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CIMA Memoria 2013 1
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ÍNDICE
CIMA Memoria 2013 3
1 Presentación
EL CENTRO
2 Estructura y funciones
3 Personal
4 Servicios
INVESTIGACIÓN
5 Acuicultura
- Dietas sostenibles para lenguado senegalés (Solea senegalensis).
- Acción Multitrófricos (AMTI).
- Cultivo en criadero, preengorde en batea y análisis de la diversidad
genética de la coquina Donax trunculus en Galicia.
- REsearch to improve PROduction of SEED of established and emerging
bivalves species in European hatcheries. (REPROSEED)
- Repoblación de especies marinas de interés comercial.
Subproyecto I.– Repoblación de especies de interés comercial en la
costa gallega.
- Exploring the biological and socio-economic potential of new/emerging
candidate fish species for expansion of the European aquaculture
industry (DIVERSIFY).
6 Patología
- Establishing the scientific bases and technical procedures and
standards to recover the European flat oyster production through
strategies to tackle the main constraint, bonamiosis.
- Caracterización de la situación sanitaria del litoral español relativa a la
infección por virus herpes en moluscos bivalvos y evaluación del
impacto de la enfermedad.
- Perkinsosis de la almeja: expresión proteínica en los hemocitos y
plasma del hospedador y en el parásito durante su interacción.
- Identificación de marcadores proteicos como indicadores de
contaminación ambiental en la almeja fina (Ruditapes decussatus) y en
el berberecho (Cerastoderma edule).
- Estudio de la marteiliosis que afecta a los berberechos Cerastoderma
edule en Galicia.
- Nuevo programa de selección de ostra plana, Ostrea edulis, resistente
a la bonamiosis, con especial énfasis en el estudio de las
mortandades, de posible origen vírica, en las fases de cultivo larvario y
preengorde de la semilla. (NOVOSOR).
- Poblaciones bacterianas en los criaderos de bivalvos y su influencia en
la producción: patógenos y probióticos.
- Estudio epidemiológico de la almeja rubia (Venerupis rhomboides) en
Galicia afectada por colonias procariotas intracelulares (CPI).
Identificación de las CPI. Seguimiento de la estructura de tallas de
poblaciones de almeja rubia de 4 bancos de la Ría de Vigo.
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7 Procesos oceanográficos costeros
- Las biotoxinas marinas en las zonas de cultivo de mejillón, con especial
atención a las toxinas emergentes: presencia en el mejillón y en el
sedimento, desarrollo de métodos de detección y evaluación de la
utilidad del sedimento para el análisis de riesgo. (TOSE).
- Transportadores y metabolitos implicados en la depuración de la toxina
ASP en bivalvos, con especial referencia a una especie de eliminación
lenta, la vieira Pecten maximus (TRAIDA).
Subproyecto 1.- Inhibición del transporte a través de membrana del
ácido domoico en moluscos bivalvos. (INDOME).
- Efecto de las biotransformaciones de toxinas de tipo diarreico (DSP) en
organismos del intermareal sobre las diferencias de toxicidad estimada
por LC-MS/MS y bioensayo de ratón y sus repercusiones para los cierres
de explotación y la salud humana (ESTINFA).
8 Recursos marinos
- Evaluación del crecimiento estacional y anual de navaja (Ensis arcuatus)
y longueirón (Ensis silíqua) y longueirón vello (Solen marginatus) en los
diferentes ambientes productivos de Galicia. Monitoring de estado
reproductivo-gametogénico de estas especies.
- Estudio de las especies exóticas presentes en las aguas costeras y rías
de Galicia: evaluación de su distribución y abundancia, de sus
repercusiones ambientales y socioeconómicas y medidas de prevención
y protección.
- Estudio de los bancos naturales de coquina: problemática de su
desaparición en Galicia.
DIVULGACIÓN
9 Artículos en revistas SCI
10 Libros
11 Ponencias y paneles
12 Edición de Publicaciones
ASESORAMIENTO
13 Informes
14 Reuniones
15 Otros
15.1. Asesoramiento. Otros
15.2. Revisión de artículos en publicaciones científicas
FORMACIÓN
16 Tesis doctorales
16.1. Dirección/Tutorización de tesis
16.2. Participación en tribunales de tesis
16.3. Tesis presentadas
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17 Cursos
17.1. Cursos impartidos
17.2. Asistencia a cursos
18 Estancias
18.1. Estancias en el CIMA
18.2. Estudiantes en prácticas
18.3. TFM: Máster Interuniversitario Gallego de Acuicultura
CUENTAS
19 Gastos
20 Fuentes de financiación
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1 PRESENTACIÓN
El Centro de Investigacións Mariñas (CIMA) depende de la Consellería do Medio Rural e do Mar, está constituido por el
Centro de Investigacións Mariñas de Corón, en Vilanova de Arousa (Pontevedra), y el Centro de Cultivos Mariños de
Ribadeo (Lugo). La función básica de estos centros es el desarrollo de investigaciones encaminadas a conseguir una
gestión racional y eficiente de los recursos marinos renovables en el ámbito geográfico de competencia de la
Administración autonómica de Galicia.
El CIMA actúa como organismo asesor de la administración pesquera gallega en las cuestiones de su competencia
que demandan los diferentes sectores productivos a través de las direcciones generales y oficinas territoriales de la
Consellería do Medio Rural e do Mar. También, mediante becas, se ocupa de la formación de nuevos investigadores
(con tutorías y dirección de tesis doctorales) y de técnicos de laboratorio. La difusión de la investigación se realiza a
través de la asistencia y participación en reuniones científicas de diverso carácter (congresos, seminarios, foros,
workshops, etc.) y en numerosas publicaciones científicas de diferentes ámbitos.
Durante 2013 el Centro de Investigacións Mariñas (CIMA) continuó su labor de investigación científica y tecnológica en
temas marinos, orientada principalmente a la acuicultura de moluscos y peces, patología de moluscos bivalvos,
bioacumulación y eliminación de toxinas fitoplanctónicas y a la dinámica de poblaciones de invertebrados marinos con
interés comercial. Un trabajo cuyos resultados se muestran resumidos en la presente memoria anual de actividades
(número 15 de la serie iniciada en 1999).
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EL CENTRO
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2 ESTRUCTURA Y FUNCIONES
La actividad científica del CIMA se reparte en cuatro áreas:
Área de Recursos Marinos
El objetivo es conocer la biología, ecología y dinámica de población de las especies
marinas con interés comercial para mejorar la gestión sostenible de los recursos
marinos vivos.
Área de Acuicultura
Su objetivo es desarrollar y mejorar los procedimientos de cultivo de las especies
marinas consideradas de interés comercial. El ámbito de investigación abarca dos
grandes líneas: cultivo de moluscos y cultivo de peces.
Área de Patología
El objetivo es estudiar las alteraciones patológicas que afectan a los moluscos
bivalvos con interés comercial, para establecer estrategias eficaces de lucha que
permitan minimizar los efectos patogénicos.
Área de Procesos Oceanográficos Costeros
El objetivo del área es el conocimiento de los aspectos de la oceanografía
relacionados con la producción de los recursos pesqueros y marisqueros de Galicia.
Las líneas de investigación se relacionan principalmente con los episodios de
toxicidad originados por el fitoplancton.
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3 PERSONAL
Director:
Gerente: D. Barreiro Piñeiro, José (hasta 26.02.2013)
Centro de Investigacións Mariñas de Vilanova de Arousa
Investigadores/as
Dr. Blanco Pérez, Juan Carlos
Dra. Cao Hermida, Asunción
asunció[email protected]
Dra. Carballal Durán, Mª Jesús
D. Cerviño Eiroa, Antonio
D. de Coo Martín, Alberto
Dr. Fuentes González, José Miguel
D. García Fernández, Antonio
Dr. Guerrero Valero, Salvador
Dr. Iglesias Estepa, David
Dña. Linares Cuerpo, Fátima
Dra. López Gómez, Mª del Carmen
Dr. Montes Pérez, Jaime
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D. No Couto, Edgar
Dña. Pérez Acosta, Carmen
Dña. Ramilo Álvarez, Andrea (hasta 31.03.2013)
D. Santos Piñeiro, Ignacio
Dr. Villalba García, Antonio
Investigadoras contratadas en prácticas
Dña. Martín Morales, Eva (hasta 30.11.2013)
Dña. Rodríguez de la Ballina, Nuria
Analistas de laboratorio
Dña. Buceta Barros, Ana Isabel (hasta 10.05.2013)
Dña. Busto Loureiro, Beatriz
D. Fariña Iglesias, Juan Antonio
D. Fernández Abuín, Isidro (hasta 31.03.2013)
Dña. Fernández Besada, Mercedes
D. Giráldez Rivero, Ramón
Dña. González Fontela, Ana Isabel
Dña. Gregorio Chenlo, Mª Victoria
Dña. Mariño Cadarso, Mª Carmen
Dña. Martín Sánchez, Helena
Dña. Martínez Verde, Gemma
Dña. Méndez Pérez, Belén
Dña. Miranda Bamio, Mercedes (hasta 16.04.2013)
Dña. Paz Márquez, Marta (hasta 31.05.2013)
Auxiliares de laboratorio
Dña. Campaña Ferro, Emilia
Dña. Cores González, Mª José
Dña. Meléndez Ramos, Isabel
Dña. Penas Pampín, Elena
Encargado de mantenimiento
D. López Ares, Hermes
Jefe de negociado administrativo
D. García Paz, Gonzalo
Sistemas de información
D. Carballal Fortes, Félix Manuel
Biblioteca
Dña. Álvarez Francisco, Mª Esther
Auxiliares administrativos
D. Lago Torrado, José
D. Álvarez Araujo, Pedro Pablo
Subalternos-ordenanzas
D. Agra Carregal, Luís Manel
D. Cubiella Granda, Rubén
D. Martínez Crespo, José Manuel
Limpiador
D. García Gamallo, Luis
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Centro de Cultivos Mariños. Ribadeo
Responsable de planta
Dra. Martínez Patiño, Dorotea
Investigadores/as
Dña. Fernández Álvarez, Aurora
Dra. Nóvoa Vázquez, Susana
Dra. Ojea Martínez, Justa
Investigadora contratada en prácticas Dña. Fernández Pardo, Alejandra (hasta 30.11.2013)
Analistas de laboratorio
D. Álvarez Llamas, Luís Manuel (hasta 30.06.2013)
Dña. Bouzamayor Yánez, Mª Victoria
Auxiliares de laboratorio
Dña. Cotarelo Jardón, Mª José
D. Páez Pérez, Francisco Javier
Dña. Ruíz Misioné, Mercedes
Oficial 1º de mantenimiento
D. Fernández Escudero, Antonio
Oficial administrativa
Dña. Neira Páez, Concepción
Administrativa
Dña. Cruzado Estévez, Ana
Subalterna
Dña. Loureiro Rodríguez, Mercedes
Limpiadora
Dña. Fernández Goás, Carmen
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Distribución del personal del CIMA por centros de trabajo
PERSONAL CORÓN RIBADEO TOTAL
DE PLANTILLA
Investigadores/as 18 4 22
Apoyo a la investigación 18 5 23
Administración 4 2 6
Servicios generales 7 3 10
INVESTIGADORES/AS CONTRAT. PRÁCTICAS Inv. contrato prácticas 2 1 3
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4 SERVICIOS
Biblioteca
El fondo bibliográfico está compuesto por más de 1.500 volúmenes y 160
publicaciones periódicas de las que 57 se reciben actualmente.
Sala de lectura. El acceso es público pero de carácter restringido (presta servicio a
usuarios internos y a usuarios externos autorizados).
Horario de lunes a viernes: 9 a 14 horas.
Salón de conferencias
Con capacidad para 80 personas.
El acceso es público pero de carácter restringido (presta servicio a usuarios
internos y a usuarios externos autorizados).
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INVESTIGACIÓN
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5 ACUICULTURA
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RESUMEN
El objetivo fundamental de la acción de investigación
“Dietas sostenibles para lenguado senegalés (Solea
senegalensis)” es su contribución al desarrollo de dietas
sostenibles para lenguado mediante la selección de
ingredientes vegetales, que puedan ser utilizados como
sustitutos de la harina y el aceite de pescado y que
permitan mantener buenas tasas de crecimiento y buena
calidad del producto final reduciendo significativamente
el impacto ambiental del cultivo.
Tras los buenos resultados obtenidos en el proyecto
InterReg Iberomare en lo referente a sustitución en las
dietas de lenguado de harina de pescado por
ingredientes vegetales se plantean en esta acción los
siguientes objetivos específicos:
Valoración de la viabilidad de las macroalgas como
ingredientes de los piensos para lenguado. Influencia
sobre el crecimiento, valor nutritivo, estado inmunológico
y valor sensorial de los peces.
Influencia de la sustitución de aceites de pescado por
aceites vegetales sobre el crecimiento, estado
inmunológico, respuesta al estrés, expresión génica y
valor sensorial del lenguado senegalés.
Influencia de la substitución de aceites de pescado
sobre la composición corporal y del músculo, hígado,
intestino y piel del lenguado senegalés.
Asimismo se plantea como objetivo de divulgación y
docencia la participación de los alumnos del IGAFA en
algunas de las actividades, tales como los muestreos y
cálculos de la alimentación e índices de crecimiento
realizando los investigadores del proyecto una labor de
divulgación y explicación de los objetivos y finalidades de
la acción entre los alumnos facilitando que estos puedan
interactuar y comprender mejor el trabajo que se realiza.
Desde julio a noviembre de 2013 se realiza un
experimento en la fase de engorde del lenguado de
reemplazamiento de harina de pescado por ingredientes
vegetales con macroalgas. Este experimento es el
complemento del realizado en la fase de preengorde del
lenguado con las mismas dietas en el marco del proyecto
Iberomare. En ambos experimentos se prueban frente a
la dieta control (75% de reemplazamiento de harina de
pescado), 2 dietas que consisten en la sustitución del
10% de los ingredientes vegetales por harina de las
macroalgas Ulva y Undaria. El experimento se lleva a
cabo en 9 tanques (tres con cada una de las dietas) de
1m2 en el IGAFA con 36 ejemplares por tanque de peso
medio 50,50g±0,38 en circuito cerrado y a una
temperatura de 19±1ºC. Se realizan muestreos
mensuales de peso y talla de los ejemplares y se toman
muestras por triplicado para análisis bioquímico de
cuerpo entero, músculo, hígado, piel e intestino al
principio y al final del experimento. Asimismo al final del
experimento se realiza un ensayo de respuesta del
sistema inmune frente a la infección del parásito
Philastérides y se toman muestras para análisis
sensorial.
Los resultados del experimento nos indican que el
crecimiento de los ejemplares es más alto con el pienso
control (150,09g±11,37) y con el pienso con Ulva
(159,64g±3,19) que con Undaria (130,67g±8,82) (Fig. 1).
Al finalizar el experimento, los lípidos totales del músculo
varían entre el 1-3% del peso fresco de los ejemplares y
no existen diferencias entre las diferentes dietas. En el
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO
TÍTULO:
Dietas sostenibles para lenguado senegalés
(Solea senegalensis).
INICIO: mayo, 2013
FINALIZACIÓN: diciembre, 2014
ENTIDAD FINANCIADORA:
Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro
Consellería do Medio Rural e do Mar
Código: PGIDIT-CIMA
INVESTIGADORA PRINCIPAL:
Linares Cuerpo, F.
INVESTIGADOR:
IGAFA: Rodríguez Villanueva, J.L.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
Cores González, M.J.; Méndez Pérez, B.; Paz Márquez,
M.
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hígado los ejemplares alimentados con la dieta control
presentan más contenido lipídico (10%PF) que los
alimentados con la dieta con Ulva (5,7%PF) no habiendo
diferencias significativas entre los ejemplares
alimentados con las dos especies de macroalgas. Los
lípidos de la piel de los ejemplares no presentan
diferencias con las tres dietas y en el intestino los lípidos
son más altos con la dieta con Ulva seguidos de Undaria
y menores con la dieta control.
Figura 1.- Crecimiento
de lenguado con las
tres dietas
Las proteínas son significativamente más altas en el
músculo de los ejemplares alimentados con la dieta
control (24%PF) seguidos por la dieta con Undaria
(21%PF) y con Ulva (17%PF). En el hígado y la piel no
se presentan diferencias en las proteínas con las
diferentes dietas y en el intestino las más altas se
corresponden con Control y Undaria (12%PF) frente a
Ulva (7%PF).
En lo referente al contenido de ácidos grasos (% total)
no se encuentran diferencias en PUFA, Saturados,
Monoinsaturados, SumW3 y SumW6 en los tejidos
analizados (músculo, hígado, piel e intestino) de los
ejemplares alimentados con las tres dietas variando en el
músculo, los PUFA entre el 29-42%, suponiendo el
SumW3 entre el 18 y 29% del total y los W6 el 11-12%,
los Saturados representan el 30-34% y los
Monoinsaturados el 27-37%. En el hígado, los PUFA
representan el 14-22% del total, suponiendo los W3 el 7-
12% y los W6 el 7-11% del total de ácidos grasos, los
Saturados el 35-40% y los Monoinsaturados el 43-45%.
Las diferencias en la composición bioquímica que han
sido puestas de manifiesto en experimentos anteriores
de engorde de esta especie cuando se testaba un pienso
control con harina de pescado frente a piensos con alto
porcentaje de reemplazamiento con ingredientes
vegetales no se manifiestan en este experimento ya que
en este caso al igual que en el realizado con las mismas
dietas en la fase de preengorde el pienso control es ya
un pienso con alto grado de proteína vegetal y las
diferencias observadas en la composición bioquímica en
los diferentes tejidos con las tres dietas no parecen ser
la causa de las diferencias en el crecimiento de los
ejemplares.
El crecimiento alcanzado con el pienso control y con
pienso con Ulva es semejante al obtenido previamente
en el lenguado con piensos vegetales con bajo contenido
lipídico.
Por otro lado, en colaboración con el Departamento de
Microbiología de la Universidad de Santiago, se realizó
un ensayo con el fin de conocer si existen diferencias en
la respuesta inmune del lenguado alimentado con dietas
con macroalgas. Para ello se sometió a los ejemplares a
infección con el parásito Philastérides comprobándose
que no existen evidencias en cuanto a la protección del
sistema inmune de los lenguados alimentados con las
dietas con macroalgas frente a los alimentados con la
dieta control.
Asimismo y mediante la colaboración establecida con
Anfaco se realizaron análisis sensoriales de los
ejemplares alimentados con las tres dietas
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comprobándose que no existen diferencias en cuanto a
los parámetros sensoriales entre los lenguados
alimentados con las tres dietas.
En el año 2014 en el marco de esta acción se realizarán
ensayos en las fases de preengorde y engorde del
lenguado de evaluación de la inclusión de lípidos de
origen vegetal en la dieta del lenguado.
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ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN
TÍTULO:
Acción Multitróficos (AMTI)
INICIO: septiembre, 2012
FINALIZACIÓN: diciembre, 2014
ENTIDAD FINANCIADORA:
Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro.
Consellería do Medio Rural e do Mar. Xunta de Galicia
Código: PGIDIT-CIMA 12/05
EQUIPO
INVESTIGADORA PRINCIPAL:
Pérez Acosta, C. (Guerrero, S.)
INVESTIGADORES/AS:
CIMA: Cerviño Eiroa, A.; Linares Cuerpo, F.; Carballal
Durán, M.J.,
IGAFA: Andrés Rivas, M.C.; Lastres Couto, M. A.;
Pérez Benavente, G.; Rodríguez Villanueva, J.L.
UDC: Cremades Ugarte, J.
IEO: Salinas Morrondo, J.M.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
Fernández Besada, M.
RESUMEN
La acuicultura multi-trófica integrada (AMTI) incorpora
especies de diferentes niveles tróficos en el mismo
sistema, conectados por nutrientes y transferencia de
energía, creando un mini-ecosistema sostenible.
Se persiguen dos objetivos concretos: por un lado,
desarrollar a escala piloto un sistema de AMTI en mar
abierto en el que se integren al menos tres niveles
tróficos representativos de los tres tipos de acuicultura: la
de alimentación (peces), la de extracción orgánica
(moluscos) y la de extracción inorgánica (macroalgas).
Se planteó utilizar para este primer estudio las
instalaciones existentes en el Igafa habilitadas para
cultivo de bivalvos y peces. Se trabajó con besugo,
mejillón, almeja rubia y babosa y la macroalga kombu de
azúcar.
Los beneficios de la integración fueron evaluados
mediante la comparación de la productividad de los
distintos eslabones integrados en relación a las cifras de
referencia así como por el estudio analítico final de los
moluscos y macroalgas tanto a nivel patológico como
bioquímico (glúcidos, proteína, lípidos totales y ácidos
grasos omega 3). Por otra parte, se validó la utilización
de Saccharina latissima como biofiltro, mediante la
analítica comparada de la biomasa de algas.
El primer experimento que incorporó tres niveles tróficos
diferentes: peces, moluscos y algas, cultivados en jaula y
en batea, tuvo lugar entre octubre 2012- junio 2013 y a
partir de octubre del 2013, se inició un segundo
experimento introduciendo un cuarto nivel trófico:
crustáceos, concretamente el bogavante, se analizará el
beneficio del cultivo en suspensión en las proximidades
de la jaula y la batea, y será estudiado el ciclo completo
de las algas que el año pasado por razones de tiempo
apenas pudieron estudiarse. Dichos niveles se sumarán
al cultivo de peces y moluscos ya iniciado el año anterior.
A continuación se dan los resultados del primer
experimento.
RESULTADOS
1.- Cultivo de moluscos
Mejillón. El crecimiento en talla, en el muestreo final, fue
alrededor de un 4% mayor en la jaula que en la batea,
por el contrario los mejillones presentaron mayor
contenido en carne en la batea (11% en peso fresco),
con diferencias más acusadas en términos de peso seco
(19%). Tanto el peso vivo como el peso escurrido (animal
entero) fueron similares en ambos sistemas, aunque el
contenido en agua fue ligeramente superior en la jaula.
Las diferencias fueron significativas tanto a nivel de talla
como de peso de carne, pero si bien fueron importantes
en peso seco, en términos de longitud la diferencia
apenas supone 3 mm.
Respecto al rendimiento en carne obtenido, fue mayor en
la batea (44%) que en la jaula (42%).
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Almeja. Se observa una pequeña diferencia en el
crecimiento de la almeja en las distintas ubicaciones
siendo más favorable este crecimiento en la semilla
cultivada en la jaula donde se encuentran los peces.
2.- Análisis bioquímicos
Mejillón (Mytilus galloprovincialis): La composición en
proteínas varía entre el 40-43% del peso seco en el
muestreo medio y entre el 26-27% en el final y los lípidos
totales entre 12-13% en el medio y 10-11% en el final no
existiendo diferencias significativas entre los valores
obtenidos en batea y jaula.
En general no existen diferencias significativas entre los
dos tipos de cultivo en los grupos de ácidos grasos
(PUFA, saturados, MUFA, sum.W3 y Sum.W6) ni en los
ácidos grasos más importantes: 20:5n-3 (EPA), 22:6n-3
(DHA) y 20:4n-6 (ARA), observándose sólo ligeras
diferencias en los MUFA en el muestreo final siendo más
altos en batea que en jaula.
Almeja rubia (Venerupis rhomboides). Las proteínas y
los lípidos (%MSLC) varían en la almeja rubia al final del
experimento entre 31-33,5% y 14,5-16%
respectivamente, no existiendo diferencias significativas
en la almeja cultivada en batea y jaula.
Almeja babosa (Venerupis pullastra). No existen
diferencias significativas en los valores de proteínas y
lípidos obtenidos en los dos sistemas de cultivo (batea y
jaula) variando las proteínas entre el 38 y el 42% y los
lípidos totales suponen el 13% (%MSLC). Los PUFAW3
suponen el 37% y los PUFAW6 el 2%. No existen
diferencias significativas en la composición de ácidos
grasos de ninguna de las almejas estudiadas.
3.- Análisis patológicos
Mejillón (Mytilus galloprovincialis). Todos los parásitos y
alteraciones patológicas son comunes en los mejillones
cultivados en batea. Por su poder patogénico, destaca la
presencia de Marteilia refringens, cuya prevalencia fue
mayor en los mejillones cultivados en batea (16,7%) que
en los cultivados en la jaula de peces (6,7%).
En los mejillones cultivados en la jaula de peces, las
prevalencias medias del copépodo Mytilicola intestinalis
(63,3%) y del turbelario Urastoma cyprinae (50,0%)
fueron mayores que en los mejillones cultivados en batea
(M. intestinalis 61,1% y U. cyprinae 42,2%). Las
prevalencias medias de los ciliados observados en la
branquia fueron mayores en los mejillones cultivados en
la batea (60,0%) que en los cultivados en la jaula
(46,7%) así como las prevalencias medias de los ciliados
observados en el digestivo de mejillones cultivados en
batea (16,7%) que en los cultivados en la jaula (11,1%).
En ningún caso anteriormente citado las diferencias
encontradas fueron estadísticamente significativas.
Almeja rubia (Venerupis romboides). Las almejas
estaban muy poco parasitadas, lo que es normal en
almejas de este tamaño. Los parásitos detectados son
comunes en estas almejas. En el control inicial, solo se
observaron parásitos en branquia. En las almejas
cultivadas en batea se detectaron copépodos en
digestivo y metacercarias en el pie, ambos con muy baja
prevalencia, que no fueron detectados en las almejas
cultivadas en la jaula de peces.
4.- Experiencias realizadas con macroalgas
Outdoor: La integración del cultivo de Saccharina
latissima tanto con los de peces en jaula como con los
de moluscos en batea es muy positiva, ya que la especie
prácticamente duplica su contenido en proteína, lo que
además de suponer una depuración real y activa del
agua en formas de nitrógeno excretadas por los peces y
moluscos aumenta su valor comercial como alga
alimentaria.
Indoor: Tanto Saccharina latissima como Gracilaria dura
pueden ser alternativamente usadas como filtros
biológicos en sistemas IMTA en tierra con el fin de poder
cubrir todas las épocas del año. Además ambas
especies por sus cualidades alimenticias y/o ser materias
primas para la obtención de ficocoloides pueden servir
para obtener un rendimiento extra a las instalaciones.
5.- Análisis de biomasa en jaula de peces
El incremento de biomasa de besugo en 6 meses fue de
800 kg con un suministro de pienso de 71 kg.
6.- Mantenimiento y análisis del crecimiento de
crustáceos en cultivo semi-intensivo
En los meses de abril y octubre, se llevaron a cabo dos
cultivos larvarios de bogavante (Homarus gammarus) a
partir de larvas obtenidas de dos hembras ovadas del
IGaFA. Las postlarvas obtenidas se llevaron hasta
estadío V en tanques de nursery en tierra.
