Germán Darío RonchiBioquímico - Especialista en Bacteriología ClínicaJefe de Trabajos Prácticos - Parasitología y MicologíaUniversidad Nacional de San Luis

La Toxoplasmosis es una zoonosis parasitaria de las aves y de diversas especies de mamíferos incluido el hombre, producida por el protozoo Toxoplasma gondii.

DEFINICIÓN

Subreino Protozoa (organismo de una sola célula eucariótica). Subphylum 2 Apicomplexa : Presenta un complejo apical

característico al microscopio electrónico sin flagelos, ni cilios excepto en los gametos. Los ciclos evolutivos generalmente involucran, estados vegetativos (trofozoítos), estados de multiplicación asexuada (merogonia), estados de multiplicación sexuada (gametogonia), y estados con formación de esporas y esporozoítos (esporogonia); todos los estados involucran formas parásitas.

Clase Esporozoea: Posee un complejo apical completo y estados infectantes esporozoíticos.

Subclase 1 Coccidia : Presenta trofozoítos y estados sexuados pequeños e intracelulares.

Orden Eucoccidia: merogonia presente, parásitos muy comunes de invertebrados y vertebrados.

Familia Sarcocystidiae: Presenta los géneros: Sarcocystis y Toxoplasma.

Género Toxoplasma Especie: Toxoplasma gondii.

CLASIFICACIÓN

Toxoplasma gondii

micrópila

CICLO BIOLÓGICO

Estados de multiplicación

Sexuada o esporogónica: se produce en el intestino del gato y otros felinos salvajes.

Asexuada o esquizogónica: se produce en los tejidos de una multitud de mamíferos incluido el hombre y en las aves.

El gato y otros felinos salvajes, son huéspedes completos ydefinitivos .

Los demás mamíferos, incluido el hombre, y las aves se consideran huéspedes incompletos e intermediarios.

El trofozoíto, divide su núcleo, cada porción nuclear se rodea con una parte de citoplasma, constituyendo el esquizonte inmaduro, madura y forma numerosos merozoítos. La célula huésped estalla y libera los merozoítos que vuelven a invadir nuevas células intestinales.

Al cabo de tres, cinco y más días, algunos merozoítos evolucionan hacia formas sexuadas. Macrogametocitos y Microgametocitos.

La fecundación del macrogametocito ocurre en la célula huésped y el cigoto resultante se rodea de una envoltura translúcida formando el ooquiste.

Se eliminan en estado inmaduro y, en condiciones adecuadas, continúan su desarrollo en el medio externo, formando una unidad llamado ooquiste esporulado que en su interior contiene, dos ooquistes con 4 esporozoítos cada uno.

El gato elimina ooquistes de 3 a 5 días después de haberse infectado con los quistes del Toxoplasma gondii, o los elimina dentro de las 2 a 3 semanas, si la infección se produce por los ooquistes del parásito.

CICLO INTESTINAL

CICLO INTESTINAL

Parasitología Médica. Antonio Atías

La multiplicación intracelular acelerada de toxoplasmas

(taquizoítos), concluye con la formación de pseudoquistes.

Liberación de nuevos zoítos, los cuales actúan localmente

invadiendo nuevas células del mismo tejido, o a distancia

invadiendo células de otros tejidos. La diseminación por todo

el organismo se produce por vía hemática o linfática.

Si el ritmo de reproducción es más atenuado, el proceso

terminará con la formación de quistes. Los parásitos de

multiplicación lenta, quistozoítos o bradizoítos, segregan

precipitados granulares que se adosan a la membrana

vacuolar circundante.

CICLO TISULAR

CICLO TISULAR

Parasitología Médica. Antonio Atías

CICLO DE VIDA

EPIDEMIOLOGÍA

La toxoplasmosis es la zoonosis parasitaria más difundida en la naturaleza.

