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Imunocromatografia e Dot-ELISA
Responsável – Prof. Helio J. Montassier
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IMUNOCROMATOGRAFIA A imunocromatografia é uma técnica que começou a ser
desenvolvida nos anos 60, sendo primeiro criada para o estudo das proteínas séricas;
Atualmente é usada para o imuno-diagnóstico de muitas
doenças infecciosas: Dengue, malária, amebíase, peste bubônica, brucelose, giardíase, leishmaniose visceral, hepatite B, infecção por vírus como HIV, cinomose, parvovirose, coronavirose, Helicobacter pylori, Streptococcus pneumoniae, entre outras; sendo usado ou para a detecção de Ags ou de Acs.
De grande valor em situações mais simples de trabalho e nas quais os profissionais de saúde necessitem tomar decisões e assumir condutas mais rápidas.
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Características
Qualitativos;
Teste de triagem;
Rápido;
Econômico;
Fácil interpretação;
Leitura é feita a olho nu;
Apresenta sensibilidade e especificidade similares ao ELISA de terceira geração;
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Princípio
Utiliza uma matriz de membrana de nitrocelulose ligada a uma tira de acetato transparente;
Para detectar antígeno, emprega-se um anticorpo de captura, ligado à matriz e um anticorpo marcado com partículas coloridas que é específico para o antígeno pesquisado;
Para detectar anticorpo, utiliza-se um antígeno específico ligado à matriz e um anticorpo anti-imunoglobulina marcado com partículas coloridas;
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Princípio • Para detecção de antígenos podem ser
utilizados anticorpos fixados na linha de captura e como conjugado um segundo
anticorpo conjugado a partículas coloridas. Um dos métodos imunológicos desses
testes emprega partículas coradas, como ouro coloidal (róseo) ou prata coloidal (azul
marinho) como revelador da interação antígeno-anticorpo.
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IMUNOMIGRAÇÃO RÁPIDAIMUNOMIGRAÇÃO RÁPIDA
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IMUNOMIGRAÇÃO RÁPIDAIMUNOMIGRAÇÃO RÁPIDA
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IMUNOMIGRAÇÃO RÁPIDAIMUNOMIGRAÇÃO RÁPIDA
NASA
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POSITIVO: Duas linhas são visíveis, sendo uma linha na região controle (C) e outra na região teste (T). A intensidade de cor da linha teste (T) poderá variar de acordo com a concentração do analito (Ag / Ac) presente na amostra. Todavia, qualquer intensidade de cor na linha teste indica resultado positivo.
NEGATIVO: Apenas uma linha é visível na região controle (C), não sendo observada linha na região teste.
INVÁLIDO: Não é evidenciada a linha controle (C). As razões mais comuns de falha são o volume insuficiente de amostra ou falha no procedimento técnico. Neste caso, reler a técnica e repetir o teste com uma nova tira.
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IMUNOMIGRAÇÃO RÁPIDAIMUNOMIGRAÇÃO RÁPIDA
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FIV e FeLV Vírus da Imunodeficiência Felina (FIV) e
Vírus da Leucemia Felina (FELV)
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Kit teste - vírus da cinomose
Detecção de Ag do vírus da cinomose; Amostra: mucosa nasal, conjuntiva, saliva, urina,
soro e plasma; Kit: diluente, swab esterilizado, conta-gotas
(pipeta) e dispositivo teste; Materiais necessários não fornecidos: solução
salina e cronômetro.
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300µL
Soro ou plasma: 2 ou 3 gotas no diluente
Kit teste - vírus da cinomose
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Kit teste - vírus da cinomose
• Quando o teste começar a reagir , deve-se observar uma cor rosa se movendo através da janela de resultado no centro do dispositivo
de teste.
• Se esta não for visualizada após 1 minuto, adicionar mais uma gota da amostra +
diluente no orifício;
• Interpretar o resultado do teste entre 5 e 10 minutos. Não interpretar o resultado em um
tempo superior a 12 minutos.
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Kit teste - vírus da cinomose
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Kit teste - vírus da cinomose
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Kit teste - vírus da cinomose
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• Reação Cruzada
Kit teste - vírus da cinomose
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• Testar a amostra imediatamente após a coleta;
• Se a amostra não for testada imediatamente, manter sob refrigeração (2 a 8º C), por 48
horas;
• Se for necessário um armazenamento de vários dias, é recomendado o congelamento
(-20ºC).
Kit teste - vírus da cinomose
Observações
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Detectar anticorpos contra o virus da cinomose
Amostras: sangue, plasma ou soro
Kit teste – Anticorpos contra o vírus da cinomose
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Kit teste – Anticorpos contra o vírus da cinomose
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LIMITAÇÕES
Resultados falso-positivos Animais recém-vacinados;
Resultados falso-negativos animais imunossupremidos;
Kit teste – Anticorpos contra o vírus da cinomose
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Kit teste – Vírus da Parvovirose e Coronavirose
• O teste deve ser realizado utilizando fezes caninas frescas. Se a amostra não for testada imediatamente, manter sob efrigeração (2 a 8º C) por até 48 horas.
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Detecção do Vírus da Raiva pelo Teste
Imunocromatográfico
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Detecção do Vírus da Raiva pelo Teste
Imunocromatográfico
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Detecção do Vírus da Raiva pelo Teste
Imunocromatográfico
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Detecção de Acs contra o vírus da dengue
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Detecção de Gonadotrofina Coriônica Humana (GCH)
Pode ser detectado no soro partir do 7º dia de gestação;
Duplica a concentração a cada 2 dias.
Qualquer urina do dia;
Princípios:
- Conjugado: Ac anti-GCH + partículas coradas
- Anticorpo de captura
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Detecção de GCH
1 gota de urina
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DOTDOT--ELISA ELISA reareaçção ão imunoenzimimunoenzimááticatica sobre membranassobre membranas
Qualitativa ou semiQualitativa ou semi--quantitativa: rquantitativa: ráápida e simplespida e simples
ProteProteíínas solnas solúúveis, fungos, protozoveis, fungos, protozoáários, bactrios, bactéérias e vrias e víírusrus
Stott, 2000
IMMUNO-DOTIMMUNO-DOT
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• Para a realização deste teste, utilizam-se sistemas enzimáticos com proteína
• A, ligada a corantes específicos, também denominados Dot-ELISA. Ele é realizado
• em papéis, o que possibilita sua utilização em áreas endêmicas, pois dispensa
• etapas críticas de incubação e leitura ótica (FERREIRA & ÁVILA, 2001; MANCIANTI
• et al., 1996)