Cada lote fue cultivado por separado: el lote de
primavera, con juveniles en estadíos V obtenidos a partir
CIMA Memoria 2013 21
de las larvas nacidas en abril, que fueron puestos en
cultivo suspendido en junio y el lote de otoño, formado
por los estadíos V de larvas nacidas en octubre, puestos
en cultivo suspendido en noviembre. El cultivo fue
realizado paralelamente en batea y en jaula. Para cada
lote (primavera y otoño) se dispusieron 3 cuerdas por
tratamiento (3 cuerdas en jaula contra 3 cuerdas en
batea). Cada cuerda estaba compuesta por 8 pisos de
cestos ostrícolas con 4 cuarterones con tapa por piso. En
cada cuarterón se coloca un ejemplar al que se le ha
medido previamente la longitud del cefalotórax. Las
cuerdas fueron fondeadas a 8 m de profundidad (jaula)
para situarse justo por debajo del límite inferior de la
jaula o a 5 m (batea), contados a partir de la parte
superior del grupo de cestos.
Los resultados del 1º cuatrimestre para el lote de
primavera, indican un crecimiento y supervivencia similar
en ambos sistemas y evolucionan normalmente.
22
RESUMEN
Este proyecto coordinado ha sido financiado por la Xunta
de Galicia dentro del programa sectorial de investigación
aplicada e I+D en el Área de Medio Marino. Consta de
tres subproyectos:
Subproyecto 1. Análisis genético, llevado a cabo por el
grupo XENOMAR de la Universidad de A Coruña (UDC).
Subproyecto 2. Preengorde en batea, desarrollado por
la empresa Ameixa de Carril S.L.
Subproyecto 3. Cultivo larvario y postlarvario, llevado a
cabo por el Centro de Cultivos Mariños de Ribadeo
(CIMA).
El objetivo principal, es contribuir a la recuperación y
aumento de producción de la coquina Donax trunculus
en Galicia y para ello, se han abordado y desarrollado
dentro de los tres subproyectos, actividades
encaminadas a cubrir los objetivos propuestos y
específicos dentro de cada uno de ellos.
El Subproyecto 3 llevado a cabo por el CIMA, ha
desarrollado los siguientes objetivos a lo largo de estos
tres años:
a) Definir las condiciones de acondicionamiento de
los reproductores
Según estudios previos realizados con reproductores de
Donax trunculus (Linnaeus, 1758), se sabe que el
período de madurez y puesta abarca de marzo a agosto.
Por estrategia de cultivo, el interés de su
acondicionamiento es para obtener desoves antes de
este período para así, adelantar la salida de la semilla y
facilitar su adaptación al medio natural evitando su
preengorde en meses de invierno, donde las
temperaturas y condiciones del medio no facilitan su
crecimiento.
Para conseguir este objetivo se hicieron pruebas de:
temperatura; de comparación de progenitores de dos
localidades diferentes (Vilarrube y Abrela); de
determinación de una temperatura que garantice un
largo mantenimiento en criadero y pruebas de
optimización de las condiciones de mantenimiento de los
progenitores comparando dos sistemas (abierto y
cerrado) y manteniéndolos con y sin sustrato.
Para las pruebas de temperatura se recolectaron
ejemplares adultos de coquina en febrero del banco
natural de Vilarrube (NO de Galicia). Las temperaturas
seleccionadas para la experiencia de acondicionamiento,
fueron: 21°C (temperatura máxima en el medio natural
de la especie); 17°C (temperatura próxima a la
gametogénesis) y 13°C (temperatura del medio natural
durante la recolección de los ejemplares). La prueba
duró 22 días y para evaluar el estado de desarrollo
gonadal, cada 2 semanas, se realizaron muestreos
separando la gónada del resto del cuerpo del individuo
para el estudio histológico. Se calculó también el
siguiente Índice de condición gonadal: ICG = (Peso
fresco gónada/Peso fresco concha)*100. A medida que
avanza el tiempo de acondicionamiento, se produce una
evolución en el desarrollo gonadal siendo más acusado
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO
TÍTULO:
Cultivo en criadero, preengorde en batea y análisis de la
diversidad genética de la coquina Donax trunculus en
Galicia.
INICIO: diciembre, 2010
FINALIZACIÓN: diciembre, 2013
ENTIDAD FINANCIADORA:
Xunta de Galicia.
Dirección Xeral de Investigación, Desenvolvemento e
Innovación.
INVESTIGADORA PRINCIPAL:
Nóvoa Vázquez, S.
Proyecto coordinado
INVESTIGADORES/AS:
Cerviño Eiroa, A.; Fernández Pardo, A.; Guerra
Díaz, A.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
Álvarez Llamas, L.M.; Bouzamayor Yáñez, V.;
Cotarelo Jardón, M.J.; Páez Pérez, J.; Ruíz
Misioné, M.
CIMA Memoria 2013 23
en los individuos tratados con temperatura más elevada
(21°C). Estos resultados son menos positivos en los
adultos acondicionados a 17ºC pero a los 14 días, tienen
lugar puestas de aproximadamente 6 millones de larvas
en los tanques tratados a 17°C y 21°C. La maduración
gonadal en coquinas acondicionadas a 21°C es más
rápida y las puestas son más abundantes, con todo,
el porcentaje de supervivencia es menor (28%).
La prueba de comparación de localidades se inició en el
mes de noviembre y los individuos, procedentes de
Vilarrube y de Abrela, se mantuvieron a 21ºC y 17ºC. El
muestreo inicial indica que, la mayor parte de los
individuos, se encuentran en estadío E1 (inicio del
desarrollo gametogénico). Los índices de condición son
altos aunque en mayor proporción en los progenitores
procedentes del banco de Vilarrube. Las supervivencias
finales, fueron de un 15% en los progenitores
procedentes de Vilarrube y un 20% en los procedentes
de Abrela, a pesar de esto, se observa que en los
individuos procedentes del banco de Vilarrube, la
maduración gonadal se produjo de un modo más rápido
y los índices de condición se mantuvieron más elevados.
Por todos estos motivos, se seleccionaron los
progenitores procedentes del banco de Vilarrube para las
siguientes pruebas de acondicionamiento.
Dos meses después, en enero, se empezó con esta
prueba con individuos de Vilarrube que se mantuvieron a
17ºC. Con esta prueba se pudo concluir que la
maduración gonadal es más rápida en progenitores
que parten con mayor Índice de condición; la
temperatura de 21ºC es una temperatura que expone
a los progenitores a problemas de mortalidad en
acondicionamientos largos, se selecciona 17ºC como
la mejor para un acondicionamiento largo o para
mantener a los progenitores en criadero durante más
tiempo y, noviembre, podría ser un mes excelente de
acondicionamiento para lograr adelantar las puestas
y que la semilla salga al medio natural en los meses
de primavera.
Para concluir este objetivo se hicieron dos
acondicionamientos más ensayando nuevos sistemas de
mantenimiento de los progenitores (sistema de
recirculación), controlando un nuevo parámetro como es
la tasa de oxígeno y, comprobando su mortalidad y la
eficacia en la madurez gametogénica manteniéndolos
con y sin arena. Se puso a punto un nuevo sistema, de
recirculación, para acondicionar adultos en el que las
características a destacar son, por una banda, el mayor
aprovechamiento del fitoplancton añadido para su
alimentación y, por otra, la aireación del agua se obtuvo
provocando que su caída fuera en cascada (Figura 1).
Figura 1. Esquema del sistema de recirculación y del abierto utilizados para probar el efecto de la alimentación en el acondicionamiento de Donax trunculus
Cascada
SIST. RECIRCULACIÓN
SIST. ABIERTO
Fitoplancton Renovación agua
Fitoplancton
Agua
24
Con la misma cantidad de fitoplancton, se compararon
mortalidades y madurez gonadal en individuos
mantenidos en sistema abierto y en sistema de
recirculación donde, esta misma cantidad de alimento,
no se pierde puesto que retorna al tanque donde se
encuentran los individuos. Según los resultados
obtenidos de Índice de condición y madurez gonadal, el
sistema más eficaz es el de recirculación ya que, con
la misma cantidad de alimento, no se pierde como ocurre
en el sistema abierto y los individuos maduran antes.
Con todo, se pone de manifiesto que, no es la
temperatura el factor más determinante, sino la
alimentación. En esta especie se consigue avanzar su
estado gametogénico, si se garantiza una cantidad de
alimento abundante por lo que, el sistema de
Recirculación, asegura su mayor aprovechamiento con
el consiguiente ahorro que ello supone.
En este sistema se realizó una prueba en diciembre, con
individuos de Vilarrube, para corroborar la eficacia de su
mantenimiento con sustrato. En uno de los tanques se
mantuvo la coquina en arena y en el otro sin ella y, a lo
largo de un mes, se comprobó la mortalidad y la eficacia
para conseguir la madurez gonadal (figura 2). Los
resultados obtenidos al cabo del mes que duró el
experimento muestran que, los individuos mantenidos en
arena presentan una mortalidad más baja que los que
estaban sin arena y, además, alcanzan un Índice de
condición más alto (10,2 frente a 7,9) llegando a la
madurez y puesta mucho antes. Los que permanecieron
en arena tienen su primera puesta a los 47 días con una
mortalidad del 48%, pero los que quedaron sin arena no
desovan hasta el día 73 y con una mortalidad del 73%.
Comprobada la eficacia del sistema de recirculación, los
resultados de acondicionamiento y mortalidad son
mejores si los adultos se mantienen enterrados en
arena.
Figura 2. Esquema
del sistema de
recirculación
ensayado para el
acondicionamiento
de D. trunculus
b) Optimizar el cultivo en criadero
Cultivo Larvario
Inicialmente y, como base de dicho protocolo que se fue
mejorando con sucesivas pruebas de densidades,
temperaturas y alimentación, la metodología del cultivo
era la siguiente: los huevos de los desoves obtenidos,
tanto de forma natural como de forma inducida, realizan
el desarrollo embrionario y larvario en tanques
troncocónicos de 200 litros, a una densidad de 10
indiv./mL, con agua de mar filtrada a ±21ºC y aireación
constante. La alimentación se basaba en una dieta mixta
de microalgas cultivadas en el sistema continuo de
fitoplancton ya mencionado. Cada dos días se realizaban
los cambios totales del agua, momento en el que se
tomaban muestras para determinar la mortalidad, el
crecimiento y los cambios morfológicos de las larvas.
Cuando se observaba que, el 50% de los individuos del
cultivo presentaban pie, se continuaba su cultivo en los
Renovación agua
COQUINA CON ARENA COQUINA SIN ARENA
Adicción fitoplancton
TANQUE DE RENOVACIÓN Y DE ADICCIÓN DEL
ALIMENTO
CIMA Memoria 2013 25
mismos tanques pero, dentro de cilindros con fondo de
malla a los que se les incorporaba una pequeña cantidad
de arena para facilitar su metamorfosis o transformación
a postlarva.
A lo largo de estos tres años que duró el proyecto se
realizó el seguimiento de todos los desoves obtenidos,
con eso se pretendió ajustar y describir un protocolo de
cultivo larvario en criadero para D. trunculus. Así mismo,
para la obtención de los desoves, se mejoraron las
técnicas de inducción.
En relación a la inducción de los desoves, los mejores
resultados se obtuvieron manteniendo a los progenitores
en seco durante períodos de por lo menos 8 horas y
mediante shocks térmicos comprendidos entre los
15º y 18ºC. Con respecto a los resultados de
crecimiento, analizando todos los datos obtenidos de los
desarrollos larvarios durante estos tres años, se puede
decir que: la duración aproximada del cultivo larvario
de la coquina es de un mes, llegando a la fijación en
23-30 días con tallas de ±300 µm, momento en el que
se debe añadir un sustrato en el sistema de cultivo, para
facilitar su metamorfosis.
Conocidos estos datos, quedaban aún parámetros que
podrían mejorarse y uno de ellos era la dieta. En general
se observaba que la mezcla de varias especies
microalgales (dietas mixtas) tenía un efecto positivo
sobre el crecimiento de larvas de bivalvos marinos, en
comparación, con las dietas monoespecíficas puesto
que, las diferencias en las carencias nutritivas son
compensadas entre las distintas especies utilizadas. En
general, se utilizaban dietas que combinen diatomeas
junto con otras especies con el objetivo de obtener
mejores rendimientos y una de estas diatomeas es
Chaetoceros sp. Diferentes estudios demostraron que la
alimentación, ya a nivel de progenitores, debe incorporar
ácidos grasos poliinsaturados de 20 y 22 carbonos y con
más de tres dobles enlaces que son, verdaderos ácidos
grasos esenciales (EFAs). Entre estos, destaca el DHA
(22:6n3) y EPA (20:5n3) siendo este último bastante
abundante en la diatomea Chaetoceros sp., lo que nos
dio la base para realizar este estudio. A partir de
reproductores del banco natural de Vilarrube se obtienen
desoves para realizar las experiencias con distintas
dietas: Dieta 1. Isochrysis sp.-Diacronema lutheri (1:1);
Dieta 2. Isochrysis sp.-Diacronema lutheri-Chaetoceros
sp. (2:1:1); Dieta 3. Isochrysis sp.-Diacronema lutheri-
Chaetoceros sp. (1:1:2). Coincidiendo con los cambios
de agua, se toman muestras de aproximadamente 100
larvas que se observan al microscopio óptico para
determinar los cambios morfológicos y para obtener
datos de crecimiento. También se realiza un conteo de
individuos a lo largo del desarrollo larvario para
conseguir datos de supervivencia. Según los resultados
obtenidos, las larvas alimentadas con la dieta 3, son las
primeras en alcanzar la fijación a los 26 días de cultivo,
con una talla de 303,08 µm. Tres días más tarde, a los
29 días de cultivo, alcanzan la fijación las alimentadas
con la dieta 2, con una talla de fijación de 323,05 µm.
Las larvas alimentadas con la dieta 1, son las que más
tarde fijan (32 días de cultivo y su talla de fijación es de
318,15 µm). En cuanto a la supervivencia, la dieta 3 es la
que presenta un porcentaje mayor, 36%. Le sigue la
dieta 2 con un 23,2% y es la dieta 1 la que presenta una
elevada mortalidad, llegando a la fijación sólo un 4% de
la cantidad inicial de larvas. Se puede decir que, una
dieta que incorpore la especie Chaetoceros en una
alta proporción, va a provocar mejores rendimientos
en los cultivos tanto de crecimiento como de
mortalidad.
Para continuar evaluando otros parámetros de cultivo
que pueden mejorar la producción de postlarvas en los
cultivos larvarios, se realizaron pruebas con tres
densidades distintas: 3 larvas/mL, 5 larvas/mL y 10
larvas/mL. Según los datos, las densidades de 3 y 5
larvas/mL, parecen crecer de un modo más rápido. Sus
porcentajes de supervivencia fueron de un 18% y un
25% respectivamente y ambas, fijaron a los 25 días de
cultivo. La densidad de 10 larvas/mL, fija a los 27 días de
cultivo y su porcentaje de supervivencia fue de un 28%.
Por lo tanto, con la densidad de 5 larvas/ml se
obtienen buenos resultados para el cultivo larvario de
coquina, sin excluir una densidad inicial de 10
larvas/ml cuando las circunstancias del criadero o de
la puesta lo exijan.
El último parámetro que se intentó optimizar fue el de la
temperatura. Con desoves obtenidos tanto de
progenitores acondicionados en el criadero como, de los
recientemente llegados del medio natural, se hicieron
cultivos en los que se mantenían a temperatura ambiente
(16ºC) y otros en los que se siguió empleando la
temperatura habitual de 21ºC. Los mejores resultados
fueron con la temperatura alta (21ºC).
26
Cultivo Postlarvario
Para finalizar y con el objetivo de mejorar el crecimiento
y por lo tanto adelantar la salida de semilla del criadero,
se ensayaron dos sistemas de cultivo postlarvario: un
sistema de cultivo abierto frente a otro cerrado (Figura 3).
A los 50 días del desove, se trasladó la semilla de 0,7
mm a tanques troncocónicos en circuito abierto y cerrado
para estudiar la efectividad de ambos sistemas.
La diferencia entre ellos radica en que, en el sistema
abierto, existe una entrada y salida constantes de agua y
fitoplancton mientras que, en el sistema cerrado, el
cambio de agua se realiza cada dos días y el fitoplancton
se añade de forma manual una vez al día. En ambos
sistemas se hacen muestreos cada 15 días para
controlar parámetros de crecimiento y supervivencia.
Figura 3.
Figura 3.- Esquema de los sistemas ensayados para el preengorde de D. trunculus
Según los resultados a los 100 días de cultivo, la semilla
cultivada en el sistema abierto consiguió una talla de 2,3
mm. La cultivada en el sistema cerrado, presentó una
talla final de 1,8 mm. La supervivencia fue algo superior
en el sistema de cultivo cerrado (92%) frente a un 74%
en el sistema abierto. Aunque la supervivencia es
mayor en el sistema cerrado (92% frente a un 74%), el
crecimiento de la semilla se produce de un modo
más rápido en el sistema abierto por lo que puede salir
antes al medio natural.
c.- Transferencia de las técnicas de cultivo a escala
superior semiindustrial
En el criadero del CIMA de Ribadeo, se lleva realizando
el cultivo de esta especie obteniendo una buena
producción de semilla, aunque el objetivo de este
proyecto es optimizar ciertos aspectos en el
acondicionamiento y en los cultivos larvarios y
postlarvarios para mejorar esta producción. Para cumplir
el tercero de los objetivos suscitados se realizaron
cultivos larvarios en el minicriadero de O Vicedo
transfiriendo las técnicas de cultivo ya desarrolladas en
Ribadeo. De cuatro partidas de progenitores recogidos
en el banco natural de Vilarrube, se comenzaron a
obtener desoves en el mes de febrero. Todos ellos, se
trasladaron al minicriadero de O Vicedo, donde se realizó
el cultivo larvario y postlarvario siguiendo la metodología
aplicada en ambos centros hasta el momento. De todas
las puestas no se consiguió semilla dado que, al llegar a
una talla de ±1000 µm todos los individuos mueren.
Posiblemente, el motivo fue debido a que faltaba perfilar
una metodología adecuada para el minicriadero de O
Vicedo, dadas sus condiciones especiales. Realizados
algunos cambios en los puntos críticos analizados, a
partir de los desoves siguientes, ya se comienza a sacar
semilla para que pueda ser preengordada en las bateas
de Vilargarcía y de Camariñas. En total, se obtuvieron
2.294.086 unidades de semilla de coquina que fueron
saliendo al medio natural (para su preengorde) desde el
mes de septiembre-octubre y se fueron entregando a
medida que las condiciones ambientales eran óptimas.
Todos los objetivos fueron desarrollados al 100% salvo
algunos aspectos del cultivo postlarvario, concretamente
en lo que se refiere a la utilización de sustrato. Hasta el
momento, cuando las larvas llegan a la fijación, se les
añade arena para que terminen la metamorfosis y en
esta arena se realiza el cultivo postlarvario. Aunque se
hicieron pruebas preliminares no se pudo concluir si esta
adición era totalmente necesaria y por lo tanto, hará falta
CIMA Memoria 2013 27
la realización de más pruebas que no fueron posibles en
este proyecto debido a los recortes de presupuesto a
que fue sometido este parámetro, seguirá siendo objeto
de estudio en otros proyectos puesto que, la eliminación
de la arena en los cultivos mejoraría bastante su
manipulación y, si fuese necesaria su utilización, es
preciso determinar qué tipo de sustrato es el más
adecuado.
Durante este período, el grupo de XENOMAR (UDC)
obtuvo resultados que llevan a las siguientes
conclusiones referidas al subproyecto 1:
a.- Se aislaron 19 marcadores microsatélites en D.
trunculus mediante construcción de genotecas
enriquecidas y se optimizaron tres PCRs multiplex que
amplifican simultáneamente 7 o 4 loci. La amplificación
de estos loci microsatélite permitió realizar análisis de
diversidad genética, estructura poblacional y
paternidades por lo que serán útiles para estudios
futuros de esta especie.
b.- El análisis de microsatélites en los tres bancos
naturales estudiados (Vilarrube, O Barqueiro y O Vicedo)
puso de manifiesto la ausencia de diferenciación
genética.
c.- El lote de reproductores empleado en el criadero
puede considerarse representativo de la población
natural de la que proceden (Vilarrube). El estudio de la
diversidad genética, de uno de los lotes de semilla que
se obtuvieron en criadero, mostró una reducción de la
variabilidad genética, por lo que deben continuar
estudios genéticos de más lotes de semilla que
garanticen la representatividad de toda la producción del
criadero y, de esta forma, llegar a conclusiones que
garanticen minimizar el impacto de la siembra en las
poblaciones naturales.
d.- Otro motivo por el que se deben de estudiar
genéticamente más lotes de semilla, es el análisis de
paternidades que determine la participación de todos los
individuos incluidos en el lote de reproductores.
En relación al Subproyecto 2, desarrollado por la
empresa Ameixa de Carril S.L., en estos años se
llevaron a cabo tareas como: el estudio de las
condiciones óptimas de preengorde de la coquina en
batea (estabulación de la semilla, control de parámetros
de crecimiento y ambientales y calendario de las
operaciones de desdoble) y la implantación de nuevos
sistemas de preengorde (instalación del sistema de aire
forzado y modificación de la batea, labores de limpieza
del sistema, mejora y adaptación del mismo). En base a
los resultados obtenidos, se llega a las siguientes
conclusiones:
a.- La coquina presenta poca resistencia a las
condiciones ambientales desfavorables por lo que no se
debe iniciar el proceso de preengorde en invierno u
otoño. El crecimiento en invierno es muy lento y presenta
mortalidades elevadas en todos los rangos de talla. En el
caso de tener que sembrar la coquina en este periodo, la
semilla de mayor talla (tamiz 3000 µm) tiene una
supervivencia mayor, por lo que sería necesario
prolongar la permanencia en el criadero.
b.- El sistema de preengorde por flujo forzado parece ser
lo más interesante, pero se hicieron modificaciones para
solventar todos los problemas surgidos durante el
proyecto y para mejorar la manejabilidad de la semilla en
los trabajos de limpieza y desdoble.
28
RESUMEN
El CIMA de Ribadeo participa en el proyecto Europeo
REPROSED dando soporte técnico al grupo de la USC
en el aspecto de obtener y proporcionar larvas de almeja
fina y japonesa (V. decussata y V. philippinarum), para la
realización de ensayos de patogenicidad y de probiosis;
para lo cual se mantiene todo el sistema de cultivo y
control de los distintos aspectos que influyen en la
producción del criadero.
Las tareas realizadas fueron:
1. Controles del agua de entrada y del circuito de
agua
La calidad del agua de mar utilizada en una instalación
de cultivo es determinante para su buen funcionamiento.
Uno de los parámetros más importantes es la “calidad
microbiológica”. Las características del agua de entrada
determinarán los tratamientos necesarios para que sea
utilizable en el criadero.
Además, las instalaciones tienen un circuito de tuberías
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO
TÍTULO:
REsearch to improve PROduction of SEED of established
and emerging bivalves species in European hatcheries.
(REPROSEED).
INICIO: 2013
FINALIZACIÓN: 2015
ENTIDAD FINANCIADORA:
Proyecto europeo FP 7-KBBE-2009
INVESTIGADOR PRINCIPAL:
Nicolas, J.L. (UMR M100, France)
INVESTIGADORES/AS:
CIMA: Martínez Patiño, D.; Nóvoa Vázquez, S.;
Ojea Martínez, J.
USC: Lopez Romalde, J.
UMR-France: Sourdaine, P.; Suquet, M.
Univ Bergen-Norway: Jacobsen, A.; Magnesen, T.
University of Bangor: G.B.: Beaumont, A.
IMARES-Holland: Kamermans, P.;
UMR-France: Robert, R.
AquaTT-Ireland: Murphy, D.
SYSAAF, France: Haffray, P.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
CIMA: Álvarez Llamas, L.M.; Bouzamayor Yáñez,
V.; Cotarelo Jardón, M.J.; Páez Pérez, J.; Ruíz
Misioné, M.
AGUA BRUTA
SALA FILTROS ARENA
25 – 50 m
SEMILLA
semillaacondicionamiento
reproductores
ASFfría
ASCcaliente
ARAFfría
ARACcaliente
REPRODUCTORES
ARFfría
ARCcaliente
cartucho 3 m
ASBFsala
bolsas
INVERNADERO
cart
ucho
3
m
AIBbolsas
fitoplancton
AITtanques
fitoplancton
cart
ucho
3
m
AIEtanques
ensayo
LARVARIOS
cartucho 3 m
UV
ALTlarvas
tanques
ALFlarvas
grifo
ALNTnavaja
tanques
ALNFnavaja
grifo
ASBLsala
bolsas
DEPÓSITO
AGUA BRUTA
SALA FILTROS ARENA
25 – 50 m
SEMILLA
semillaacondicionamiento
reproductores
ASFfría
ASCcaliente
ARAFfría
ARACcaliente
semillaacondicionamiento
reproductores
ASFfría
ASCcaliente
ARAFfría
ARACcaliente
REPRODUCTORES
ARFfría
ARCcaliente
ARFfría
ARCcaliente
cartucho 3 m
ASBFsala
bolsas
cartucho 3 m
ASBFsala
bolsas
INVERNADERO
cart
ucho
3
m
AIBbolsas
fitoplancton
AITtanques
fitoplancton
cart
ucho
3
m
AIEtanques
ensayoAIBbolsas
fitoplancton
AITtanques
fitoplancton
cart
ucho
3
m
AIEtanques
ensayo
LARVARIOS
cartucho 3 m
UV
ALTlarvas
tanques
ALFlarvas
grifo
ALNTnavaja
tanques
ALNFnavaja
grifo
ASBLsala
bolsas
ASBLsala
bolsas
DEPÓSITO
CIMA Memoria 2013 29
complejo, utilizando distintos tramos y tratamientos del
agua para abastecer los diferentes compartimentos del
criadero (reproductores, larvarios, semilla y fitoplancton).
Las propias tuberías pueden funcionar como reservorios
de bacterias si estas llegan a colonizarlas, formando
biopelículas cuando la limpieza y mantenimiento no son
los adecuados.
Para la siembra de muestras se utilizan los medios Agar
Marino (AM, Pronadisa), para recuento de bacterias
heterótrofas marinas, y Tiosulfato-Citrato-Bilis-Sacarosa
(TCBS, Oxoid), medio selectivo para vibrios.
Las muestras se recogen semanalmente, en recipientes
estériles. Inmediatamente se llevan al laboratorio de
Microbiología de la planta y se procesan. Para ello se
hacen las diluciones necesarias, en tubos estériles con
4,5 ml de agua de mar estéril (AME), sembrándose 100
µl en los medios AM y TCBS. Las placas se incuban a
25ºC. El medio TCBS se lee en 24-48 horas, para evitar
los problemas de reversión de color de las colonias. El
AM se debe dejar hasta 7 días, para permitir el
crecimiento de los tipos más lentos, como pueden ser
algunas bacterias pigmentadas.
Los puntos de muestreo se determinaron en función de
los tratamientos (filtración, radiación ultravioleta,
calentamiento,...) en los diferentes apartados del
criadero, así como de los tramos de tuberías de
conexión.
El agua que sólo pasa por el filtro de arena general
presenta una buena calidad, desde el punto de vista
microbiológico.