Las encuestas serológicas, efectuadas en diferentes países, indican una infección del 40 a 50 % de los adultos sanos entre 30 y 40 años de edad. Estas cifras varían de un lugar a otro y se atribuyen a:

Factores geográficos. Factores climáticos. Hábitos alimentarios. Tipo de trabajo. Higiene ambiental. Presencia de gatos infectados.

La tasa de prevalencia aumenta en forma paulatina con la edad. La tasa de incidencia para la Toxoplasmosis congénita es de 1 cada

10.000 nacimientos en Europa y EEUU, en Argentina es de 2,5 a 3,5 cada 10.000 nacimientos.

Un gato infectado elimina ooquistes durante 1 a 2 semanas y una sola deyección puede contener millones de ellos. Si estos elementos encuentran condiciones favorables en el ambiente externo como: • Agua. • Terreno húmedo. • Temperatura alrededor de 25 ºC. • Suficiente oxígeno. pueden alcanzar su estado infectante en un lapso de 1 a 3 días.

Los ooquistes esporulados son extremadamente resistentes a los desinfectantes comunes y pueden permanecer viables por períodos muy prolongados en un ambiente que les sea favorable. Se ha demostrado una supervivencia de hasta 2 años en el agua, y más de 6 meses en la tierra húmeda. Por lo tanto, el ooquiste constituye el eslabón más importante en la cadena epidemiológica del Toxoplasma.

MECANISMOS DE TRASMISION DE LA INFECCION

Los huéspedes intermediarios, pueden adquirir la infección por medio de:

Los ooquistes diseminados en los pastizales, establos, bodegas, y graneros.

Los quistes contenidos en carnes y vísceras. Ocasionalmente por taquizoítos al ingerir animales

enfermos. Transmisión congénita.

MECANISMOS DE TRANSMISIÓN DE LA INFECCIÓN

MECANISMOS DE TRASMISION DE LA INFECCION

La infección puede ocurrir: A través de la sangre: Por una transfusión única o por

transfusiones repetidas. Por vía placentaria. Contacto directo con animales intensamente infectados en

la fase aguda. Leche no pasteurizada.

La penetración del parásito se puede producir: A través de las mucosas. A través de la vía digestiva. A través de la vía respiratoria. Por la vía conjuntival. Por lesiones de la piel o mordeduras.

INMUNIDAD

Mecanismo de evasión parasitaria

Inmunidad innata

Inmunidad adapatativa celular

Inmunidad adapatativa humoral

EosinófilosBasófilosIgG, IgM, IgA, IgE

CINETICA DE ANTICUERPOS EN TOXOPLASMOSIS

SINTOMATOLOGÍA

TOXOPLASMOSIS EN INMUNOCOMPETENTES

Forma linfoadenopática o ganglionar

Toxoplasmosis ocular

TOXOPLASMOSIS EN INMUNOCOMPROMETIDOS

Encefalitis toxoplásmica

Toxoplasmosis diseminada

SINTOMATOLOGÍA

TOXOPLASMOSIS EN LA EMBARAZADA

Infección aguda generalmente asintomática

TOXOPLASMOSIS CONGENITA

•Coriorretinitis

•Ceguera

•Hidrocefalia

•Calcificaciones intracraneales

•Retraso mental o psicomotor

•EpilepsiaSEROLOGÍA

TOXOPLASMOSIS CONGENITA

1/3 de las madres con infección aguda darán a luz un hijo con toxoplasmosis, con desarrollo normal; el 4% puede morir, tener un daño neurológico permanente o compromiso visual en los primeros años de vida.

FORMAS DE PRESENTACIÓN

Enfermedad neonatal: RN gravemente afectado,

compromiso del SNC y secuelas.

Enfermedad que se manifiesta en los primeros meses de vida: El

diagnóstico del niño se efectúa meses después del nacimiento.

Enfermedad que se manifiesta tarde en la

vida: Se diagnostica por la presencia de una secuela o

la reactivaciónde una infección no

diagnosticada durante la infancia

Infección asintomática: El 90% de los niños infectados son clínicamente

normales y muestran IgG Persistenteso crecientes como única expresión de

su infección.

