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02/02/2010

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FECONDAZIONE E IMPIANTO

La fecondazione rappresenta l’insieme deiLa fecondazione rappresenta l insieme dei fenomeni attinenti al riconoscimento e

all’unione dei due gameti e all’ottenimento dell’embrione

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FECONDAZIONE

Cronologia eventi essenziali

• Formazione di gameti maturi

• Presenza contemporanea nel sito di fecondazione

• Riconoscimento dei due gameti

• Fusione dei due gameti

• Penetrazione dello spz all’interno dell’ovocita

SPERMATOGENESI

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SPERMATOGENESI

• La quantità di sperma emesso in una eiaculazione è dicirca 3 ml ed in esso si trovano da 200 a 300 milioni dispermatozoi.

• Degli spermatozoi deposti in vagina la maggior partedegenera e viene eliminata attraverso un intenso processo difagocitosi ad opera dei leucociti, per cui solo un numeroesiguo (300-500) raggiunge la tuba

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Lo spermatozoo è la cellula sessuale maschile. E’ molto più piccolodell’ovulo e, quando è maturo, ha una forma allungata in cui sidistingue una testa voluminosa, un collo ed una coda.

SPERMATOZOO

TESTA

Nel liquido seminale (o sperma) che lo contiene, ricco di sostanzenutritive lo spermatozoo può vivere all’interno del canale cervicale

TESTA

CODACOLLO

nutritive, lo spermatozoo può vivere all interno del canale cervicalecirca 5 giorni mentre la loro capacità di fecondare dura un tempo piùbreve ( 24 – 48 ore).Sono prodotti da particolari cellule dei testicoli (spermatociti); nelperiodo di piena maturità sessuale, un uomo può produrre fino a100.000 spermatozoi ogni mm3 di spermaLa loro produzione, a differenza della donna, è continua.

SPERMATOZOOGli spermatozoi che vengono prodotti nei tubuli seminiferi deltesticolo per poter avere proprietà fecondanti devono andare incontroa due successivi processi di maturazione funzionale:

MATURAZIONE ha luogo nell’epididimo e fa loroacquistare la motilità

CAPACITAZIONE avviene nelle tube uterine e consistein alterazioni della membranaplasmatica (attivazione degli enzimiacrosomiali e dell’adenil-ciclasi) cheli rende capaci di subire la reazioneacrosomale e di essere quindi ingrado di attraversare gli involucridell’uovo

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OVOGENESIOogonio

Oogonio (46 cr)

Vita embrionale

MITOSI

MEIOSI I

Ovocita primario (46 cr)

Ovocita primario (46 cr)Ripresa meiosi

Pubertà

Durante ciclo Ovarico

LeptoteneZigotenePachiteneDiplotene

MEIOSI IIDiplotene

Ovocita secondario (23 cr)Espulsione I globulo polare

Ovarico

Scoppio del follicolo

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STADI MATURAZIONE OVOCITARIA

PROFASE 1

STADI MATURAZIONE OVOCITARIA

METAFASE 1

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EIACULAZIONE

OVULAZIONEPROGRESSIONE NEI

CICLO OVARICO

UOMO DONNA

OVULAZIONEGENITALI FEMMINILI

PASSAGGIO NELLA TUBA UTERINACAPACITAZIONE

PORZIONE AMPOLLARE DELLA TUBA

REAZIONE ACROSOMALE E PENETRAZIONE

FECONDAZIONE

• Nell’uomo la fecondazione avviene nella porzioneampollare della tuba uterina, dove l’ovocita secondarioarriva, circondato dalla membrana pellucida, sospinto dalmovimento ciliare dell’epitelio tubarico e dalle contrazionidella muscolatura tubarica che aumentano dopo l’ovulazione

• L’ovocita secondario è allo stadio di metafase della

seconda divisione meiotica, processo che si completa solo

se avviene la fecondazione

Si iti h l’ it• Si ritiene che l’ovocita mantenga la capacità di

essere fecondato per circa 12-24 ore, dopo di che va

incontro a fenomeni degenerativi e ad eliminazione

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• La penetrazione dello spermatozooll’ it ( l i ) ènell’oocita (copulazione) è resa

possibile dall’azione degli enzimi liticiacrosomiali il cui rilascio (reazioneacrosomiale) agevola l’invasione deglispermatozoi a livello della membranapellucida

• Il legame tra spermatozoi e zonapellucida è mediato da proteinespecie-specifiche

REAZIONE ACROSOMIALE

La reazione acrosomale simanifesta con la fusione inpiù punti della membranaplasmatica con lamembrana acrosomaleesterna e loro conseguentelisi con fuoriuscita delcontenuto enzimatico(ialuronidasi, fosfatasiacida collagenasi etc )acida, collagenasi,etc.)della vescicola acrosomaleche digerisce la matrice chetiene unite le cellule dellazona pellucida

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Superata la zona pellucida lo spermatozoo si viene a trovare nellospazio perivitellino, ove entra in rapporto con la membrana plasmaticadell’ovocita; le membrane dei due gameti cominciano a fondersi

PENETRAZIONE SPZ

(fusione dei gameti) e lo spermatozoo entra nell’ovocita.