El tratamiento con filtro de cartucho ofrece unos
resultados muy irregulares en lo que respecta a la carga
tanto de bacterias heterótrofas marinas como a
poblaciones de vibrios. En cuanto a la función de
eliminación de materia en suspensión, en este caso
parecen suficientes los filtros de arena, a juzgar por los
resultados del agua que no recibe más tratamiento. Un
problema de estos filtros puede ser el de su correcto
mantenimiento, ya que si no se limpian y se cambian en
el momento adecuado pueden convertirse en un punto
de acumulación de bacterias que se incorporarían al
sistema.
La combinación de filtro de cartucho-radiación UV reduce
sólo ligeramente la carga media de bacterias
heterótrofas marinas, y no garantiza una reducción de
los valores máximos. En cuanto a la media de vibrios, va
desde valores mínimos a estimaciones superiores a las
obtenidas para los puntos sin tratamiento adicional.
El uso de radiación UV persigue eliminar la microbiota
presente en el agua, sin embargo según los resultados
obtenidos su eficacia es irregular. Esto implica un riesgo
de proliferación excesiva de bacterias que resisten el
tratamiento, en un ambiente favorable para el desarrollo
del que además se eliminan posibles competidores,
entre los que pueden estar bacterias beneficiosas. La
importancia se agrava al ser la línea utilizada para los
cultivos larvarios. Por todo ello, sería necesaria la
revisión de este sector, sin embargo, la excelente calidad
microbiológica del agua utilizada en la planta sugiere
también la posibilidad de suprimir el uso de la radiación
UV.
2. Control del fitoplancton
En el criadero se mantienen diferentes tipos de cultivos
de microalgas, de las especies Isochrysis galbana, I.
galbana T-iso, Pavlova lutheri, Chaetoceros calcitrans, C.
gracilis, C. mülleri, Skeletonema costatum, Tetraselmis
suecica y Phaeodactylum tricornutum.
Esta mezcla se suministra regularmente, llevando
consigo una importante carga bacteriana, ya que no se
trata de cultivos axénicos. El control de esta carga que
entra rutinariamente en el sistema de cultivo es
primordial para reducir los riesgos de proliferación de
patógenos oportunistas. En esa línea, los mayores
esfuerzos se encaminaron al conocimiento de las
poblaciones de vibrios, principales patógenos de cultivos
larvarios, además de estimar los contenidos de bacterias
marinas heterótrofas totales.
2.1. Fitoplancton de cámara
Se cultiva en matraces de 6 l. a una temperatura de 17-
19ºC y con iluminación continua. Se utiliza agua que
pasa por filtro de arena, autoclavándose en los
botellones una vez llenos. Los recuentos medios son de
10.000 células por microlitro (cél/µl). Sirve como alimento
para los cultivos larvarios y para inocular las bolsas. Se
recoge una muestra que es mezcla de las diferentes
especies.
30
2.2. Cultivo en bolsas
Se mantienen cultivos en bolsas de 30-40 l., a la
temperatura ambiente del invernadero y con luz solar.
Los recuentos medios son de 7.000 cél/µl.
Se utiliza para alimentar reproductores y semilla. Se
vacían las bolsas en un tanque de 1.500 l. donde se
mezclan las diferentes especies, se rellena con agua y
entonces se recoge la muestra para microbiología antes
de que pase al criadero.
2.3. Cultivo continuo
El sistema de producción de microalgas en continuo se
basa en un aporte constante del medio nutritivo a los
recipientes de cultivo y en la obtención de la cosecha de
microalgas también constante. Los recipientes utilizados
son bolsas de 400 l. El agua de entrada es esterilizada
por pasteurización. El cultivo se realiza en el invernadero
con luz natural, pero el sistema también cuenta con
iluminación artificial (tipo luz-día), cuyo
encendido/apagado puede ser regulado en función de la
temperatura deseada para las bolsas. Los recuentos
medios son de 1.000 cél/µl. La muestra se recoge en el
tanque en que se mezcla, antes de ser repartido al
criadero.
La “calidad microbiológica”, en relación con la presencia
de vibrios, fue buena tanto para el fitoplancton de
cámara como para el de cultivo continuo. Los resultados
obtenidos permitieron aportar información para mejorar
el alimento suministrado y evaluar las consecuencias de
los cambios adoptados. La sustitución del fitoplancton de
bolsas por el de cultivo continuo en el circuito de
alimentación se demostró también como una mejora
sustancial.
3. Muestras de reproductores
Es importante conocer la carga bacteriana asociada a los
reproductores, y por tanto susceptible de ser transmitida
verticalmente a la progenie. Se analizaron lotes de
adultos utilizados como reproductores a lo largo de la
temporada a su llegada al criadero desde el medio
natural, procedentes de diferentes bancos y en distintos
meses del año. Además se analizaron individuos de los
diferentes grupos inmediatamente después de la
obtención de puestas. Estos datos nos permitirán
evaluar la influencia del origen geográfico, la época del
año, el estadío de desarrollo gonadal y el tiempo de
permanencia en la instalación.
Se abren los ejemplares y se lavan con agua de mar
estéril (AME). Se toma un trozo de gónada, cortada
asépticamente, con un peso conocido (≈ 0.08 g). Se
coloca en un mortero estéril y se homogeniza en 1 ml de
AME. Se hacen las diluciones seriadas necesarias,
sembrándose en los medios AM y TCBS. Los datos
obtenidos se expresan en ufc/g de gónada.
Se realizan muestreos a los lotes de reproductores de
almeja fina para evaluar el efecto sobre la carga
bacteriana de diferentes acondicionamientos, variando la
temperatura y el alimento suministrados. Los mejores
resultados desde el punto de vista microbiológico,
representados por una reducción de carga bacteriana, se
obtuvieron con el acondicionamiento a 20ºC sin alimento,
seguido de otro con subida gradual de Tª y alimento,
suponiendo en ambos casos los presuntos vibrios un 4%
de las bacterias marinas totales. En cuanto al análisis de
los datos en función del sexo de los individuos, no se
observaron diferencias marcadas, con la excepción de
los ejemplares mantenidos sin alimento, en que las
hembras mostraron recuentos superiores a los machos.
4. Muestras de cultivos larvarios
La monitorización del cultivo larvario y el seguimiento de
las diferentes etapas relacionadas con el mismo, nos
permitirá conocer cuáles son las posibles vías de
contaminación y los microorganismos responsables de
las mortalidades.
El control de la población bacteriana habitualmente
asociada a los cultivos larvarios y post-larvarios de
bivalvos, entre la que se encuentran los patógenos
oportunistas responsables de la mayor parte de los
episodios de mortalidades masivas, es preciso para
minimizar las pérdidas en la producción.
4.1. Larvas
Para el muestreo se escoge el cambio de agua de los
tanques de cultivo, después de lavar en el tamiz donde
quedan retenidas las larvas con la propia agua del
criadero. Se toma la muestra directamente, con asa de
siembra estéril de 1 µl, y se extiende sobre las placas de
AM y TCBS. Se obtiene una estima cualitativa de las
poblaciones bacterianas, aunque permitiendo la
comparación entre muestras al unificar el volumen
sembrado.
CIMA Memoria 2013 31
4.2. Agua de cultivo
Se recoge en un recipiente estéril del tanque una
muestra del agua de cultivo justo antes del vaciado para
el cambio de agua. En el laboratorio, se hacen las
diluciones seriadas apropiadas y se siembran en AM y
TCBS. Se obtienen datos cuantitativos, que se expresan
en ufc/ml.
Los ensayos con probióticos, previamente preparados
por el grupo de la USC para ver la viabilidad técnica a
escala de planta de cultivo se abordaron en sus fases
iniciales, se enviaron las muestras a la USC para su
análisis.
Además se suministraron periódicamente larvas, semilla
de las dos especies de almeja para la realización de
pruebas de patogenidad de aislados realizados por el
equipo de la USC.
32
RESUMEN
Por ser actividades que se desenvuelven en el dominio
público marítimo-terrestre y habitualmente apoyadas por
la administración autonómica, las acciones y proyectos
de las cofradías para la recuperación y la creación de
zonas productivas para el marisqueo y la pesca precisan
de una adecuada evaluación, tanto de su oportunidad
como de su ejecución y de los resultados obtenidos. Por
otra banda, generalmente la carga de trabajo en la
administración para dar respuesta a los problemas y
demandas del sector suele ser demasiado alta para
abordar bien otros problemas de nueva aparición o que
requieran de un mayor análisis. La puesta en marcha de
este subproyecto dentro de la acción de repoblación de
especies con interés comercial, pretendió ofrecer el
apoyo técnico necesario para la toma de decisiones en
relación con problemas de pérdida de producción de
bancos, los cuales requieren amplia base de
conocimiento de temática muy diversa. (Subp. I).
Durante 2013 en el ámbito de este proyecto se
desarrollaron actividades en diversas áreas:
a. Seguimiento de los bancos de libre marisqueo en
la ría de Arousa
En el ámbito de este subproyecto se enmarcan todas las
actividades relacionadas con el seguimiento científico
técnico de la explotación de los bancos marisqueros a
flote de Lombos do Ulla, O Bohído y Cabío, iniciadas en
los años 2002, 2006 y 2009, respectivamente. Los
resultados de estos seguimientos son empleados como
base para el asesoramiento de los órganos de la
Consellería do Medio Rural e do Mar y de las cofradías
de pescadores implicadas en la gestión de la explotación
de los bancos.
Durante 2013 se realizaron en cada banco y con
periodicidad semestral, los muestreos cuantitativos con
dragas desde embarcación. Con estas prospecciones se
obtienen, entre otros datos, las densidades, la
distribución espacial y la estructura de tallas de las
poblaciones de las diferentes especies de interés
comercial, fundamentalmente berberecho (Cerastoderma
edule), almeja fina (Tapes decussatus), almeja japonesa
(Tapes semidecussatus), almeja babosa (Venerupis
senegalensis), almeja rubia (Venerupis rhomboides),
almeja bicuda (Paphia aurea) y reloj (Dosinia exoleta),
antes del inicio de la campaña (de octubre a marzo) y
después de su remate. Por otro lado la acumulación de
esta clase de datos a lo largo del tiempo permite el
análisis de la dinámica de población de cada especie
(curvas de crecimiento, mortandad, reclutamiento, etc.).
Durante el desarrollo de las campañas extractivas se
realiza el seguimiento productivo y económico de las
mismas mediante la recepción y el análisis de los datos
de primera venta en lonja, la asistencia de
embarcaciones en los bancos y los muestreos de tallas
de individuos capturados.
Al mismo tiempo, para detectar los niveles de mortandad
y posibles episodios de afección de patologías en los
bivalvos, mensualmente en cada banco se procede a la
ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN
EQUIPO
TÍTULO:
Repoblación de especies marinas de interés comercial.
Subproyecto I.– Repoblación de especies de interés
comercial en la costa gallega.
INICIO: enero, 2012
FINALIZACIÓN: septiembre, 2014
ENTIDAD FINANCIADORA:
Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro.
Consellería do Medio Rural e do Mar.Xunta de Galicia.
Código: PGIDIT- CIMA 12/01
INVESTIGADOR PRINCIPAL:
No Couto, E.
INVESTIGADOR:
Iglesias Estepa, D.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
Martínez Verde, G.; Miranda Bamio, M.
CIMA Memoria 2013 33
introducción y recogida de individuos de las diferentes
especies en juegos de cajas de confinamiento. De los
ejemplares vivos recogidos se separan muestras para su
análisis patológico.
b. Repoblación de especies marinas
Durante 2013 no se realizaron actividades específicas de
cultivo de rodaballo (Scophtalmus maximus) y lubrigante
(Hommarus gammarus) para su marcaje y suelta,
centrándose la actividad en la recuperación de individuos
marcados en sueltas previas y en el análisis de los datos
proporcionados por estas recapturas.
Sin embargo, de la misma manera que en los últimos
años, se procedió al marcaje y suelta en el Mar de Lira
de 1200 juveniles de lubrigantes procedentes de las
actividades formativas de los alumnos del IGaFA
(Instituto Galego de Formación en Acuicultura).
Desde junio de 2012 todas las cofradías con
embarcaciones que pescan en el ámbito del área de
suelta (Lira, Fisterra y Muros) cuentan con detectores de
las marcas metálicas que se inyectan en las crías antes
de las sueltas.
c. Apoyo técnico e información sobre
acondicionamiento de bancos marisqueros
Para evaluar las acciones de regeneración de bancos
marisqueros concedidas a través de las ayudas a
proyectos colectivos iniciados la DXORM solicita a las
cofradías la presentación de informes técnicos sobre la
situación de las áreas tras la ejecución de las
actuaciones regulares (primavera y otoño-invierno) sobre
la evolución del substrato y las poblaciones de moluscos
bivalvos comerciales en las zonas afectadas. Este
equipo de recursos marinos del CIMA presta su apoyo
técnico a las entidades y biólogos de zona para obtener
y analizar los datos relacionados con las características
del substrato, llevando a cabo las siguientes actividades:
1. Elaboración de mapas batimétricos de alta resolución
mediante sistemas informáticos de información
geográfica (GIS).
2. Análisis granulométrico de muestras de sedimento,
facilitadas por los técnicos de las entidades o bien
tomadas por el personal del CIMA.
En concreto, en 2013 se colaboró mediante los
siguientes estudios:
- Levantamiento batimétrico de la playa de Canelas,
(Cofradía de Vilaxoán). Abril de 2013.
- Análisis granulométrico de substrato submareal entre
Punta Portomouro y Punta de Pedra Rubia (Boiro). Abril
de 2013.
- Análisis granulométrico en la Playa do Castro (Cofradía
de Aguiño). Septiembre de 2013.
Igualmente se le prestó apoyo a la cofradía de
Cambados en el seguimiento del proyecto de
regeneración del banco marisquero submareal de
Meloxo iniciado en ese año y consistente en el
acondicionamiento de substrato y siembra de almeja
babosa. El CIMA colabora mediante la colocación de una
estructura con cajas de confinamiento para evaluar el
crecimiento y la mortandad de los juveniles de almeja
suplementados y la recogida de parámetros
oceanográficos con un CTD.
d. Experiencias de estudio de evolución productiva y
sedimentaria en zonas regeneradas
En noviembre de 2013 se finalizó la experiencia que se
llevó a cabo en los bancos intermareales de Pontedeume
con la que se pretendió observar durante un período de
tres años la evolución del substrato y de las poblaciones
de bivalvos, comparando en una misma localidad y
zonas con substrato corregido mediante el aporte de
áridos gruesos con zonas adyacentes no emendadas en
una misma localidad.
Con la experiencia se pretende estudiar las posibles
diferencias:
1. En la evolución de características del substrato
(composición granulométrica, materia orgánica y el grado
de compactación).
2. En la dinámica poblacional, analizando el crecimiento
y la mortandad de almeja japonesa en cajas de
confinamiento situadas próximamente y en el mismo
nivel mareal, con un juego de cajas en zona corregida y
otro en zona con lama sin corregir.
3. En la evolución de las poblaciones de bivalvos
comerciales y su productividad, a partir de los resultados
de los muestreos poblacionales ordinarios realizados
semestralmente por el técnico de la cofradía.
34
Complementariamente, se está realizando una
monitorización de parámetros ambientales de interés,
para lo que se colocó un registrador de temperatura y
salinidad junto a las cajas de confinamiento y se
introdujeron en el terreno testigos verticales de
sedimentación para observar el régimen de deposición
de finos en las diferentes zonas.
Si bien el análisis definitivo de los datos no está
terminado, los resultados provisionales muestran que, en
lo relativo a las mortalidades y crecimientos en cajas de
confinamiento, las nuevas zonas son viables para el
cultivo de moluscos infaunales y que no hay diferencias
considerables entre la zona regenerada y la de substrato
original, por lo que en este caso la actividad de
regeneración supuso la creación de nuevas zonas de
cultivo con alta capacidad productiva que antes de la
regeneración eran impracticables para el marisqueo a
pie por la falta de consistencia del terreno.
e. Monitorización de parámetros ambientales
marinos
De las diversas actividades desarrolladas en este y en
otros proyectos del mismo equipo, durante el año 2013
quedaron colocados sensores de medición en continuo
de salinidad y temperatura en diversas localizaciones de
la costa gallega con importancia productiva:
- Ría de Vigo: río Maior (Vilaboa), O Puntal (Arcade), A
Barra- Praia Vella (Redondela).
- Ría de Pontevedra: Placeres, Campelo.
- Ría de Arousa: O Sarrido y Meloxo (Cambados), Cabío
y Lombos do Ulla (libre marisqueo en la ría de Arousa).
- Costa da Morte: Os Miñarzos (Lira).
- Rías Altas: A Croa Grande (Pontedeume), batea de
reinstalación nº 2 (Ferrol), A Caleira (Cariño).
Contándose en muchos casos con la colaboración de los
técnicos de las cofradías en la descarga de los datos,
toda la información generada fue filtrada, representada
gráficamente y se puso a disposición de los órganos de
gestión de la Consellería do Medio Rural e do Mar.
CIMA Memoria 2013 35
RESUMEN
En este proyecto en el que participan 20 centros de
investigación y 8 empresas (SMEs) pertenecientes a 9
países se pretenden abordar los factores más
importantes que limitan (cuellos de botella) la acuicultura
de peces y que se cree pueden ser una alternativa para
la industria acuícola de Europa.
Se abordarán 6 especies que se encuentran en
diferentes etapas de desarrollo en cuanto a su “inclusión”
en la industria (investigación disponible y producción
acuícola): con la corvina (Argyrosomus regius) y el
halibut (Hippoglossus hippoglossus) como las más
desarrolladas, seguidas por la perca (Sanders
lucioperca) y la seriola (Seriola dumerili) con alguna
producción e investigación, la cherna (Polyprion
americanus) de la que no existe producción y está en
fase de investigación y la lisa (Mugil cephalus) cuya
acuicultura se realiza a partir de alevines capturados del
medio natural.
La selección de especies se realizó teniendo en cuenta
factores biológicos y el potencial económico: rápido
crecimiento, buen rendimiento, aceptabilidad en el
mercado, idoneidad para la diversificación y desarrollo
de productos de alto valor añadido. Para las especies
marinas también se ha tenido en cuenta su potencial
para ser cultivadas en jaulas
La propuesta pretende hacer frente a los cuellos de
botella específicos en la producción de cada una de las
especies citadas con el fin de proporcionar herramientas
y métodos para la industria, y permitir en algunos casos
y optimizar en otros, la producción de estas especies con
el objetivo de incrementar la producción en la UE. El
trabajo se centrará según las especies - en la
reproducción, y / o cría de larvas y / o la nutrición, y / o
tecnologías de producción para el engorde, y / o salud de
los peces, y / o desarrollo de nuevos productos y
factores socioeconómicos tales como estudios de la
percepción de los productos de acuicultura, demanda de
mercado y preferencias de los consumidores.
El proyecto está dividido en paquetes de trabajo
referidos a gestión y organización del proyecto
(reproducción, nutrición, cultivo larvario, engorde,
patología, socioeconomía y diseminación) y dentro de
cada una de ellas en grupos de trabajo (WP) según las
especies resultando un total 31 paquetes de trabajo.
La especie en la que está involucrada la CMRM (CIMA e
IGAFA) en el proyecto, conjuntamente con el IEO y el
Acuario de la Coruña es la cherna (Polyprion
americanus). Además el Acuario del Grove y la empresa
Isidro de la Cal colaboran también en el desarrollo de
esta especie.
Asimismo, participan en el desarrollo de esta especie los
siguientes centros de investigación : Hellenic Center for
Marine Research (HCMR), Universidad de las Palmas de
Gran Canaria (ULPGC), Institut de Recerca i Tecnologia
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN
EQUIPO
TÍTULO:
Exploring the biological and socio-economic potential of
new/emerging candidate fish species for expansion of the
European aquaculture industry (DIVERSIFY).
INICIO: diciembre, 2013
FINALIZACIÓN: diciembre, 2018
ENTIDAD FINANCIADORA:
7º Programa Marco. KBBE2013.1.2.09
Diversification of fish species and products in
European Aquaculture Area 2.1.2. Increased
Sustainability of all Production Systems (agriculture,
forestry, fisheries and aquaculture)
COORDINADOR DEL PROYECTO
HCMR (Greece): Mylonas, C.C.
INVESTIGADORA PRINCIPAL:
CIMA: Linares Cuerpo, F.
INVESTIGADOR:
IGAFA: Rodríguez Villanueva, J.L.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
Cores González, M.J.; Méndez Pérez, B.
36
Agroalimentaries (IRTA), Institut Francais de Recherche
Pour L'Exploitation de la Mer (IFREMER), Universidad de
La Laguna (ULL), SKRETTING Aquaculture Research
Centre AS (SARS).
La cherna (Polyprion americanus) perteneciente a la
familia Serranidae es una de las especies de peces de
mayor tamaño pudiendo alcanzar los 100 Kg, tiene una
amplia distribución geográfica ya que prácticamente está
distribuida por todo el mundo, excepto en los trópicos y
se caracteriza por una prolongada fase pelágica juvenil.
Su rápido crecimiento, su madurez reproductiva tardía,
su precio alto en el mercado, la facilidad de manipulación
en cautividad, así como la reducción de su pesquería -
los TAC se han reducido en 2012 en un 90% en los
EE.UU. (NOOA, www.fishwatch.com)– la convierten en
una especie muy atractiva para la acuicultura comercial.
Es además una especie muy apreciada desde el punto
de vista gastronómico y tiene un precio en el mercado
muy alto y estable, lo cual también es una gran ventaja
desde el punto de vista de la acuicultura, al ser una
especie con gran potencial exportador.
La falta de control de la reproducción y de protocolos de
cultivo larvario se consideran los principales cuellos de
botella que impiden el desarrollo del cultivo a gran escala
de esta especie. Se han obtenido desoves en cautividad
con inducción hormonal o mediante masaje en
individuos con maduración natural y el desarrollo
embrionario y las primeras etapas de la vida de las
larvas ha sido establecido pero hasta el momento las
puestas han sido de un escaso número de huevos.
En este momento, existen varios stocks de reproductores
activos o potencialmente activos en Galicia. El grupo
Isidro de la Cal, dispone de un stock de 39 ejemplares de
un peso medio aproximado de unos 15kg, el IGAFA de
12 ejemplares y el COV del IEO de 10 ejemplares de un
peso entre los 11-18 kg. El Acuario Finisterrae dispone
de 24 ejemplares de entre 15 y 30 kg y el Acuario del
Grove dispone de juveniles que mantendrá en sus
instalaciones para obtener futuros reproductores.
En lo que se refiere a requerimientos nutricionales y
obtención de dietas óptimas no existen estudios sobre la
cherna. Solo existen algunas referencias relacionadas
con la alimentación en el medio natural procedentes de
capturas comerciales y tasas de alimentación en
cautividad, pero existe alguna información referida a
especies similares.
En resumen, aunque la escasez de reproductores es una
desventaja para el cultivo integral de la cherna, el claro
potencial biológico y económico de esta especie, justifica
la asignación de parte de los recursos de este proyecto
en reunir a todos los centros de investigación
involucrados hasta ahora en Europa para estudiar el
potencial de la acuicultura de esta especie, superar los
cuellos de botella y producir juveniles de forma fiable y
en cantidades adecuadas para la producción comercial.
CIMA Memoria 2013 37
6 PATOLOGÍA
38
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO
TÍTULO:
Establishing the scientific bases and technical
procedures and standards to recover the European
flat oyster production through strategies to tackle the
main constraint, bonamiosis.
INICIO: mayo, 2010
FINALIZACIÓN: octubre, 2013
ENTIDADES FINANCIADORAS:
Unión Europea, 7º Programa Marco,
Grant agreement no.: 243583.
Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro
Consellería do Medio Rural e do Mar
Xunta de Galicia,
Código: PGIDT-CIMA 12/04
COORDINADOR DEL PROYECTO:
CETMAR: Fernández Otero, R.
COORDINADOR CIENTÍFICO:
CIMA: Villalba García, A.
INVESTIGADORES/AS:
CIMA: Cao Hermida, M.A.; Carballal Durán, M.J.;
Fuentes González, J.M.; Iglesias Estepa, D.; No Couto,
E.; Parada Encisa, J.M.; Ramilo Álvarez, A.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
CIMA: Fernández Abuín, I.; Giráldez Rivero, R.; Gregorio
Chenlo, M.V.; Martínez Verde, G.; Meléndez Ramos,
M.I.; Miranda Bamio, M.; Pazos Pazos, J.C.; Penas
Pampín, E.; Rendo López, R.; Rodríguez Rodríguez, A.;
Rúa Martínez, M.N.; Vilar Fernández, D.
BECARIOS/AS:
CIMA: Barreiro Martínez, L.; García Alves, L.; González
García, M.M.; Marletta Vázquez, M.; Pérez González, L.;
Rodríguez de la Ballina, N.
RESUMEN
La producción de ostra plana Ostrea edulis en Europa se
redujo notablemente en la primera mitad del siglo XX
como consecuencia de la sobrepesca. La propagación
de dos enfermedades, marteiliosis y bonamiosis, al
comienzo de las décadas de 1970 y 1980,
respectivamente, agravaron drásticamente la caída de
producción. Cinco asociaciones de productores de ostra
plana, tres empresas, siete instituciones de investigación
y un centro tecnológico, correspondientes a 6 países
europeos (Irlanda, Holanda, Reino Unido, Dinamarca,
Francia y España), han participado en este proyecto
(OYSTERECOVER) con el objetivo global de establecer
las bases científicas y técnicas, los procedimientos y
estándares que permitan recuperar la producción de O.
edulis mediante el desarrollo de estrategias para superar
el principal obstáculo, la bonamiosis. Por cuestiones de
propiedad intelectual de los resultados del proyecto, no
se permite la divulgación de resultados detallados, por lo
que este resumen sólo incorpora ideas globales.
OYSTERECOVER ha contribuido a estandarizar y validar
los métodos de diagnóstico de Bonamia. Por primera
vez, cuatro métodos de diagnóstico (examen de
improntas de corazón, histología estándar, PCR e
hibridación in-situ hybridization) se evaluaron
simultáneamente por tres laboratorios diferentes. Se ha
concluido que se deben usar al menos 2 métodos para
una detección sensible y una determinación realista de la
prevalencia de la infección en una muestra. Los dos
métodos elegidos deberían incluir un método basado en
el examen microscópico y un método molecular, para
permitir la visualización del parásito e incrementar la
sensibilidad en infecciones ligeras, respectivamente.
Además, deberían establecerse protocolos fijos que
permitan obtener resultados reproducibles entre
laboratorios. Estas conclusiones se transmitirán a las
autoridades responsables del control zoosanitario por si
consideran oportuno asumirlas.
La búsqueda de posibles localizaciones de Bonamia en
el ecosistema, alternativas a la propia ostra, que
pudieran constituir un reservorio o vehículo de
transmisión del parásito, permitió constatar su presencia
en otros invertebrados, de forma que los resultados
concretos condujeron a establecer las siguientes
recomendaciones para el sector ostrícola:
CIMA Memoria 2013 39
1. Extremar la precaución con los movimientos y
transferencias de equipamiento, agua de mar e
invertebrados (incluyendo especies de moluscos sin
consideración oficial de hospedadores de Bonamia
ostreae) desde áreas afectadas a áreas libres del
parásito.
