Seminar Nasional Sains dan Teknologi (Senastek) IV, Bali, Indonesia 2017 

 

1 

 

Extraction and Fractionation of Bangle Rhizome (Zingiber purpureum) in the Screening of Active Compounds for the Treatment of Degenerative

Diseases

Ni Made Pitri Susanti1, Ni Kadek Warditiani1, Ni Luh Putu Vidya Paramita1, Luh Putu Febryana Larasanty1

1Pharmacy Departement, Faculty of Mathematic and Natural Science,Udayana University, Bukit Jimbaran, Badung, Bali

Presenter’s telephone, fax and e-mail address: 081337254323, dekpitsusanti@unud.ac.id

Abstract

Bangle (Zingiber purpureum) is one of Indonesia's native plants whose pharmacological activity has not been tested and has potential as a medicine. Screening of pharmacological activity from a purified extract of rhizome bangle is done as an effort in the utilization of Indonesian herbal plants as medicinal plants. The first stage is the optimization of the process of making extract of purified rhizome bangle. Purification of this extract is intended to increase the number of certain secondary metabolites that are responsible for antidislipidemia activity of bangle rhizome. So it is expected to have a greater activity than the crude extract. Therefore, in this research will be optimized the process of making purified extract and screening of secondary metabolite content in each extract so that it will be known active compound contained in purified extract. The bangle rhizome is macerated by using 96% ethanol (polar) and n-hexane (nonpolar) solvents. Fractination of n-hexane and 96% ethanol extracts was carried out using liquid vacuum chromatography method. It starts with making a column and a mobile phase (eluent). The mobile phase used is a hexane: chloroform solvent gradient (9: 1; 8: 2; 7: 3; 6: 4; 5: 5; 4: 6); ethyl acetate 100%. The result shows that in hexane fractions with mobile phase hexane: CHCl3 (9: 1) and hexane fractions with mobile phases hexane: CHCl 3 (8: 2) contain terpenoid compounds. When compared with the literature (Farmakope Herba Indonesia), this terpenoid compound is Terpinen-4-ol.

Keywords: Bangle, purified extract, extraction, fractionation.

Extraction and Fractionation ofBangle Rhizome (Zingiber

purpureum) in the Screening ofActive Compounds for theTreatment of Degenerative

Diseasesby Ni Made Pitri Susanti

Submission date: 13-Jan-2018 11:11AM (UTC+0700)Submission ID: 902347977File name: Abstrak_pitri-english.doc (31.5K)Word count: 304Character count: 1815

FINAL GRADE

/0

Extraction and Fractionation of Bangle Rhizome (Zingiberpurpureum) in the Screening of Active Compounds for theTreatment of Degenerative DiseasesGRADEMARK REPORT

GENERAL COMMENTS

Instructor

PAGE 1

-Jit"

M

si

'*%?%

^3 i B> %

I'@! . . ... .. ik

Vtf1 '̂. "@ @@ -.-V*

Letnbaga Peneliti.in.d in, , . ̂* jPengabdian KepadH M.isycirdkcit--

Universitas Udayana '. _. .'.;@

ma

r-f -- ? @ @ - f~+~---f*i"

-1.- .-, @* -?'*. !f"*!Jr. , * -*&: __ i;

1 f i >@ S_# %r- 'Js ̂ J } s &r *? I &.. V I i

iiirisasi inovasi Humaniora. Sains dan TeknolofiioiifyK PtsTibangynan Berkelaniufan

V

tCH naif CO

;;':. '@''/ @'>'@; :.y '

r!V fCf

V @ /

,, to ->

@@ @ ,f-. if

1/13/2018

1

Ekstraksi dan Fraksinasi RimpangBangle (Zingiber purpureum) dalam

Skrining Senyawa Aktif untukPengobatan Penyakit Degeneratif

Ni Made Pitri Susanti,,Ni Kadek Warditiani,, Ni Luh PutuVidya Paramita, Luh Putu Febryana Larasanty

Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan IlmuPengetahuan Alam, Universitas Udayana

Arterosklerosis

PenyakitKardiovaskuler

Latar Belakang

Pengobatan tradisional

Hiperlipidemia, oksidasi LDL dan oksidasi lipid

g

Ekstrak terpurifikasiRimpang Bangle (Zingiber Purpureum)

Anti Hiperlipidemia

Anti Aterosklerosis

Tujuan

• mengetahui metode yang paling tepat untukmendapatkan ekstrak terpurifikasi rimpangbangle serta aktifitas antioksidan denganmetode insilico dan invitrometode insilico dan invitro. 