Remington et. al. 2006

TOXOPLASMOSIS CONGENITA

THE LANCET • Vol 363 • June 12, 2004

DIAGNOSTICO

El diagnóstico definitivo de la infección aguda se determina por el aislamiento de toxoplasmas en sangre, líquidos corporales, líquidos de lavado o por la demostración de quistes en cortes histológicos de tejido, feto o neonato.

DIAGNÓSTICO DE

LABORATORIO

MÉTODOS DIRECTOS

MÉTODOS INDIRECTOS

METODOS DIRECTOS

Aislamiento delMicroorganismo

Inoculación en ratones

Cultivo de tejidos

Biología MolecularPCR

Hibridización

HistologíaDemostración del parásito o sus Ag.

Coloraciones

PCR

TOXOPLASMOSIS CONGENITA LIQUIDO AMNIOTICO

TOXOPLASMOSIS OCULAR HUMOR VITREO

TOXOPLASMOSIS EN EL INMUNOCOMPROMETIDO

LCR, BAL, LIQUIDO PLEURAL, SANGRE ENTERA

GEN B1

TAQUIZOÍTOS

QUISTE

Taquizoítos: ME de barrido Quiste en cerebro

MÉTODOS INDIRECTOS

LOS QUE UTILIZAN COMO ANTÍGENOS TOXOPLASMAS

ENTEROS

LOS QUE UTILIZAN COMO ANTÍGENOS PRODUCTOS DE LISIS DE LOS

TOXOPLASMAS

IgM falsos positivos !!!!

Serología

Antígenos: Toxoplasmas enteros

Ag Enteros

Sabín - Feldman (Dye test)

Aglutinación directa

Inmunofluorescencia Indirecta (IFI)

Inmunocaptura (ISAGA)

Aglutinación diferencial (AC/HS)

REACCIÓN DE SABIN - FELDMAN

ALTA SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD METODO DE REFERENCIA

Toxoplasmas teñidos con azul de metileno

Lisis de Toxoplasmas en presencia de Ac y complemento y visualización con Azul de metileno

IgG

AGLUTINACIÓN DIRECTA

AGLUTINACIÓN DIFERENCIAL

(AC/HS)

Antígeno fijado con formol (HS)

Antígeno fijado con acetona (AC)

Etapa aguda

Etapa aguda y crónica

VARIANTES DE AGLUTINACIONES

IgG + IgM

INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA

IgG

IgM

IgA

Ausencia de Anticuerpos Presencia de anticuerpos

PRUEBAS DE INMUNOCAPTURA

IMMUNOADSORBENT AGLUTINATION ASSAY (ISAGA) ALTA SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD

NEGATIVO

POSITIVO

Reacción de aglutinación específica previa absorción inmunológica de las Igs de clase deseadas

1) Absorción con anti μ, anti γ, anti ε o anti α según sea ISAGA IgM, IgG, IgE o IgA respectivamente

2) Reacción de aglutinación

IgG, IgM, IgA, IgE

Ag Lisados

Hemaglutinación Indirecta (HAI)

Test de avidezEnzimoinmunoensayo (ELISA)

Latex

Antígenos: Productos de lisis

Total

P 30

NO EMBARAZADAS, Se positiviza tardíamente

Poco uso

HEMAGLUTINACION INDIRECTA

25µl de diluyente a cada pocillo 25µl de sueros y controles al primer pocillo Diluciones seriadas de las muestras y controles 25 µl de GR no sensibilizados al primer y segundo pocillo 25µl de GR sensibilizados al resto de los pocillos Agitar la placa, dejar reposar 90 minutos e interpretar

Ag soluble: 80%

citoplasmático y 20%

membrana

C+ C- M1 M2

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

1/64

HEMAGLUTINACION INDIRECTA INTERPRETACION

ENZIMOINMUNOENSAYO

IgG

IgM

IgA

TEST DE AVIDEZ

Las IgG de infecciones recientes (agudas) tienen baja avidez por el Ag y se desprenden de su unión cuando se tratan con una solución de urea

