Docente: QF. Dr. Juan Parreño Tipian.

Alumno: Luis Loayza Sosa.

Código: 10040022.

Grupo: Viernes 10am – 2pm.

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú, DECÁNA DE AMÉRICA)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

EAP FARMACIA Y BIOQUÍMICA

CURSO: ANÁLISIS CLÍNICOS 1PRACTICA N° 4

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I. INTRODUCCION

El término hemograma tiene su origen en la clasificación de los neutrófilos en subgrupos en función del número de lobulaciones realizada por J. Arneth en el año 1904. Posteriormente, en 1930 J. Schilling definió la desviación a la izquierda del hemograma como un aumento de los neutrófilos juveniles o en banda, así como el procedimiento para el recuento de las diferentes subpoblaciones leucocitarias. Por ello, la fórmula leucocitaria realizada a 100 elementos se conoce con el término “hemograma de shilling”. A partir de 1980, con la llegada de los analizadores hematológicos automatizados, que determinan otras magnitudes importantes e las células sanguíneas (concentración de las diferentes células sanguíneas y de hemoglobina (Hb), hematocrito (Hto), volumen corpuscular medio (VCM), etc.), se ha denominado hemograma a toda la información que proporcionan estos instrumentos.

El hemograma, junto al recuento diferencial manual de los diferentes leucocitos o formula leucocitaria, es una de la pruebas diagnósticas más solicitadas dado que forma parte del estudio inicial de la gran mayoría de los pacientes y tiene una gran utilidad diagnóstica no sólo en las hemopatías, sino también en muchas otras enfermedades (1).

II. OBJETIVO

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1. Hallar el recuento porcentual de las distintas células blancas en una muestra de sangre a través del hemograma de Shilling.

2. Diferenciar las características estructurales de los diversos tipos de leucocitos. 3. Aprender a realizar frotis sanguíneos.

III. MARCO TEÓRICO

3.1. Hemograma

Es un documento escrito o representación gráfica de un análisis de sangre, tal como el análisis de sangre completo, o el recuento diferencial de leucocitos. (2)

Clásicamente se considera que un hemograma debiera incluir: el recuento de eritrocitos, la hemoglobina, el hematocrito, los índices corpusculares, el estudio de la morfología eritrocitaria y, además, el recuento de leucocitos, la fórmula leucocitaria, el recuento plaquetario, la morfología plaquetaria. Otros índices que pueden incluirse son: recuento de reticulocitos, el índice ictérico y la velocidad de eritrosedimentación.

Sin embargo, el "hemograma completo" difiere en cuanto a informe, en los distintos laboratorios.A través del tiempo, el hemograma ha sido objeto de múltiples modificaciones en cuanto a los parámetros que lo componen, la forma de obtenerlos, los grados de precisión y de exactitud y la manera de interpretarlo. Para una mejor utilización de los parámetros que el hemograma aporta es de vital importancia conocer el desarrollo que ha acompañado a la prueba y el laboratorio clínico debe permanecer atento al desarrollo tecnológico para incorporar los aspectos de mayor relevancia desde el punto de vista clínico, como una herramienta de rutina que le permita tener pruebas cada vez más exactas, más precisas, a un costo razonable y, sobretodo, de mayor utilidad clínica. (3)

III.2. Hemograma de Schilling: fórmula leucocitaria o hemograma completo

El hemograma de Shilling constituye uno de los exámenes de laboratorio más usados en el campo de la hematología. (1)

Se define como el recuento porcentual de las diferentes subpoblaciones leucocitarias. El hemograma incluye la fórmula leucocitaria y la determinación de otras magnitudes celulares sanguíneas, tales como recuento de leucocitos, hematíes y plaquetas, concentración de hemoglobina, hematocrito y volumen medio de los hematíes entre otras. La determinación de los parámetros hematológicos básicos mediante contadores hematológicos especializados, junto al examen morfológico de los elementos sanguíneos en sangre periférica, son de gran utilidad para la detección de alteraciones cuantitativas y cualitativas de dichas células sanguíneas, lo que contribuye al diagnóstico de enfermedades hematológicas y no hematológicas.Es una prueba que mide el porcentaje de cada tipo de glóbulos blancos que un paciente presenta en la sangre (3).

