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Ademir Assis Henning

GUIA PRÁTICOPARA IDENTIFICAÇÃO DEFUNGOS MAIS FREQUENTESEM SEMENTES DE SOJA

Empresa Brasileira de Pesquisa AgropecuáriaEmbrapa Soja

Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento

EmbrapaBrasília, DF

2015

Ademir Assis Henning

GUIA PRÁTICO PARA IDENTIFICAÇÃO DE FUNGOS MAIS FREQUENTES EM SEMENTES DE SOJA

Exemplares desta publicação podem ser adquiridos na:

Embrapa SojaRod. Carlos João Strass, s/n, Distrito de Warta - Londrina, PRCaixa Postal 231CEP 86001-970Fone: (43) 3371 6000Fax: (43) 3371 6100www.embrapa.brwww.embrapa.br/fale-conosco/sac/Unidade responsável pelo conteúdo e edição

Embrapa Soja

Comitê de Publicações da Embrapa SojaPresidente: Ricardo Vilela AbdelnoorSecretária-executiva: Regina Maria Villas Bôas de Campos LeiteMembros: Alvadi Antonio Balbinot Junior, Claudine Dinali Santos Seixas, Eliseu Binneck, Fernando Augusto Henning, Liliane Márcia Hertz Henning, Maria Cristina Neves de Oliveira, Norman Neumaier e Vera de Toledo Benassi.

Colaboração: Agnes Izumi NagashimaSupervisão editorial: Vanessa Fuzinatto Dall´AgnolNormalização bibliográfica: Ademir Benedito Alves de LimaEditoração eletrônica e Capa: Vanessa Fuzinatto Dall´AgnolFotos da capa (sentido horário): Álvaro Manoel Rodrigues Almeida, Agnes Izumi Nagashima e Ademir Assis Hennning.

1ª Edição Versão on-line: 2015

Todos os direitos reservados.A reprodução não autorizada desta publicação, no todo ou em parte,

constitui violação dos direitos autorais (Lei nº 9.610).

Dados Internacionais de Catalogação na Publicação (CIP)Embrapa Soja

Henning, Ademir Assis. Guia prático para identificação de fungos mais frequentes em sementes de soja / Ademir Assis Henning. – Brasília, DF : Embrapa, 2015. 33 p. : il. color. ; 14 cm x 21 cm.

ISBN 978-85-7035-441-9

1. Soja-Semente-Fungo. I. Embrapa Soja. II. Título.

CDD 633.3494

© Embrapa 2015

ADEMIR ASSIS HENNINGEngenheiro Agrônomo, Ph.D. em Agronomia,pesquisador da Embrapa Soja, Londrina, PR

AUTOR

Este manual é direcionado aos técnicos que atuam nos laboratórios de

análise de sanidade de sementes de soja. As fotografias e os desenhos

das estruturas dos principais fungos que ocorrem nas sementes de soja

são bastante ilustrativos e permitem ao analista fazer a identificação

dos patógenos com segurança. Para facilitar o entendimento, os micror-

ganismos (fungos principalmente) foram classificados em três grupos:

i) patógenos importantes (fitopatógenos); ii) fungos de armazenamento

e iii) contaminantes e/ou saprófitas.

A análise sanitária da semente, além de fornecer subsídios para indi-

car o melhor tratamento com fungicidas, juntamente com o teste de

tetrazólio (DIACOM – diagnóstico completo da qualidade da semente),

pode fornecer informações importantes acerca dos problemas de baixa

qualidade da semente, possibilitando sua identificação e a tomada de

decisões para corrigir suas causas.