Bl d ll li i

MODIFICAZIONI OVOCITARIE

- Blocco della polispermia- Completamento meiosi: sbloccodallo stato di metafase e prosieguodella seconda divisione meiotica conformazione di un uovo maturo edespulsione del II globulo polare.

Giunto nell’ooplasma, i componenti strutturali dello spermatozoovanno incontro a degenerazione, la membrana nucleare si rompeed il materiale in essa contenuto va a costituire il pronucleomaschile

ZIGOTE

Contemporaneo sviluppo pronucleo femminile

I due pronuclei dopo aver duplicato il loro DNA vanno incontro allaprofase della prima divisione di segmentazione. Scomparsi inucleoli e l’involucro nucleare i due gruppi di cromosomi sidispongono (anfimixi) all’equatore in un unico fuso mitotico.

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FECONDAZIONE

Cronologia eventi essenziali

• Replicazione indipendente di DNA in ogni pronucleo

• Rottura delle membrane pronucleari

• Condensazione dei cromosomi

• Organizzazione sul piatto equatoriale del primo fuso

• Prima divisione cellulare Embrione a due cellule

A : ovocita in metafaseB : lo spermatozoo è entrato

nell’ovocita che ha completatola seconda divisione meiotica

C : si formano il pronucleofemminile e quello maschile

D : avviene la duplicazione del DNAe sono evidenziati i cromosomi

E : i cromosomi materni e paterni sidispongono insieme (anfimixi)sul piano equatoriale del primofuso di segmentazione

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EMBRIONE ALLOSTADIO DI DUEBLASTOMERI

La prima divisione di segmentazionesi conclude con la formazione dei primi due blastomeri

PRIMA SETTIMANA DI SVILUPPO

Eventi che caratterizzano la prima settimana disviluppo dell’uovo fecondato sono:

- Segmentazione- Migrazione attraverso le tube fino alla cavità

uterina- Impianto dell’uovo fecondato

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SEGMENTAZIONE

La segmentazione dell’uovo fecondato consiste nella rapida successione di divisioni mitotichenella rapida successione di divisioni mitotiche

che portano alla formazione di numerose cellule sempre più piccole, dette blastomeri; l’uovo

fecondato si trasforma pertanto in una struttura pluricellulare.

Ciascun blastomero mantiene la sua totipotenza fino allo stadio embrionale di 4-8 blastomeri: da

ognuno di essi può svilupparsi un embrione completo

Col proseguire della segmentazione l’embrioneraggiunge lo stadio di morula (12–36 blastomeri)ammasso centrale di blastomeri contenuto nello spazioancora delimitato dalla membrana pellucida (4° giornidalla fecondazione)dalla fecondazione)

RAPPRESENTAZIONESCHEMATICA DIEMBRIONE ALLOEMBRIONE ALLO

STADIO DI MORULA

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Dallo stadio di 32-64 blastomeri, per assunzione di liquidodall’esterno e per secrezione dei blastomeri stessi comincia nellamorula a formarsi una cavità, il blastocele, ripiena di liquido:l’embrione assume un aspetto cistico e prende il nome di blastocisti

RAPPRESENTAZIONESCHEMATICA DIEMBRIONE ALLO

STADIO DI BLASTOCISTI(5°giorno di sviluppo)

Blastocisti sfera cava la cui parete è formata da un unicostrato di blastomeri appiattiti, il trofoblasto, nella quale sonoraggruppati ad una estremità (polo embrionale) i blastomeri piùinterni a costituire il nodo embrionale.

Le contrazioni peristaltiche della muscolatura della tuba ed ilbattito ciliare dell’epitelio fanno si che l’uovo fecondato percorrain 3-4 giorni tutta la tuba uterina e raggiunga, allo stadio di morulala cavità uterina E’ nella cavità uterina che la morula diventa

MIGRAZIONE E IMPIANTO

la cavità uterina. E nella cavità uterina che la morula diventablastocisti.

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IMPIANTOVerso la fine della prima settimana (6°-7°giorno) la blastocisti,costituita da circa 180 cellule, comincia ad impiantarsi nell’endometrio(impianto interstiziale); dapprima aderisce alla mucosa uterinamediante il trofoblasto del polo embrionale poi inizia ad eroderemediante il trofoblasto del polo embrionale, poi inizia ad eroderel’epitelio per portarsi nella sottostante tonaca propria.