Normalmente, aparecen cinco tipos de glóbulos blancos, también llamados leucocitos, en la sangre:

Neutrófilos Linfocitos (Células B y T) Monocitos Eosinófilos Basófilos

Una máquina especialmente diseñada o el médico cuenta el número de cada tipo de célula. El examen muestra si el número de células está en la proporción apropiada entre sí y si hay más o menos cantidad de un tipo de célula (3).

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Los valores normales de las células blancas en sangre son las siguientes:

Neonatos 1año Adultos

Neutrófilos en banda 9% 600-3000 3% 50-700 2 -8 % 1800-7000

Neutrófilos 52% 3300-17000 28% 1800-4600 46 - 66 % 0-700Eosinófilos 2 % 20-850 3 % 50-700 1 - 5 % 0-450Basófilos 0 % 0-640 0 % 0-200 0 -1 % 0-200Linfocitos 31 % 2000-11000 61 % 4000-10500 20 - 40 % 1000-4800Monocitos 6 % 400-3100 6 % 50-1100 2 - 10 % 100-800

III.2.1. Utilidad clínica

Screeming de leucocitosis, leucopenias, infecciones. Evaluación de infección, inflamación, intoxicación, anemia, colagenosis, leucemia, desórdenes

mielo y linfoproliferativos, tumores, inmunosupresión de médula ósea, leucocitosis, leucopenias.

III.2.2. Variables pre analíticas:

Aumento del número de linfocitos: linfocitosis fisiológica de la infancia. Aumento del número de monocitos: monocitosis fisiológica del recién nacido.

III.2.3. Variables por enfermedad:

Las alteraciones de la fórmula leucocitaria pueden clasificarse en dos grupos:

A. Alteraciones cuantitativas:

a) Aumento de un determinado tipo de leucocitos:

Aumento del número de neutrófilos (infecciones bacterianas, síndromes mieloproliferativos, inflamaciones de origen no infeccioso, necrosis hística, enfermedades metabólicas, neutrofilia congénita).

Aumento del número de eosinófilos (enfermedades alérgicas, parasitosis, enfermedades de la piel, eosinofilia pulmonar, síndrome hipereosinofílico, neoplasias).

Aumento del número de basófilos (hipersensibilidad, mixedema, síndromes mielo-proliferativos crónicos, cirrosis hepática, hemólisis, síndrome inflamatorio crónico).

Aumento del número de linfocitos (infecciones bacterianas, infecciones virales, linfocítica o linfoblástica).

Aumento del número de monocitos (infecciones bacterianas de tipo crónico, enfermedad de Hodgkin y otras neoplasias, enfermedad del colágeno).

b) Disminución de un determinado tipo de leucocitos:

Neutropenia (enfermedad del colágeno, infección tipo crónico, neutropenia crónica idiopática).

Linfopenia (insuficiencia cardíaca congestiva, estado inicial de la enfermedad de Hodgkin).

Eosinopenia y basopenia (enfermedad de Cushing), enfermedades alérgicas (basopenia).

c) Presencia de células inmaduras en sangre periférica:

1. Salida de elementos celulares pertenecientes a la línea madurativa granulopoyética (infecciones agudas, reacción leucemoide, leucemia mieloide crónica, mielofibrosis idiopática).

2. Salida de elementos celulares de la serie eritroide: respuesta a estímulo extracelular (síndromes hemolíticos intensos y crónicos, eritroblastosis fetal); de origen medular (diseritropoyesis

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congénita o adquirida, eritremias primarias o asociadas a distintos síndromes mieloproliferativos agudos o crónicos).

3. Salida de células muy inmaduras (blastos) de una o más series madurativas (leucemia aguda) o de células linfoides en diferentes estadíos de maduración (linfoma leucemizado).

B. Alteraciones cualitativas:

4. Polinucleares neutrófilos (alteraciones de granulación: granulación tóxica, cuerpos de Dohle, anomalías de Alder Reilly, anomalías de Chediack-Higashi, desgranulación de los polinucleares neutrófilos).

5. Linfocitos (aumento de basofilia del citoplasma en infecciones víricas; aumento de tamaño y citoplasma azul claro (linfocitos T estimulados) en mononucleosis infecciosa y otras virosis).