Hasil Pelaksanaan Penelitian

• Pembuatan ekstrak terpurifikasi

Ekstrak Kental

Pemisahan fase N-heksan dan etanol

1/13/2018

2

• Pembuatan ekstrak terpurifikasi

Kromatografi vakum cair denganpelarut heksan :kloroform dan etil

asetat

Hasil fraksinasi ekstrak N-heksan dan etanol

Identifikasi KLT fraksi

• KLT fraksi  dari ekstrak N‐heksan (1‐5), etanol (6‐8) dan crude ekstrak etanol (9)

• Spot 1,2,3,dan 7 kandungan terpenoid

• Spot 6, dan 9 kandungan  flavonoid

• Identifikasi dan konfirmasi senyawa pada KLT

Plat A disemprot pereaksi asam asetat anhidrat (spot 1,2,3, dan 7 menunjukkan kandungan terpenoid)

Plat B disemprot pereaksi sitroborat (spot 6 dan 9 menunjukkan kandungan plavonoid)

A B

• kromatografi vakum cair kembali terhadap ekstrak heksan. Fase gerak yang digunakan adalah gradien pelarut heksan:kloroform (9:1;8:2;7:3;6:4;5:5; 4:6; 3:7).

P i h d t d• Pemisahan senyawa dengan metode kromatografi vakum cair

• Dari hasil pemisahan diperoleh faksi sebanyak 7 buah.

1/13/2018

3

• Hasil pemisahan fraksi heksan  • A = KLT setelah disemprot pereaksi asam asetat anhidrat + H2SO4 diamati secara visual

• B = KLT setelah disemprot pereaksi asam asetat anhidrat + H2SO4 diamati dibawah sinar UV 366

• no 1 dan 2 mengandung senyawa terpenoid. Jika dibandingkan dengan literaurdibandingkan dengan literaur (Farmakope Herba Indonesia), senyawa yang dimaksud adalah Terpinen‐4‐ol.

A B

Uji aktivitas antioksidan : penghambatan radikal DPPHsenyawa flavonoid dari 

No AUC Konsentrasi %IC1 6424,3 Blanko 02 6332,2 Blanko 03 6246 Blanko 04 5048,3 100 20,300495 4956,4 100 21,751356 4983,9 100 21,31727 3451,4 300 45,511388 3382,4 300 46,60071

fraksi Etanol bangle

9 3429 300 45,8650210 2155,9 500 65,9639511 2153,2 500 66,0065812 2116,4 500 66,5875513 2185,6 700 65,4950714 2170,2 700 65,7381915 2179,2 700 65,5961116 2151,7 900 66,0302617 2124,3 900 66,4628318 2155,1 900 65,97658

Uji aktivitas antioksidan : penghambatan radikal DPPHsenyawa terpenoid dari

No AUC Konsentrasi %IC1 6536,5 Blanko 02 6510,1 Blanko 03 6595,2 Blanko 04 3945,4 100 39,739745 3911,1 100 40,263626 3948 100 39,700037 3585,7 300 45,233638 3565,5 300 45,54216te pe o a

fraksi heksan bangle

9 3606,3 300 44,91910 3200,1 500 51,1231111 3146,5 500 51,9417812 3183,8 500 51,3720713 2788,1 700 57,4158214 2770,9 700 57,6785215 2732,4 700 58,2665516 2517 900 61,5564817 2549,5 900 61,0600918 2530,5 900 61,35028

1/13/2018

4

Regresi linier penghambatan DPPH Senyawa golongan flavonoid dalam fraksi etanol bangle (IC50 = 207,82 µg/ml)

Regresi linier penghambatan DPPH Senyawa golongan terpenoiddalam fraksi heksan bangle (IC50 = 385,87 µg/ml)

Docking  Molekular senyawa aktifbangle pada protein target untuk

k i i i k idaktivitas antioksidan

Superoxyde Dismuthase (SOD) PDB ID‐1MPM

Gluthation Peroxidase (GPX) PDB ID-2F8A

1/13/2018

5

(a) (b)

Struktur 3D senyawa uji terpinen-4-ol (a), senyawa 1:(E)-4-(3’,4’-dimetoksifenil)but-3- en-1-il-asetat (b), Senyawa 2 (E)-4-(3’,4’-dimetoksifenil)but-3-en-1-1-ol (c) dan Senyawa3metoksi-8-(3,4-dimetoksifenil)-1,4-napthoquinon (d).