Ricardo Vilela Abdelnoor Chefe-Adjunto de Pesquisa e Desenvolvimento Embrapa Soja

APRESENTAÇÃO

SUmÁRIO

1. MéTODO DO PAPEl DE FIlTRO (blotter test) .......................................9

1.1. Materiais necessários ................................................................................................. 10

1.2. Metodologia ............................................................................................................... 11

2. PATóGENOS IMPORTANTES ...................................................................12

2.1) Cercospora kikuchii ................................................................................................... 12

2.2) Colletotrichum truncatum .......................................................................................... 13

2.3) Fusarium spp. ............................................................................................................ 15

2.4) Macrophomina phaseolina ........................................................................................ 16

2.5) Phomopsis sp. ........................................................................................................... 18

2.6) Rhizoctonia solani ..................................................................................................... 19

2.7) Sclerotinia sclerotiorum - Mofo branco ...................................................................... 20

2.8) Sclerotium rolfsii ....................................................................................................... 21

3. FUNGOS DE ARMAZENAMENTO .............................................................22

3.1) Aspergillus spp. ......................................................................................................... 22

3.2) Penicillium sp. ........................................................................................................... 23

4. CONTAMINANTES OU SAPRóFITAS .........................................................24

4.1) Alternaria spp. ........................................................................................................... 24

4.2) Bactérias ................................................................................................................... 25

4.3) Botryodiplodia sp. ..................................................................................................... 26

4.4) Chaetomium sp. ........................................................................................................ 27

4.5) Cladosporium spp. ..................................................................................................... 28

4.6) Rhizopus spp. ............................................................................................................ 29

4.7) Trichoderma spp. ....................................................................................................... 31

REFERêNCIAS ............................................................................................32

Anexo (Ficha para avaliação de análise sanitária) .................................................33

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Guia prático para identificação de fungos mais frequentes em sementes de soja

1. méTOdO dO PAPEl dE fIlTRO (blotter test)

Figura 1. Montagem do método do papel de filtro. A) materiais a serem uti-lizados; B) desinfestação dos gerbox com NaOCl 1,05%; C) água destilada autoclavada para umedecer o papel de filtro esterilizado; D) vinte sementes por gerbox; E) amostras na câmara de incubação a 20 ± 2 °C por 7 dias; F) avaliação dos patógenos e saprófitas.

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1.1. MATERIAIS NECESSáRIOS

• Caixas plásticas (gerbox) com dimensões 11,5 x 11,5 x 3,5 cm

(Figura 1 A)

• Papel de filtro qualitativo 80 g/m2, quatro folhas 3,5 x 3,5 cm esteri-

lizado em estufa a 160 °C por 20 min (Figuras 1A e 1C)

• Água destilada e autoclavada (de preferência) ou esterilizada em

micro-ondas (Figuras 1A e 1C)

• Pinças retas, estiletes, vidros conta gotas com água e com lactofenol

com corante, lâminas e lamínulas de vidro, lenço de papel ou papel

higiênico fino (Figuras 1D e 1F)

• Microscópio biológico com aumento no mínimo até (400 x)

(Figura 1F)

• Microscópio estereoscópico com aumento de no mínimo até (50 x)

(Figura 1F)

• Água sanitária contendo 20% hipoclorito de sódio (NaOCl 1,05%)

para desinfestar gerbox (Figuras 1A e 1B)

• Luvas (nitrílicas) de borracha, antiderrapantes ou luvas cirúrgicas

(Fig. 1B e 1C)

• Lápis cópia (Figura 1D)

• Avental (guarda-pó) (Figura 1B)

• Câmara de incubação a 20°C ± 2°C com luz branca fluorescente (ou

NUV) (Figura 1E) .

11


1.2. METODOlOGIA

O principal método utilizado na análise de sementes de soja é o do papel de filtro (Blotter). A experiência tem comprovado que este método é perfeitamente viável, sendo o mais eficaz para a cultura (HENNING, 2005). Em casos específicos, o método pode ser alterado, variando a temperatura e o período de incubação, para detectar patógenos impor-tantes como Sclerotinia sclerotiorum (mofo branco).