6. Plaquetas (aumento de tamaño: mielofibrosis, trombocitopenia esencial, dismorfia).7. Hematíes:

- Alteraciones del tamaño (macro y microcitosis).- Alteraciones de la forma (esferocitosis, rodocitos, drepanocitos, eliptocitos, equinocitos,

acantocitos, dacriocitos, esquizocitos).- Alteraciones del color: hipocromía, policromía, anisocromía.- Presencia de inclusiones intraeritrocitarias (punteado basófilo, granulación azurófila, anillos

de Cabot, cuerpos de Howell Jolly, parásitos).

3.3.4. Variables por drogas

A. Aumento de un determinado tipo de leucocitos:

Aumento del número de neutrófilos: administración de haloperidol, litio, barbitúricos. Aumento del número de eosinófilos: ingesta de medicamentos.

B. Disminución de un determinado tipo de leucocitos:

Linfopenia: administración de corticosteroides (3).

Foto 1: Maduración del leucocito neutrófilo

Foto 2: Leucocitosis

polimorfonuclear con granulaciones tóxicas

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Foto 3: Mononucleosis infecciosa

Foto 4: Linfocitos en la neumonía viral

Foto 5: Linfocitos en leucemia granulocitica

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Foto 6. Frotis sanguíneo, humano - Tinción de Leishman

IV. METODOLOGÍA

4.1. Materiales, reactivos y equipos:

Lancetas estériles. Guantes. Algodón. Alcohol. Porta objetos. Colorante de Wright. Pizetas con agua destilada. Recipiente de plástico para colocar portaobjetos. Microscopio.

4.2. Técnica operatoria

1) Obtención de la muestra de sangre:Con una lanceta estéril hacer, previa desinfección con alcohol, una punción en el pulpejo de un dedo. Colocar una gota de sangre en la parte extrema de un porta objetos. Con otro portaobjetos se procede de la manera siguiente:

- Ponerlo delante de la gota de sangre hasta que su borde toque la gota.- Deslizarlo sobre toda la superficie del primer portaobjetos de manera que se pueda

obtener una fina película de sangre (Esto se llama “frotis”) (4-

2) Tinción de Wright

Es una técnica de tinción derivada del método de Romanowsky que se utiliza principalmente para el coloreo de muestras de frotis sanguíneos. Permite diferenciar cualitativamente y cuantitativamente los principales elementos formes de la sangre. El colorante de Wright contiene:

- Un colorante aniónico (eosina).- Un colorante catiónico (azul de metileno) ambos disueltos en metanol.

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Estos colorantes se encuentran en estado no ionizado mientras se mantienen en solución de alcohol metílico. Al añadir el agua destilada se ionizan y se unen selectivamente a los constituyentes celulares precipitando como sales insolubles.

Fundamento:

Los componentes celulares de naturaleza aniónica (ácida) se unen selectivamente a los tintes catiónicos tiñéndose en variados tonos de azul. Estos componentes son llamados BASÓFILOS (ADN, mitocondrias, ribosomas y citoplasma de células ricas en ARN). Los componentes celulares de naturaleza catiónica (básico) se unen selectivamente al tinte ácido eosina, tiñéndose en variados tonos de naranja y rojo. A estos elementos se les denomina ACIDÓFILOS o EOSINÓFILOS. Este es el caso de la hemoglobina y de las proteínas contenidas en las granulaciones de los EOSINÓFILOS.

Los componentes que tienen afinidad por ambos tipos de colorantes se denominan NEUTRÓFILOS y se tiñen de variados tonos de violeta.

Coloraciones obtenidas:

Núcleos: aparecen de colores que van del color azul al púrpura-negro.

Citoplasma de las células maduras: aparecen de un color violeta muy pálido o marrón muy pálido.

Eritrocitos ricos en hemoglobina: colores rosados y beige.

Gránulos de neutrófilos: colores entre violeta y marrón.

Gránulos de eosinófilos: color naranja.

Gránulos de basófilos: colores entre azul y negro.

Gránulos de linfocitos: color púrpura.

Componentes del colorante de Wright:

Colorante de Wright……. 0,3 gr.

Azul de metileno y eosina → Tiozina Eosinato.

Metanol…………………… 97 mL.

Glicerol…………………… 3 mL.