2. Filtrar el agua de mar que se bombea a los criaderos
de moluscos de áreas afectadas, para impedir la entrada
del parásito a las instalaciones y evitar que las larvas de
ostra se infecten.
3. Usar métodos de diagnóstico adecuados para detectar
infecciones iniciales o latentes antes de mover lotes de
ostras.
Varios estudios independientes previos a este proyecto
habían concluido que la única manera efectiva de
superar la bonamiosis es la producción de estirpes de
ostra resistentes a esta enfermedad. En consecuencia,
en OYSTERECOVER se investigó sobre las bases
fisiológicas y moleculares de la resistencia a Bonamia,
mediante enfoques experimentales proteómico y
genómico. Un primer resultado relevante fue el desarrollo
de una amplia base de datos con genes que se expresan
en los hemocitos de Ostrea edulis. A partir de esta lista
se seleccionaron genes candidatos a ser utilizados como
marcadores. Entre estos, se han identificado dos claros
marcadores moleculares con un alto potencial para ser
utilizados en programas de selección genética de
estirpes resistentes a la bonamiosis.
En el seno del proyecto se ha desarrollado una
herramienta de SIG que compila información
cartográfica, distribución espacial de biomasa y densidad
de ostras, batimetría, tipo de sustrato y prevalencia de
Bonamia de bancos y áreas de cultivo del litoral atlántico
europeo. Esta herramienta es muy útil para identificar
áreas de interés para su recuperación y para el
asesoramiento de la gestión de su explotación. En este
mismo contexto se ha realizado la caracterización
genética de 16 bancos de ostra del litoral atlántico
europeo. Con ello se ha evidenciado que las poblaciones
de un mismo país son más semejantes que entre países
diferentes, llegándose a identificar tres regiones
biogeográficas en el área estudiada, lo que es
congruente con la adaptación de las poblaciones de
ostras a condiciones ambientales concretas. Esta
información resulta fundamental para impedir la pérdida
de variabilidad genética así como el uso de las estirpes
geográficas adecuadas en planes de recuperación y
programas de selección de estirpes resistentes.
Se comparó el rendimiento en el engorde de diferentes
estirpes de ostras en diferentes regiones, lo que ha
permitido identificar las estirpes más adecuadas en cada
región, constatándose una variabilidad de rendimiento
(supervivencia, crecimiento, susceptibilidad a Bonamia)
tanto entre estirpes como dentro de cada estirpe.
El uso de colectores de semilla es una práctica extendida
entre los ostricultores. La eficiencia de diferentes tipos de
colectores se evaluó en el seno del proyecto y se han
elaborado recomendaciones sobre qué tipo, cómo deben
usarse y cuándo han de colocarse en diferentes
regiones.
40
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO
TÍTULO:
Caracterización de la situación sanitaria del litoral
español relativa a la infección por virus herpes en
moluscos bivalvos y evaluación del impacto de la
enfermedad.
INICIO: enero, 2011
FINALIZACIÓN: diciembre, 2013
ENTIDADES FINANCIADORAS:
Junta Asesora de Cultivos Marinos (JACUMAR)
Ministerio de Agricultura, Alimentación y Medio
Ambiente
Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro
Consellería do Medio Rural e do Mar
Xunta de Galicia
COORDINADORA DEL PROYECTO:
CETMAR: Abollo Rodríguez, E.
INVESTIGADORES:
CIMA: Villalba García, A.
INTECMAR: Darriba Couñago, S.; Pérez Bello, J.L.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
CIMA: Busto Loureiro, B.; Meléndez Ramos, M.I.; Penas
Pampín, E.
BECARIOS:
CIMA: González García, M.M.; Vilar Fernández, D.
RESUMEN
Desde el verano de 2008, la industria ostrícola francesa
está sufriendo mortandades masivas de semilla de ostra
rizada Crassostrea gigas, cuya causa más relevante es
una variante nueva de un virus que ya se conocía
previamente. Se trata del virus herpes de ostreidos tipo 1
y la nueva variante, muy virulenta, se bautizó como
microvariante (OsHV1-var). La Unión Europea
estableció un reglamento específico (175/2010) para
evitar la expansión de esta enfermedad emergente.
Dada la carencia de información en España sobre la
presencia y efecto de los virus herpes en las áreas de
cultivo de moluscos y bancos marisqueros y
considerando que la importación de C. gigas de áreas
costeras francesas afectadas por el OsHV-1 era una
práctica extendida en varias CCAA, con el consiguiente
riesgo de introducción del patógeno, se planteó este
proyecto, en el que se integraron equipos de
investigadores de Cataluña, Andalucía, Asturias, Ceuta y
Galicia, para caracterizar la situación sanitaria litoral de
las CC AA implicadas en lo referente a las infecciones
por virus herpes, tanto en poblaciones de C. gigas como
en otras especies de interés marisquero. Por parte de
Galicia participaron el CETMAR, el INTECMAR y el
CIMA.
Intercalibración del diagnóstico del OsHV-1 μvar.
El equipo del CIMA preparó el material necesario para un
ejercicio de intercalibración del diagnóstico del OsHV-1,
en el que participaron tres laboratorios, IRTA de Sant
Carles de la Ràpita (Cataluña), Centro Agua del Pino del
IFAPA (Andalucía) y CIMA (Galicia). Se acordó un
protocolo de diagnóstico común por PCR, que se
ajustaba al protocolo fijado en el Reglamento 175/2010
de la UE, usando la pareja de cebadores HERP F/R
diseñados en el seno del proyecto, dado que la
secuencia de los cebadores del reglamento no se ha
hecho pública. Los resultados mostraron mayor acuerdo
intralaboratorio que interlaboratorio, proponiéndose
cambios en el protocolo.
Incidencia de la infección por OsHV-1 μvar en el
engorde de ostra rizada en Galicia.
El enfoque experimental de este estudio implicó el
seguimiento del engorde de cohortes de semilla de ostra
rizada de varios orígenes mediante la estimación
periódica de su rendimiento, en concreto su crecimiento,
su supervivencia y la prevalencia de la infección por
OsHV1-var. En un primer experimento, el seguimiento
del engorde de semilla de ostra se realizó en sendas
bateas de dos polígonos de cultivo de la ría de Arousa, O
GROVE A y CAMBADOS D, utilizando 4 cohortes
distintas de semilla de ostra: un lote de ostra rizada
procedente de Francia, otro lote de ostra rizada
procedente de un criadero español, otro lote de ostra
rizada procedente de ese mismo criadero español, que
se había preengordado en un semillero flotante, y un lote
de ostra plana procedente de otro criadero español.
CIMA Memoria 2013 41
El crecimiento de los lotes de semilla de ostra rizada fue
similar independientemente del polígono de cultivo, salvo
en el caso del lote del criadero (Fig. 1A). La semilla de
ostra plana creció más lentamente que la ostra rizada.
En la semilla procedente de Francia la mortalidad fue
muy alta en los tres primeros meses en ambas bateas, O
Grove y Cambados, superando el 80%; a partir de ese
momento la tasa de mortalidad se redujo marcadamente
y la mortalidad acumulada se estabilizó en torno al 85%
(Fig. 1B). En el lote recogido en el criadero gallego, la
mortalidad fue extremadamente alta, registrándose el
97% tras 22 días desde su emplazamiento en batea. En
el caso de la semilla preengordada en el semillero
flotante la mortalidad registrada tras los primeros 22 días
fue del 26%, semejante a la de la semilla francesa en su
primer mes; sin embargo, la tasa de mortalidad fue
disminuyendo desde entonces y al cabo de 3 meses se
hizo insignificante, cuando la mortalidad acumulada
estaba justo por debajo del 50%. Probablemente esta
cohorte ya había sufrido mortalidad en el semillero y,
quizás, su mayor edad y tamaño contribuyó a una menor
mortalidad en la batea. En el caso de la ostra plana, la
mortalidad fue casi insignificante durante 9 meses, no
hubo mortalidad juvenil, pero hacia la mitad de la
primavera de 2013 la mortalidad se incrementó
notablemente, superándose el 80% de mortalidad
acumulada 6 meses después.
Fig. 1. A: Evolución mensual de la altura media (± error estándar) de cada lote de semilla de ostra rizada y un lote de ostra plana durante el engorde. B: Evolución mensual de la mortalidad acumulada (%) de cada lote de semilla durante el engorde.
M J J A S O N D J F M AM J J A S O0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
M J J A S O N D J F M AM J J A S O0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Francia (GROVE A) Francia (CAMBADOS D)
Semillero (GROVE A) Criadero (GROVE A) Ostra plana (GROVE A)
Mo
rta
lid
ad
ac
um
ula
da
(%
)
Alt
ura
me
dia
(±
EE
, m
m)
2012 2013 2012 2013
42
May Jun Jul Aug Sep Oct Nov Dec Jan Feb Mar Apr
0
20
40
60
80
100
2012 2013
Por
cent
aje
de c
asos
pos
itivo
s po
r P
CR
C. gigas Francia (Grove) C. gigas Francia (Cambados)
C. gigas semillero (Grove) C. gigas criadero (Grove)
Ostra plana (Grove)
Fig. 2. Evolución mensual del porcentaje de casos positivos por PCR para OsHV1-
var en cada lote de semilla de ostra rizada y en un lote de ostra plana
La prevalencia del OsHV1-µvar se analizó
mensualmente en todos los lotes de ostra mediante PCR
(Fig. 2). Todos los ejemplares de la muestra inicial de
semilla de Francia, antes de su emplazamiento en batea,
mostraron resultados negativos para OsHV-1 µvar; sin
embargo, en la muestra del 30 de mayo un 97% de los
individuos fueron positivos. ¿Qué pasó? El virus OsHV1-
µvar ya estaba presente en otras ostras de esta batea y,
muy probablemente, infectó a las ostras francesas poco
después de su introducción; ese pico inicial de casos
positivos por PCR coincidió con la elevada mortalidad
inicial. Desde entonces el porcentaje de casos positivos
disminuyó en ambas bateas. En la muestra inicial de la
semilla procedente del criadero gallego, antes de su
emplazamiento en batea, el porcentaje de casos
positivos de OsHV-1µvar fue del 10%, es decir que
algunas ostras ya venían infectadas del criadero;
transcurridos 22 días desde la introducción, el 100% de
las ostras eran positivas por PCR, lo que es coherente
con la mortalidad extremadamente alta en ese periodo
inicial. El porcentaje de casos positivos disminuyó en los
meses siguientes en los pocos supervivientes que
quedaron. En el lote preengordado en el semillero
flotante, el 96% de los individuos resultaron positivos
antes del emplazamiento en batea; en los meses
siguientes el porcentaje disminuyó. Por tanto, en cada
lote de semilla de ostra rizada, tras un máximo temprano
de prevalencia del virus, a medida que la semilla
infectada iba muriendo, la prevalencia disminuía entre
los supervivientes. En el caso de la ostra plana también
se detectaron casos positivos por PCR, incluso hubo
registros superiores al 60%, pero la mortalidad fue
insignificante en esos meses. La causa de la mortalidad
de ostra plana registrada en los últimos meses tuvo que
ser distinta a la infección vírica y probablemente se debió
a bonamiosis.
De este primer experimento se concluyó que todas las
cohortes de ostra rizada sufrieron mortalidad alta o muy
alta al inicio del engorde, que muy probablemente se
debió a la infección por OsHV1-var. Incluso la semilla
de ostra rizada libre de OsHV1 puede sufrir mortalidad
CIMA Memoria 2013 43
elevada si se engorda en un área afectada por OsHV1-
var pues adquiere pronto la infección. Parece existir un
umbral de tamaño de la ostra rizada, en torno a 30 mm,
por encima del cual la ostra tolera al virus, es decir que
por encima de ese tamaño el virus no es letal. La
detección frecuente de casos positivos de OsHV1-var
en ostras rizadas de tamaño grande sugiere que, aun
tolerando la infección, las ostras grandes podrían ser
focos de infección. La ostra plana es tolerante o
resistente al OsHV1-var, pero su papel como reservorio
no se debe desdeñar.
Un segundo experimento de seguimiento del engorde de
semilla de ostra rizada en la batea del polígono GROVE
A usada en el primer experimento y otra batea del
polígono REDONDELA A (ría de Vigo) mostró que la
semilla de ostra rizada, incluso estando libre de OsHV1
inicialmente, puede sufrir mortalidad elevada si se
engorda en un área afectada por OsHV1-var (GROVE
A), mientras que en ausencia de OsHV1-var
(REDONDELA A), la mortalidad de la semilla de ostra
rizada es insignificante. En este experimento se realizó
un seguimiento del engorde de semilla de mejillón en la
batea de GROVE A, registrándose una mortalidad
insignificante sin que se detectase ningún caso positivo
por OsHV1-var, lo que indica una alta resistencia del
mejillón a la infección por el virus.
Tras varios muestreos de dos bancos de ostra rizada
asilvestrada, localizados en la ría do Barqueiro y en la de
Viveiro, no se ha detectado en ellos ningún caso positivo
por OsHV1-microvar.
Las conclusiones de este estudio junto con la
información bibliográfica disponible permiten avanzar la
hipótesis de que el engorde de la ostra rizada podría
desarrollarse con supervivencia provechosa incluso en
polígonos en que el virus está presente: para ello sería
preciso que la ostra rizada hubiese superado el tamaño
umbral de susceptibilidad (aprox. 30 mm) al comienzo
del periodo en que la temperatura del agua supera 16º C.
El preengorde de la semilla hasta alcanzar dicho tamaño
umbral podría realizarse en una zona libre del virus (p.
ej. REDONDELA A) o bien en la propia zona afectada
durante un periodo de temperatura inferior a 16 ºC. La
hipótesis debe ser contrastada.
44
RESUMEN
Perkinsus olseni es un protozoo parásito de moluscos
con una amplia distribución mundial, al que se ha
responsabilizado de mortandades masivas de almejas en
varios países. Este parásito está muy extendido por los
bancos marisqueros de Galicia. La almeja japonesa
Ruditapes philippinarum es una de las especies
susceptibles. Esta almeja es un recurso marisquero
importante en varios continentes; los países con mayor
producción mundial son China, Corea del Sur, Japón,
Italia, España, Francia, Irlanda y Reino Unido. La
producción mundial de esta almeja aumenta año tras
año, habiendo pasado de 350.000 toneladas en 1990 a
3,5 millones en 2010, según las estadísticas de la FAO.
En Galicia la situación es similar, de forma que las
estadísticas del total de ventas anuales en lonja reflejan
un aumento progresivo desde las 285 toneladas en 1997
a las 3.200 en 2012 (www.pescadegalicia.com). P.
olseni es una amenaza para la producción mundial
de almeja japonesa, como lo prueba el declive de la
producción coreana y las mortalidades altas registradas
en países del sur de Europa asociadas a perkinsosis.
Como consecuencia, P. olseni se incluyó en la lista de
enfermedades de declaración obligatoria de la
Organización Mundial de Sanidad Animal. Teniendo en
cuenta que las almejas no crecen en ambientes cerrados
sino en medio abierto la lucha contra la enfermedad ha
de basarse en impedir que el parásito se propague a
zonas libres de la enfermedad y, en cuanto a las zonas
ya afectadas, la producción de estirpes de almejas
resistentes es una opción realista y prometedora para su
uso en parques de cultivo o la repoblación de bancos
marisqueros afectados. En este sentido, el
conocimiento de las bases moleculares de la
respuesta inmune del hospedador frente al parásito
puede ser muy útil para definir criterios de selección
de reproductores en programas de mejora genética
para aumentar la resistencia de las almejas a la
perkinsosis. En el sistema inmunitario de los moluscos
bivalvos se integran un componente celular, cuyo
componente principal son los hemocitos, y un
componente humoral, constituido básicamente por
moléculas presentes en el plasma de la hemolinfa.
El objetivo de este proyecto es analizar los efectos
de la infección por P. olseni sobre la expresión
proteica de los hemocitos y el plasma de la
hemolinfa de la almeja japonesa. Se han
implementado dos enfoques experimentales, con uno de
ellos se exploran los efectos de la etapa inicial de la
infección, a través de infección experimental en el
laboratorio, mientras que el otro aborda los efectos de la
infección crónica, utilizando almejas infectadas de forma
natural.
Infección experimental en laboratorio. En este
experimento se utilizaron almejas libres del parásito que
se expusieron individualmente durante 24 horas a una
suspensión de 106 zooesporas de P. olseni. Tras la
exposición, las almejas se mantuvieron durante 8 días en
tanques con agua de mar esterilizada, aireada y con
microalgas cultivadas como alimento. Almejas que no
fueron expuestas al parásito y se mantuvieron en las
mismas condiciones que las expuestas se utilizaron
como control. Se extrajo hemolinfa de las almejas y se
mezcló, resultando 2 réplicas de 20 almejas cada una
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO
TÍTULO:
Perkinsosis de la almeja: expresión proteínica en los
hemocitos y plasma del hospedador y en el parásito
durante su interacción.
INICIO: enero, 2012
FINALIZACIÓN: diciembre, 2014
ENTIDAD FINANCIADORA:
Ministerio de Economía y Competitividad.
Código: AGL2011-30449-C02-01
INVESTIGADOR PRINCIPAL:
Villalba García, A.
INVESTIGADORES/AS:
Cao Hermida, M.A.; Carballal Durán, M.J.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
CIMA: Buceta Barros, A.; Meléndez Ramos,
M.I.; Penas Pampín, E.
BECARIOS/AS:
Fernández Boo, S.; Pérez González, L.
CIMA Memoria 2013 45
por tratamiento. A continuación se separó la fracción
celular (hemocitos) del plasma de la hemolinfa.
Infección en el medio natural. En este caso se
utilizaron almejas de un banco afectado por el parásito.
Tras extraer la hemolinfa de cada almeja, se separó
individualmente la fracción celular (hemocitos) del
plasma. Cada almeja se diagnosticó y se seleccionaron
42 almejas con infección intensa por P. olseni y otras 42
almejas no infectadas. Las muestras se agruparon,
resultando 3 réplicas de 14 almejas cada una por
tratamiento.
En ambos enfoques experimentales, las proteínas
presentes en las muestras de hemocitos y en las de
plasma se separaron mediante electroforesis
bidimensional, produciendo 3 geles de cada réplica. Las
marcas proteicas presentes en los geles resultantes de
la separación se analizaron con el paquete informático
PD Quest 8.4.0. Más de 500 marcas proteicas se
distinguieron en los geles correspondientes a hemocitos,
con un promedio de 570 marcas por gel, mientras que el
número fue inferior en los geles de plasma, con un
promedio de 281 marcas por gel. Considerando todas las
réplicas de cada tratamiento, se elaboró un mapa
sintético de referencia para cada tratamiento
incorporando sólo las marcas proteicas presentes en
todas las réplicas. Estos mapas de referencia incluían en
torno al 40% del número total de marcas proteicas
diferentes observadas en las réplicas de cada
tratamiento. La comparación de los mapas sintéticos
entre tratamientos, siguiendo criterios conservadores,
permitió identificar de forma inequívoca marcas proteicas
comunes a tratamientos así como marcas proteicas
exclusivas de cada tratamiento (Tabla 1). Los efectos del
patógeno en la expresión proteica en el inicio de la
infección fueron diferentes con respecto a infecciones
crónicas. Así el promedio del número de marcas
proteicas en los geles de hemocitos creció por
exposición al parásito en el laboratorio con respecto al
control pero disminuyó en las infecciones crónicas
intensas (Tabla 1). Las mismas tendencias se
observaron en el caso de las proteínas plasmáticas. La
comparación entre tratamientos mostró que, en el caso
de la exposición en el laboratorio, el número de marcas
proteicas comunes a almejas expuestas y no expuestas
fue alto mientras que el número de marcas exclusivas de
cada tratamiento fue muy bajo, tanto en hemocitos como
en plasma. En el caso de la infección natural, el número
de marcas exclusivas de cada tratamiento fue incluso
menor, hasta el punto de que no se encontraron marcas
proteicas exclusivas de tratamiento en el plasma (Tabla
1). Estos resultados sugieren que con la exposición al
parásito se activa la síntesis de un número notable
de proteínas mientras que cuando la infección
progresa y alcanza niveles intensos, se inhibe la
síntesis de un número elevado de proteínas. Tras la
comparación entre tratamientos, marcas proteicas
comunes y exclusivas se han separado de los geles y
están siendo analizadas para identificar la proteína
correspondiente a cada marca y conocer su función.
Una vez identificadas marcas proteicas comunes y
exclusivas de tratamientos, las marcas proteicas
exclusivas se separaron de los geles y se enviaron al
Laboratorio de Proteómica del Complejo Hospitalario
Universitario de Santiago de Compostela, para identificar
la proteína correspondiente a cada marca. En dicho
Laboratorio de Proteómica tuvieron dificultades en la
secuenciación peptídica, lo que se achacó a problemas
derivados de la tinción con plata realizada sobre los
geles para la identificación de marcas proteicas. Por ello
se decidió cambiar de tinción y se repitieron los geles,
que en esta ocasión se tiñeron con Sypro ruby. Las
marcas proteicas exclusivas de tratamientos que ya se
habían seleccionado previamente se separaron de los
geles nuevos y se enviaron al Laboratorio de Proteómica
mencionado. Se enviaron 11 marcas proteicas
correspondientes a muestras de hemocitos y 25 marcas
proteicas correspondientes a muestras de plasma. Los
péptidos extraídos de las marcas proteicas se analizaron
por MALDI-TOF/MS, MALDI-TOF/TOF y secuenciación
“de novo”. La información de huella peptídica y del
espectro de fragmentación peptídica de cada marca se
combinaron mediante GPS Explorer Software v3.6,
usando Mascot software v2.1. para identificar proteínas
frente a la base de datos de Mollusca (NCBInr
DATABASE).
Se obtuvieron secuencias peptídicas para las 11 marcas
proteicas de hemocitos, de las que 1 correspondía a
almejas no infectadas recogidas en el campo, 2 a
almejas muy infectadas en el campo, 5 a almejas control
de la exposición en laboratorio y 3 a almejas expuestas
al parásito en laboratorio. En el caso de las marcas
proteicas de plasma, se obtuvieron secuencias
peptídicas para 20 de las 25 marcas, 6 correspondientes
a almejas expuestas al parásito en laboratorio y 14 a
almejas control.
46
Tabla 1. Resumen de los resultados del análisis de las marcas proteicas de cada tratamiento y de la comparación de almejas expuestas al parásito en laboratorio frente a almejas control y almejas con infección natural intensa frente a almejas no infectadas
Enfoque experimental
Fracción de la hemolinfa
Tratamiento
Promedio del número de marcas proteicas
Número de marcas
proteicas en los
mapas de referencia
Comparación de infectadas frente a control
Marcas proteicas
comunes a ambos
tratamientos
Marcas proteicas
exclusivas de cada
tratamiento
Exposición en laboratorio
Hemocitos
Control 561 248
153
5
Expuestas 596 252 3
Plasma
Control 418 234
105
15
Expuestas 360 143 10
Infección en el medio natural
Hemocitos
Control 592 278
176
1
Infectadas 529 241 2
Plasma
Control 189 54
46
0
Infectadas 160 69 0
CIMA Memoria 2013 47
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO
TÍTULO:
Identificación de marcadores proteicos como indicadores
de contaminación ambiental en la almeja fina (Ruditapes
decussatus) y en el berberecho (Cerastoderma edule).
INICIO: 2009
FINALIZACIÓN: 2012 (concedida prórroga hasta abril
2013)
ENTIDAD FINANCIADORA:
Consellería de Economía e Industria. PGIDIT. Programa
sectorial del Medio Marino, Xunta de Galicia.
Código: 09MMA008501PR
INVESTIGADORA PRINCIPAL
Cao Hermida, M.A.
INVESTIGADORES:
Fernández Boo, S.; Hermida Prieto, M.; Villalba
Garcia, A.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
Gregorio Chenlo, M.V.; Meléndez Ramos, I.; Penas
Pampín, E.
RESUMEN
Una gran cantidad de contaminantes acceden al medio
marino de forma directa o indirecta, pero sólo un número
reducido de ellos está siendo evaluado de forma
sistemática. En este caso se encuentran, desde hace
décadas, los contaminantes persistentes, como metales
pesados, hidrocarburos aromáticos policíclicos
(PAHs/HAPs) y compuestos organoclorados (OCs), cuya
distribución y tendencias temporales están siendo objeto
de estudio a través de programas internacionales de
seguimiento y vigilancia ambiental en el ámbito atlántico
(OSPAR).
Actualmente, la contaminación por metales pesados es
una de las mayores preocupaciones que afectan a la
sociedad. Los moluscos, como organismos filtradores,
tienden a acumular metales en sus órganos, y este
hecho puede suponer un serio riesgo para el
consumidor. Fruto de esta preocupación sanitaria, se
enmarca la normativa recogida en la Reglamentación
Técnico-Sanitaria referida a la producción y
comercialización de moluscos bivalvos vivos (Real
Decreto 571/1999), y que ha de ser aplicada en todo tipo
de cultivos marinos. También, la Unión Europea en el
Reglamento CE nº 466/2001 recoge los contenidos
máximos que pueden presentar algunos contaminantes
en los alimentos. Todo ello determina que sea necesario
realizar un control y protección, tanto de la calidad del
agua donde habitan como del producto final obtenido,
siguiendo siempre las recomendaciones establecidas por
la legislación vigente.
El principal objetivo de este proyecto es la evaluación
toxicoproteómica de la almeja (Ruditapes decussatus) y
el berberecho (Cerastoderma edule) frente a diversos
contaminantes presentes en el medio marino. Para ello
se estudiará el análisis de la expresión de las proteínas
presentes en el hepatopáncreas y músculo aductor de
las especies Ruditapes decussatus y Cerastoderma
edule lo que nos permitirá entender las diferencias en la
susceptibilidad a contaminantes observadas en
diferentes órganos de la almeja fina y del berberecho.
Además, los cambios en la expresión de proteínas
implicadas en mecanismos de defensa de la almeja y del
berberecho frente a contaminantes, nos ayudará a
monitorizar el estado de salud de los moluscos,
facilitando el control y la protección tanto de la calidad
del agua donde habitan como del producto final
obtenido, permitiendo la evaluación de la calidad
medioambiental. El estudio de los patrones de expresión
proteica mediante morfometría geométrica en
poblaciones control y poblaciones contaminadas,
permitirá desarrollar un método diagnóstico para
clasificar muestras desconocidas como contaminadas o
no. El método también permite la identificación de las
proteínas que contribuyen más a los cambios detectados
entre los grupos. Estas proteínas, identificadas como
asociadas a la contaminación, pueden ser empleadas
como biomarcadores, siendo un criterio de uso potencial
en programas de toxicología ambiental.
48
Análisis histológico y toxicológico
Las muestras recogidas en las tres zonas de estudio del
litoral gallego: Lira-ría de Muros (zona libre de
contaminación), Sarrido-ría de Arousa y Placeres-ría de
Pontevedra (zonas contaminadas) reveló la presencia de
patógenos en almejas y berberechos de las tres zonas
de estudio.