Para a execução do teste, as caixas plásticas (gerbox) podem ser utili-zadas por muito tempo, bastando que as mesmas sejam lavadas com detergente, após cada uso, enxaguadas e secas. Antes da utilização, as mesmas devem ser desinfestadas com hipoclorito de sódio a 1,05% (água sanitária a 20%). O papel de filtro (80g/m2) deve ser cortado em folhas de 10,5 cm x 10,5 cm, acondicionado em sacos de papel e esterilizado em estufa a 160ºC, por 20 minutos. Após esse período, aguardar o resfriamento da estufa antes de abrí-la. Para a montagem, colocar quatro folhas de papel de filtro em cada gerbox previamente esterilizado e adicionar água (autoclavada de preferência), suficiente para umedecer o papel, evitando excessos que favorecem a ocorrência de bactérias e Alternaria spp. Posteriormente, tomar, aleatoriamente, 20 sementes que são dispostas no gerbox, na forma de 5 x 4. Montar 20 gerbox (total de 400 sementes) por amostra. Após a montagem, o material deve ser mantido em incubação por sete dias a 20 ± 2ºC (REGRAS..., 2009).

A avaliação é feita em cada semente, sendo anotada em ficha apropria-da a ocorrência dos diversos patógenos. Aspergillus flavus e Penicillium spp., apesar de serem considerados saprófitas por alguns autores, devem ser contados por serem fungos de armazenagem, responsáveis pela completa deterioração das sementes, quando as condições de armazenagem são inadequadas (umidade e temperatura elevadas).


12

2. PATóGENOS ImPORTANTES

Figura 2. Cercospora kikuchii. A) semente com sintoma de mancha púrpura; B) esporulação do fungo (conidióforos e conídios) sobre a semente; C) co-nídios (tingidos) e conidióforos (marrons); D) semente infectada na vagem.

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C D

2.1. Cercospora kikuchiiMuito comum em sementes, não afeta a germinação e o vigor.

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Figura 3. Conidióforos (esquerda) e conídios ou esporos multi-septados à direita. Fonte: Sinclair e Shurtleff (1975).

2.2. Colletotrichum truncatumAgente causal da antracnose.

Figura 4. Colletotrichum truncatum. A e B) Conídios (esporos) e setas de Colletotrichum truncatum.

A B

Conídios (esporos e setas)

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Figura 5. Colletotrichum truncatum. A) Semente com acérvulos, massa de esporos; B) acérvulos com setas e massa de esporos (creme) sobre o tegu-mento da semente; C) radícula apresentando vários acérvulos com as setas.

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2.3. Fusarium spp.Fusarium graminearum e Fusarium pallidoroseum (F. semitectum) são

as duas espécies mais frequentes em sementes de soja. Podem preju-

dicar a germinação no laboratório mas não são patogênicos às plantas!

Figura 6. Fusarium spp. A) Fusarium graminearum; B) Conidióforos, conídios, ascas, clamidosporos de Fusarium graminearum; C) Fusarium pallidoroseum; D) Conidióforos, conídios e clamidosporos de Fusarium pallidoroseum. Fonte: Booth (1971).

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C

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BClamidosporos

Ascas e ascósporos Conídios

Fiálides

D


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2.4. Macrophomina phaseolinaFungo de solo, pode eventualmente contaminar as sementes.

Figura 7. Conídios (esporos) de Macrophomina phaseolina.

Figura 8. Macrophomina phaseolina. A) corte de picnídio com esporos; B) esporos; C) picnídios. Fonte: Sinclair e Shurtleff (1975).

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Figura 9. Macrophomina phaseolina. A) Microescleródios espalhados sobre o papel de filtro; B) semente infectada com Macrophomina phaseolina.

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2.5. Phomopsis sp.É o principal patógeno em sementes de soja. Juntamente com Fusarium pallidoroseum (F. semitectum) pode afetar a germina-ção da semente no teste do rolo de papel. São frequentes quando as fases de maturação e/ou colheita coincidem com períodos de alta

umidade (chuvas).