Formula Relativa: %

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Hemograma de SchillingFormula Leucocitaria o Recuento diferencial (5).

Fórmula Absoluta:

Procedimiento:

En el frotis de la muestra de sangre se agrega colorante Wright. Fijarla durante un minuto (soplando), añadirle agua destilada, mezclar (soplando), dejar por 4 minutos y llevar finalmente a chorro de agua para eliminar los excesos.

3) Lectura de un frotisPara la fórmula relativa se cuentan 100 leucocitos con el fin de obtener el porcentaje de cada tipo de leucocito, siendo necesario que estos se encuentren uniformemente distribuidos en el extendido. En los frotises generalmente los leucocitos de mayor diámetro (granulocitos) ocupan las zonas más periféricas del frotis. Los de menor diámetro se ubican en el centro (linfocitos). Se recomienda utilizar el método recomendado por Von Schilling, que consiste en tomar 4 puntos equidistantes recorriendo el campo en zigzag desde la zona de frotis menos densa hacia la más densa. Se debe también observar los eritrocitos y las plaquetas.

V. DIBUJO DE LOS ELEMENTOS FORMES EN UN FROTIS COLOREADO.

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Recuento de leucocitos x %100

Observar en el microscopio a 10 x

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1. GRANULOCITOS

1.1. Neutrófilos segmentados: 7

1.2. Neutrófilos cayado: 12

1.3. Eosinófilos: 01.4. Basófilo: 4

2. Agranulocitos2.1. Linfocitos: 23

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2.2. Monocitos: 4

VI. RESULTADOS

1. Formula relativa

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Tipo de célula Formula relativa Valores normalesNeutrófilo cayado 14% 3-5%

Neutrófilo segmentado 24% 55-65%Eosinófilos 0% 2-4%

Basófilo 8% 0-1%Monocito 8% 4-8%Linfocito 46% 20-30%

2. Formula absolutaRecuentro leucocitario = 8000/mm3

Tipo de célula Formula absoluta Formula absoluta promedioNeutrófilo cayado 1120/mm3 125/mm3

Neutrófilo segmentado 1920//mm3 4250/mm3

Eosinófilos - 270/mm3

Basófilo 640/mm3 50/mm3

Monocito 640/mm3 450/mm3

Linfocito 3680/mm3 2850/mm3

VII. CONCLUSIONES

1. Con el hemograma de Schilling se midió el porcentaje de los diferentes tipos de células blancas presentes en la muestra de sangre referencial.

2. Se diferenció morfológicamente y estructuralmente los diferentes tipos de células blancas.3. El frotis de sangre sigue siendo una herramienta diagnóstica importante.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

(1) Merino, Ana. Valores normales del hemograma: ¿Cuándo hay que alarmarse? Servicio de hemoterapia-hemostasia. Hospital Clínica (IDIBAPS). JANO. Barcelona. España. 2008; 1 (709): 42-46.

(2) Muñoz Zambrano, María E.; Morón Cortijo, Cecilia G. Manual de procedimientos de laboratorio en técnicas básicas de hematología. MINISTERIO DE SALUD - INSTITUTO NACIONAL DE SALUD. Lima, Perú. 2005

(3) Merino, Ana. Criterios para la realización de la fórmula leucocitaria manual. Servicio de hemoterapia-hemostasia. Hospital Clínica (IDIBAPS). Universidad de Barcelona. Barcelona. España, 2009. Ed Cont Lab Colín; 13: 49-58.

(4) Portal “Informatica.com”. Acceso 13/04/2014.l Disponible en: http://www.infobioquimica.com/wrapper/CDInterpretacion/te/bc/192.htm

(5) Disponible en: http://www.juntadeandalucia.es/averroes/ies_torre_del_aguila/webccnn/praclab/formula%20leucocitaria.htm

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(6) Portal “MedlinePlus, información de salud para usted”. Acceso 13/04/2014. Disponible en: http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003657.htm

(7) Portal “Citología e histología”. Acceso 13/04/2014. Disponible en: http://citologiaehistologiatm2.blogspot.com/2009/04/tejido-epitelial-cubico-estratificado.html

(8) Portal “Microscopio virtual, recursos docentes de hematología a través de internet”. Acceso 13/04/2014. Disponible en : http://griho2.udl.es/carles/medicina/sp/leucos.html

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