Con respecto al análisis toxicológico, se puede constatar
que los resultados no eran los esperados, siendo
además bastante heterogéneos. Respecto a los
organoclorados, se observó que en general los valores
de Placeres fueron superiores en ambas especies a la
zona de Lira y Sarrido. En metales pesados, la diferencia
en la media fue significativa para varios de ellos en las
dos especies, no obstante no existió un patrón común
para ningún metal en concreto, ni para ninguna zona. En
el caso de organoclorados, en casi todos los casos las
ANOVA fueron significativas y en la comparación por
pares Placeres resultó ser significativamente diferente a
Lira y Sarrido.
Análisis comparativo y búsqueda de proteínas
específicas de cada zona para una misma especie y
órgano
Se analizaron 216 geles correspondientes a 3 réplicas de
6 individuos para cada órgano, molusco y zona. La Tabla
1 representa los resultados obtenidos en dicho análisis
empleando el programa PDQuest 7.4.0.
Tabla 1.- Análisis de los “spots” en los geles, incluyendo el número de spots comunes y exclusivos a cada zona, molusco y
órgano y el número de spots enviados a secuenciar.
“Spots” comunes “Spots” exclusivos “Spots” enviados a secuenciar
Lira almeja hepatopáncreas 254 36 4
Placeres almeja
hepatopáncreas 218 21 3
Sarrido almeja
hepatopáncreas 266 33 4
Almeja hepatopáncreas 108 3
Lira almeja músculo 123 12 2
Placeres almeja músculo 120 6 2
Sarrido almeja músculo 155 26 3
Almeja músculo 69 4
Lira berberecho
hepatopáncreas 135 13 2
Placeres berberecho
hepatopáncreas 116 3 3
Sarrido berberecho
hepatopáncreas 129 18 3
Berberecho hepatopáncreas 35 4
Lira berberecho músculo 72 8 2
Placeres berberecho músculo 52 1 1
Sarrido berberecho músculo 74 5 2
Berberecho músculo 30 2
Análisis estadístico y morfométrico de la expresión
proteica
Análisis cualitativo
Los test chi-cuadrado efectuados en todas las matrices
fueron no significativos en todos los casos. Esto es
indicativo de que a pesar de que existen diferencias en
los spots identificados en cada población, estas
diferencias no son tan patentes como para resultar
significativas, seguramente porque el número de spots
comunes a todas ellas es importante.
CIMA Memoria 2013 49
Análisis cuantitativo
En el caso de las muestras de hepatopáncreas de
almeja, se identificaron 4 spots con una capacidad de
discriminación corregida del 77,8%. En las
comparaciones de intensidades mediante el “fold
change” el número de spots “downregulated” fue muy
numeroso, existiendo sin embargo un spot con una
diferenciación muy superior y que fue coincidente en
ambas poblaciones. Asimismo, el único spot
“upregulated” fue también coincidente entre ambas
poblaciones. En el caso del análisis discriminante en
músculo de almeja las diferencias fueron incluso
mayores, ya que con cuatro, la clasificación correcta
llegó casi al 100%. El análisis “fold change” no tuvo
resultados similares al caso anterior, siendo los spots
seleccionados todos “upregulated” y en un número e
intensidad bastante inferior, aunque de nuevo
manteniendo coherencia entre ambas poblaciones.
El análisis discriminante en las muestras de berberecho
dio como resultado la selección de 4 spots en ambos
casos, capaces de discriminar cerca del 90% de los
casos, tanto en hepatopáncreas como en músculo. En la
comparación de los geles de hepatopáncreas mediante
el “fold change” la cantidad de spots varió mucho según
las muestras comparadas. Por ejemplo, el número de
spots “upregulated” en la comparación entre Lira y
Placeres fue muy elevado. Sin embargo, sí que se
mantuvo cierta coherencia en los spots seleccionados en
ambas comparativas. Por último, las variaciones en
intensidad en los geles de músculo fueron muy
pequeñas.
Análisis morfológico
El estudio de la forma, que es el objetivo de la
morfometría geométrica, se adapta en este caso para
poder evaluar las diferencias en la posición de los
distintos spots en las muestras estudiadas. En el caso de
las muestras de hepatopáncreas de almeja se
seleccionaron 8 Relative warps para explicar un 80% de
la varianza. Con la representación de los dos primeros
se pudo apreciar una clara separación de las muestras
de las tres procedencias. En el caso de músculo de
almeja no hubo una diferenciación tan clara ya que a
pesar de que el número de Relative warps fue menor no
mostraron un patrón claro en su representación.
El análisis de las muestras de hepatopáncreas de
berberecho, a pesar de no ser tan claro como en el caso
de almeja, sí parece mostrar una separación de las
muestras de Lira respecto a las otras dos mediante la
observación de los valores del Relative Warp 2, que
acumuló un 20% de la varianza. Pudo observarse que la
diferenciación en este RW se debe principalmente a dos
“landmarks”, lo que posibilitó la identificación del “spot”
correspondiente. Respecto a las muestras de músculo
de berberecho muestran una configuración parecida al
caso de hepatopáncreas, en el sentido que el RW1
permite diferenciar las muestras de Lira respecto las
otras dos.
Identificación proteica. Los spots con mayor
intensidad y los más interesantes procedentes de cada
uno de los distintos análisis fueron enviados a un servicio
externo de secuenciación obteniéndose la identificación
de las siguientes proteínas:
ALMEJA HEPATOPÁNCREAS
LIRA EXCLUSIVOS
PLACERES EXCLUSIVOS
SARRIDO EXCLUSIVOS
COMUNES DOWN
REGULADAS UP
REGULADAS MORFOMETRIA
Synaptotagmin-like protein 5
Dynein beta chain, ciliary
Betainehomocysteine Smethyltransferase 2
Beta-ureidopropionase
Betaine-homocysteine
S-methyltransferase
2
Cathepsin L Prohormone convertase 1
Omega-cristallin
Heat shock protein 22 isoform 2
Neutral ceramidase B
A-kinase anchor protein 9
Ferritin subunit
G protein B subunit
Glutamate receptor-
interacting protein1
50
ALMEJA MÚSCULO
LIRA EXCLUSIVOS PLACERES
EXCLUSIVOS SARRIDO
EXCLUSIVOS COMUNES UP REGULADAS
Arginine kinase Phosphoglucomutase-
1
Dihydrolipoyl dehydrogenase,
mitochondrial
26S proteasome non-ATPase regulatory
subunit 2 Calponin-2
V-type proton ATPase subunit B
Tetratricopeptide repeat protein 26
E3 ubiquitin-protein ligase HUWE1
Actin
G protein B subunit Actin
Calponin-2
BERBERECHO HEPATOPÁNCREAS
LIRA EXCLUSIVOS PLACERES
EXCLUSIVOS SARRIDO
EXCLUSIVOS COMUNES UP REGULADAS
Retinal dehydrogenase 1
Vesicular glutamate transporter 2
Hypothetical protein CGI_10027319
Cadherin EGF LAG seven-pass G-type
receptor 1
N(4)-(Beta-N-acetylglucosaminyl)-L-
asparaginase
Actin Putative C1q domain
containing protein MgC1q12
DnaJ-like protein subfamily C member
27
Heterogeneous nuclear
ribonucleoprotein K
Collagen alpha-5(VI) chain
Actin Isocitrate
dehydrogenase [NADP], mitochondrial
Actin
BERBERECHO MÚSCULO
LIRA EXCLUSIVOS
PLACERES EXCLUSIVOS
SARRIDO EXCLUSIVOS
COMUNES DOWN
REGULADAS UP
REGULADAS MORFOMETRIA
Succinate dehydrogenase
[ubiquinone] flavoprotein subunit B,
mitochondrial
Prohormone convertase 1
Complement C1q-like protein
4
Heat shock protein 70
B2 Vigilin
Heat shock protein 70 B2
Fibropellin-1
Malate dehydrogenase,
cytoplasmic, partial
Uncharacterized
protein y4xO Vigilin
Heterogeneous nuclear
ribonucleoprotein A2-like protein 1
CIMA Memoria 2013 51
ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO
TÍTULO:
Estudio de la marteiliosis que afecta a los berberechos
Cerastoderma edule de Galicia.
INICIO: mayo, 2013
FINALIZACIÓN: diciembre, 2014
ENTIDAD FINANCIADORA:
Consellería do Medio Rural e do Mar
Código: PGIDIT-CIMA 13/03
INVESTIGADORA PRINCIPAL:
Carballal Durán, M.J.
INVESTIGADORES/AS:
CIMA: Iglesias Estepa, D.; No Couto, E.; Villalba
García, A.
CETMAR: Abollo Rodríguez, E.
Cofradía de Pescadores “San Antonio” de
Cambados: Mariño Balsa, J.C.
Delegación de Carril de la Consellería do Medio
Rural e do Mar: Fernández Barreiro, J.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
CIMA: Meléndez Ramos, I.; Penas Pampín, E.
RESUMEN
La marteiliosis es una enfermedad infecciosa originada
por parásitos del género Marteilia. Este género se
incluye en la orden Paramyxidea, dentro del filo
Cercozoa. En la actualidad, en los Paramyxidae se
incluyen dos géneros que afectan a los moluscos
bivalvos de interés comercial, el género Marteilia y el
género Marteilioides. Los parásitos pertenecientes al
género Marteilia afectan a moluscos bivalvos de gran
interés económico para la acuicultura europea, como son
la ostra plana, Ostrea edulis, y los mejillones Mytilus
galloprovinciallis y Mytilus edulis. La especie Marteilia
refringens es la causante de la enfermedad de los Abers,
que causó importantes mortalidades desde su
descubrimiento en 1968 en Ostrea edulis en Europa y
Marteilia sydneyi es responsable de la enfermedad
conocida como QX, causante de altas mortalidades en la
ostra Saccostrea glomerata en Australia.
La marteiliosis en Cerastoderma edule se detectó por
primera vez en Francia en 1975 (Comps et al., 1975;
Rev. Trav. Inst. Peches Marit., 4:317-326). En España,
se detectó en berberechos del Delta del Ebro, con un
40% de prevalencia, asociada a un episodio de elevada
mortalidad en 2008 (Carrasco et al., 2011; Aquaculture,
321: 197-202). En Galicia se detectó por primera vez en
febrero de 2012, en berberechos C. edule de Lombos do
Ulla asociada a una mortalidad masiva del huésped. En
los meses siguientes, la enfermedad se detectó en
berberechos de O Sarrido (Cambados) y de otros bancos
de la ría de Arousa. Las intensas mortalidades causadas
por este parasito llevaron a la práctica desaparición de
este recurso en la ría de Arousa.
En esta acción de investigación se pretende profundizar
en el estudio de la marteiliosis que afecta al berberecho
C. edule en Galicia con el fin de adquirir un nivel de
conocimientos que facilite la toma de decisiones en la
gestión del recurso y, si es el caso, el desarrollo de
estrategias de lucha que conduzcan a la mitigación de
sus efectos. Durante el año 2013 se llevaron a cabo
actividades dirigidas a la consecución de los siguientes
objetivos:
1. Desarrollar un programa activo de vigilancia de la
enfermedad en poblaciones de berberecho que aún
no están afectadas, con el fin de conocer el status
sanitario de las poblaciones en todo momento.
La marteiliosis afectó en 2012 a berberechos de la ría de
Arousa causando una gran mortalidad. Ante el riesgo de
propagación de esta enfermedad a las rías limítrofes, se
desarrolló un programa de vigilancia centrado en el
análisis de berberechos de bancos de las rías de
Pontevedra y Noia. Con este fin, se recogieron con
periodicidad bimestral muestras de 30 individuos en los
bancos de Placeres (ría de Pontevedra) y Testal (Noia).
Se hicieron cortes histológicos de los berberechos que
52
se analizaron con microscopio óptico. El análisis de las
muestras recogidas a lo largo de 2013 indicó que los
berberechos de Noia no estaban afectados por Marteilia.
En el caso de la ría de Pontevedra si se diagnosticaron
berberechos afectados por la marteiliosis. Los primeros
casos se detectaron en el mes de febrero con una baja
prevalencia (6,7%). En el mes de julio se detectó de
nuevo un caso (3,3%), incrementándose la prevalencia
en los meses siguientes hasta alcanzar en el mes de
diciembre el 63%. Los berberechos de los bancos de
Campelo, Combarro y Tambo fueron analizados en el
mes de diciembre, resultando que los 3 bancos estaban
afectados por la marteiliosis.
2. Monitorizar la evolución de la prevalencia de la
enfermedad en los bancos de Cerastoderma edule
afectados, especialmente en lo que se refiere a los
nuevos individuos que se incorporen a la población a
través del reclutamiento.
En el mes de junio de 2013 se detecta una nueva
cohorte de berberechos en los bancos de Sarrido y
Lombos do Ulla. Con el fin de analizar la evolución del
estado de salud de estas poblaciones, cada mes se
recogieron 30 berberechos en cada uno de estos
bancos. De cada individuo se realizó un corte histológico
que se examinó con microscopio óptico. Durante 2013
no se detectó la enfermedad en el banco de Sarrido. En
las muestras de Lombos do Ulla analizadas hasta el
momento, no se detectó la enfermedad.
3. Analizar aspectos relacionados con la transmisión
de la enfermedad, tanto en el medio natural como en
laboratorio.
El estudio de la posible transmisión de la marteiliosis se
abordó mediante experimentos en el medio natural y en
el laboratorio.
Experimento de transmisión en el medio natural
Se introdujeron berberechos procedentes del banco de
Testal (Noia), libre de marteiliosis, en el banco
intermareal de Sarrido y en el banco submareal de
Lombos do Ulla, ambos afectados por la enfermedad
durante 2012. Con el fin de analizar el posible efecto
estacional, se introdujeron berberechos en cuatro
momentos del año coincidiendo con el invierno, con la
primavera, con el verano y con el otoño. En cada una de
las introducciones se colocaron 5 cajas de 100
berberechos, previamente marcados, en el banco de
Sarrido, y 6 cajas de 100 berberechos marcados en
Lombos do Ulla. En el intermareal se utilizaron cajas de
paredes acanaladas de 0,20 m2 cada una, que se
enterraron en el substrato. En el submareal las cajas
tenían paredes cerradas y se dispusieron en una
estructura metálica que se depositaba sobre el fondo.
Las cajas estaban recubiertas con malla plástica con el
fin de evitar la pérdida de los berberechos y su muerte
por depredación. En cada caja se cerró una zona de
0,03 m2 empleando una malla, en esta zona se colocaron
15 berberechos para el estudio de la mortalidad. Cada
mes se tomó una muestra de 25-30 individuos (5 o 6 por
caja) para el estudio histopatológico, se determinó la
mortalidad, y los individuos que murieron en el recinto
cerrado se sustituyeron por otros de la caja. En cada
emplazamiento se colocó una sonda registradora en
continuo de la temperatura y salinidad.
En el banco de Sarrido, el seguimiento de la introducción
de invierno remató en el mes de agosto y el de
primavera en septiembre. La observación de las
muestras al microscopio indicó que los berberechos no
estaban afectados por la marteiliosis pero si por otras
patologías. Los parásitos y enfermedades más
importantes fueron las siguientes: neoplasia diseminada,
granulomatosis, bolsas bacterianas, esporoquistes y
metacercarias de trematodos, y haplosporidios. La
prevalencia de bolsas bacterianas fue alta pero la
intensidad de la infección fue baja por lo que no debieron
causar importantes problemas patológicos. En la gráfica
se muestran las prevalencias de las principales
patologías y la mortalidad finita mensual. La prevalencia
de neoplasia se incrementó progresivamente y alcanza
el máximo valor en mayo. Este aumento de la neoplasia
parece estar relacionado con la mortalidad, ya que el
mes siguiente de la máxima subida de la prevalencia de
neoplasia la mortalidad alcanza el máximo valor, y
después decrece al bajar la neoplasia, probablemente
por muerte de los individuos muy afectados por la
enfermedad. En la introducción de primavera los
resultados fueron similares, la prevalencia de la
neoplasia se incrementó progresivamente, alcanzó un
máximo valor en julio y descendió en agosto,
probablemente por la muerte de los individuos muy
afectados. La mortalidad se incrementó con el aumento
de la neoplasia y alcanzó el máximo valor en agosto el
mes siguiente de la máxima prevalencia de la neoplasia.
Por otra parte, en el mes de julio se detecta que un 20%
de los berberechos tenían haplosporidios, y en un 12%
de estos las infecciones eran intensas por lo que
probablemente también causaron cierta mortalidad.
CIMA Memoria 2013 53
En el banco de Lombos do Ulla, las introducciones de
berberechos de Noia en las cajas no terminaron en el
año 2013, ya que la mortalidad finita mensual fue muy
baja (siempre por debajo del 20%). La observación de
las muestras indicó que los berberechos no estaban
afectados por marteiliosis y si por otras patologías
similares a las detectadas en el banco de O Sarrido,
detectándose neoplasia diseminada pero con
prevalencias menores.
54
Experimento de transmisión en el laboratorio
Se realizó un experimento de transmisión por
cohabitación. Para ello, en vasos de vidrio y en circuito
abierto en el laboratorio, se colocaron berberechos de un
banco no afectado por marteiliosis (Noia) junto con
berberechos de otro banco muy afectado por esta
enfermedad (O Sarrido). En cada uno de los 3 vasos de
transmisión se pusieron 10 berberechos de Noia y 10
de Sarrido. En cada uno de los 3 vasos control se
pusieron 20 berberechos de Noia. Al final del
experimento se analizaron los cortes histológicos de los
berberechos. El análisis de los resultados indicó que no
se transmitió la marteiliosis entre berberechos
Cerastoderma edule. Estos resultados sugieren que la
transmisión no se produce de forma directa entre
berberechos, y confirmarían lo descrito para Marteilia
refringens en otros bivalvos. Son necesarios más
ensayos para confirmar esta hipótesis ya que la duración
del experimento fue corta (65 días) y es posible que se
necesite más tiempo para transmitir la enfermedad.
4. Evaluar la susceptibilidad de otra especie de
berberecho, el birollo C. glaucum, a las infecciones
por Marteilia sp.
Durante el año 2013 se tomaron muestras mensuales de
25 berberechos Cerastoderma glaucum adultos en el
banco de Sarrido. Los berberechos se procesaron por
técnicas histológicas. El análisis de los cortes
histológicos mostró que los berberechos no estaban
afectados por marteiliosis. Estos resultados sugieren que
C. glaucum es resistente a esta enfermedad ya que
convivieron en el medio con una población de C. edule
muy infectada con Marteilia.
5. Caracterizar el nivel ultraestructural y molecular
de la especie de Marteilia que afecta a los
berberechos gallegos.
La identificación de la especie que causa la marteiliosis
en los berberechos de Galicia se realizó mediante el
estudio de las características ultraestructurales y
mediante análisis moleculares. El examen de la
ultraestructura permitió incluirla en el género Marteilia.
Las características morfológicas mostraron proximidad,
pero no completa identidad, con la especie Marteilia
cochillia que fue recientemente descrita por Carrasco et
al. (2013) en berberechos del Delta del Ebro afectados
por marteiliosis. Son necesarios más estudios para saber
si estas diferencias son debidas a la variabilidad
intraespecífica o a un examen impreciso. Con todo, el
análisis molecular indicó que el parásito que causó la
marteiliosis en berberechos de Galicia es M. cochillia.
Este parásito parece tener una alta especificidad, ya que
no se detectó ni en almejas R. philippinarum ni en
almejas Venerupis corrugata de Lombos do Ulla,
recogidas cuando esta enfermedad era muy intensa en
los berberechos. Tampoco se detectó en mejillones
Mytilus galloprovincialis recogidos de bateas próximas a
bancos muy afectados, aunque si se detectó Marteilia
refringens en alguno de ellos. Todos estos estudios
fueron recogidos en la siguiente publicación:
Collapse of the cockle Cerastoderma edule fishery in ría
de Arousa (Galicia NW Spain) associated with the
protistan parasite Marteilia cochillia. Vilalba A., Iglesias
D., Ramilo A., Darriba S., Parada J. M., No E., Abollo E.,
Molares, J., Carballal M. J. Diseases of Aquatic
Organisms (en prensa).
CIMA Memoria 2013 55
RESUMEN
Desde finales de los años 70, las poblaciones naturales y
cultivadas de ostra plana europea, Ostrea edulis, están
siendo afectadas por una pandemia causada por el
protozoo Bonamia ostreae. Esta pandemia provoca
mortalidades masivas a lo largo de todo el litoral
Atlántico europeo. Una de las formas de lucha más
eficaces contra este tipo de pandemias es la obtención
de estirpes resistentes o tolerantes a la enfermedad,
mediante programas de cría selectiva. En el año 2000 se
inició en el Centro de Investigacións Mariñas-CIMA un
programa de selección de ostras resistentes con el
objetivo de obtener variedades de ostra plana más
tolerantes a la bonamiosis en Galicia. El programa se
inició con un proyecto preliminar consistente en la
evaluación de varias familias de ostra plana obtenidas en
criadero a partir de reproductores procedentes de
diferentes poblaciones naturales de la costa europea. En
una segunda fase del programa, realizada durante el
trienio 2004-2007, se inició el programa de cría selectiva
propiamente dicho. En el año 2008, cando iniciamos la
tercera fase de desarrollo del mismo, comenzaron a
acontecer mortalidades masivas y recurrentes, al inicio
de la fase de cultivo larvario, ocasionadas por
malformaciones en el aparato locomotor (el velo) de las
larvas, que impedía la correcta natación y alimentación
de las mismas. Los resultados de los
análisis preliminares realizados en estas larvas nos
hicieron sospechar de un posible origen vírico de estas
mortalidades. Más tarde, en la fase de pre-engorde en
batea, la semilla cultivada volvió a sufrir mortalidades
masivas, que en este caso sí fueron causadas por un
virus tipo herpes, diferente al OsHV descrito para la
especie Crassostrea gigas. Esto nos hizo pensar que las
masivas mortalidades acaecidas al inicio del cultivo
larvario pudiesen también ser debidas al mismo tipo de
virus.
Esta acción de investigación tiene como objetivo
principal el reinicio del programa de selección de ostras
resistentes a la bonamiosis en Galicia, a partir de varias
poblaciones naturales (Ortigueira, Noia y Pontevedra) y
de una población semi-natural (IGAFA), haciendo
especial hincapié en el estudio de las malformaciones en
el velo de las larvas, en el caso de que éstas vuelvan
acontecer. Durante el año 2013 se llevaron a cabo las
fases de: acondicionamiento de los reproductores,
obtención de las puestas, cultivo larvario y cultivo de la
semilla. De los resultados obtenidos podemos extraer las
siguientes conclusiones:
1. Las malformaciones del velo afectan, con mayor o
menor intensidad, a las larvas de todos los stocks de
ostra utilizados en este experimento.
2. En el caso de O. edulis, estas malformaciones
afectan, por término medio, al 25% de las larvas emitidas
en cada puesta, aunque en ciertos casos este porcentaje
puede superar el 50%
3. Las malformaciones también se detectaron en las
larvas de la ostra plana de Provenza, Ostrea stentina,
aunque en porcentajes significativamente menores que
ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO
TÍTULO:
Nuevo programa de selección de ostra plana, Ostrea
edulis, resistente a la bonamiosis, con especial énfasis
en el estudio de las mortandades, de posible origen
vírica, en las fases de cultivo larvario y preengorde de la
semilla.
(NOVOSOR).
INICIO: junio, 2012
FINALIZACIÓN: diciembre, 2014
ENTIDAD FINANCIADORA:
Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro.
Consellería do Medio Rural e do Mar. Xunta de Galicia
INVESTIGADOR PRINCIPAL:
Fuentes González, J.M.
INVESTIGADOR:
Villalba García, A.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
Giraldez Rivero, R.; Gregorio Chenlo, M.V.
56
las de los stocks de O. edulis. Esta especie de ostra
plana apareció de manera accidental entre los
reproductores procedentes de Ortigueira.
4. A pesar de la presencia, en las células de diversos
tejidos de larvas con velos malformados, de síntomas
microscópicos compatibles con una infección vírica, no
fuimos capaces de encontrar partículas virales en los
núcleos de estas células cuando fueron examinadas
mediante el microscopio electrónico de transmisión.
5. Sí se detectó de forma inequívoca una infección viral
de tipo herpesvirus en semilla de un lote procedente de
una puesta del stock de Noia, lo cual indica la presencia
de este tipo de virus en nuestras instalaciones.
6. Durante las fases de acondicionamiento de los
reproductores y obtención de las puestas, el stock que
presentó un peor comportamiento (mayor mortalidad) fue
el stock semi-salvaje del IGAFA. El mejor resultado se
obtuvo con el stock salvaje procedente de la ría
de Ortigueira que fue lo que presentó una menor
mortalidad. Los otros dos stocks salvajes de las rías de
Noia y Pontevedra presentaron mortalidades
intermedias.
7. El número medio de larvas emitidas por puesta fue
semejante en los cuatro stocks de O. edulis es
significativamente menor en el caso de O. stentina.
8. El rendimiento medio de los cultivos de todos los
stocks utilizados, desde la obtención de las puestas
hasta el inicio de la fase de pre-engorde en batea, fue
bastante bajo (7,1%). Este rendimiento fue aún menor
(1,7%) si sólo incluimos en los cálculos los cuatro stocks
de O. edulis.
9. El stock O. stentina, mostró ser significativamente más
robusto (menos mortalidad en casi todas las fases del
cultivo) que los cuatro stocks de O. edulis.
CIMA Memoria 2013 57
RESUMEN
El presente proyecto tiene por objeto el estudio del papel
de las poblaciones bacterianas en la supervivencia de
los cultivos larvarios de moluscos bivalvos mantenidos
en criaderos y su repercusión en la producción.
El trabajo está estructurado desde un punto de vista
multidisciplinar, integrando conocimientos de Biología de
Cultivos, Microbiología, Patología y Tecnología
Farmacéutica. Se parte de los resultados obtenidos en
proyectos previos y se pretende avanzar en el desarrollo
de procedimientos mejorados a partir del análisis de los
datos elaborados y de la nueva investigación a realizar.
En los últimos años ha habido un importante desarrollo
del conocimiento de la biología de las nuevas especies
de bivalvos introducidas en la acuicultura, así como
avances en la tecnología de producción de las
microalgas usadas como alimento. Sin embargo, es
todavía escaso el conocimiento de los procesos
microbiológicos implicados en todo el sistema del
criadero.
Los cuatro objetivos generales son:
1. El análisis integrado de los datos microbiológicos,
histopatológicos y de cultivo.
2. La caracterización fenotípica y molecular de aislados
bacterianos asociados al criadero, relevantes por su
potencial patogénico o beneficioso.
3. La definición de los controles mínimos a realizar en
un criadero para conocer su status microbiológico,
aplicando el protocolo diseñado por el grupo en
proyectos anteriores.
4. El ensayo de bacterias probióticas (ya disponibles en
el grupo de trabajo), en lo que se refiere a su
conservación, interacciones del producto en el criadero y
vías de uso en el sistema de producción.