Figura 10. Phomopsis sp. A e B) Phomopsis sp; C) Exudação de esporos pelos picní-dios; D e E) esporos alfa (germinam) e beta (não germinam).

A B

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2.6. Rhizoctonia solaniFungo de solo pode eventualmente contaminar as sementes.

Figura 11. Rhizoctonia solani. A) “Rizomorfas” em método de papel de filtro; B) sintomas em planta; C) Hifas septadas e ramificadas a 90°.Fonte: Henning et. al (2002).

A

B

C


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2.7. Sclerotinia sclerotiorum - Mofo brancoBaixa taxa de transmissão pela semente (< 0,1%). O problema maior são os escleródios (negros de formato irregular) misturados às sementes.

Figura 12. Sclerotinia sclerotiorum. A) Placa do método do Neon; B) escle-ródios em gerbox no método do papel de filtro; C) escleródios misturados às sementes; D) hastes com escleródios e E) sintoma em planta no campo.

D E

A B

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2.8. Sclerotium rolfsiiFungo de solo, pode aparecer em lotes de sementes. Produz escle-ródios pequenos, marrons escuros (quando maduros), semelhantes a sementes de repolho.

Figura 13. Sclerotium rolfsii. A e B) Produção de escleródios em método do papel de filtro; C) sintomas em plântulas e D) escleródios em placa com meio.

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3. fUNGOS dE ARmAZENAmENTO

3.1. Aspergillus spp.Fungo de armazenamento, sendo que a espécie mais comum é

Aspergillus flavus.

Figura 14. A) Aspergillus spp. B) Aspergillus flavus; C) estruturas de Asper-gillus flavus em visualização microscópica (400 x); D) estruturas de frutifica-ção de Aspergillus flavus. Fonte: Silveira (1968).

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Figura 16. Penicillium sp. A) Semente com Penicillium sp.; B) Penicillium sp. em semente com Bacillus sp.

Aspergillus sp.

Penicillium sp.

Penicillium sp.

Bacillus sp.

A

B

3.2. Penicillium sp.Fungo de armazenamento, porém menos frequente que Aspergillus spp.

em sementes de soja.

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Figura 15. Estruturas de Penicillium sp.Fonte: Silveira (1968).


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Fonte: Henning et al. (2002)

4.1. Alternaria spp.Saprófita, as espécies encontradas mais comumente são Alternaria

tenuis ou Alternaria alternata.

4. CONTAmINANTES OU SAPRófITAS

Figura 17. Alternaria sp. A) Diferentes formas de conídios (esporos) com sep-tos transversais e longitudinais; B) esporos em cadeia (catenulados).

Figura 18. Alternaria spp. A) Se-mente com Alternaria spp.; B) espo-ros em visualização por microscópio óptico (400 x); C) esporulação do fungo em visualização por microscó-pio estereoscópio (50 x).

A BC

A B

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4.2. BactériasSaprófitas, algumas espécies são utilizadas no controle biológico de

patógenos importantes.

Figura 19. Bactéria. A) normalmente associada com semente morta e deterio-rada; B) Bacillus sp. saprófita.

Penicillium sp.

Bacillus sp.

B

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4.3. Botryodiplodia sp.(Contaminante em soja, não é patogênico).

Figura 20. Botryodiplodia sp. A e B) Conídios novos (claros) e maduros (escu-ros), com parede dupla e septo transversal; B) picnídios e conídios. Fonte: Barnett e Hunter (1972).

Figura 21. Botryodiplodia sp. A e B) Semente com Botryodiplodia sp.

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Cabeleira

B

D

F

A

C

E

4.4. Chaetomium sp.Contaminante – cuidado para não confundir com Colletotrichum! Pro-

duz peritécios com cabeleira que pode ser confundida com as setas

dos acérvulos de C. truncatum!

Figura 22. Chaetomium sp. A) Semente com Chaetomium sp.; B) ascósporos (esporos) em visualização por microscópio óptico (400 x); C, D, E e F) diferen-tes tipos de peritécios e cabeleiras. Fonte: Henning et al. (2002).

