encargaban de ellas (las buscaban para llevar a la manga, las
revisaban y si estaban ovuladas las inseminaban).
Una vez que la ovulación era detectada por medio de ultrasonografía, la
yegua procedía a ser inseminada.
Se retiraban las pajuelas del tanque de nitrógeno líquido y se las
descongelaba a baño maría en agua a 37 grados centígrados por 1 minuto.
Luego se secaban y se cortaba con tijera su extremo sellado.
Previa a la inseminación se colocaba una gota de semen al microscopio
para la evaluación de su calidad postdescongelado (evaluación de motilidad,
morfología y vitalidad espermática). No se detectaron pajuelas con alteración
de la calidad del semen en ninguno de los casos. Los porcentajes de motilidad
progresiva y de espermatozoides normales dieron mayor al 40% y 50%
respectivamente en todos los casos.
Se utilizaban pipetas de inseminación temperadas previamente a 37
grados centígrados en estufa.
Se vendaba y ataba la cola de la yegua y se continuaba lavando el
periné, primero con una solución de clorhexidina jabonosa y luego con alcohol
70%.
Posteriormente, se realizaba la inseminación artificial propiamente dicha,
en la cual se utilizó la técnica de depósito de semen en profunidad en el cuerno
del útero guiada por palpación rectal utilizando 1 pajuela por yegua en todos los
29
casos.
La técnica se realizó de la siguiente manera:
Con una mano con guante de tacto y una pequeña cantidad de gel, se
pasaba la pipeta de inseminación a tavés de la vulva y luego a través del cérvix
hasta llegar al cuerpo del útero. Una vez en el cuerpo del útero, la mano
enguantada se colocaba en el recto previamente vaciado de heces, y se
palpaba transrectalmente la punta de la pipeta. Por medio de manipulación
manual, la misma era dirigida hacia el cuerno correspondiente ipsilateral al
ovario que poseía el folículo que ovuló y, una vez que se llegaba al extremo del
cuerno, en la unión uterotubal, se realizaba el depósito de semen;
precisamente en la papila útero tubárica. El depósito de semen se realizaba
colocando las pajuelas en la pipeta, siendo éstas empujadas por un émbolo
metálico hacia el extremo de la pipeta, desde la cual salía el semen hacia el
cuerno.
El día siguiente a la inseminación, se revisaban ginecológicamente todas
las yeguas nuevamente y se evaluaba de manera ultrasonográfica si las
mismas habían acumulado fluído intrauterino. El fluido intrauterino fue
clasificado en base a su cantidad en tres grados: leve, moderado y severo. Las
yeguas que presentaban grado leve de cantidad de fluido se les administraba
oxitocina (2ml intramuscular), y aquellas que presentaban grado moderado y
severo eran tratadas con lavajes uterinos de ringer lactato y/o infusiones
intrauterinas con antibiótico (20ml de ceftiofur). En este momento también se
realizaba el procedimiento de caslick a las yeguas con mala conformación
vulvar.
Se realizó primer y segundo chequeo de preñez a los 14 y 30 días
postinseminación respectivamente.
30
5. RESULTADOS
El porcentaje de preñez obtenido a los 30 días postinseminación fue del
66,66%, ya que 8 yeguas de las 12 con las que se trabajó, resultaron preñadas.
DATOS OBTENIDOS DEL PRESENTE TRABAJO:
Cuadro N° 2: Datos Yeguas (Aclaraciones: PO, post-ovulación; PI, post-
inseminación.)
YEGUA PADRILLOFECHAINSEMI-NACIÓN
N°DEPAJUELAS
USADAS
MOMENTODE
INSEMINA-CIÓN
ESTADO
HG Argenta
(8 años)
Challenger 15/09/17 1 3 hs PO Preñada al
día 30 PI
HJ Barbie
(6 años)
Challenger 18/10/17 1 3 hs PO Preñada al
día 30 PI
Statize Z
(7 años)
Montender 18/10/17 1 3 hs PO Preñada al
día 30 PI
HJ Thiara
(10 años-
con potrillo
al pie)
L'Arc the
Triumph
22/11/17 1 3 hs PO Preñada al
día 30 PI
Carthago
(8 años)
Challenger 20/12/17 1 3 hs PO Preñada al
día 30 PI
Casskaya
(8 años-con
potrillo al
L'Arc the
Triumph
28/12/17 1 3 hs PO Preñada al
día 30 PI
31
pie)
HJ Emma
(10 años-
con potrillo
al pie)
Montender 29/12/17 1 3 hs PO Preñada al
día 30 PI
HJ Rose(10 años)
Montender 08/01/18 1 3 hs PO Preñada al
día 30 PI
HJ Hada
(9 años)
L'Arc the
Triumph
08/01/18 1 3 hs PO Vacía
HJ
Aranjuez
(6 años)
Montender 12/01/18 1 3 hs PO Vacía
HJ Jill
(3 años)
L'Arc the
Triumph
07/02/18 1 3 hs PO Vacía
HJ Vallarta
(6 años)
Challenger 07/02/18 1 3 hs PO Vacía
32
Cuadro N° 3: Observaciones y Tratamientos.