El aspecto más relevante de este proyecto es la
oportunidad de obtener el máximo rendimiento de
trabajos anteriores junto con los resultados obtenidos en
la experimentación propuesta, aplicando una
aproximación innovadora consistente en la integración
de toda la información disponible. Esta visión global del
criadero es importante dada la falta de estudios de este
tipo, a causa de la gran inversión de tiempo necesario y
la dificultad de obtener resultados a largo plazo.
En el año 2013, se ha continuado con las líneas básicas
de integración de las distintas disciplinas, y en el caso
del Departamento de Patología del CIMA de Corón, con
los datos de parasitología y de desarrollo gonadal de
especies como: almeja fina (Venerupis decussatus),
almeja babosa (Venerupis pullastra), almeja japonesa
(Venerupis philippinarum), coquina (Donax trunculus),
longueirón (Ensis siliqua) y longueirón “vello” (Solen
marginatus), procedentes en su día de puesta inducida
del Centro de Cultivos de Ribadeo.
Para el diagnóstico parasitológico, se utilizaron técnicas
histológicas, muestras de glándula digestiva, branquia,
manto y pie se fijan en Davidson, se realizan los bloques
de parafina, cortes de 5 micras, aplicando diversas
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO
TÍTULO:
Poblaciones bacterianas en los criaderos de bivalvos y su
influencia en la producción: patógenos y probióticos.
INICIO: enero, 2012
FINALIZACIÓN: diciembre, 2014
ENTIDAD FINANCIADORA:
Ministerio de Ciencia e Innovación
INVESTIGADOR PRINCIPAL:
Universidad de Santiago: Barja Pérez, J,L.
INVESTIGADORES/AS:
CIMA: Montes Pérez, J.; Ojea Martínez, J.
Universidad de Santiago: Dubert Pérez, J.; Prado
Plana, S.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
CIMA: Meléndez Ramos, I.; Penas Pampín, E.
58
tinciones.
Durante el desarrollo del proyecto se han alcanzado ya
resultados relevantes:
- Se han descrito dos nuevas patologías de larvas.
- Se ha demostrado la no especificidad de hospedador.
- Se ha estudiado la dinámica de las poblaciones de
Vibrio en el fitoplancton usado como alimento para las
larvas.
- Se ha estudiado el efecto de diferentes protocolos de
acondicionamiento en la carga bacteriana de los
reproductores.
La aplicabilidad final de los resultados del proyecto
incluiría tanto el conocimiento de la dinámica de las
poblaciones bacterianas en criadero y su transferencia
entre compartimentos, la presencia de potenciales
bacterias patógenas, la influencia de las distintas
especies de bivalvos cultivadas y, por último, la
aplicación de bacterias probióticas para regular la
microbiota asociada al sistema. Es decir, una mejora de
la producción final del criadero.
CIMA Memoria 2013 59
TÍTULO:
Estudio epidemiológico de la almeja rubia (Venerupis
rhomboides) en Galicia afectada por colonias
procariotas intracelulares (CPI). Identificación de las
CPI. Seguimiento de la estructura de tallas de
poblaciones de almeja rubia de 4 bancos de la ría de
Vigo.
INICIO: octubre, 2013
FINALIZACIÓN: octubre, 2015
ENTIDAD FINANCIADORA:
Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro.
Consellería do Medio Rural e do Mar. Xunta de Galicia
COORDINADORA DEL PROYECTO:
López Gómez, M.C.
INVESTIGADORES:
CIMA: Febrero Mayor, F.M.; No Couto, E.
Xefatura de Coordinación da Área do Mar, Vigo:
Rodríguez González, L.M.
INTECMAR: Darriba Couñago, S.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
CIMA: Meléndez Ramos, M.I.; Penas Pampín, E.
RESUMEN
Eventos de mortalidades elevadas en los bancos de
almeja rubia comunicados por las cofradías de
pescadores de la ría de Vigo e informes emitidos por los
biólogos de zona; también informes emitidos por la
Unidad de Patología del INTECMAR, que confirmaban la
detección de colonias procariotas intracelulares tipo
rickettsias (CPI) en bancos de almeja rubia de la ría de
Vigo. Llevaron a que en el año 2012 la Consellería do
Medio Rural e do Mar encargara a investigadores del
CIMA una acción corta “Análisis preliminar de la
problemática de disminución de la producción de almeja
rubia (Venerupis rhomboides) en la ría de Vigo”. Indicar
que en dicho informe las CPI fueron denominadas OPIBr
(Organismos Procariontes Intracelulares en Branquia),
pero a partir de ahora serán denominadas CPI. En el
informe de dicho trabajo, en lo que respecta a la
patología de esta especie, se destaca la presencia de
CPI- I y II en la branquia, por sus prevalencias e
intensidades (las CPI-I con mayor intensidad que las
CPI-II); así como la presencia del protozoo Nematopsis
sp. también localizado en la branquia. Destacar que las
CPI-II son colonias que están hiperparasitas por un virus
(Darriba et al., 2012).
Posteriormente en el año 2013 la Consellería encargó a
investigadores del CIMA la siguiente acción de
investigación para continuar con el estudio de la almeja
rubia en la ría de Vigo.
En esta acción se contemplan los siguientes objetivos:
1.- Realizar el seguimiento de la estructura de tallas de
las poblaciones de almeja rubia de 4 bancos de la ría de
Vigo (los cuales fueron estudiados en la acción
preliminar de la almeja rubia), para relacionarla con una
posible mejora del reclutamiento.
2.- Profundizar en la identificación del agente etiológico
(CPI tipo rickettsias), a nivel molecular.
3.- Observación al microscopio óptico, empleando una
escala cuantitativa de intensidad, de las preparaciones
histológicas recogidas hasta la actualidad en bancos de
la ría de Vigo y de la ría de Arousa.
4.- Continuar el estudio epidemiológico iniciado como
consecuencia de los episodios de mortalidad de esta
especie en la ría de Vigo, centrándose en los agentes
patógenos que fueron identificados como posibles
responsables de causar efectos deleterios en la almeja
rubia.
Con respecto a la estructura de tallas (Objetivo 1), los
resultados de la acción preliminar del 2012 mostraron en
conjunto abundancias de población muy reducidas y, en
muchos casos, estructuras de tamaños desequilibrados,
sugiriendo la existencia de un déficit en la incorporación
de juveniles a la fracción comercial. Sobre esta base se
esperaba que durante los dos próximos años la situación
productiva de la almeja rubia en la ría de Vigo no
mejorase o mismo empeorase. Para seguir estudiando la
ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO
60
estructura de la población de almeja rubia en la ría de
Vigo, se eligieron 4 bancos sublitorales en los que
trabajan los barcos del plan de a flote para muestrear:
Cabo de Mar, Tirán, Liméns e Islas Cíes.
En el muestreo de Tirán (16/10/2013) la estructura de la
población tiene un tamaño desequilibrado, apareciendo
solamente 16 individuos de la fracción juvenil (< 26mm)
de los 162 individuos totales (9,98%). La talla media,
cerca de la legal, fue de 38,08±7,62 mm y un porcentaje
de legales bajo (38,27%).
En el banco de Liméns (30/10/2013) sigue la estructura
de la población del banco de Tirán, con una talla media
más alta, cerca de la legal (35,23±6,49) y un porcentaje
también bajo de legales (21,01%). La estructura de la
población es la de la siguiente gráfica:
La estructura de la población del banco de las Islas Cíes
(12/11/2013) es muy distinto de los dos anteriores,
estando equilibrada con una elevada fracción de
juveniles (<26mm), 108 frente a los 150 individuos
totales del muestreo (72%). La talla media fue baja
(26,50±9,25 mm) y un porcentaje de legales muy
reducido (12,67%). La gráfica de la población es la
siguiente:
CIMA Memoria 2013 61
Por último el banco de Cabo de Mar (18/11/2013) tiene
una estructura de población muy semejante al de las
Islas Cíes, con una talla media baja (28,62±14,65 mm) y
un porcentaje de legales bajo (35,93%). En este banco
no se encontraron ejemplares entre las tallas 22-33 mm.
Tiene elevada fracción de juveniles (<26mm), 91 de los
150 individuos totales del muestreo (60,67%).
La conclusión de estos primeros muestreos indica que
los dos bancos (Liméns y Tirán) tienen una estructura
desequilibrada de la población y no presenta una
fracción juvenil por lo que puede existir un déficit en la
incorporación de juveniles a la fracción comercial. En los
otros dos bancos (Cabo de Mar e Islas Cíes) la
estructura de la población está equilibrada con una
amplia fracción de juveniles que en un futuro podrían
incorporarse a la fracción comercial.
Para la identificación del agente etiológico (CPI tipo
rickettsias) (Objetivo 2) se llevó a cabo la extracción de
ADN de la branquia (de individuos diagnosticados
previamente por histología), así como PCRs utilizando
cebadores diseñados por (Giovannoni, 1991) y
(Meetselaar et al., 2010) para amplificar el gen 16s rDNA
de bacterias. Las secuencias obtenidas de hasta 1527
pb fueron analizadas en el GENBank encontrándose
similitudes con KC668434 (Uncultured bacterium clone
P3-C12); KC668464 (Uncultured bacterium clone P8-
G11); KC668432 (Uncultured bacterium clone P3-C09);
KC878324 (Endozoicomonas sp. WP70); KF799154
(Uncultured bacterium clone Wood Hole a5663).
Estamos diseñando nuevos cebadores para continuar
con la identificación.
En lo que corresponde al Objetivo 3, se está llevando a
cabo la observación al microscopio óptico, aplicando
una escala cuantitativa a las preparaciones histológicas
disponibles en el laboratorio (pero a las que no se les
aplicó dicha escala), así como a las muestras del otoño
del 2013 de los bancos de Vigo en los que se está
llevando a cabo el estudio de la estructura de tallas.
Trabajo realizado o pendiente de observación:
- Corcubión (30 indv) Mar 2011 (observado).
- Fisterra (30 indv) Jl 2011 (observado).
- Cabo do Mar (30 ind) My, Jl, Sept, Dic 2011 y Marzo
2012 (observado) Cabio (30 ind) Febr - Dic 2011;
Mar, My, Jn, Sept, Oct 2012 (observado).
- Liméns (50 indv) Octubre 2013 (en observación).
- Tirán (50 indv) Octubre 2013 (en observación).
- Islas Cíes (50 indv) Octubre 2013 (pendiente de
observación).
- Cabo do Mar (50 indv) Julio y Octubre 2013 (en
observación).
Con respecto al Objetivo 4, los datos obtenidos de la
observación histológica están archivados en la base de
datos Access para su posterior análisis.
62
7
PROCESOS OCEANOGRÁFICOS COSTEROS
CIMA Memoria 2013 63
RESUMEN
Existen un buen número de toxinas lipofílicas,
consideradas emergentes porque están relativamente
poco estudiadas y presentan una considerable toxicidad
estimada por bioensayo de ratón y por otros
procedimientos. Es necesario controlar estas toxinas
pero la intensidad del control a realizar debe adaptarse al
riesgo que representan. Se sabe que algunas de estas
toxinas están presentes en Galicia pero no está clara ni
la importancia de las presentes ni si hay presencia de
más toxinas que las ya detectadas. Como para aclarar
estas dos situaciones son necesarios registros largos en
el tiempo y estos no existen consideramos de interés
evaluar la posibilidad de utilización de los sedimentos
como registro continuo de las toxinas y de esta forma
habilitar una nueva herramienta para conocer la
presencia e incidencia en el pasado de las toxinas
marinas, con especial atención en las toxinas
emergentes y, más concretamente, en las iminas cíclicas
(espirólidos, pinnatoxinas, pteriatoxinas y
gymnodiminas). Para esto se plantearon los siguientes
objetivos:
1. Desarrollar métodos analíticos para el control de las
toxinas emergentes y especialmente de iminas cíclicas.
2. Iniciar el control rutinario de dichas toxinas en zonas
de cultivo elegidas.
3. Determinar la persistencia y/o transformación de las
toxinas en los sedimentos de batea.
4. Describir los perfiles verticales de las toxinas
identificables o rastreables en zonas de bateas
especialmente relevantes para las toxinas que se
puedan estudiar.
Se han obtenido todas las muestras necesarias, pero
algunos datos están aún por procesar.
En relación al Objetivo 1, se desarrolló una técnica de
detección/cuantificación por HPLC-MS/MS con fases
móviles alcalinas que en modo positivo es capaz de
detectar y cuantificar más de 30 toxinas entre las que se
incluyen los espirólidos, las pinnatoxinas, las
pteriatoxinas (probable) y las gymnodiminas conocidas
en la actualidad, así como las toxinas DSP, la palytoxina,
las pectenotoxinas 2 y 1, los azaspirácidos 1-6 y 37 y la
brevetoxina 2, todo ello en un cromatograma de 7.5
minutos incluyendo el reequilibrado de la columna. El
método se desarrolló en dos versiones, la primera para
muestras estándar de moluscos o muestreadores
pasivos, que no requieren preconcentración de la
muestra y la segunda para sedimento, que dadas las
bajas concentraciones de las toxinas en él, requieren
una etapa de preconcentración. En ambos casos la
inyección de la muestra se hace a un cartucho trampa
ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO
TÍTULO:
Las biotoxinas marinas en las zonas de cultivo de
mejillón, con especial atención a las toxinas
emergentes: presencia en el mejillón y en el
sedimento, desarrollo de métodos de detección y
evaluación de la utilidad del sedimento para el
análisis de riesgo. (TOSE).
INICIO: febrero, 2012
FINALIZACIÓN: febrero, 2014
ENTIDAD FINANCIADORA:
Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro.
Consellería do Medio Rural e do Mar. Xunta de
Galicia
INVESTIGADOR PRINCIPAL:
Blanco Pérez, J.
INVESTIGADORES/AS:
INTECMAR: Arévalo Bartolomé, F.; Moroño Mariño, A.;
Correa Jorge, J.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
CIMA: Mariño Cadarso, C.; Martín Sánchez, H.
INTECMAR: Muñíz Romero, S.
BECARIA:
Martín Morales, E.
64
(“trap column”) colocado en una válvula de 2 posiciones
que, al cambiar de posición deriva la muestra del
cartucho a la columna cromatográfica para su análisis.
Sin preconcentración se inyectan 5µL de muestra y con
preconcentración 500µL en fases móviles ligeramente
diferentes para optimizar la retención de las toxinas en el
segundo caso.
Este método se complementó con otro en modo negativo
para el estudio de las yessotoxinas más importantes de
entre las conocidas.
En relación con el Objetivo 2, se realizó un año de
monitorización de presencia de estas toxinas en mejillón
y en disolución en agua, por medio del uso de
muestreadores pasivos (Diaion HP20), en dos
estaciones: Bueu en la ría de Pontevedra y Arnela en la
ría de Ares y Betanzos. La única imina cíclica que se
encontró, con presencia significativa, fue el 13-desmetil
SPX C, tanto en el agua como en los bivalvos. Su
concentración en los bivalvos fue siempre baja en ambas
estaciones al igual que en columna de agua en Bueu. En
Arnela, sin embargo, la presencia en agua fue importante
aunque esta no se vio traducida en altas
concentraciones en el mejillón de la zona.
En relación al Objetivo 3, se encontraron diversas
toxinas en sedimentos, tanto arenosos como fangosos.
El estudio de la degradación en agua mostró que hay
grandes diferencias en estabilidad entre las toxinas. El
ácido okadaico no se degrada, prácticamente, mientras
que la mitad del 13-desmetil SPX C desaparece del agua
en 21 días (agua de mar) o 9.5 días (agua de mar en
condiciones reductoras). Conclusiones similares se
obtienen con incubaciones de 13-desmetilSPX C,
Gymnodimina y ácido okadaico en sedimentos de
distintas rías y de 4 o 20 cm de profundidad: las dos
primeras toxinas (iminas cíclicas) se degradan
rápidamente y la tercera prácticamente no sufre
alteración alguna en un período de 1 mes.
Según estos estudios de estabilidad el 13-desmetil SPX
C no debería poderse detectar en el sedimento por lo
que se evaluó la posibilidad de que estuviese contenido
en quistes de resistencia de los dinoflagelados que
producen la toxina. El análisis del sedimento tamizado
para eliminar la fracción menor de 5µm mostró que
prácticamente no se pierde toxina en la fracción fina, por
lo que es esperable que en realidad la toxina esté dentro
de los quistes.
En relación al Objetivo 4, se obtuvieron perfiles de 13-
desmetil SPXC y otras toxinas en diversas estaciones de
las rías de Ares, Muros, Pontevedra y Arousa. Los datos
preliminares de dos estaciones de la ría de Pontevedra
muestran que la concentración de 13-desmetil SPXC
disminuye exponencialmente con la profundidad en el
sedimento y la presencia de máximos subsuperficiales.
La extrapolación de estos máximos a la superficie del
sedimento daría valores en 2 y 6 veces más altos que en
la actualidad, lo que indica, de forma preliminar, que las
proliferaciones en el pasado no han sido sustancialmente
mayores que las actuales.
Dado que no se encontraron iminas cíclicas distintas del
13-desmetil SPXC en los sedimentos de Galicia
analizados, decidimos analizar sedimentos de alguna
zona en la que estén presentes en la columna de agua,
para comprobar si el sedimento es un indicador fiable.
En colaboración con el IRTA se obtuvieron muestras del
delta del Ebro y en ellas, a pesar de ser muy arenosas,
pudieron detectarse pinnatoxinas, lo cual sugiere que los
sedimentos son un indicador fiable de la presencia de
estas iminas cíclicas y que en realidad en Galicia o bien
no están presentes o lo están pero con una incidencia
marginal.
CIMA Memoria 2013 65
RESUMEN
La principal toxina ASP, el ácido domoico, se acumula en
la glándula digestiva de la vieira Pecten maximus
durante períodos mucho más largos que en otros
bivalvos, lo cual impide que esta especie sea utilizada en
acuicultura y dificulta sustancialmente la explotación de
sus poblaciones naturales. Estudios recientes de este
equipo han mostrado que la toxina se encuentra libre en
el citoplasma de las células de dicho órgano, por lo que
la explicación más probable para la elevada retención del
compuesto es la carencia o ineficacia de transportadores
de membrana que faciliten su excreción. La alta
acumulación hace que no sea posible encontrar
individuos sin toxina, lo cual dificulta los estudios
experimentales.
Para tratar de abrir vías de solución para el problema
hemos considerado indispensable caracterizar,
inicialmente, el/los transportadores implicados utilizando
tres estrategias complementarias: a) genómica,
identificando los posibles genes implicados; b)
metabolómica, identificando algunos metabolitos
relacionados con la acumulación de ácido domoico y c)
fisiológica: identificando inhibidores de transportadores
de membrana o de procesos asociados al transporte,
que reducen su tasa de eliminación en las especies que
depuran rápidamente.
En el proyecto coordinado, utilizando esta estrategia
combinada se identificarán los candidatos más probables
de entre los transportadores y se comprobará la
expresión de los genes que los regulan cuando los
bivalvos están expuestos a la toxina.
Este subproyecto se ocupará de llevar a cabo la parte
experimental y analítica y los estudios de metabolómica
necesarios para el desarrollo de los dos subproyectos,
llevando a cabo experimentos de exposición de dos
especies al ácido domoico, de inhibición selectiva de
transportadores de membrana y de prospección de otros
aminoácidos y metabolitos que pudieran tener relación
con la acumulación de ácido domoico, especialmente en
la vieira.
Adicionalmente se probará la capacidad de distintas
sustancias, entre ellas metales, para ligar ácido domoico
y por tanto con potencialidad para habilitar rutas de
eliminación de las células diferentes de las de la
molécula libre.
Los estudios se realizarán mediante la exposición de
vieiras y mejillones a células tóxicas y ácido domoico
disuelto, mediante el análisis detallado de poblaciones
naturales de vieira y mediante la exposición de
fragmentos de tejidos con toxina a inhibidores de
transportadores de membrana y de procesos
relacionados. Los analisis de ácido domoico y los
estudios de metabolitos se realizarán mediante UHPLC-
MS o UHPLC-MSn utilizando posteriormente
herramientas de libre acceso de metabolómica.
En el presente año se ha determinado la toxicidad de
varias cepas de Pseudo-nitzschia se ha realizado un
experimento de intoxicación de mejillones y se han
seleccionado mejillones con alta y baja exposición al
ácido domoico que se tranfirieron al Subproyecto 2 para
PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO
TÍTULO:
Transportadores y metabolitos implicados en la
depuración de la toxina ASP en bivalvos, con especial
referencia a una especie de eliminación lenta, la vieira
Pecten maximus (TRAIDA).
Subproyecto 1.- Inhibición del transporte a través de
membrana del ácido domoico en moluscos bivalvos
(INDOME).
INICIO: enero, 2013
FINALIZACIÓN: diciembre, 2015
ENTIDAD FINANCIADORA:
Ministerio de Economía y Competitividad
INVESTIGADOR PRINCIPAL:
Blanco Pérez, J.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
Mariño Cadarso, C.; Martín Sánchez, H.
BECARIA:
Martín Morales, E.
66
la evaluación de las diferencias en expresión génica. Se
han desarrollado, además diversas actividades previas
para la continuación de las actividades previstas.
CIMA Memoria 2013 67
RESUMEN
Esta acción de investigación surge de la aparición de
algunas discrepancias, especialmente en fases tardías
de los episodios de toxicidad DSP, entre la estimación de
la toxicidad por bioensayo de ratón y por HPLC-MS/MS,
en el sentido de que la última de estas técnicas estima
valores superiores. Para clarificar esta situación y
evaluar su impacto, se plantean los siguientes objetivos:
1.- Evaluación de la extensión del problema identificando
en qué especies se presenta.
2.- Identificación de los compuestos responsables.
3.- Evaluación de la liberación de toxinas de los
compuestos responsables durante un proceso simulado
de digestión humana.
Durante este primer año el trabajo a realizar se centró en
la obtención de muestras de moluscos del intermareal
expuestos a toxinas DSP, en la medida de lo posible, en
varios momentos del ciclo de intoxicación/
desintoxicación. Se han obtenido más de 60 muestras
que comprenden diversas almejas (fina, babosa,
japonesa, rubia), navajas (navaja, longueirón) y
berberecho, en alguna de las cuales ya se ha estimado
la toxicidad por alguna de las dos técnicas y una
submuestra de 10g se mantiene congelada.
Para el Objetivo 3 se ha revisado la información
existente sobre digestión simulada y se ha elegido el
método a utilizar.
ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN
EQUIPO
TÍTULO:
Efecto de las biotransformaciones de toxinas de tipo
diarreico (DSP) en organismos del intermareal sobre las
diferencias de toxicidad estimada por LC-MS/MS y
bioensayo de ratón y sus repercusiones para los cierres
de explotación y la salud humana (ESTINFA).
INICIO: mayo, 2013
FINALIZACIÓN: mayo, 2015
ENTIDAD FINANCIADORA:
Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro.
Consellería do Medio Rural e do Mar. Xunta de
Galicia
INVESTIGADOR PRINCIPAL:
Blanco Pérez, J.
INVESTIGADORES/AS:
INTECMAR: Arévalo Bartolomé, F.; Moroño
Mariño, A.; Correa Jorge, J.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
CIMA: Mariño Cadarso, C.; Martín Sánchez, H.
INTECMAR: Muñíz, S.
68
8 RECURSOS MARINOS
CIMA Memoria 2013 69
RESUMEN
1.-INTRODUCCIÓN
Durante finales de 2010, y en los años 2011 y 2012, este
equipo de investigación vino desarrollando un estudio
sobre la dinámica de poblaciones de los solénidos en
Galicia.
Hay que señalar que estos años no fueron normales en
lo que respecta a temperatura y precipitaciones en las
rías donde se realizaron los muestreos. Los años, según
las informaciones meteorológicas de MeteoGalicia y
otras, resultaron estar significativamente apartados de la
normalidad. Así el invierno de 2010-2011 registró
elevadas precipitaciones y bajadas de salinidad que
afectaron de forma relevante tanto en el intermareal
(Vilaxoán) como submareal próximo (Lourizán-
Pontevedra) que interfieren en la reproducción, tanto en
el proceso de maduración, puesta y posterior
supervivencia en las estaciones de estudio. Por otro lado
a finales de 2011 e invierno de 2012 se presentó el
proceso contrario de no presencia de lluvias, cielos
claros, etc. con valores desconocidos en la historia y con
un resultado global de años más cálidos y secos.
Es por esto que consideramos interesante la
continuación del proyecto por DOS AÑOS más, lo que
nos permitiría, por un lado, la confirmación de los datos
hasta aquí alcanzados y la comparación con los años
próximos que pueden presentar características más
normales.
Reseñar los dos aspectos más relevantes de la presente
acción-ampliación: (1) los muestreos de comprobación
se efectuarán en los bancos intermareales de navaja y
longueirón vello de la Cofradía de Vilaxoán y en las
zonas de buceo de navaja y longueirón de O Grove, y (2)
el período de duración que, dadas las fechas actuales y
procesos de aprobación, se extendería a dos años, hasta
detectar las fijaciones naturales de estas especies en el
año 2015.
2.-TRABAJOS REALIZADOS
2.1.- Seguimiento de las condiciones oceanográficas.
2.2.- 12 muestreos: en zona intermareal para navaja y
longueirón vello en Vilaxoán, en submareal en O Grove
para navaja y longueirón y datos de navaja en la ría de
Pontevedra y Noia derivados de muestreos de la acción
de investigación de especies exóticas.
3.- RESULTADOS Y AVANCES INICIALES
3.1.- El año 2013 no resultó un año de valores normales
y por lo contrario registró datos aún más severos que los
3 años anteriores (ver figura anexa)
ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO
TÍTULO:
Evaluación del crecimiento estacional y anual de la
navaja (Ensis arcuatus) y longueirón (Ensis silíqua) y
longueirón vello (Solen marginatus) en los diferentes
ambientes productivos de Galicia. Monitoring de estado
reproductivo-gametogénico de estas especies.
INICIO: 2013
FINALIZACIÓN: 2015
ENTIDAD FINANCIADORA:
Consellería do Medio Rural e do Mar. Xunta de Galicia
INVESTIGADOR PRINCIPAL:
De Coo Martín, A.
INVESTIGADORES:
CIMA: García Fernández, A.
Cofradía de Vilaxoán: Alcalde Creo, A.
Cofradía de O Grove: Otero, J.
PERSONAL DE APOYO:
Fariña Iglesias, J.A.
70
3.2.- Estas condiciones oceanográficas se asocian a no
detección de cría de longueirón vello en Vilaxoán,
detección del reclutamiento anual en O Grove de navaja
y longueirón y a un crecimiento general más reducido en
navaja en intermareal.
0
5
10
15
20
25
30
35
Sa
lin
id
ad
e
Xa Fe Mr Ab Ma Xñ Xl Ag Se Ou No De Xa Fe Mr Ab Ma Xñ Xl Ag Se Ou No De Xa Fe Mr Ab Ma Xñ Xl Ag Se Ou No De Xa Fe Mr Ab Ma Xñ Xl Ag Se Ou No De
Meses
2010 2011 2012 2013
SALINIDADE (Estacion de Cortegada)0,6 metros
CIMA Memoria 2013 71
ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO
TÍTULO:
Estudio de las especies exóticas presentes en las aguas
costeras y rías de Galicia: evaluación de su distribución y
abundancia, de sus repercusiones ambientales y
socioeconómicas y medidas de prevención y protección.
