human elastase 1: evidence for expression in the skin and the identification of a frequent...

6
Human Elastase 1: Evidence for Expression in the Skin and the Identi®cation of a Frequent Frameshift Polymorphism Ulvi Talas, John Dunlop, 1 Sahera Khalaf , Irene M. Leigh, and David P. Kelsell Center for Cutaneous Research, St. Bartholomew's and the Royal London School of Medicine and Dentistry, Whitechapel, London, U.K. Human pancreatic elastase 1 is a serine protease which maps to the chromosomal region 12q13 close to a locus for an autosomal dominant skin disease, diffuse nonepidermolytic palmoplantar keratoderma, and was investigated as a possible candidate gene for this disorder. Expression of two elastase inhibitors, ela®n and SLPI, has been related to several hyper- proliferative skin conditions. elastase 1 is functionally silent in the human pancreas but elastase 1 expres- sion at the mRNA level was detected in human cultured primary keratinocytes. Antibody staining localized the protein to the basal cell layer of the human epidermis at a number of sites including the palmoplanta. Sequencing of genomic DNA from individuals with/without the keratoderma revealed a sequence variant, which would result in a premature truncation of the protein. This sequence variant, however, did not segregate with the skin disease and, indeed, was found to occur at a relatively high fre- quency in the population. Individuals homozygous for the variant do not have any obvious skin abnormalities. Based on the analysis of the secondary structure of the translated putative protein, the truncation is unlikely to result in knock-out of the elastase, but may cause destabilization of the enzyme±inhibitor complex. Key words: ela®n/keratino- cyte/protein truncation/serine protease. J Invest Dermatol 114:165±170, 2000 T he human elastase I gene (ELA1) maps to chromo- some 12q13 (Davies et al, 1995) and could be regarded as a positional candidate for the autosomal dominant skin disease, diffuse nonepidermolytic palmoplantar keratoderma (NEPPK) (Kelsell et al, 1995, 1999). Elastase (EC 3.4.21.36.) is a member of a group of enzymes termed ``serine proteases'' which are characterized by the reactivity of a serine residue in the active site of the enzyme. Elastase breaks down elastin, the speci®c protein of elastic ®bers, and digests other proteins such as ®brin, hemoglobin, and albumin. Three structurally related types of elastase, named elastases I, II, and III (or protease E), have been identi®ed, with several isoforms being secreted by the mammalian exocrine pancreas (MacDonald et al, 1982; Kawashima et al, 1987; Shirasu et al, 1988; Tani et al, 1988). Despite the apparent structural integrity of the human elastase I gene (ELA1), it is reported to be transcriptionally silent (Tani et al, 1987; Kawashima et al, 1992). The evolutionary silencing of the human elastase I gene in pancreatic acinar cells appears to be due to mutations that inactivate enhancer and promoter elements (Rose and MacDonald, 1997) which are crucial for pancreas speci®c transcription (Roux et al, 1989; Swift et al, 1989, 1994; Rose et al, 1994; Kruse et al, 1995). Dot blotting of human tissue mRNAs from kidney, heart, liver, aortic intima, and peripheral blood lymphocytes failed to detect hybridization to 32 P- labeled human elastase I DNA probe, neither could elastase I mRNA be detected in the human kidney, liver, or heart by the more sensitive reverse transcription±polymerase chain reaction (PCR) technique (Kawashima et al, 1992). It should be noted that when in the literature human elastase 1 activity in the pancreas is described, it is in fact elastase IIA. An elastase inhibitor termed ela®n (Wiedow et al, 1990), also referred to as skin-derived anti-leukoproteinase (SKALP: Schalkwijk et al, 1990, 1991), has been isolated from the skin of patients with scaling skin disorders (Chang et al, 1990). Ela®n has been shown to be a potent and speci®c inhibitor of porcine pancreatic elastase and human leukocyte elastase (Wiedow et al, 1990) as well as proteinase 3, an elastin degrading enzyme of neutrophils (Wiedow et al, 1991; Molhuizen et al, 1993). Another elastase inhibitor, secretory leukocyte protease inhibitor (SLPI) is also expressed in epidermal keratinocytes and upregulated in epidermal hyperproliferative skin disease (Wiedow et al, 1998; Wingens et al, 1998). Although elastase I is not expressed in human pancreas and other tissues, the striking conservation of the protein coding region and absence of any changes that could prevent correct RNA splicing or synthesis of a functional enzyme, suggest that this gene may in fact be functional, and that a candidate site for its expression is human skin where it may interact with ela®n or SLPI. The latter hypothesis is supported by the fact that the crystal structure and the inhibitory mechanism of ela®n was determined from its complex with porcine pancreatic elastase (Tsunemi et al, 1996)Ðthe porcine orthologue of human elastase I. This study reports the cloning and sequencing of a full-length transcript of pancreatic elastase I from cultured human skin keratinocytes. We also describe a nucleotide polymorphism in the coding region of the ELA1 gene, which would lead to truncation of the protein and may destabilize the enzyme±inhibitor complex. Manuscript received April 1, 1999; revised October 1, 1999; accepted for publication October 7, 1999. Reprint requests to: David P. Kelsell, Center for Cutaneous Research, St. Bartholomew's and the Royal London Hospital School of Medicine and Dentistry, 2 Newark Street, Whitechapel, London E1 2AT, U.K. Email: [email protected] 1 Current address: Dept de Genetica, Facultat de Biologia, Universitat de Barcelona, Diagonal 645, Barcelona, Espana. Abbreviations: ELA1, human pancreatic elastase 1; SLPI-secretory leukocyte protease inhibitor 0022-202X/00/$15.00 ´ Copyright # 2000 by The Society for Investigative Dermatology, Inc. 165

Upload: david-p

Post on 06-Jul-2016

213 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

����� ������ �� � ���� ��� ��������� �� � ���� ���� ���������� �� � ����� �������� ������������

���� ������ �� ������ ������ ������ � ����� �� ������ ��� ���� �� ������������� �� �������� ������ �� ��� !�����"�#$� ��� ��� �%�� ���� � �� � ���� ��� ��� �������%� &���� ������ ����� ����

����� �������� ����� � �� � ���� ���������� ���� � � ����������� � ��� �!��" ����� � ����� ��� �� �������� ������� ���� �����#������ ������������� ����������� ��������#��� ��� �� �� �� �� � �����$� ������� � ������ �������% ��������� �� �� ����� ����$����#���� ��� �&��# ��� $� ���� � � ��� ����'��������� ���� ���������% ����� � �� ��������������� �� � ����� ������� $� ����� � ����'���� � � �()* � � ��� ��� �� ����������� ������� ���������% *��$��� ������ ������+� � ����� � � $���� ��� ���� �� ������ ������� � � ���$� �� ��� �������� �����������% ������� �� ����� ,)* ����

���� ������ ���-����� � �������� � ��� ������ �����# ����� ����� ���� �� � �������������� �� � �����% .��� ����� �����#��� �# ��� �� � � � ��� � ���� ����� ���#����# ��� ����� � ����� � � ���� �� �� � ��'����� �� � ���������% ���� ������ ����+� ������ � ����� �� �� �� ��� �$ ���� �����$���������% /��� �� � �������� �� � �������������� �� � ������� ���� �����# ��������� �� ������� � ���� �� �����'�� �� ������# $� ��� ���� ���$���+���� �� ��+��0����$��� ������% ��� ����� ��� ������� ������������� ��� ����� ����� � ��������� � � ���� ������������� �!"# $"""

��� ��"�� �������� � ���� '(�)�* "��� � ��"+�"� �,-�. ' ����� �� ��� �//0* ��� ��� 1��������� �� � �������� �������� �� ��� ����"���"����� �2�� �������� ������� ��������"�%�� ���"������� 2�������"� '3(���* '������� �� ���

�//0� �///*� (������� '(� .�4�,��.5�* �� � "�"1�� � � ���� ���6%"�� ���"�� 77������ ��������$$ #�� � ��� ���� ����6�� 1% ������ �����% � � ������ ������� �� ��� � ���� ���� � ��� ��6%"��(������� 1���2� �#� �������� ��� ��� �8 ������ � ������ 81������� ������� ���� ������� �� � �� 81���� ��"��1��� ��� ��1�"�������� ���� ������% ������� �%��� � ��������� ��"�� ��������� �� ��� ������ '� ������� (*� ���� 1��� ������8��� #��� ������� ����"�1���� �� ����� 1% ��� "�""����� �9 ���� ��� ���� '�� ������ ��� �/:,; ��#����"� �� ��� �/:<; ������� �� ��� �/::; ���� �� ����/::*� ������ ��� �������� ���� ����� ��������% � ��� ��"���������� � ���� '(�)�*� �� �� ������� � 1� ����� ���������% ������'���� �� ��� �/:<; ��#����"� �� ��� �//,*� ��� ���������%����� ��� � ��� ��"�� �������� � ���� �� ��� ����� � ���� ����������� � 1� ��� � "������� ���� ��� ������ ����� �� �����"��� ���"���� '��� ��� �� ����� �//<* #�� � ��� �� ����� ��� ���� ��� �8 ����� ������ '��9 �� ��� �/:/; �#��� �� ����/:/� �//4; ��� �� ��� �//4; ����� �� ��� �//0*� � 1������ ���"�� ������ "�3)� ��" 2����%� ������ ������ ���� ����"�� ���

���������� 1�� �%"�� %��� ������ � ���� � �%1����6���� � .,�+��1���� ��"�� �������� � 3) ��1�� ������� ��� �������� �"�3) 1� ���� ��� �� ��� ��"�� 2����%� ������ � ����� 1% ���"�� ��������� ������� ����� ������=��%"����� ���� ��� ���'���* �� ���-�� '��#����"� �� ��� �//,*� �� ����� 1� ���� ����#��� �� ��� ���������� ��"�� �������� � � �����% �� ��� ��� ���� ����� ��1��� �� �� �� �� � �������� ��)�

)� �������� ����1��� ���"�� ���8� '&���# �� ��� �//>*� ����������� � �� �2��+������� ����+���2��������� '��)��?� ���2#�@2 �� ��� �//>� �//�*� ��� 1��� ������� ��" ��� �2�� ��������� #��� � ����� �2�� �������� '����� �� ��� �//>*� (��8� ���1��� ��#� � 1� � ����� ��� ��� �8 ����1��� � �� ������ ����� �������� ��� ��"�� ���2 %�� �������� '&���# �� ����//>* �� #��� �� ��������� .� �� ������� ��������� ��6%"� ����������� '&���# �� ��� �//�; �����6�� �� ��� �//.*� )������������� ����1���� �� ����% ���2 %�� ������� ����1��� '����* ����� �9������� �� ������"�� 2������ %��� ��� ����������� ��������"�� �%��������������� �2�� ������� '&���# �� ��� �//:;&������ �� ��� �//:*� )������ �������� � �� �� �9������� �� ��"����� ���� ��� ���� �������� ��� ����2��� ��������� � ��� ������ ���� ����� ��� �1��� � � ��% ������ ���� ��� ������� ��� � �3) ���� ��� � �%������� � � ��� ����� ��6%"�� ����������� ���� ���� "�% �� �� � 1� ��� ������ ��� ���� � �������� ���� ����� �9������� �� ��"�� �2�� #���� �� "�% ������ � #��� ���8� ������ ��� ������ �%������� �� �������� 1% ��� �� � ���� ��� �%�������� ���� ��� ��� ����1���% "� �����" � ���8� #�� �����"������" ��� "���9 #��� �� ��� ��� ����� �������� '�����"� �� ����//5*A��� �� ��� ������� � ��"�� �������� ��

���� ����% ������ ��� ����� ��� ��-��� ��� � � ����+����������� ���� � ��� ����� �������� � ��" ������� ��"�� �2��2������ %���� &� ��� ��� ��1� � �� ������ ��%"�����" ����� ���� ����� � ��� (�)� ����� #�� � #��� ���� ����� ���� � ��� ������ ��� "�% �����1���6� ��� ��6%"�=����1��� "���9�

����� ���� �� ����� )���� �� �///; ������� B �1�� �� �///; � ������� ��1�� ���� B �1�� <� �///�

������� ��-����� �? ���� �� �������� ������ �� �������� ������ ����� !�����"�#$� ��� ��� �%�� ���� C������ � �� � ���� ��� ��� �������%� , 3�#��2 ������� &���� ������ ���� (� ,)�� ����("���? 2������D� ���� �����2

�������� �������? ��� �� E����� �� F� ����� �� !������ ����������� ��!�� ����� ������ 540� !�� ����� (������

)11���������? (�)�� ��"�� ��� ����� �������� �; ����+�� ����%���2 %�� ������� ����1���

>>,,+,>,GH>>HI�0�>> J ��%����� � ,>>> 1% ��� � ���% �� ������������� ��"����%� �� �

�12

�)�(��)�� )3 �(�CB �

����������������� �""���������� #�� �����"�� � 4=0�"��6�� �2�� �� ���� � ��������� ���� '77! C$$ ��1����% ������������ 2� ��� ����������� ����* "� �� �� ������� F���� �2�� #�� ���� ��6���� ��-��� ������� ��� ����� �� =<>��� ��� "������� #�� �%�� ������ ����� ���� ��� ����� ��� ������� 1% �������� �""������ ��"����% ��� ������ �� ���� #��� ������� ����� )�B (�K���� L �%���" C�� ' )!*' )�B� ������������ �)* ���#��� ��� "����� ������ ������ ����� ��������� �� ���� #��� 1� 2�� #��� ��"�� �#��� ����" '������� �?0 ���������� 1������� ������* 1���� �� �1���� #��� ��� ���"��% ����1�%�)���+�� ��� ��� ����� �������� ��11�� "� ���� ����1�% '���"� �������������� ��"� ���� �)* #�� ������� �?0>>> �� �������� 1������������� #��� >��M !�)� ����� �� ���� #��� �� �1���� #��� ��������1������� ������� >��M 1���� ����" ��1�"�� ������� � ��� ���"��%����1�%� )���+��"�� ���2 %�� �������� "��� "� ���� ����1�% ��" )�B #�� ���� �� �������� �?0> ��� �?�>>�

()* �������� C�"�� �2�� ���"��% 2������ %��� #��� ������� #������������� "��� .�. ������� �� ��� ��1�� �� 3������� �� �� '�//4*� �����3) ��" �N���� 2������ %�� ������� ��� ���� ��6�� ������ ��"����#�� ������� #��� �3)6� ! '���+����� F������#�� �G* �� � ������+������ ����� � ����� � "����� ������ ������ ����� ��� -�����% �����������% � ��� �9��� ��� ���� �3) #��� �� 2�� 1% ������ ����� ���� ��� �:� ��� ,:� ��3) �� �������"+1�"���+������� ������ ���� '����#�*�

( �� �����������0�3( ��� �,)* ������ F� ������������ ������=��� E���)"� �3) ��� ��� '���2��+(�"��* #�� ��������� �3) ��"���� #��� ������ � 50�� �� ,"�� � ������� �� ����%���� ����� #�� � ��� "��2 ��� ��%')* ���"��� � ��� "�3) ��� ���� �3) �������� ���� ��% ��� ��� "����� "�9 �������� ,�0�� ����'�*�5� 0>"� ���� 0"� ����,� �>"� ����=C�� �C:�.� �3����"� �� �� �3��� ����1��� �� ����� ��� ,�0� ����� ���K ������������ �������� 8��� ���"� ,>��� ��� ��� ���� #��� �� �1���� �� �"��"�������� �� �>"�� �� ���"�� ��������� ��� ������� ����� ������ #�������"�� �� .>"�� �� 4,�� �� � �� �� ��� "� ����� ���#�� 1%0"�� �� //�� ����������� ��� 0"�� �� 0�� ���� ����� F� ��� �������� ����+��� �8 ���"��� ��� � ���� � ��- ��%"����� #��� ����� ������ ��� ���� ������� � ,�,"� ����, ��� >�,"� �3��� �� 8��� ���"�� �>>��� )"���8 ���� #�� ������ �� �� 4> % ���� #��� ����������� ��/0�� �� .> �� ��������� 5��� �� �"�� ��� �9������ �� <,�� �� ,"�� ��� ���2��+(�"�� 3) ����"�� % ����

�# ���������� ��� ����"���� ������ ��� ���� ������ ��"����� ����� �������� � ����� ���� #��� �"���8�� ����� ��� ���"��� �����?��#��� ���"�� 0��))E))EE�)E�EE���)�� .� ��� ������� ���"��0���E)�)���)E)E�E))���.� %������� � 5./ 1� 3+���"��������"��� ��� ��� ��#��� ���"�� 0��))�EEE�)E��EE���)E).�#��� ��� ������� ���"�� 0���E�))E����)��E�)E)��.� �� ���.<> 1� �+���"���� ����"���� ��� �,0 1� ���������� ����� � ����� �#����"���� ������ � ���-�� ���� ����� ��� ��� ���� �� #��� ������� �� ���0M ������ ���� ��� ����"���� #��� ��� ����8�� ����� E��������'!��>�� K����� �)* ��� ��1 ���� ��� �E(�+� �� �� '��"����

������� &�*� ��� ���� #��� ��-��� �� �� 1�� ���� ���� ����� ��� ��#��� �� ��������� �������� ���"���� F������ ����"���� ��" ������������"��% 2������ %�� ������� � ��������� �2�� �%��� #��� ����8�� �����-��� �� ���� ��%; �#����� 40 ��� % ��� #��� ��-����� � ���������� 5./ 1� ��"����� �� ���� � ��-��� ����

��� ������� ����� ������=��� ���"��� �� ���� ��� � ��"�� ���������� � �������� ��� #��� �������� � �� ���6� ��� 2�#� ����"� � ��� ���������� ��6%"��� ��� 2�#� "�3) ��-��� �� #��� ������� ������"��� ���� 1���� � ��� "�3) ���� �������% �������

������� ����� ������=��� ���"�� ��-��� �� �� �������� �� '(��,*�1���� � "�3) ��-��� �� ��1"����� � E��!��2 '� ����� ��"1���? >>,.5� (>�,,>� ��55.�� ��550,� ��550.* #���?� 4,� 1� 0� ����"���? ��#��� ���"�� 0� E��EE)E�����)E+��E�EEE .�; ������� ���"�� 0� �E��EEE�)E))�EE�E��EE .�;! 0,> 1� .� ����"���? ��#��� ���"�� 0� )E���EE���E��E+E�)E .�; ������� ���"�� 0� E�))��)��E))��E)���)E��E .��(������� ��� '(�.* 'E��!��2 ) ������? ��:5/, >.0�5� (>�,0<*?� 4.> 1� 0� ����"���? ��#��� ���"�� 0� E���)E���������+����E�EE .�; ������� ���"�� 0� )��)E��EE)EEE)E�E)EE .�;! 5�0 1� .� ����"���? ��#��� ���"�� 0� E�����EE)���)��)+EE�EE .�; ������� ���"�� 0� ��E)��)E�)��E��)E��EE .��

������� �� ����� ,)* 3) #�� ������� ��" ��"�� 1����"���� ����� 3� ��� !)��. 3) �9��� ��� 2�� '3� ��� !�� ��� ��������� �%��� ����* � ����� � ��� "����� �����$� ������ ����� ������ ���� #��� �%�� ���% �����"�� #��� )! ����"���1�� 3)��%"����� ��� ��� ��� 1����� '77)���� �� !��� �������$$� (��"������%� ����* �� 5>=5,�� ���"�� ����������

���"��� �� ��� ��� �"���8 ���� � ��� ��"�� �������� � ��" ������"� 3) ���"��� #��� �������� 1���� � ��� ��-��� � �� ���E��!��2 '��1"����� 1% ��#����"� �� ��� �//,; � ����� ��"1���G5,,0,=G5,,0/*� F� ��� �9�� #���� ��% � ��# 1��� ����� � N��2�����-��� � #��� ������1�� �� ��� ��1�� �"���� ���"��� #��� ��� �� �� ����9� � �"����% ��� ������� ��� ����� )�������� E��"� ��%"�����"�9 '����� �� ��� )��� �)* ��� 5:�� ��������� ��"�������� #�� ������ ��� � ��� ��� ����"����� F� ����� 5 � E��"� &��2��� ����� �'�� ��� ��1�� �� ���1��� �� ��� �//0* #�� ��-������ ��� ������+����������"� 3) ����"��� ��1������ ��� ������ ��� �8 ���"��� #��� �������� ���� ��" � ��� E��%� ��� ���"��% ��� ��� ��� #�� �����"������� ��� ���� ������ ���"�� ��� �� ���� ���� ��� �8 ���"�� �� ���"����� � ��� �����1���� �9�� ���������� ��� ���"��% ��� ���� #���������� 0>+��� ��� � 77������$$ ��� ��� ��� #�� �����"�� ����� ���������� ����� ���"���� ��� ������ ��� %������ ���� ������ 1�����#�� � #��� ��"� ����8�� ��� ��-��� �� ���� ��%�

���"�� ��-��� �� �������� 1���� � ��� 1������ ����� ��-��� �� #������� � � ���� ��� ���� ����� ��� ���� � ����� � ��� ��"�� �������� � ��"�������H��%"�����"� ��� ���"�� ����� #�� � �"����% ��� ����� �9��� ��� (�)� ���� ��� ��#� �� .�$� ��

��� ��� ���� �� #��� ����8�� ����� O�)-�� 2 ��� ����8 ���� ��"�� 'O�)���* ��� ��-��� �� � 1�� ������� ����� ��� )!� ���������"��� � !�� %� ���"����� ��-��� ��� ����% ��� ��� "�9 '���2��(�"��* � �� )!� .<< ���"��� ��-��� ���

.�$� �% ����� ����� ����� ������� � � � ���� �� � �&*� �

(9� �� ���"��

� F�#��� 0� )�EE)�E)�))EEEE�E����� .�������� 0� EEE���E))�)E��)E�EE�� .�

, F�#��� 0� ���)E)E))���)�)E��EEE�� .�������� 0� )��)���))E���E)����)��� .�

. F�#��� 0� �)E���3�)EE���))��E)����� .�������� 0� E)E)EEE�))))��)�)���������)E .�

4 F�#��� 0 7��)�������)�����)))E�EEE� .$������� 0� �����EE)�E))�E)E��)E� .�

0 F�#��� 0� E��E�))�)��))�E����)�� .�������� 0� ���EE�����EE��)�))E�)� .�

5 F�#��� 0� ���E)E���)E�����)�E)E)E .�������� 0� ))E�E)EEE�)��E)E�))E)�� .�

< F�#��� 0� ���)EE)����E������������E� .�������� 0� ))EE))E)�E)�EE���E��� .�

: ��� ��#��� 0� E���E)E)E��)EE�E)EE����E .�������� 0� )EEE)�����E����EE)EE .���-��� �� ��#��� #��� 0� E���)�EE��)����))EE�� .�

�11 �)�)� �� �C( B��3)� BF �3K(���E)��K( (��)�B�BEP

�(�����

* �������� �����'��� ����� �� ���� �� ����������� ���� �� ���� � ���� �� ��� ������ � � �������� � ����"�� �2��� #� ���� �� ����1�% ������ ������� ��� �� ������ ����� ��������� #�� � ��� :/M �"�� � �� �������% #��� �����"�� �"�� '��� �����"��� �� �� 2%*� � � ���� �� ���� ���"�� ��"�� �2�� �� ��� ������ � ��� � ���6���� � ��� (�)�������� ��� ����1�% ���� ��� �9������� � �� ��������+��2������� �� ��� 1���� ��%�� � ��"�� ��"�� ������"�� ��" 1���������"� ���� ��� ����2��� )� �9�"��� � ��� �""������ ��"� ���������� � ��"�� ��� �2�� #��� ��� ����+�� ��� ��� ����� ������������1�% �� ��#� �� �� �� ���� ������ #�� �� �� ���6�� 1% �������1�% ���� ��� ������� ��"�� ���2 %�� �������� '�� ��#�*���� �� � ���� #� ���� ��� ����+�������� ����1�% �� �� � � �#������� '������� �?0>>>* "�2�� �� ����2��% ���� ��� ����+�� ������ ����� �������� ����1�% ���+��� ��� #��� 2�������� &� �����������% ������ ���� ��11�� ����1���� ��� ��� �� ��� ��"������������ ���� �� �#�� �������� � ��� ����1�%�

��� ������ � � � ��� ����� �������� ��2� ������ �� ��"�� �2�������� ��� -������ � #������ ��� ������ �� ��� ��"��� ����� ������� � ��� ��"�� �������� � ���� '��� ����� ����� �//<* ��� ���� � ��� �9������� �� �2�� � ���� ������ ��� �9������� ��" ������ ���� � ��� �2��� �� ���� � ���� �"� ����� � ���� -������ #����� ������� �%�� ���� � ��� ��� "��� �2�� #��� ��� ��"� ����+�� ��� ��� ����� �������� ����1�% '�� ��#�*� ��� ����1�% �����% ������� ��� 1���� ��%��� � ����� �2�� �� ����� 1�� ��� ��� ����

���� �� ��� ��� ��1� ��� ����� ���������� ����� 1��������� ������������ � ��"���� ������ �� ������� �� ��� �2�� � ����"�""���#�� � ���2�#� � �9����� ��� ��6%"� �� ��� ��� �����

)����� ����� ��������� ����� ����� � 4�&*�5B#��� � ��� ���� ����� � �"�� � �� ��������� 1��#������ ����� ���������� ���+��� �����% � ��� ����1�% #��� ��� �����# 2�#� ��� ����� ��������� ��� �� 1� �9 ������ K��% #��2�������� � � ����% ���� �� �%�� ���� ��" ��"�� ��� ���� ���1� 1������ �� ������ � ��������� � ��� ����1�%� ���������� ����� �������� � ��� 1��� ��#� � 1� �1���� �� ��� ��"����� ����� ���� �������� ���� ��� ����1�% �� ��� ���� � ������� ����� ���������� ��������� #� ���� "��� "�3) ��� �8 ���"��� �� ��� ����� 2�#� ��"�� ��� ����� �������� ����� '(�)��(��,� ��� (�.* � ����������� "�3) �9������� �� ��"�� ������� 2������ %��� ��� ����� ��� ����� ������ 1% ������������ ������=���� ��� �# (�)� ��� �8 ����"���� ��� 1����� ��% �� ��� 2������ %�� ���� �3) ���������� '�� !� ������ ��� *� ������� ����� ������=��� �"���8�� ��� ����"���� ���� �9�� ��� ��6� '4,� 1� ��� 0,> 1� ����"��� � �������� �� =�� !������ � ��� � ��� 4.> 1� ��� 5�0 1� ����"��� � �������� ��� =�� !������ �� ��� � * ��" ��� ���� �3) ���������� ��" ��"����� ����� 1�� ������ � ���� � ��% � ����� ���� �� �� ���������"�� ���"��% 2������ %��� '�� !� ����� �� �� �� ��� ��*� ��������"��� #��� �������� � �� ���6� ��� 2�#� ����"� � ��"���������� �� � �������� ���� ����� �����% '��� ��������� ��� �������*�B�� ���� �"����� ���� ��� ������ ���� ��� 1% ��� ����+�� ������ ����� �������� ����1�% �� ��� ������"�� �� ��2��% � 1� ��"���������� ��

�,)* ����� �������� ��� �� ������ ��-��� � � ���"����� "�3) �� ��"�� �������� � ��� �� %�� 1��� ������� '���������������* ��� ��% � �%������ �������� "�3) ��-��� �'� ����� ��"1�� (>�44<*� ����� ��� ��" ���"� ��-��� ���� ��� "������ #��� ��� �� ������ ��-��� � � ��� ��� �������� �

�� �� �% ������������ �� ������ ����� ��� ���� ��� ������'�� ����� ��� ������% '�* 3�������� ���� �� ��� '�� ����% )!��%*� '�* ������� #��� ����+�� ��� ��� ����� �������� ��11�� "� ��������1�%� )� ����1�% ������� �?0>>> � ���� ������� �������� � ���1���� ��� ��%�� � ������"�� �� 1�������

�� �� !% ( �� �����������0�3( �� � ����� ����� ���'����� ������ �# ��# ��� ��� ���� ��� ()* ����������� ���"���#��� �������� � �"����% �# ��������� ���������� ����"���� � �� ���������� �� 2������ %���; �� ��� ����� ��� �������? 40 % ��� � /0��.> �� 5��� 5> �� <,�� �,> �� ���� � ��� �� 5./ 1� 3+���"���� ��� �(�)�; ����� ��� �� .<> 1� �+���"���� ��� � (�)�; ����� � ��� ��4,� 1� ��� � (��,; ����� � ��� �� 0,> 1� ��� � (��,; ����� � ��� ���4.> 1� ��� � (�.; ����� �� ��� ��� 5�0 1� ��� � (�.�

KB�� ��4� 3B� � )3�)�P ,>>> (�)� (G��(���B3 �3 �C( ���3 �16

���� ��� ��� 3) �� ������1�� '��#����"� �� ��� �//,* '��� ������� 3) �4, 1� ����"��� � ����� ��"1�� >>�0/*�

��� ����� � �# ����������� 8��� �9�� ��� 1��� ��������� �� ���(�)� ���� '��#����"� �� ��� �//,; � ����� ��"1��� G5,,0: ���G5,,0/� ��� �� 2&*� &� �������� � ����+��� �8 ���"�� �� �������� �������" � ��� ���������� ����� ��� #�� � �� ������ �� ��1�� ��-��� � ��������� )� "������� �1�� �� �# ���"�� �����'�� ��-��� �� ��� ��������� ��� �������* �"���8�� ����"���� ��9�� ��� ��6�? 54> ��� .<> 1�� ����� �����%� ��" ��� ��"��2������ %�� ���� �3) '�� !� ����� � ��� *� ����� ����"���� ��� ��� ���� ������ � ��� ���� ���� ��-��� � ��� #�����1 ���� ��� �E(�+�� ��� �,0 1� ���������� ����� � ������# ����"���� ������ � ���-�� ���� ����� ��-��� ��� � ���������"���� �������� "����� ��"�� (�)� 3) //M ������ �� ���� �� ����� ���� ��� ���� ������ 3) ��-��� � � ��"���������� � '�� ��1"����� � E��!��2� � ����� ��"1��?)F�,>4/.* ��� ��� �"�� � �� ���������� � ��� ���� ����� ����#� �� �� "� B�� 3) ��-��� � ������ �# �� ��������1��������� '�� �� �9� . ��� ��� �� �9� <* �� "����� #������ ��1������ ��"�� �������� � ���"� ��-��� �'��� �� 2&*������ ��1��������� ���� � ��� �9 ����� � ��� ��� �"�� � ���?���+44 ����� �� ��� )�� ������� ��� E�� ��1�������� �� )��+,4.���� ��"� �� ������ �������� �� #��� ��� ���� �� ��� � �����"� 3) ��"���� '��� ��9� 1��#*� ����� ������� �#�����"�% ��N� � �� ������ ��%"�����" 1��#��� ��� ����� ���������� ����������

)������ ��#����"� �� �� '�//,* ���� ������ �# ��������������� � �������� � ��� �9�� � ��� ���� '� ����� ��"1�� G5,,0:*��������� 1% 4> 1� �� ������� #� ��� �������% ��% ��� ���� ��"'��� �� 2&*� �"��%��� ���� ��� 8��� ���� � ���� �� �������������% ������ "�3) ���� ��� �� 2������ %����

���� �3) ����������� � ���"��% 2������ %��� ������� ��"��"�� ��"�� �2�� � ��������� 1�% ����� '1������ �1�"��� ���"*��� #��� �� ��" ����������� � ��������� ����� ��� �� ��� ����� #���������� �� ��� �# ��"�� �������� � ������� ����� ������=�������"����� ) #��2 1��� � ��� ������� ����� ������=��� ���� � ��� ��� 1� 1������ ��" ��"�� �2�� ���� �3) ��"�����

*� ������ ������������ �������� �������� ��� ��� �� �� � �+�� � ����������� �� "������� ��(�)� ��� �������� ������� 3(���� #� ���� � ������ ��� ��������� � ��� (�)� ���� '�� ������ ���� � �����* �� ���"� 3)��" ���� ��� ��� ������ ��� ��"��% "�"1����

��� ��-��� ��� �������� �� ����������� ��%"�����" �� �9� <���� ���"� 3) ��-��� � � � �����6%��� ��� �"6%������ 1�� ������� �� ��#� �� �� 7� B�� ������ �� ��� ������ � ���������� � � � '��#� �� � E � ��� ������� ������ �� �� 7� ������ �� 2&* �� � �������� "������ 77�� ���$$ "������ � ������ � � 8�� ������� ��� ���#�� 1% 8�� %����� �� ������������ 77�� ���$$ ���� ���� ��% �#������" ��" ��� ��-��� ��� ���� ��� � ���� ���� � 2�� � ��� ��6%"� '��� �� "* ��� ����������� ����� � � ���"������ ������ �� ����% ��� �� ������������ ��� �������� ,0: �"�� � �� ������ 1% ,5 �"�� � ����

��� ������ ���� ����� ������ ��� �� ��������� #��� ����������� ���������� �� "�% 1� � ��%"�����"� � ������� ��%"�� %�� 3) ��" :> ��������� ��������� ��"�� ������������� ���� ������� �������� ��� ������ � � ���� ������ �� � ���������% �������-��� % #��� 4. �"6%��� �� ��� 77#���+�%��$$ ������� .������6%���� ��� ��9 �"6%���� �� ��� ���� ���� ������������������� �����6%��� ��� �"6%��� �� ���� "������ ��������"�� #��� � 1���� �2�� "�������� �����������%� � �2��1������ #��� ������1�� ��" ��� ����������� #� ��� �"6%����� ���� ��%"�����" � ����������� ��% ��1��� ������"�� �������

B#��� � ��� ���9�� ����% ���� ���-��� % � ��� ���������� ����� ������� �"�� ���������% ��"�� ������������ #� ��������� � �������� ��� ����1�� ���� � � ��� ���"������ � ��� ������� ��� ���������� ������� ��� � ���� ���� � (�)� �� ����� ����"�� � ��� � ��� ����%�� ����� 'C��+5.� )��+���� ��� ���+,>5*������ ��������� �� #��� �� "�� � ��� %������ �������� '��� 1�� ������� ��*� #�� � ���1���6� ��� �� ����% ���� ���� � ��� ������� ��� ��� �������" � ��� ���"������ ��� ��"��� ������ ��� '��������"���� �� �� 2%*� &� ���� ����%6�� ��� "����� ����� ����% ���� ����� � ��� �# �������� ���� ���� �� ����� ����B�� ������ ����%��� �����" 'E���@� ��� ���Q���� �//4*�B� � �� ����% ���� ���� ����� ��� ��%"�����" "�������� ������ ���� �9 ���� � � ���� �����= ��=����= ��=����= ��=����� ������ ��� ���� ��� ���"���� ����9� ���� �� ������ ��� 2�% �"��� �� �������� K��+,,< ��� ���+,./ ������� �� ��� "��� � �����1������ 1������ � 2��� #�� � ����1��� � ��� ��1������

�� �� "% ����� ����� � �,)* �� ������ ���� ���������������� ��� ����� ���� ��������� �� � ����� � �������������� �� ������� ����� �������� �� 1��#��� �� ��-��� � ��� ����� ������ 1% ��#����"� �� �� '�//,; ��� ��9�*� ��� �"�� � ��� � ��� ����%�� ����� 'C��+5.� )��+���� ��� ���+,>5* ��� ������� �� 1�� #��� ���1�� ���������� !�� � ���� #��� � ������ ��������� ���������� K��+,,<��� ���+,./ �������� ������� �� ��� "��� � ��� ��1������ 1������ � 2���#�� � ����1��� � ��� ��1������ ��� �8 ��% � �������� �� ��� �"�� � ���������� �� 1�� ����� ��� ������� �� ��� ���"��% ��� � � ��� ��6%"�H����1��� "���9 #��� ���8��

�� �� 7% ������� ���� �� � ����������� ����� �� ��� 6 ���&*�% &���+�%�� '�� *� �����6%��� '!�����*� �"6%��� �����������'�����!* �� ��� �������� �������� � �� �9��� � �� �������� �� �� �9��� E ���� ������� ������ '.��0�*� �� ��#� #��� �� ����"�

�18 �)�)� �� �C( B��3)� BF �3K(���E)��K( (��)�B�BEP

��� �8 ��% � �������� � '����������� �� �� "*� �� #��� �� 8�� � �������� �"�� � ��� ������� �� ��� ���"��% ��� � � ��� ���8�H�������� "���9 ��"���� '��� �� 2 ����������� ��� �� �� "*'�����"� �� ��� �//5*� ����� 1��������� �"��% ���� ��� ��-��� �������� "���� "���% ��� ��1������ ��� �8 ��% � ��� ��6%"� ����1���� ��� ����1��� 1������ ���1����%�

�������B3

&� ���� ��"�������� ����� �""������ ��"����% ���� ���������� �� � ���6�� �� ��� 1���� ��� ��%�� � ��� "�""����� �2����� ��"�� 2������ %���� #� ���� ��� ������ ������ ���� � ��"� (�)� ���� '��#����"� �� ��� �//,*� ������� ��� ������ ������� ���� ���������� ���� � '��% ����� �"�� � ���* � ���� �� ��� ����% ��6%"�� ����� �� ��2��% � 1� �� ������ �������� � ��� 1� ������� �� ��� ���� �"��� � ���� ��" ��� 1���"���"�"1���� ��� ����� "��"��� � ��� ����� ��%����

��� �� ����% ���� ���� ����%��� � ��� ���� ���� ������� ��#������ �� #��� �� �� �������% ���� � ��� ��������� � ��� �������� ��� ��� ��� �9����� ��� �1��� � � � ���� �����%����� ����� #��� ���� �������� ����1��� 1������ ���1����%� �#���� ����2��% � 1� �1������ ��� �1��"������� ��� 1� �9�� ��� ����� ������� #���� 1� 2��� ��� ��6%"� � �����% 1� "�� ����������

(��8�� ��� �2��+������� �������� ����1���� ��� 1��� ��#� � 1� ������ ��� ��� �8 ����1��� � 1�� ��� �� ��� �"�� � (�)���� ��"�� ���2 %�� �������� �� #���� '&���# �� ��� �//>*� (��8� ���9������� 1% ������"�� 2������ %��� ����� �%��������������� ������� �� � �� �������� '����� �� ��� �//>; � ���2#�@2 �� ���

�//>� �//�; &���# �� ��� �//.; 3�"��� �� ��� �//4* ���#��� ������� '��� !����� �� ��� �//5*� �� ��� ��� 1��� ������� �1� ������� �� "��% ���� ����� ��������� ���� ��� �9���� �������"����� ���"���? ������ ������ ������� ������� ������������%�9� ���������� � �� ���� ��������� ������� ����9� ���������� ���� ���� ��� '������ �� ��� �//5*� �� ��� ����� �������� ��������� � � ��N�""���% ���� �� ��%����� ��� ���8� �9������� ��1������� � ���� � ������� ���2 %�� ��������� �����1% ������� �"������� ���������� ��������%�

�� �� ����������� � ��� ���� ��� ����1�% �������� � ��"�� �2���� �� �9����"���� #�� "����% ������ ��� � ��� 1����� ����+�������������� ��%�� � ��� ������"��� (��8� � ��� �����% �������� 1��� ���� �� ��� 1���� ��%�� �� ��% �%�� � ���������� ��������� ������� � 1� ��� ����� #��� ��� �������������� �����"')�2�"��� �� ��� �//.� �//4�; ������ �� ��� �//5*� ������ ���8� ����������% �1���� �� ��"�� ��"�� ������"��� ��� ���� 2�#��������� ����1���� ����� �#����� ��� 1��� ������� � 1��9������� �� ��� 1���� 2������ %��� '&���# �� ��� �//:;&������ �� ��� �//:* ���������� ���� ���� "�% 1� ��� "�@� ������������1��� �� ��"�� ������"��� ����� ����� #��� � 1������������ ������"�� �1��"������� ��� ����� #��� ��� ���� ����(�)� �������� �� �� ����1�� ���� ������� � ���� ������ "�% 1� ��������� ���2 � ��������� ��� ""� �2�� �������� �� � ���������� ��� � 6�"�� E����� ��� ������� ������� #��� 1���-����� � ����������� ��� ��� � (�)� �� ����� ""�������"�� ��������� ����1�� ���� �� �������� � �� #��� ���������� �� �� ��� ��� 1� �9����� ')�2�"��� �� ��� �//41;P�"�"� �� ��� �//<*�

�� �� 2% ����� ����������� �� ������ �% '* �"������ � ��� ������� E��!��2 ��1"������ � ��"�� �������� � �9� ��-��� � #��� ��2������ %�� "�3) ��� 1�� 3) ��-��� ��� ���� '1�� 2 1�� �����*� � ������ ��� ������������ ����� ����� RS ��# "�3) ���� � ������ �����%"���� ���� �� �9� < #��� �� �9��� � �������� �� ��� ������ , �� ����������� 1% �� ���# '�*� ���������� � ��� ������, ����� � ��� ���� ���� (�)������� ��#� �� (�)�T��� �� '$*� )����� � �������� � (�)�T��" �� ��� '$* � ��� 8����� '$* �������� �����"��� � ��� �� ��� ��� ����� ��������'(��T��E* ��� ��"�� �������� � '(�)�T��"* ������� #��� ��� ���� ���� ������� '(�)�T���*� ��� �"�� � ��� � ��� ����%�� ����� 'C��+5.� )��+���� ������+,>5* ��� ��#� �� 1��� ��� �"�� � ��� ������� �� 1�� ����� #��� ��1�� ��������� ��� ������� �� ��� ���"��% ��� � � ��� ��6%"�H����1��� "���9 #��� ���8��

KB�� ��4� 3B� � )3�)�P ,>>> (�)� (G��(���B3 �3 �C( ���3 �19

��� ������� "��� �� ����% &�! '(�� )�� ��� "��� ��������* ��� %��������+��� ���

����� ��� )�� ,- ��! ���. ����%� �� -��% ���!��/ �����+ 0����/ ���

���1����� 2�** )�� �������� ������* �) ��� !������� �. ���� "��% "�� �� ����� �+

3�����!� ����� 4���� ������5$5��.

�(F(�(3�(�

)�2�"��� C)�� �����6�� CBF� ��� K��@"��+&����"� ��� C����� �E��� ���2#�@2 ? ����������� �9������� � ��)��H���8� �� ��"�� ������"����"��� ! 6 ���� �4.?�5</=�5:<� �//.

)�2�"��� )� �����6�� CB� ��� �� �� ��? ��)��H���8� �� �� ���� �1����������� ����1��� �� ��"�� ������"�� 2������ %���� 6 7��� 8�� �><?,..0=,.4,� �//4�

)�2�"��� C)�� ��� K��@"��+&����"� ��� ��� C����� �� ��� �� ���2�� ���� ���2#�@2 ? �"�������� � �2��+������� �������2��������� '��)��* ������ ������ ��6%"� ��"�� ���2 %�� �������� �� �-��"�� ��� �� ��"�� 6 �������<4?�,�=�,/� �//41

����� )� � ���2#�@2 � C����� �� ��� �� ���2�� ���? (�������+����1����� � �����%�� � ����� �2�� ��������� ��� ,��! 9������� <>?�4<=�0�� �//>

����� ��� P� �� &������1� � � &��� � ������� �� �� ��������� �? ��%�� ��"������ � ��� ��"�� (�)� ���� 1��#��� �,�.5� ��� �,�.4< � ��"�"� �,-�.� 4���!��� ,/?<55=<5:� �//0

E���@� �� ���Q��� E�B��? � ����+���"���� "���� �� ������ �� ����%���� ���� ����� ���� ���� ��* <?�0<=�54� �//4

��#����"� �� ���� �� ���"�� �� ��2��� �� P? ����� ����6���� � ��� ����� �������� �� 3)�? �# �������� �� "�3)� ��� �9������� �� ��"�� ��� �����,- 5?�5.=�<,� �/:<

��#����"� �� ���� �� ����+C�@ �� ���"��+��2�� �� B�"��� �� F���2�#� C���2��� �� P? E��"� �����6���� � ��� ��"�� �"���� � ��� ������ ����� �������� � ����� ,- 8�: ,?.>.=.�,� �//,

������� �� ������� C�� �������� �� !�%��� ��� !���� �� ����� ��� ����� 3�?E����� ���2��� ������� �� ��+������"�%�� ���"������� 2�������"�?������ � �� �����������%. ;�! ��� 4���� 4?�>,�=�>,0� �//0

������� �� ������� C�� ���2�� �(� ����� �� ������ �C)� ����� ��? F��� ������ "������ � ������� ��+������"�%�� ���"������� 2�������"� � ��"�"� �,-��+-�.? �9 ����� � ��� "����� �%�� �� 2�������� �< ,��!���� :?.::=./�� �///

����� F� ��� � � �#��� EC� C�""�� �(� �� ���� �? �������� 1��#������"���� � �� ����+��� �8 ����� �������� ����� �� �� ���"���� ��� 7��� $����0?4.:0=4./4� �//0

�� ���� �� �#��� EC� O���� �� �#��� &� �� ��� ��� 3�2���� &� ������ &?���"��% ���� ���� � �# ������ � ��� ��� ����� �������������� �����"���� 1%��-��� � ����%��� � ��� "����� ���� "�������� ��1�� ��� � �� ��-��� ���$�����!����+ ,�?�40.=�45.� �/:,

�����6�� CBF� )�2�"��� C)�� U���#�� ���� �� ��� E� &������� !�� ���2#�@2 ? ��)��H(��8�? �� �������� ����1��� ��" ������� ��"��2������ %��� ����8 ����� 3) ��-��� � ��� ������ � �� ����������"����� ������2���� 6 $��� 7��! ,5:?�,>,:=�,>.,� �//.