IgG sin urea

IgG con urea=Test de Avidez

IgM

NEGATIVA POSITIVA

Infección pasada

IgG

TSP

SF, ELISA-IgM, ELISA IgA, ELISA IgE y AC/HS

SEROLOGÍA EN LA EMBARAZADA

The Journal of Infectious Diseases 2002;185(Suppl 1):S73–82

ALGORITMO PARA DIAGNOSTICO DE TOXOPLASMOSIS EN EL ADULTO

Manual of Clinical Microbiology. Murray et al

Consenso Argentino de Zoonosis

ALGORITMO TOXOPLASMOSIS EN LA EMBARAZADA

Consenso Argentino de Zoonosis

ALGORITMO TOXOPLASMOSIS CONGENITA

ALGORITMO TOXOPLASMOSISCONGENITA - ISAGA

Consenso Argentino de Zoonosis

TRATAMIENTO

Infección aguda asintomática: NO

Toxoplasmosis aguda en embarazada: Espiramicina

Infección fetal documentada (luego de semana 12 a 18): Pirimetamina + Sulfadiazina + Leucovorina (Acido folínico)

Toxoplasmosis congénita: Pirimetamina + Sulfadiazina + Leucovorina + Corticosteroides (Prednisona)

Encefalitis toxoplásmica en SIDA: idem congénita + macrólidos, ver respuesta

Prevención de la infección por Toxoplasma

- Cocinar la carne muy bien y hasta que ya no se vea rojiza.

- Lavar los cuchillos y las tablas de cortar que se usan para cortar carne, con agua caliente y con jabón.

- Lavar las verduras y quitarles toda la tierra antes de comerlas.

- Evitar tomar agua de los ríos y arroyos

- Lavarse bien las manos después de trabajar en el jardín y quitarse bien toda la tierra de las uñas.

- Usar guantes si trabaja con tierra o si va a limpiar o cambiar el arena de la caja del gato.

- Lavarse las manos con agua caliente y con jabón después de limpiar la caja del gato.

- Limpiar la caja del gato todos los días – toma aproximadamente 24 horas para que los ooquistes en el excremento de los gatos puedan infectar a las personas.

- No permitir que el gato caze animales salvajes y pájaros, mantenerlo dentro de la casa.

-Dar al gato comida seca o enlatada, o cocinar carne fresca poco antes de darle de comer a su gato.

RESUMIENDO……

QUE LINDO GATITO…..PERO OJO CON EL GATO… ESTE SEÑOR PUEDE ESTAR PRESENTE……

MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCIÓN !!!

BIBLIOGRAFIA

Recent Development for Diagnosis of Toxoplasmosis. Remington. JCM, 2004, 941-945

Consenso Argentino de Toxoplasmosis Congénita. Medicina. 2008 Consenso Argentino de zoonosis. 2008 Toxolasmosis. J.G.Montoya. Lancet 2004; 363:1965-76 Laboratory Diagnosis of Toxoplasa gondii Infection and Toxoplasmosis.

Montoya JID, 2002 Diagnostic Medical Parasitology. García 4° Edición. ASM PRESS. 2001 Manual of Clinical Parasitology. Murray. 7° Edición ASM PRESS.1999 Parasitología Médica. Antonio Atías. Meditarráneo. 1998 Proeco. Cursos a distancia. Fundación Bioquímica Argentina Departamento de Microbiología y Parasitología. Facultad de Medicina.

UNAM. México Toxoplasmosis Congénita. Rev Cubana Obstet Ginecol. 1997 Toxoplasma gondii Infection in Pregnancy. Lopes Fabiana. BJID 2007;

11(5): 496-506 Laboratory Diagnosis of Toxoplasma gondii Infection and Toxoplasmosis.

Montoya JG. The Journal of Infectious Diseases 2002;185(Suppl 1):S73–82