INICIO: 2013
FINALIZACIÓN: 2015
ENTIDAD FINANCIADORA:
Consellería do Medio Rural e do Mar. Xunta de Galicia
INVESTIGADOR PRINCIPAL:
De Coo Martín, A.
INVESTIGADORES:
CIMA: Fernández Álvarez, A.; García Fernández,
A.; López Gómez, M.C.;
Delegación CMReM Carril: Fernández Barreiro, J.;
Iglesias Núñez, R.A.; Otero González, X.
Delegación CMReM Celeiro: Cerdeira Arias, J.D.;
Teijeiro Golpe, O.E.
Delegación CMReM Vigo: Febrero Mayor, F.;
Rodríguez González, L.M.
UTPB: Bañón Díaz, R.; Filgueira Rodríguez, F.J.;
Juncal Caldas, L.; Ribo Landín, J.
Colaborador externo-Malacólogo: Trigo, J.
ASISTENCIAS TÉCNICAS:
Cofradía de Vilaxoán: Alcalde Creo, A.
Cofradía de Noia: Solís Pais, L.
Cofradía de O Grove: Otero Mascato, J.
Cofradía de Cangas: Barreiro Ríos, B.
Cofradía de Pontevedra: Simón Gómez, A.
Cofradía de Carril: Conde Varela, L.
Cofradía de Vicedo: Gómez Brandariz, D.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
Briones Beiras, M.; Fariña Iglesias, J.A.; Meléndez
Ramos, M.I.; Penas Pampín, E.
RESUMEN
I.- INTRODUCCIÓN
El presente programa se plantea como una colaboración
entre equipos y persoal investigador del CIMA, biólogos
de playas, UTPB, Cofradías de Noia, O Grove, Vilaxoán,
Carril, Lonxa Campelo (Pontevedra, Lourizán y
Combarro) y Cangas, y sus asistencias técnicas y por
una duración inicial de tres años.
Los objetivos acordados fueron los siguientes :
1.- Elaboración de un catálogo de las especies
exóticas marinas presentes en las aguas costeras y
rías de Galicia. Recopilación de la información
bibliográfica y práctica disponible.
Subobjetivos:
1.1.- Catálogo actualizado.
1.2.- Fichas por especie.
1.3.- Base de datos. Bibliografía.
1.4.- Creación de colección tanto gráfica y de ejemplares
conservados.
2.- Creación de un observatorio de las especies
exóticas marinas.
Subobjetivos:
2.1.- Centralización y atención.
2.2.- Conocimiento público y contacto.
2.3.- Recogida de información y muestras.
2.4.- Comunicación, coordinación equipo, investigación y
relación entidades semejantes.
72
3.- Estimación de los efectos medio-ambientales y
socio-económicos de las especies conocidas y de
nueva localización.
Subobjetivos:
3.1.- Capacidad invasora y de expansión y ocupación
espacial.
3.2.- Niveles de depredación y consumo de recursos de
otras especies.
3.3.- Sobrecostes y deterioros en empresas acuícolas e
infraestructuras litorales.
3.4.- Repercusiones socio-económicas.
3.5.- Otro tipo de efecto.
4.- Evaluación de métodos y medidas de prevención
y protección de los ecosistemas y las especies
autóctonas.
Subobjetivos:
4.1.- Análisis de las vías de entrada.
4.2.- Métodos de gestión, control y erradicación.
4.3.- Técnicas de protección.
4.4.- Posibilidades de aprovechamiento comercial.
5.- Revisión de la legislación y de las estrategias de
gestión, control y posible erradicación diseñadas por
las distintas administraciones.
6.- Divulgación de la problemática y resultados:
Subobjetivos:
6.1.- Elaboración memorias anuales, final y
publicaciones.
6.2.- Generación de reuniones con expertos implicados.
6.3.- Puesta a disposición de catálogo, resultados
investigación y base de datos bibliográfica.
6.4.- Sensibilización social: Edición de DVD y manual
didáctico.
II.-TRABAJOS REALIZADOS
2.1.- La acción fue aprobada el 15-06-2013, aunque no
se comenzó de forma práctica hasta la disposición de los
presupuestos efectivos el 21-08-2013.
2.2.- Principales acciones realizadas en el ano 2013:
2.2.1.- Funcionamiento equipo, determinación de
responsabilidades y tareas para 2013.
2.2.2.- Adquisición de material aprobado.
2.2.3.- Muestreos :
o Muestreo ría de Vigo: Distribución Crepidula fornicata y
fauna asociada.
o Muestreo distribución Cyclope neritea en zona de
Carril, Vilaxoán, Pontevedra y ría de Noia.
o Muestreo submareal de rias de Viveiro y Celeiro.
o Muestreo Stramonita haemastona en playas de la
Mariña Lucense.
o Muestreo de población referenciada de Anadar
kaghosimensis en ría de Viveiro.
o Muestreo de población Anadara kaghosimensis en
zona de Carril.
o Muestreo Crepipatela dilatata en zona Illa de Arousa.
o Muestreo en Ensenada de O Grove sobre poblaciones
de Hexaplex trunculus y Bolinus brandaris.
o Muestreo banco natural de ostra plana en ría de Noia
afectada por Crepidula fornicata.
Los muestreos se realizaron durante los meses de
septiembre y octubre y las muestras se congelaron en el
CIMA.
2.2.4.- Procesamiento y toma de datos de muestras
congeladas realizado en los meses de noviembre y
diciembre.
2.2.5.- Diseño, debate y elaboración de cartel para
campaña de colaboración con Observatorio de Especies
Exóticas Mariñas de Galicia.
2.2.6.- La parte de patología tiene realizado controles
específicos en Anadara e iniciada la revisión bibliográfica
específica.
2.2.7.- Se tiene comenzada la revisión bibliográfica
en profundidad de los temas-especies relacionadas con
la acción de investigación.
2.2.8.- Reuniones con la Subdirectora del Parque das
Illas Atlánticas, Montserrat Martínez y con el
Responsable de la Planta de Insuiña en O Grove para
colaborar con la Acción de Investigación.
2.2.9.- Se tienen iniciado los contactos con grupos
científicos especialistas en taxónes de especies marinas
para colaborar en el buen desarrollo de la acción de
investigación.
III.- RESULTADOS Y AVANCES INICIALES
3.1.- Alcanzado un buen nivel de colaboración entre los
miembros del equipo y un posicionamiento realista sobre
la amplitud, diversidad y complejidad de los temas
abordados en la acción de investigación.
3.2.- Se recogió una información inicial importante para
programar el próximo año.
3.3.- Los datos iniciales de las especies más importantes
obtenidos, serían:
CIMA Memoria 2013 73
- Crepidula fornicata: Muy extendida. Densidades bajas
(1-10 ind/m2). Expansión a otras especies y zonas
nuevas: Zonas naturales y banco natural O. plana ría
Muros-Noia.
- Anadara kaghosimensis: Pequeña población en fase
de estabilización, presentando activación reproductiva y
crecimiento rápido. Se está realizando una
comprobación de la población de Anadara en Ribadeo,
detectada en los años 90.
- Crepipatella dilatata: Bastante extentida y densidades
bajas. Gran capacidad reproductiva.
- Hexaplex trunculus: Bastante extendido (ría Arousa-
Vigo) y densidad baja y parece en fase de expansión
fuera de la Ensenada de O Grove.
- Bolinus brandaris: Baja densidad mucho menor que
Hexaplex.
- Cyclope neritea: Muy extendida en rías Pontevedra,
Arousa (mucho menos Muros Noia). Densidades altas
(10-50 ind/m2). Rápida movilidad y concentración.
- Stramonita haemastoma: Expansión en playas/rocas
costa lucense. Densidad baja.
74
RESUMEN
El objetivo de este trabajo es estudiar las causas por las
que desaparecieron los bancos de coquina que existían
en Galicia, abordando tanto el estudio medio ambiental
de los bancos como el estudio de su población.
Para eso se marcaron unas líneas de actuación a
desarrollar por los grupos de trabajo participantes en
esta acción.
Durante el último cuatrimestre del año 2013, que se
corresponde con el primero del desarrollo de la acción,
dentro de cada línea, se abordaron las siguientes
actividades:
1.- Naturaleza de los bancos
Los bancos estudiados fueron: Vilarrube en Valdoviño,
Playa América en Nigrán y Lombo das Navallas en la ría
do Barqueiro.
- Sedimentos. En este estudio, el objetivo es caracterizar
texturalmente los sedimentos para saber su tamaño
ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO
TÍTULO:
Estudio de los bancos naturales de coquina:
problemática de su desaparición en Galicia.
INICIO: septiembre, 2013
FINALIZACIÓN: diciembre, 2015
ENTIDAD FINANCIADORA:
Xunta de Galicia.
Dirección Xeral de Investigación, Desenvolvemento e
Innovación.
COORDINADORA:
Martínez Patiño, D.
INVESTIGADORES/AS:
CIMA: Febrero Mayor, F.; Iglesias Estepa, D.; Montes
Pérez, J.; No Couto, E.; Nóvoa Vázquez, S.; Ojea
Martínez, J.
UNI VIGO: Nombela Castaño, M.A.
ECIMAT: Beiras García-Sabell, R.; González
Fernández, S.; Trigo Sampedro, N.
CSIC: Álvarez Salgado, X.A.; Otero Villar, J.
INTECMAR: Doval González, M.D.
Xefatura de Coordinación da Área do Mar. Celeiro:
Cerdeira Arias, D.; Teijeiro Golpe, O.
Departamento Territorial de Vigo. CMReM: Iglesias, E.;
Rodríguez González, L.M.
Xefatura Comarcal de Ferrol. CMReM: Brezmes
Comesaña, C.; Liñán Gil, I.M.
USC: Barja Pérez, J.L.; Dubert, J.; Olveira, G.; Prado
Plana, S.
XENOMAR. UDC: Insua Pombo, A.; Méndez Felpeto, J.;
Nantón Varela, A.
ASISTENCIAS TÉCNICAS:
Cofradía de Vicedo: Gómez Brandariz, D.
Cofradía do Barqueiro: del río Rocha, G.
Cofradía de Cedeira: Quintana Couto, A.
APOYO A LA INVESTIGACIÓN:
CIMA: Álvarez Llamas, L.M.; Bouzamayor Yáñez, V.;
Cotarelo Jardón, M.J.; Meléndez Ramos, I.; Páez
Pérez, J.; Penas Pampín, E.; Ruíz Misioné, M.
Xefatura de Coordinación da Área do Mar. Celeiro:
Martín Salas, F.
CIMA Memoria 2013 75
medio, su grado de selección, así como todos aquellos
parámetros que definen sus características
granulométricas (mediana, modas, curtosis, asimetría,
etc).
Por otro lado se estudiará la composición de los
sedimentos atendiendo a diferentes parámetros como
son: su contenido en materia orgánica y carbonatos,
composición mineralógica y contenido en metales tanto
mayoritarios como minoritarios. El primer paso fue la
recogida de las distintas muestras y su separación para
llevar a cabo las diferentes analíticas según las distintas
metodologías.
- Ecotoxicología de los sedimentos. Se llevó a cabo un
muestreo de sedimentos en Playa América, el 19 de
octubre. Se hizo el estudio ecotoxicológico de los
sedimentos recogidos. Realizando bioensayos con
organismos marinos pertenecientes a tres niveles tróficos
diferentes: fitoplancton (productor primario), erizo de mar
(herbívoro) y copépodo (carnívoro). Los bioensayos se
llevan a cabo con elutriados, extracción acuosa de los
contaminantes retenidos en el sedimento problema.
- Compactación de los sedimentos. Se hace este estudio
a la vez que los muestreos de población ya que se trata
de correlacionar este parámetro con las características
de las distintas poblaciones por lo que los puntos de los
muestreos son los mismos.
- Análisis del agua. El objetivo es caracterizar las aguas
que afectan a los bancos desde el punto de vista
fisicoquímico prestando atención a su contenido en
nutrientes orgánicos e inorgánicos, tanto disueltos como
en suspensión. Esta información, junto con la
caracterización fisicoquímica de los sedimentos, servirá
para comprobar si las diferencias fisicoquímicas del agua
y los sedimentos, son quién de explicar el éxito dispar de
los bancos naturales de coquina en las tres playas
estudiadas.
Se comenzó por dotar a los biólogos de zona y a las
asistencias técnicas de las cofradías de Baiona, Cedeira,
O Barqueiro y O Vicedo, con el material científico y la
formación necesaria para recoger, procesar y conservar
las muestras de agua que se analizarán en los
laboratorios del IIM-CSIC y del INTECMAR. Igualmente
importante fue la elección de los puntos de toma de
muestras, tanto en los ríos que vierten a las playas
estudiadas (Miñor, Das Mestas/Ferreiras y Sor), como en
el agua que baña los bancos naturales de coquina
durante la marea alta. Hasta la fecha, se recogieron
muestras de las tres zonas en septiembre de 2013 y
diciembre 2013–enero 2014.
2.- Muestreos poblacionales
Se realizaron muestreos periódicos y por estratos
(intermareales y submareales), comparando los bancos
marisqueros de Lombo das Navallas y Playa América
como bancos problema, con el banco de Vilarrube como
banco control.
- Lombo das Navallas en la ría do Barqueiro. Se
realizaron dos muestreos de la población del banco de
Lombo das Navallas, los pasados 18 de septiembre y 5
de diciembre.
- Playa América. Este banco está dividido en dos sub
zonas: “Playa América” y “Panxón”. Se realizaron dos
muestreos en el intermareal de la sub zona de “Playa
América”, en septiembre (18 y 19) y en diciembre (4 y 5)
y un muestreo en el sublitoral de esa misma zona el 5 de
diciembre.
- Vilarrube. Banco de coquina en Valdoviño. Se
realizaron dos muestreos, el primero a finales de
septiembre y el otro en diciembre.
3.- Tolerancia de la coquina a diversos parámetros
El estudio de la resistencia de esta especie a las
condiciones del medio a las que puedan estar expuestas
en algunas ocasiones es una de las líneas a abordar:
- Salinidad. Se hicieron experiencias con distintas
salinidades con las coquinas del banco de Vilarrube
recogidas en noviembre. Se emplearon ejemplares de
diferentes tamaños.
- Adaptación a la naturaleza de los fondos y agitación
del agua. Con el objetivo de estudiar su respuesta ante
factores de esta naturaleza se hicieron pruebas
puntuales en el laboratorio, con adultos y con semilla,
sometiéndolos a diferentes grados de agitación de agua
y diferentes tipos de substrato.
4.- Patología y microbiología
El objetivo de este apartado es conocer el estado
parasitológico de este recurso, de cara a valorar la
existencia o no de patologías relevantes.
76
Estudios anteriores realizados por Carballal et al.,
(2008), como el informe de JACUMAR (2009), que
recoge una serie de parasitologías, que no causaban
daños importantes, con la única excepción de
organismos tipo rickettsias con prevalencias en algunos
meses relativamente altas, lo que puede constituir un
peligro potencial, ya habiéndose descrito mortalidades
en Francia asociadas a esta patología (Comps y
Raimbault, 1978).
Se realizaron muestreos microbiológicos en el banco de
Vilarrube en los meses de septiembre y diciembre, y en
este último muestreo también se hizo el estudio de
presencia o número de herpesvirus de ostra.
5.- Análisis de la diversidad genética
El objeto es la diferenciación genética de las coquinas en
las localidades gallegas donde exista el recurso,
mediante marcadores microsatélite. Durante estos
meses, el grupo Xenomar recogió muestras de coquina
de los bancos naturales de Vilarrube, Playa América y
Lombo das Navallas.
6.- Recopilación de bibliografía y tratamiento de
datos
Por parte de cada grupo de trabajo está recopilando
toda la información existente sobre los bancos de
coquina de Galicia, tanto la bibliografía de los trabajos
existentes, como los datos obtenidos en estudios
anteriores que hagan referencia a esta especie, para
poder marcar los protocolos para una gestión eficiente
de los datos.
Los resultados más destacables de los trabajos
realizados en la primera anualidad de esta acción, son:
En cuanto al estudio de los sedimentos, en el actual
estado de desarrollo del proyecto, podríamos concluir
que se hizo el protocolo tanto para la recogida de las
muestras de campo, como los tratamientos previos a los
análisis granulométricos y composicionales.
Los resultados de todos los bioensayos para el estudio
toxicológico realizados en Playa América indican que
para la zona de la playa estudiada y en esta época del
año no existe toxicidad sobre los organismos marinos
representativos de 3 niveles tróficos utilizados. Por lo
tanto y a falta de estudios más exhaustivos podemos
afirmar que en la actualidad no existe contaminación
química en la zona que represente un peligro para los
organismos bentónicos infaunales. Se recomienda
repetir el estudio en otras zonas de playa incluyendo el
submareal.
Se marcaron los puntos de recogida de las muestras de
las aguas tanto continentales como marinas de los tres
bancos. En los bancos el aspecto más destacable son
las elevadas concentraciones de clorofila encontradas
en Vilarrube en comparación con los bancos de Playa
América y Lombo das Navallas, donde se encontraron
las concentraciones más bajas.
En el banco de Lombo das Navallas, los datos de los
muestreos muestran una población debilitada y
representada, mayormente, por individuos de la segunda
cohorte de 15 mm de media, con tamaños máximos de
unos 25 mm.
Todo esto indica que nos encontramos ante una
población que no da crecido y que sobrevive gracias a
unos pocos individuos que maduran prematuramente, los
individuos de entre 12 y 25 mm.
Existe una correlación entre los individuos más pesados
y el sedimento más ligero.
En Playa América existe una población de coquina de
muy baja densidad con escasa/nula importancia
comercial. Hay una diferencia importante entre las
densidades encontradas en los muestreos intermareales
de septiembre y de diciembre. Aunque con índices de
densidad muy bajos en los dos casos, en diciembre la
densidad de población de coquina (ind/m2) se multiplicó
por 4.
En el muestreo sublitoral de diciembre aparece una
densidad importante de individuos de casi 10 ind/m2
(multiplica por 20 o por 3 las encontradas en el
intermareal en septiembre y diciembre, respectivamente)
aunque toda la población pertenece a individuos
juveniles (tallas entre 8 y 22 mm). Ningún adulto.
Habría que valorar la presencia de posibles progenitores
de esta semilla; quizás los reproductores se encuentren
a mayor profundidad: están pendientes, a partir de 2014,
de realizar otros muestreos sublitorales mediante buceo.
El banco marisquero de coquina de la playa de Vilarrube
presenta un comportamiento normal en relación a la
evolución esperada de las cohortes. No obstante se
CIMA Memoria 2013 77
constata una disminución generalizada de los efectivos
comparando los dos muestreos realizados hasta el
momento.
En el comportamiento de la coquina, se observó una
mayor tolerancia de los ejemplares más pequeños a las
bajas salinidades, los más grandes toleran mejor los
fuertes movimientos del agua y todos los ejemplares
presentaron un rápido enterramiento en el substrato
Hasta el momento las parasitologías detectadas, tanto
por las características de estas, como por su intensidad,
no pueden considerarse como preocupantes para el
desarrollo de este recurso.
Los análisis microbiológicos muestran una carga de
bacterias marinas normal y una cantidad algo elevada
de vibrios, la presencia del herpesvirus dio un resultado
negativo.
A nivel genético se consiguieron los marcadores
microsatélite para la especie Donax trunculus, siendo
este el primer paso para el análisis genético poblacional
de las localidades objeto de estudio.
78
DIVULGACIÓN
CIMA Memoria 2013 79
9 ARTÍCULOS EN REVISTAS SCI
CARBALLAL, M.J.; IGLESIAS, D.; DÍAZ, S.; VILLALBA, A. Disseminated neoplasia
in clams Venerupis aurea from Galicia (NW Spain): histopathology, ultrastructure
and ploidy of the neoplastic cells, and comparison of diagnostic procedures.
Journal of Invertebrate Pathology, 112:16-19.
DA COSTA, F.; BARREIRO, B.; OJEA, J.; NÓVOA, S.; MARTÍNEZ-PATIÑO, D.
Effects of stocking density on intermediate culture of the razor clam Ensis arcuatus
(Pharidae: Bivalvia). Aquaculture Research, 1–8.
DA SILVA, P.M.; VIANNA, R.T.; GUERTLER, C.; FERREIRA, L.P.; SANTANA,
L.N.; FERNÁNDER-BOO, S.; RAMILO, A.; CAO, A.; VILLALBA, A. First report of
the protozoan parasite Perkinsus marinus in South America, infecting mangrove
oysters Crassostrea rizophorae from Paraíba River (NE, Brazil). Journal of
Invertebrate Pathology, 113: 96-103.
DÍAZ, S.; VILLALBA, A.; INSUA, A.; SOUDANT, P.; FERNÁNDEZ, J.; MÉNDEZ, J.; CARBALLAL, M.J. Disseminated
neoplasia causes changes in ploidy and apoptosis frequency in cockles Cerastoderma edule. J. Invertebr. Pathol.,113:
214-219.
DOMINGUES, P.; SÁNCHEZ, F.J.; IGLESIAS, J.; OTERO, J.J.; PAZOS, G.; LINARES, F. Variations in Weight and
Proximate Composition of Newly Hatched Octopus vulgaris (Cuvier 1797) Paralarvae. Journal of Applied Aquaculture,
25:219–226.
LYNCH, S.A.; VILLALBA, A.; ABOLLO, E.; ENGELSMA, M.; STOKES, N.; CULLOTY, S.C. The occurrence of
haplosporidian parasites, Haplosporidium nelsoni and Haplosporidium sp., in oysters in Ireland. Journal of Invertebrate
Pathology, 112:208-212.
MARTÍN-GÓMEZ, L.; VILLALBA, A.; CARBALLAL, M.J.; ABOLLO, E. Identification of relevant cancer related-genes in
the flat oyster Ostrea edulis affected by disseminated neoplasia. Marine Biotechnology, 15:159-174.
PAZ, B.; BLANCO, J.; FRANCO, J.M. Yessotoxins production during the culture of Protoceratium reticulatum strains
isolated from Galician Rias Baixas (NW Spain). Harmful Algae, 21-22: 13–19.
RAMILO, A.; NAVAS, J.I.; VILLALBA, A.; ABOLLO, E. New species-specific PCR assays for diagnosis of Bonamia
ostreae and Bonamia exitiosa in the European flat oyster Ostrea edulis: conventional, real-time and multiplex PCR.
Diseases of Aquatic Organisms, 104:140-161.
RUIZ, P.; DÍAZ, S.; ORBEA, A.; CARBALLAL, M.J.; VILLALBA, A.; CAJARAVILLE, M.P. Biomarkers and transcription
levels of cancer-related genes in cockles Cerastoderma edule from Galicia (NW Spain) with disseminated neoplasia.
Aquatic Toxicology, 136-137: 101-111.
RUIZ, M.; DARRIBA, S.; RODRÍGUEZ, R.; LÓPEZ, C. Histological survey of symbionts and other conditions of pod
razor clam Ensis siliqua (Linnaeus, 1758) in Galicia (NW Spain). Journal of Invertebrate Pathology
80
10 LIBROS
Clam fisheries and aquaculture. Editor: Fiz da Costa González, Nova Science
Publishers, ISBN: 978-1-62257-521-3, New York:
DA COSTA, F.; ARANDA-BURGOS, J.A.; CERVIÑO-OTERO, A.; FERNÁNDEZ-
PARDO, A.; LOUZÁN, A.; NÓVOA, S.; OJEA, J.; MARTÍNEZ-PATIÑO, D. Clam
Reproduction, pp. 45-72.
LÓPEZ, C.; DARRIBA, S.; NAVAS, J.I. Clam Symbionts. pp. 107-148
RUIZ, M.; LÓPEZ, C. Neoplasms in Clams. pp. 149-162.
ROMALDE, J.L.; DIÉGUEZ, A.L.; DOCE, A.; LASA, A.; BALBOA, S.; LÓPEZ, C.;
BEAZ-HIDALGO, R. Advances in the Knowledge of the Microbiota Associated with
Clams from Natural Beds. pp 163-190.
DA COSTA, F.; ARANDA-BURGOS, J.A.; CERVIÑO-OTERO, A.; FERNÁNDEZ-
PARDO, A.; LOUZÁN, A.; NÓVOA, S.; OJEA, J.; MARTÍNEZ-PATIÑO, D. Clam
Hatchery and Nursery Culture. pp. 217-254.
GUERRA DÍAZ, A. Clam Production and Cultivation in Galicia (NW Spain): The
Role of Hatcheries. pp. 255-272.
PARADA, J.M.; MOLARES, J. Artisanal Exploitation of Natural Clam Beds: Organization and Management Tools. pp.
273-290.
Libro de Resúmenes, XIV Congreso Nacional de Acuicultura.
VILLALBA, A.; RAMILO, A.; ABOLLO, E. Impacto de la infección por virus herpes de ostreidos tipo 1 en el engorde de
ostra rizada Crassostrea gigas en Galicia. pp. 112-113.
CASTRO, N.; MAGARIÑOS, B.; BANDÍN, I.; RODRÍGUEZ, J.L.; LINARES, F.; TORANZO, A.E. Influencia de
macroalgas en la resistencia del lenguado a enfermedades microbianas. pp. 158-159.
FERNÁNDEZ-PARDO, A.; MURADO, M.; RIAL, D.; MARTÍNEZ-PATIÑO, D.; NÓVOA, S. Optimización del cultivo
larvario de Venerupis pullastra mediante una aproximación factorial de segundo orden. pp. 208-209.
MEDINA, A.; FERNÁNDEZ-PARDO, A.; MARTÍNEZ, D.; OJEA, J.; NÓVOA, S. Estudio de la Tasa de Aclaramiento y
de Ingestión de tres especies de almeja: fina (Ruditapes decussatus), japónica (Ruditapes philippinarum) y rubia
(Venerupis rhomboides). pp. 272-273.
MEDINA, A.; ARANDA, J.A.; CERVIÑO, A.; NÓVOA, S.; OJEA, J.; MARTÍNEZ, D. Evaluación de dos sistemas de
preengorde de especies de almeja: fina (Ruditapes decussatus), japónica (Ruditapes philippinarum) y rubia (Venerupis
rhomboides). pp. 274-275.
Advances in aquaculture hatchery technology. G. Allan and G. Burnell editors, Woodhead Publishing Limited,
ISBN: 978-0-85709-119-2, 518 pp.
KAMERMANS, P.; GALLEY, T.; BOUDRY, P.; FUENTES, J.; MCCOMBIE, H.; BATISTA, F.M.; BLANCO, A.;
DOMINGUEZ, L.; CORNETTE, F.; PINCOT, L.; BEAUMONT, A. Blue mussel hatchery technology in Europe.
CIMA Memoria 2013 81
11 PONENCIAS Y PANELES
Congreso: First Internacional Conference Fish and Shellfish Immunology.
Vigo.
DE LA BALLINA, N.R.; RAMILO, A.; VILLALBA, A.; CAO, A. Proteomic approach
to identify markers of resistence to bonamiosis in the proteins of the oyster Ostrea
edulis haemolymph.