YEGUA OBSERVACIONES Y/O TRATAMIENTOS
HG Argenta
(Preñada al
día 30 PI)
- En el control ecográfico del día siguiente a la inseminación seobservó un grado severo de cantidad de fluido intrauterinopostinseminación. Se realizó un lavaje uterino con 3 litros deringer lactato y se le hizo una infusión con 20ml de ceftiofur (Sólo1 vez).
HJ Barbie
(Preñada al
día 30 PI)
- En el control ecográfico del día siguiente a la inseminación nose observaron alteraciones reproductivas, por lo que no serealizó tratamiento alguno.
Statize Z
(Preñada al
día 30 PI)
- En el control ecográfico del día siguiente a la inseminación nose observaron alteraciones reproductivas, por lo que no serealizó tratamiento alguno.
HJ Thiara
(Preñada al
día 30 PI)
- Yegua con mala conformación vulvar. Se realizó caslick post-
inseminación. No se observaron alteraciones reproductivas
Carthago
(Preñada al
día 30 PI)
- En el control ecográfico del día siguiente a la inseminación nose observaron alteraciones reproductivas, por lo que no serealizó tratamiento alguno.
Casskaya
(Preñada al
día 30 PI)
- En el control ecográfico del día siguiente a la inseminación se
observó un grado leve de cantidad de fluído intrauterino
postinseminación. Se le adminitró oxitocina, 2ml IM
HJ Emma
(Preñada al
día 30 PI)
- Yegua con mala conformación vulvar. Se realizó caslick post-
inseminación. No se observaron alteraciones reproductivas
HJ Rose - En el control ecográfico del día siguiente a la inseminación no
33
(Preñada al
día 30 PI)
se observaron alteraciones reproductivas, por lo que no se
realizó tratamiento alguno.
HJ Hada
(Vacía)
- En el control ecográfico del día siguiente a la inseminación se
observó un grado moderado de fluído intrauterino
postinseminación. Se realizó un lavaje uterino con 2 litros de
ringer lactato y se le hizo una infusión con 20ml de ceftiofur (Sólo
1 vez).
HJ
Aranjuez
(Vacía)
- En el control ecográfico del día siguiente a la inseminación nose observaron alteraciones reproductivas, por lo que no serealizó tratamiento alguno.
HJ Jill
(Vacía)
- En el control ecográfico del día siguiente a la inseminación no
se observaron alteraciones reproductivas, por lo que no se
realizó tratamiento alguno.
- Se detectó como preñada al día 14 postinseminación, pero la
preñez se encontraba con un alto grado de edema uterino, por lo
cual se le administró progesterona oral diariamente hasta el día
30, momento en el cual se observó reabsorción embrionaria.
HJ Vallarta
(Vacía)
- En el control ecográfico del día siguiente a la inseminación se
observó un grado leve de cantidad de fluído intrauterino
postinseminación. Se le adminitró oxitocina, 2ml IM
34
6. DISCUSIÓN
Realizando la técnica de inseminación en profundidad con el uso de una
pajuela por yegua, en el presente trabajo se obtuvieron muy buenos resultados,
ya que se alcanzó un porcentaje de preñez del 66.66%. Dicho porcentaje
sobrepasa al que obtuvieron Buchman (35%) y Squires (40%) y se acerca a los
rangos reportados por Morris (67%) y Caldevilla y Miragaya (72,9%) para la
inseminación en profundidad. Esto concuerda con lo que dice Schmidt (2011),
cuando explica que la técnica de profundidad permite obtener buenos
resultados utilizando baja dosis de semen. Si tenemos en cuenta que una de
las desventajas en la inseminación con semen congelado es que su fertilidad
suele estar disminuida, como menciona Samper, (2009), este resultado es muy
alentador.