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4.5. Cladosporium spp.Saprófita, contaminante.

Figura 23. Conidióforos escuros e conídios de formas e tamanhos variados. Fonte: Ellis (1976).

Figura 24. A e B) Cladosporium spp.

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4.6. Rhizopus spp.Saprófita, contaminante - produz rizóides o que o diferencia de Mucor

sp.

Figura 25. A, B e C) estrutura de Rhizopus spp. com rizóides em visualização por microscópio esteroscópico (50x).

Rizóide

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Figura 26. A e B) fungo contaminante espalhado em sementes e no papel de fitro; C – estrutura de Rhizopus spp. em visualização por microscópio óptico (400 x).

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4.7. Trichoderma spp.Contaminante, algumas espécies são utilizadas no controle biológico

de patógenos importantes.

Figura 27. Trichoderma spp. A, B, C e D) Coni-dióforos hialinos muito ramificados; E) coní-dios pequenos elípticos Fonte: Barnett e Hunter (1972).

Figura 28. Trichoderma spp. A, B e C) fungo espalhado nas sementes e papel de filtro.

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A B

C


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Referências

BOOTH, C. The genus Fusarium. Kew: Commonwealth Mycological Institute,

1971. 237 p.

BARNETT, H. L.; HUNTER, B. B. Illustrated genera of imperfect fungi. 3rd ed.

Minneapolis: Burgess, 1972. 241 p.

ELLIS, M. B. More dematiaceous hyphomycetes. Kew: Commonwealth Myco-

logical Institute, 1976. 507 p.

HENNING, A. A. Patologia e tratamento de sementes: noções gerais. 2. ed.

Londrina: Embrapa Soja, 2005. 52 p. (Embrapa Soja. Documentos, 264).

HENNING, A. A.; MELCHIADES, A. R.; MORAES, S. R. Patologia de sementes:

ilustração das estruturas dos principais fungos em soja. Londrina: Embrapa Soja,

2002. 35 p. (Embrapa Soja. Documentos, 190).

REGRAS para análise de sementes. Brasília, DF: Ministério da Agricultura, Pecuária

e Abastecimento, 2009. 395 p.

SILVEIRA, V. D. lições de micologia. 3. ed. Rio de Janeiro: José Olimpio, 1968.

301 p.

SINCLAIR, J. B.; SHURTLEFF, M. C. Compendium of soybean diseases. Minne-

sota: The American Phytopathological Society, 1975. 69 p.

33


ANExOFICHA PARA AVAlIAÇÃO DE ANálISE SANITáRIA

REMETENTE:

LOCAL DA COLHEITA:

PATOLOGIA DE SEMENTES REGISTRO Nº____________

MÉTODO: PAPEL DE FILTRO PERÍODO: TÉRMINO Nº SEM. TESTADAS

INÍCIO

ESPÉCIE SOJA DATA DA COLHEITA, MÊS E ANO:

VARIEDADE

DATA DO RECEBIMENTO:

PATÓGENOS (FUNGOS) REPETIÇÕES:

%

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Aspergillus flavus

Aspergillus spp.

Cercospora kikuchii

Colletotrichum trunchatum

Fusarium pallidoroseum (semitectum)

Fusarium spp.

Macrophomina phaseolina

Phomopsis sojae

(Outras determinações)

BACTÉRIA

SEMENTE DURA

DANO

GERMINADAS

SAPRÓFITAS: Alternaria sp. Cladosporium sp. Mucor sp. Rhizopus sp.

Botryodiplodia sp. Curvularia sp. Nigrospora sp. Trichoderma sp.

Chaetomium sp Helminthosporium sp. Penicillium spp

OBSERVAÇÕES: ANALISTA

Soja

CG

PE 1

1990

9788570354419

ISBN

978-8

5-7

035-4

41-9

guia prÁtico...guia prático para identificação de fungos mais frequentes em sementes de soja 14...

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