L’annidamento della blastocistinell’endometrio, che sicompleterà intorno al 13°giorno, è frutto di una reciprocainterazione fra trofoblasto ed

Blastocisti che ha iniziato la penetrazionenella mucosa uterina (6°giorno di sviluppo)

interazione fra trofoblasto edendometrio e si verifica infattiper l’attività erosiva deltrofoblasto la cui azioneproteolitica è però attivata dallamucosa uterina stessa.

Quando avviene l’impianto, normalmente ha luogo nella partesuperiore della faccia posteriore dell’utero o, più raramente, dellafaccia anteriore.

IMPIANTO

Normale sede di impianto nell’utero dell’uovo fecondato

Possono tuttavia aversi impianti anomali che si possono verificare onello stesso utero in vicinanza dell’OUI (impianti bassi) che esitanoin una placenta previa (0,5% delle gravidanze) oppure al di fuoridell’utero (gravidanze extrauterine).

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STERILITA’ DI COPPIA: SCELTA TERAPEUTICA

STERILITA’

TERAPIA FARMACOLOGICARAPPORTI MIRATI CHIRURGIA

PROCREAZIONE MEDICALMENTE ASSISTITA

(PMA)

CHIRURGIA

L hi i i t i ll t ilità lLa chirurgia interviene nella sterilità per lacorrezione di malformazioni mulleriane noncompatibili con la prosecuzione dellagravidanza (utero setto, utero didelfo), o perrisolvere patologie che si presentano come unp g postacolo meccanico alla fecondazione eall’impianto dell’embrione (miomi, aderenzetubariche).

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Metroplastica

Asportazione setto uterino (HSG/Laparotomia)

CHIRURGIA

Metroplastica (Utero didelfo)

Salpingolisi

Miomectomia

METROPLASTICA

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INSEMINAZIONE

INDUZIONE DELLA SUPEROVULAZIONE

PMA

• INDUZIONE DELLA SUPEROVULAZIONE• ASPIRAZIONE FOLLICOLARE• RICONOSCIMENTO GAMETI E COLTURA

EMBRIONALETRANSFER EMBRIONARIO• TRANSFER EMBRIONARIO

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Prevenzione luteinizzazione

Induzione crescitafollocolare

Induzione scoppiofollicolare

FARMACI UTILIZZABILI NELLA S.O.

Analoghi GnRh

Agonisti Antagonisti

Gonadotropine

Ricombinanti Urinarie

HCG UrinarieRicomb.

Ricombinanti Urinarie- FSH- LH

- FSH- FSH + LH

Fase Luteale

- HCG- Progesterone

OraleVaginale Gel

Cprs

L’ECOGRAFIA NELLA PMA

• Monitoraggio dell’ induzione della superovulazione

Prelievo follicolare ecoguidato• Prelievo follicolare ecoguidato

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• VIA TRANSVAGINALE

• NUMERO DI FOLLICOLI Dosaggio RIA17beta estradiolo

MONITORAGGIO OVULAZIONE INDOTTA

• TIMING DI SOMMINISTRAZIONE β HCG

• SOVRASTIMOLAZIONE

Ovaie Follicoli- lieve < 5 cm < 30 mm

17beta-estradiolo

- moderata 5 – 10 cm < 60 mm- grave > 10 cm > 60 mm (± ascite)

• CORRELAZIONE CON LA MORFOLOGIA ENDOMETRIALE- spessore- ecopattern

MONITORAGGIO OVULAZIONE INDOTTA

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PRELIEVO OVOCITARIO (PICK UP)

IL prelievo del liquido follicolare dall’ovaio si esegue per via transvaginale con l’impiego di un sottile

id tago ecoguidato

VANTAGGI DELLA TECNICA- Non necessita dell’anestesia generale- Ridotto tempo operativo p p- Rischi minori- Maggiore accettabilità - Basso costo

PRELIEVO FOLLICOLARE

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PMALE TECNICHE

TECNICHE DI FECONDAZIONE INTRACORPOREA

• IUI• IPI• ICI• GIFT

TECNICHE DI FECONDAZIONE EXTRACORPOREA

• FIVET• ICSI• PESA• MESAGIFT MESA • TESE

FIVETFecondazione In Vitro con Trasferimento embronario

Tecnica che consiste nel mettere a contattoin vitro la cellula uovo con spermatozoi capacitati p p

e successivo trasferimento in utero dell’embrione ottenuto

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Tecnica che consiste ll’i i i

ICSIIntra Cytoplasmic Sperm Injection

nell’iniezionediretta di uno spermatozoo nella

cellula uovo. Si utilizza in caso di incapacità degli spermatozoidi penetrare nella cellula uovo

spontaneamente per una carenza numerica o una incapacità

funzionale.

GIFTGamete Intra Fallopian Transfer

Inserimento di gameti (cellule uovo e spermatozoi)

o di embrioni nelle tube mediante una laparoscopia

in anestesia generale.I presupposti sono la funzionalità ed integrità anatomica delle tube

(tecnica oggi quasi in disuso)(tecnica oggi quasi in disuso).

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