3������� C)� ��9�� �� !����� K� ����� ��� E�#�� � 2������ %��� #��� � .�.������ ��%��? 1��� �� ���-���� ��? ����� ��� &��� F� '���*� &��������+���������� ��"1����� ���������% ������ �//4� �� 0=�,

3�"��� �� P�"������ �� P���� C� 3��� �� C���� �? ��+��������� � ���8�H��)�� ���� �9������� �� ������� ������"��� 6 ��#��� ,��!���� �>.?::=/���//4

������ �� ��� ������� F� ��� K��@"��+&����"� ��� �� ��? ���������� ��� ���� �1���9������� � ��)��H���8� ������� ����+�������� ����� � �� ��"�� ���������� 67��� ��#��� /:?�.:/=�.//� �//5

��� � � �� ���� �? (��������% ����� ��� � ��� ��"�� �������� � ����'(�)�*� ;�! ��� 4���� 5?:/<=/>.� �//<

��� � � ����� F� �#��� EC� �� ���� �� C�""�� �(? ) ������ ���"��� � ����������� � ����� �� �� ���8 ���� � ���� � ����� ������ ���� �����% � ��� ��� ������� ���� ��� 7��� $��� �4?,>4:=,>0<� �//4

��9 (� ����1�� �� C����1�V ��� B� &������� ��? ��� ���+��� �8 ����� �������� �� ��F� ������ �# ��������� ��1����� ���� ������ � #��� ��� 3)� 4����,�# .?�5�.=�5,4� �/:/

� ���2#�@2 � ����� )� ������ �� �� ��� E� ���� � ? �2��+��������������2���������� '��)���*? ���� ����6���� � �# ��# ������������1���� ��" ������� ������"��� $� 6 ,��!���� �,,?5.�=54�� �//>

� ���2#�@2 � �� � �� �� ��� E? �2��+������� �������2��������� '��)��*� ���������� ����1��� ��" ��"�� 2������ %���? ����8 ���� ��� 1� ��"� ������������ $�����! $�� �+� ��� �>/5?�4:=�04� �//�

������� P� ��2�"��� �� P����� C� �� ��? ��� ���� ����� � "���"�����% 3)�� ���� �� � ��� ��"�� ��� ����� ������� ( ��6%"��� 6 $�����! =��%+�>�>4?,0/=,54� �/::

���1��� � � ���� ��2 )� ������ (� ��2%��� �)� ��2%��� �)? )� �"�������� "���� �� #��2��� �� �� ���� ���"� 3)� -������ ���� 2��,.?�>:<=�>::� �//0

�#��� EC� ����� F� �� ���� �� C�""�� �(? ����������� ��-����"���� �� ���+��� �8 �������� � ����� �� �"���� �� ������� ��� ���� ��� ��������� "� ��4���� ,�# .?5:<=5/5� �/:/

�#��� EC� ��� � � �� ���� �? )� ���"��� � ��� �������� � ����� �� �� ������������ 1�������� 1������ ���� � ������� 1% � �����"��� �� ��� 6 $��� 7��!,5/?�,:>/=�,:�0� �//4

���� �� ��#����"� �� F���2�#� C� B�"��� �� ��2��� �� P? ����� ����6���� � ������� ���� �� ��"�� ��� ����� �������� �� ���� ���� � ��� 0�+N��2��� ������ 6$�����! =��%+�> �>�?0/�=0//� �/:<

���� �� B���"� � ���� �� ��2��� �� P? ������8 ���� � � ���� ���� � ����������6%"�� ��"�� ��� ����� �������� ���� 1% 3) ��� ���"� ���� ������ 6$��� 7��! ,5.?�,.�=�,./� �/::

�����"� �� �������� P� ��2�2�1��� �� �����1� P? ��%���� ���� ���� � �� ��������+��� �8 ����1��� ���8� "���9�� #��� �� ��� ��� ����� �������� �����"������ �/)W ��������� $�����!����+ .0?��0<>=��0<5� �//5

��� !����� !C� )��������� ��� �����@� ��� ��� �� ���2�� ��� � ���2#�@2 ?(9������� � ��)��H���8� ������ #��� ������� �� ��"�� �2��� ���,��!���� 2�� ,::?40:=05,� �//5

&���# B� � ��V��� � E����% C� P��� )� ���������� (? (��8�? �� ����������� �8 ����1��� � ��"�� �2��� ����8 ����� ���� ��������� ��� "������"�� � �� ��-��� �� 6 $��� 7��! ,50?�4</�=�4</0� �//>

&���# B� ��V���"��� � ��� �� !? (��8� �� � ����� ����1��� � ��������� .�$�����! $�� �+� 2�� 7�!!�� �<4?5=�>� �//�

&���# B� P��� )� ����� � � ����������� (? )������2������� �� ������� � ����� 6 ��#��� ,��!���� �>�?.>0=.>/� �//.

&���# B� C����� � !������ � ������ K� ����������� (? )������2������� ����"�� �2��? �� ����1��� ������� �����������% ���� �� 1% 2������ %����$�����! $�� �+� 2�� 7�!!�� ,4:?/>4=/>/� �//:

&������ �� ��� !����� !C� C��"���� ��� �� ��? ���� ��� � ���� ')��HC���+�* ��������"�� 2������ %���� 6 ��#��� ,��!���� ���?//5=�>>,� �//:

P�"�"� �� (��"� C� ����6�2� �� �� ��? �""������ ��"� �� �9������� ���)��H���8� �� �-��"�� ��� �� ��"� � ��� ��������� $� 6 7�����<5?�>:�=�>:5� �//<

�6: �)�)� �� �C( B��3)� BF �3K(���E)��K( (��)�B�BEP