Teniendo en cuenta que se utilizó 1 pajuela por yegua (cuando con la
técnica convencional de depósito de semen en el cuerpo del útero se utilizan
entre 4 y 8 pajuelas por dosis), se puede determinar que la técnica permite
reducir al mínimo el número de pajuelas y así disminuir la dosis de semen, ya
que el mismo se deposita cerca del folículo ovulatorio, logrando que los
espermatozoides tengan acceso a la papila úero tubárica en mayores
cantidades, concordando con lo que afirman Dascanio y McCue, (2014) cuando
sostienen que esta técnica de profundidad es la mejor opción para optimizar los
porcentajes de preñez con un número limitado de pajuelas.
El uso de baja dosis permitió reducir significativamente los gastos
económicos y, de esta forma, preservar mayor cantidad de semen, lo cual
coincide con lo que dice Schmidt, (2011) cuando afirma que el uso de la baja
dosis de semen permite conservar más cantidad para futuras inseminaciones.
No se detectaron pajuelas con alteración de la calidad del semen
35
postdescongelado en ninguno de los casos, lo cual resultó ser una ventaja en
el presente trabajo, ya que, como afirma McKinnon, (2011), no todos los
padrillos son buenos candidatos para congelación de semen.
Estos resultados se obtuvieron debido a que hubo una correcta
constancia en la revisación ginecológica de las yeguas y que las mismas fueron
inseminadas a las 3 horas postovulación, ya que Samper y Hankins (2001)
afirman que para maximizar la fertilización, la inseminación debe ser realizada
lo más cerca posible en tiempo a la ovulación y que, de este modo, los
porcentajes de preñez son mejores cuando las yeguas son inseminadas entre
las 2 y las 4 horas postovulación.
Los resultados logrados reflejan también la minuciosa y correcta
elección de las yeguas, como afirman Dascanio y McCue (2014) que la
elección influye en el éxito de los porcentajes obtenidos. La elección de las
yeguas se basó de un modo similar al que proponen Samper y Hankins (2001)
en donde consideran como mejores candidatas para la inseminación con
semen congelado a yeguas jóvenes de entre 3 y 8 años, sanas, fértiles y/o
productoras comprobadas.
La disponibilidad a tiempo completo por parte del equipo veterinario, que
contaba con dos veterinarias residentes que vivían en el establecimiento y una
veterinaria jefa a cargo, sumado a la ayuda constante y dedicada del personal
rural permitieron que el trabajo se realizara de manera correcta en tiempo y
forma, utilizando al máximo los recursos disponibles.
36
7. CONCLUSIONES
Las observaciones del presente trabajo pueden asegurar que la técnica
de inseminación artificial en profundidad utilizando una pajuela por yegua es
conveniente, ya que se obtuvo un buen porcentaje de preñez.
El uso de la técnica de profundidad hace posible la utilización de un
menor volumen de semen y concentración de espermatozoides obteniendo
resultados satisfactorios y aumentando la eficiencia del semen.
Realizando el depósito de semen en profundidad en el cuerno del útero
se puede minimizar el número de pajuelas necesarias por yegua, disminuyendo
así los gastos económicos que tiene el cliente y reservando semen para
inseminaciones futuras.
La técnica de profundidad a baja dosis adquiere una fundamental
importancia en especial cuando se consideran los casos de baja disponibilidad
comercial y alto costo del semen de determinados padrillos, lo que resulta en
un limitado número de pajuelas disponibles para la inseminación.
Las condiciones variables de instalaciones, personal, manejo y
administración tienen un efecto fundamental sobre los resultados. Con
adecuada organización y constancia de trabajo, revisando ginecológicamente
las yeguas en su debido momento y con un equipo de trabajo dedicado y con
disponibilidad completa de tiempo se pueden obtener muy buenos resultados,
haciendo que los recursos disponibles sean utilizados al máximo.
Resulta fundamental que se realice un buen manejo clínico reproductivo
por parte del veterinario, que incluya un correcto seguimiento ginecológico para
determinar el momento óptimo de la inseminación con semen congelado,
detectar problemas y realizar eventuales tratamientos. Asímismo, deben
37
seguirse cuidadosamente los procedimientos de descongelado y evaluación del
semen, así como la maniobra de inseminación para obtener óptimos
resultados.
Finalmente, se concluye que la técnica de profundidad a baja dosis es
una excelente opción al momento de inseminar con semen congelado, teniendo
siempre en cuenta la variedad de factores a considerar al momento de
implementarla.
38
8. BIBLIOGRAFÍA
- Allen W. (2005). The Development and Application of the Modern
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