MARTÍN-GÓMEZ, L.; VILLALBA, A.; CARBALLAL, M.J.; ABOLLO, E. Molecular
characterisation of TNF, AIF, dermatopontin and VAMP genes of the flat oyster
Ostrea edulis and analysis of their modulation by diseases.
PARDO, B.G.; MILLÁN, A.; FERNÁNDEZ, C.; ALVAREZ-DIOS, J.A.; GÓMEZ-TATO, A.; CAO, A.; RAMILO, A.;
CARBALLAL, M.J.; VILLALBA, A.; MARTÍNEZ, A. Identification of candidates genes involved in responses of Ostrea
edulis to bonamiosis based on oligo-microarray analysis.
Congreso: XVIth International Conference of the European Association of Fish Pathologists “Diseases of Fish
and Shellfish”. Tampere, Finlandia.
Ponencias
VILLALBA, A. Collapse of the cockle Cerastoderma edule fishery in Ría de Arousa (Galicia, NW Spain) due to
marteiliosis.
VILLALBA, A. Evaluation of the impact of the infection with ostreid herpesvirus-1 (OsHV-1) µvar in the on-growing of
pacific oysters Crassostrea gigas in Galicia (NW Spain).
Paneles
CARBALLAL, M.J.; RAMILO, A.; ABOLLO, E.; VILLALBA, A. First detection of Minchinia sp. (Haplosporida) infecting
cockles Cerastoderma edule from Galicia (NW Spain).
RAMILO, A.; VILLALBA, A.; CARBALLAL, M.J.; IGLESIAS, D.; ABOLLO, E. Sequences of SSU rDNA, ITS AND IGS
regions of Marteilia sp. (Cercozoa: Paramyxidae) infecting cockles Cerastoderma edule from Galicia (NW Spain), and a
specific PCR assay for its diagnosis.
VILLALBA, A.; IGLESIAS, D.; DARRIBA, S.; PARADA, J.M.; NO, E.; RAMILO, A.; ABOLLO, E.; CARBALLAL, M.J.
Collapse of the cockle Cerastoderma edule fishery in Ría de Arousa (Galicia, NW Spain) due to marteiliosis.
VILLALBA, A.; RAMILO, A.; ABOLLO, E. Evaluation of the impact of the infection with ostreid herpesvirus-1 (OsHV-1)
µvar in the on-growing of pacific oysters Crassostrea gigas in Galicia (NW Spain).
Congreso: Aquaculture 2013. Las Palmas, Gran Canaria.
MATIAS, A.M.; DÍAZ, S.; SOUSA, J.; VILLALBA, A.; CARBALLAL, M.J.; LEITÃO, A. Variation of the karyotype of
neoplastic cells associated to severity of disseminated Neoplasia in cockles Cerastoderma edule.
Congreso: XVI Foro de Recursos Marinos y Acuicultura de las Rías Gallegas. O Grove (Pontevedra).
Ponencias
FERNÁNDEZ OTERO, R.; VILLALBA GARCÍA, A. OYSTERECOVER: Abrindo o camiño para a recuperación da ostra
plana en Europa.
82
MARTÍNEZ PATIÑO, D. Incorporación de nuevas especies al cultivo industrial en criadero.
Paneles
ARANDA, J.A.; CERVIÑO-OTERO, A.; DA COSTA, F.; FERNÁNDEZ-PARDO, A.; LOUZÁN, A.; NÓVOA, S.; OJEA, J.;
MARTÍNEZ, D. Desarrollo embrionario y larvario de especies de moluscos bivalvos de interés comercial.
GUERRERO, S.; MARIÑO, J.C.; FERNÁNDEZ, M.; OTERO, X.; SANTOS, I. Crecimiento y supervivencia de semilla de
almeja babosa Venerupis pullastra (Montagu, 1803) colocada en bolsas en dos zonas submareales de la Ría de
Arousa (Pontevedra, España).
NANTÓN, A.; FREIRE, R.; ARIAS, A.; NÓVOA, S.; LOUZÁN, A.; MARTÍNEZ-PATIÑO, D.; MÉNDEZ, J. Estudio
preliminar de una región de control del genoma mitocondrial de la coquina Donax trunculus.
OJEA, J.; MARTÍNEZ-PATIÑO, D.; NÓVOA, S.; RODRÍGUEZ, N.; FERREIRO, L.; BARCELÓ, E.; GÓMEZ, D.;
GARCÍA, M.; CATOIRA, J.L. Proyecto de regeneración del erizo de mar, Paracentrotus lividus, en las Rías Altas.
(Ribadeo, San Cosme, Burela, San Cibrao, Celeiro, O Vicedo y Espasante).
PÉREZ ACOSTA, C.; GUERRERO, S.; FERNANDEZ BESADA, M. Efecto de la salinidad sobre la supervivencia de
semilla de almeja.
SANTOS, I.; TOCA, F.A.; MARIÑO, J.C.; FERNÁNDEZ, M.; GUERRERO, S. Supervivencia de la almeja japonesa
Ruditapes philippinarum (Adams et Reeves, 1850) en tres tipos de sustrato: Fango, Conchilla de mejillón y Mixto al
50% en el banco intermareal del Sarrido, Cambados (Pontevedra).
Congreso: XIV Congreso Nacional de Acuicultura. Gijón.
VILLALBA GARCÍA, A.: Miembro del Comité Científico.
CASTRO, N.; MAGARIÑOS, B.; BANDÍN, I.; RODRÍGUEZ, J.L.; LINARES, F.; TORANZO, A.E. Influencia de
macroalgas en la resistencia del lenguado a enfermedades microbianas.
FERNÁNDEZ-PARDO, A.; MURADO, M.; RIAL, D.; MARTÍNEZ-PATIÑO, D.; NÓVOA, S. Optimización del cultivo
larvario de Venerupis pullastra mediante una aproximación factorial de segundo orden.
MEDINA, A.; FERNÁNDEZ-PARDO, A.; MARTÍNEZ, D.; OJEA, J.; NÓVOA, S. Estudio de la Tasa de Aclaramiento y
de Ingestión de tres especies de almeja: fina (Ruditapes decussatus), japónica (Ruditapes philippinarum) y rubia
(Venerupis rhomboides).
MEDINA, A.; ARANDA, J.A.; CERVIÑO, A.; NÓVOA, S.; OJEA, J.; MARTÍNEZ, D. Evaluación de dos sistemas de
preengorde de especies de almeja: fina (Ruditapes decussatus), japónica (Ruditapes philippinarum) y rubia (Venerupis
rhomboides).
VILLALBA, A.; RAMILO, A.; ABOLLO, E. Impacto de la infección por virus herpes de ostreidos tipo 1 en el engorde de
ostra rizada Crassostrea gigas en Galicia.
Congreso: Fourth Joint Symposium and AOAC Task Force Meeting. Bayona.
MARTÍN MORALES, E.; MARIÑO, C.; ARÉVALO, F.; MOROÑO, A.; CORREA, J.; BLANCO, J. A prospective study of
cyclic imines in two Galician aquaculture areas.
MARTÍN MORALES, E.; MARIÑO, C.; BLANCO PÉREZ, J. The origin of persistent low levels of 13-desmethyl SPX C in
Galician waters: Stability in seawater and sediments.
Congreso: 2do Congreso Nacional de la Sociedad Mexicana para el Estudio de los Florecimientos Algales
Nocivos.
Ponencia magistral:
BLANCO PÉREZ, J. Ficotoxinas en organismos marinos. Detección, acumulación y minimización de su impacto.
Congreso: Seminario de divulgación “OYSTERECOVER Final Workshop – A Change of Scenario”, Vigo.
VILLALBA, A.; PARDO B.G. A new scenario for starting selective breeding programmes.
CIMA Memoria 2013 83
Congreso: Impacto de la infección por virus herpes en el sector ostrícola, situación actual y perspectiva futura.
Vigo.
Ponente: Villalba García, A.
VILLALBA, A.; RAMILO, A.; ABOLLO, E. Sostenibilidad del cultivo de ostra rizada en Galicia en el contexto de la
infección por virus herpes.
84
12 EDICIÓN DE PUBLICACIONES
Revista Galega dos Recursos Mariños (4 series). Blanco, J.; Salgado, C.; Molares,
J.; Fernández, M.L.
Journal of Shellfish Research. Villalba García, A. (miembro del Comité Editorial)
Diseases of Aquatic Organisms. Villalba García, A. (editor revisor)
CIMA Memoria 2013 85
ASESORAMIENTO
86
13 INFORMES
Título: Informe técnico-biológico sobre la solicitud de extracción de áridos en Punta
Lioira (Rianxo) para vertido con fines de regeneración en el banco marisquero Punta
Fincheira-Punta Salto Ladrón (Rianxo) y Parques de Carril.
Autor/a: No Couto, E.
Solicitante: Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro
Título: Análisis granulométrico de substrato submareal entre Punta Portomouro y
Punta de Pedra Rubia (Boiro).
Autor/a: No Couto, E.
Solicitante: Agrupación Profesional de Mariscadores Ría de Arousa, Abanqueiro.
Título: Análisis granulométrico de muestras de sedimento de una zona submareal de la Playa do Castro sometida a
regeneración del substrato.
Auto/a: No Couto, E.
Solicitante: Cofradía de Aguiño
Título: Informe del año 2012 correspondiente a las “Experiencias para el cultivo del besugo realizadas en las Jaulas
Experimentales” de las que es titular el Centro de Investigacións Mariñas (Consellería do Medio Rural e do Mar)
ubicadas en Bueu.
Autor/a: Linares Cuerpo, F.
Solicitante: Servizo de Innovación Tecnolóxica da Acuicultura. Secretaría Xeral do Mar. Consellería do Medio Rural e
do Mar.
Título: Informe sobre el análisis realizado a una muestra de ostra rizada recogida en una batea afectada por
mortalidad anormal.
Autor/a: Villalba García, A.
Solicitante: Servizo de Inspección Veterinaria
Título: Informe sobre el análisis realizado a una muestra de ostra rizada de una batea del polígono Grove A para el
diagnóstico de virus herpes de ostreidos tipo 1 - µvar.
Autor: Villalba García, A.
Solicitante: Servizo de Inspección Veterinaria
Título: Informe sobre los análisis realizados a las muestras de ostra rizada recogidas en tres bateas del polígono
“Grove A” para el diagnóstico de la microvariante del virus herpes de ostreidos tipo 1 (OsHV1 - µvar).
Autor: Villalba García, A.
Solicitante: Servizo de Inspección Veterinaria
CIMA Memoria 2013 87
14 REUNIONES
Reuniones de planificación de los planes de explotación de los bancos marisqueros
“Lombos do Ulla”, “O Bohido” y “Cabío”. Carril.
Participantes: Iglesias Estepa, D.; No Couto, E.
Reunión de coordinación del proyecto (Kick-off meeting) “Exploring the biological
and socio-economic potential of new/emerging candidate fish species for expansion
of the European aquaculture industry (DIVERSIFY)”.
Hellenic Center for Marine Research, Heraklion (Creta).
Participante: Linares Cuerpo, F.
Representante del CIMA en el “Clúster Uso Sostenible de Recursos Marinos” del Campus del Mar para el diseño de
Planes Estratégicos.
Participante: Villalba García, A.
Participación en una reunión de coordinación del proyecto “Establishing the scientific bases and technical procedures
and standards to recover the European flat oyster production through strategies to tackle the main constraint,
bonamiosis”. Yerseke (Holanda).
Participante: Villalba García, A.
Reunión de coordinación del Plan Nacional JACUMAR “Caracterización de la situación sanitaria del litoral español
relativa a la infección por virus herpes en moluscos bivalvos y evaluación del impacto de la enfermedad”.
Participación por videoconferencia: Villalba García, A.
Reunión de asesoramiento a la administración y coordinación sobre la marteiliosis que afecta a los berberechos de
Galicia. INTECMAR.
Participante: Villalba García, A.
Reunión de coordinación del proyecto “Establishing the scientific bases and technical procedures and standards to
recover the European flat oyster production through strategies to tackle the main constraint, bonamiosis”. CETMAR
Participante: Villalba García, A.
88
15 OTROS
15.1. ASESORAMIENTO. OTROS
Representante del CIMA como responsable del seguimiento del proyecto ATRUGAL
en la convocatoria 2013 FEDER-FEP de la CMRM.
Linares Cuerpo, F.
Convenio de colaboración entre la Xunta de Galicia a través de la Consellería do
Medio Rural e do Mar y la Asociación de Acuicultores “Illa do Santo” de Bueu
(Pontevedra), para el cultivo de peces en jaulas.
Linares Cuerpo, F.
Actualización de los cálculos de costes de la determinación de toxicidad DSP por
medio de Bioensayo de ratón y HPLC-MS/MS, obtenidas en el subproyecto
“Evaluación del impacto de los métodos y niveles utilizados para el control de toxinas
en el mejillón” del proyecto JACUMAR “Cultivo de mitílidos: expansión y sostenibilidad
(CULMITES)”.
Blanco Pérez, J.
15.2. REVISIÓN DE ARTÍCULOS EN PUBLICACIONES CIENTÍFICAS
Journal of Invertebrate Pathology (2 artículos)
Carballal Durán, M.J.
Toxicon (2 artículos)
Chemosphere
Latin American Journal of Aquatic Research
Food Additives and Contaminants
Blanco Pérez, J.
Diseases of Aquatic Organisms
Montes Pérez, J.
Diseases of Aquatic Organisms (2 manuscritos)
Journal of Invertebrate Pathology
Villalba García, A.
CIMA Memoria 2013 89
FORMACIÓN
90
16 TESIS DOCTORALES
16.1. DIRECCION/TUTORIZACIÓN DE TESIS
Tema: Estudio del desarrollo gametogénico de la almeja fina, Ruditapes
decussatus (Linné, 1758) en el medio natural y optimización de las condiciones del
acondicionamiento en criadero.
Doctorando/a: Ojea Martínez, J.
Titulación: Licenciada en Biología
Tutor/a y director/a de la tesis: Abad Caeiro, M.; Martínez Patiño, D. (Codirectora)
Tema: Alimentación en una planta de cultivos. Calidad del alimento vivo y
alternativas a su sustitución o suplementación.
Doctorando/a: Fernández Pardo, A.
Titulación: Licenciada en Biología
Tutor/a y director/a de la tesis: Martínez Patiño, D.; Nóvoa Vázquez, S.
Tema: Optimización del cultivo intensivo de la almeja fina Ruditapes decussatus en criadero.
Doctorando/a: Aranda Burgos, J.A.
Titulación: Licenciado en Biología
Tutor/a y director/a de la tesis: Martínez Patiño, D. (Tutora y directora); da Costa González, F. (Codirector).
Tema: Optimización del cultivo de la coquina Donax trunculus en criadero.
Doctorando/a: Louzán Pérez, A.
Titulación: Licenciada en Biología
Tutor/a y director/a de la tesis: Martínez Patiño, D.; Nóvoa Vázquez, S.
Tema: La perkinsosis en el litoral español: caracterización de variantes taxonómicas del parásito y de la respuesta
inmunitaria del hospedador.
Doctorando/a: Fernández Boo, S.
Titulación: Licenciado en Biología
Tutor/a y director/a de la tesis: Villalba Garcia, A. (Tutor y codirector); Cao Hermida, A. (Codirectora); Martínez Portela,
P. (Codirector, USC).
Tema: Estudio proteómico del sistema inmunitario de la ostra Ostrea edulis y de su respuesta frente a la bonamiosis.
Doctorando/a: Rodríguez de la Ballina, N.
Titulación: Licenciada en Biología
Tutor/a y director/a de la tesis: Villalba Garcia, A. (Tutor y codirector); Cao Hermida, A. (Codirectora)
Tema: Estudio histopatológico de los solénidos comerciales en Galicia (Ensis arcuatus, Ensis siliqua y Solen
marginatus).
CIMA Memoria 2013 91
Doctorando/a: Ruíz Pérez, M.
Titulación: Licenciada en Ciencias del Mar
Tutor/a y director/a de la tesis: López Romalde, J. (Tutor, USC); López Gómez, C. (Directora, CIMA); Darriba, S.
(Directora, INTECMAR)
Tema: Estudo dunha neoplasia diseminada e outras alteracións patolóxicas que afectan as poboacións de berberecho,
Cerastoderma edule, de Galicia.
Doctorando/a: Díaz Costa, S.M.
Titulación: Licenciada en Ciencias del Mar
Directores Tesis: Carballal Durán, M.J.; Villalba García, A.
Tema: Toxinas emergentes en Galicia.
Doctorando/a: Martín Morales, E.
Titulación: Licenciada en Biología
Tutor/a y director/a de la tesis: Blanco Pérez, J.
Tema: Caracterización molecular de genes implicados en la respuesta inmune de la ostra plana (Ostrea edulis) y
japonesa (Crassostrea gigas) frente a patógenos.
Doctorando/a: Martín Gómez, L.
Titulación: Licenciada en Biología
Tutor/a y director/a de la tesis: Villalba García, A. (Tutor y codirector), Abollo Rodríguez, E. (Codirectora, CETMAR)
Tema: Desarrollo de herramientas moleculares de diagnóstico y su aplicación a los estudios de patología de moluscos
bivalvos.
Doctorando/a: Ramilo Álvarez, A.
Titulación: Licenciada en Biología
Tutor/a y director/a de la tesis: Villalba García, A. (Codirector), Abollo Rodríguez, E. (Codirectora, CETMAR)
16.2.PARTICIPACIÓN EN TRIBUNALES DE TESIS
BLANCO PÉREZ, J.
Título: Identificación de genes implicados en la eliminación de biotoxinas en el mejillón Mytilus galloprovincialis Lmk.:
clonación y expresión de los cDNA que codifican para tres proteínas transportadoras ABC pertenecientes a las
subfamilias C (proteínas MRP) y G.
Doctorando/a: Lozano Paredes, V.
Universidad: Universidad de Santiago de Compostela
Título: Identificación de genes implicados en la eliminación de biotoxinas en el mejillón Mytilus galloprovincialis Lmk.:
clonación y expresión de los cDNA que codifican para dos proteínas transportadoras ABC de la subfamilia B (proteínas
MDR).
Doctorando/a: Martínez Escauriaza, R.
Universidad: Universidad de Santiago de Compostela
VILLALBA GARCIA, A.
Título: Coccidiosis and molecular basis of the immune response of common octopus (Octopus vulgaris Cuvier, 1797)
Doctorando/a: Castellanos Martínez, S.
Universidad: Universidad de Vigo
Título: Cancer development in bivalve molluscs in relation with chemical pollution
92
Doctorando/a: Ruiz Rodríguez, P.
Universidad: Estación Marina de Plentzia, Universidad del País Vasco, Plentzia (Vizcaya)
MARTINEZ PATIÑO, D.
Título: Identificación de genes implicados en la eliminación de biotoxinas en el mejillón Mytilus galloprovincialis Lmk.:
clonación y expresión de los cDNA que codifican para tres proteínas transportadoras ABC pertenecientes a las
subfamilias C (proteínas MRP) y G.
Doctorando/a: Lozano Paredes, V.
Universidad: Universidad de Santiago de Compostela
Título: Estudio genético poblacional de la almeja babosa Venerupis pullastra.
Doctorando/a: Pereira Fernández, S.M.
Universidad: Universidad de A Coruña
Título: Inducción de la fijación en moluscos bivalvos. Genes Homeobox y su conservación en bivalvos.
Doctorando/a: Mesias Gansbiller, C.
Universidad: Universidad de Santiago de Compostela
Título: Caracterización genética de poblaciones de Paracentrotus lividus (Lamarck, 1816) en Asturias, Galicia y
Canarias y desarrollo de sistemas de cultivo en batea.
Doctorando/a: Tourón Besada, N.
Universidad: Universidad de Santiago de Compostela
NÓVOA VÁZQUEZ, S.
Título: Estudio del desarrollo gametogénico de la almeja fina, Ruditapes decussatus (Linné, 1758) en el medio natural
y optimización de las condiciones del acondicionamiento en criadero.
Doctorando/a: Ojea Martínez, J.
Universidad: Universidad de Santiago de Compostela
FUENTES GONZÁLEZ, J.
Título: Dinámica ecológica de una especie de almeja nativa y otra introducida: Implicaciones para la conservación y
gestión del marisqueo.
Doctorando/a: Bidegain Cancer, G.
Universidad: Universidad de Santander
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16.3.TESIS PRESENTADAS
Título: Estudio del desarrollo gametogénico de la almeja fina, Ruditapes decussatus (Linné, 1758) en el medio natural
y optimización de las condiciones del acondicionamiento en criadero.
Doctorando/a: Ojea Martínez, J.
Universidad: Universidad de Santiago de Compostela
Fecha presentación: junio-2013
RESUMEN
El objetivo fundamental de esta tesis es optimizar el proceso de acondicionamiento en criadero de la almeja fina
(Ruditapes decussatus), para poder obtener larvas la mayor parte del año. Los experimentos se hacen trabajando con
volúmenes similares a los criaderos industriales para que los resultados puedan ser válidos para su aplicación en este
tipo de criaderos.
Se realiza el seguimiento de una población natural situada en las Lagunas de Baldaio (A Coruña) para establecer su
patrón anual de desarrollo gonadal, determinando su ciclo gametogénico mediante un estudio histológico y de
composición bioquímica de la gónada-masa visceral. Los reproductores usados en los acondicionamientos serán del
mismo banco, lo que nos permitirá disponer de un patrón al que referir los resultados obtenidos a través de la
manipulación que se realiza durante el acondicionamiento en criadero; el estudio de éste, se hace atendiendo sobre
todo a la influencia de dos factores externos importantes: el efecto de la temperatura y de la ración del alimento. Para
estudiar el efecto de la temperatura se realizan tres acondicionamientos durante el año, en octubre, febrero y abril y se
ensayan dos regímenes de temperatura, uno con subida gradual y otro con temperatura constante a 20ºC. Para
estudiar el efecto de la ración de alimento se ensayan dos raciones del 3% y 6% en peso seco de microalgas con
respecto al peso seco de la carne de los reproductores.
La almeja fina tiene un ciclo reproductivo anual con un periodo de reposo de octubre a diciembre. En enero la mayoría
de las almejas empiezan la gametogénesis y el período de puesta abarca desde mayo a agosto. Los carbohidratos y
lípidos son los componentes bioquímicos que más se movilizan durante la gametogénesis. En general los
carbohidratos aumentan durante las fases de reposo e inicio y disminuyen durante el desarrollo gametogénico. Los
lípidos aumentan con la maduración de la gónada.
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17 CURSOS
17.1. CURSOS IMPARTIDOS
Máster Interuniversitario en Acuicultura. USC, UVIGO, UDC
BLANCO PÉREZ, J.
Mareas Tóxicas
VILLALBA GARCÍA, A.
Enfermedades en Invertebrados
Seminarios impartidos:
- Neoplasia en moluscos
- Estrategias de lucha contra enfermedades de moluscos
Sesión de prácticas
NO COUTO, E.
Sesión de prácticas sobre: Diseño de muestreos cuantitativos, análisis de muestras y seguimiento productivo de las
zonas de libre marisqueo en la Ria de Arousa.
European Master of Science in Marine Environment and Resources. Universidad del País Vasco
VILLALBA GARCÍA, A.
Histology and Histopathology of Aquatic Animals
Seminarios impartidos:
- General Histopathology of Molluscs
- Sesión práctica: Microscopical observations of general mollusc histopathology
- Neoplastic lesions in mollusks
- Sesión práctica: Identification of neoplastic lesions
Programa de Doctorado en Acuicultura. Facultad de Ciencias del Mar de la Universidad Católica del Norte.
Coquimbo (Chile).
VILLALBA GARCÍA, A.
Taller teórico – práctico: Taller de Biopatología de Moluscos
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17.2. ASISTENCIA A CURSOS
a) EGAP. Santiago de Compostela
Prevención de riscos laborais: seguridade nos laboratorios. Bouzamayor Yáñez, V.
Curso Superior de Linguaxe Administrativa. Cruzado Estévez, A.
Estatuto Básico do Empregado Público. Cruzado Estévez, A.
Lingua inglesa. Linares Cuerpo, F.; Nóvoa Vázquez, S.
b) Centro Tecnológico del Mar. CETMAR. Vigo
Seminario: Caracterización da situación sanitaria do litoral español relativa á infección por virus herpes en
moluscos bivalvos e avaliación de impacto da enfermidade. Carballal Durán, M.J.
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18 ESTANCIAS
18.1. ESTANCIAS EN EL CIMA
Nombre: Yuri Bovi Morais Carvalho Organismo: Universidade Federal do Rio Grande, Rio Grande do Sul (Brasil). Estudiante de doctorado becado por CAPES (Gobierno Federal de Brasil) Tema desarrollado: Aprendizaje sobre enfermedades de moluscos, con énfasis en análisis de muestras traídas de Brasil. Nombre: Zoe Hilton Organismo: Cawthron Institute, Nueva Zelanda Tema desarrollado: Programas de selección genética en moluscos. Nombre: María Prado Organismo: Cork University College, Irlanda Tema desarrollado: Análisis proteómicos en el contexto de la respuesta inmunitaria
de la ostra plana. Nombre: Lamia Azbaid Organismo: Institut National de Recherche Halieutique. Tanger (Marruecos). Tema desarrollado: Parasitología de moluscos.
18.2. ESTUDIANTES EN PRÁCTICAS
Alumno/a: Corrochano González, J.B. Procedencia: Universidad Complutense de Madrid Duración: 160 horas Tutor/a: Ojea Martínez, J. Alumno/a: Rodríguez Riveira, A. Procedencia: Universidade de Santiago de Compostela Duración: 240 horas Tutor/a: Ojea Martínez, J.
18.3. TFM. MÁSTER INTERUNIVERSITARIO GALLEGO DE ACUICULTURA
Alumno/a: Hermida Alonso, L. Universidad: Santiago de Compostela Título TFM: Cultivo larvario de tres especies de almeja de interés comercial en Galicia: Ruditapes philippinarum, Venerupis corrugata y Politapes rhomboides.
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CUENTAS
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19 GASTOS
I.- Distribución del presupuesto por capítulos
Capítulo
Cantidad (Euros)
Capítulo I: Gastos de personal 1.964.811,79 €
Capítulo II: Gastos corrientes en bienes y servicios 159.070,17 €
Capítulo IV: Transferencias corrientes
Capítulo VI: Inversiones reales 640.940,29 €
Capítulo VII: Transferencias de capital
Total 2.764.822,25 €
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20 FUENTES DE FINANCIACIÓN
ORIGEN DE LOS FONDOS
CANTIDAD (€)
Propia: Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro. Consellería do
Medio Rural e do Mar. Xunta de Galicia
a) Acciones de Investigación que desarrolla el CIMA
b) Convenios con entidades externas
140.619,45 €
I+D de la Xunta de Galicia 5.398,79 €
Administración General del Estado
Plan Nacional de Cultivos Marinos
JACUMAR
INIA, MCYT/MEC
146.452,47 €
Unión Europea (INTERREG, VI Programa Marco,...) 91.531,61 €
Total 384.002,32 €
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