(d)(c)

Native ligand ZN (‐)

Terpinen‐4‐ol (ARG69; HIS80) Senyawa 1 (‐)Konformasi hasil docking native ligand dan

ji

Senyawa 2 (ARG69; HIS80) Senyawa 3 (GLY61)

senyawa uji dengan protein target SOD (1MPM)

Konformasi hasil docking native ligand dan senyawa uji dengan

Native ligand MLA (THR143; ARG179; ARG180)

Terpinen‐4‐ol (ARG 179) Senyawa 1 (ARG 179; ARG180)

uji dengan protein target GPX (2F8A)

Senyawa 2 (GLY48;TRP160; ARG179) Senyawa 3 (GLY48;TRP160; ARG179)

Konformasi(Senyawa dengan SOD)

Energi Ikatan(Kkal/Mol)

Ikatan Hidrogen

1MFM‐Native Ligand ‐0,87 ‐

1MFM‐Terpinen‐4‐ol ‐4,58 ARG69HIS80

1MFM S 11MFM‐Senyawa 1‐3,25 ‐

1MFM‐Senyawa 2‐3,93

ARG69;THR135HIS80

1MFM‐Senyawa 30,29 GLY61

1/13/2018

6

Konformasi(Senyawa dan GPX)

Energi Ikatan(Kkal/Mol)

Ikatan Hidrogen

2F8A‐Native Ligand ‐5,88ARG179THR143ARG180

2F8A‐Terpinen‐4‐ol ‐4,33 ARG179

2F8A‐Senyawa 1‐4,75

ARG179ARG180

2F8A‐Senyawa 2‐3,9

GLY48TRP160ARG179

2F8A‐Senyawa 3‐5,02

ARG179GLY48TRP160

Kesimpulan

• Proses ekstraksi yang dapat dilakukan untuk mendapatkan senyawa terpenoid : ekstraksi (maserasi) dengan N‐Heksan dan pemurnian dengan kromatografi vakum cair dengan fasedengan kromatografi vakum cair dengan fase gerak heksan:CHCl3 (9:1) dan heksan:CHCl3 (8:2).

• Senyawa (E)‐4‐(3’,4’‐dimetoksifenil)but‐3‐en‐1‐il‐asetat (senyawa 1) dapat berinteraksi dengan protein SOD namun tidak membentukikatan hidrogen, serta dapat berinteaksi dengan protein GPX danmembentuk ikatan hidrogen dengan ARG179 dan ARG180. Hal inimenunjukkan senyawa ini memiliki potensi sebagai antioksidan. 

• Senyawa (E)‐4‐(3’,4’‐dimetoksifenil)but‐3‐en‐1‐1‐ol (senyawa 2) dapat berinteaksi dengan protein SOD dan membentuk ikatanhidrogen dengan ARG69 , THR 135 dan HIS80, serta dapatberinteaksi dengan protein GPX dan membentuk ikatan hidrogendengan GLY48, TRP160 dan ARG179. Hal ini menunjukkan senyawaini memiliki potensi sebagai antioksidan. 29 p g

• Senyawa H ‐metoksi‐8‐(3,4‐dimetoksifenil)‐1,4‐napthoquinon (senyawa 3) berinteraksi dengan sangat lemah (energi ikatanbernilai positif) dengan protein SOD dan membentuk ikatanhidrogen dengan GLY61, serta dapat berinteaksi dengan protein GPX dan membentuk ikatan hidrogen dengan GLY48, TRP160 danARG179. Hal ini menunjukkan senyawa ini memiliki potensi sebagaiantioksidan. 

Ucapan terimakasih

• Kami mengucapkan terimakasih kepada LPPM UNUD atas Hibah Penelitian Unggulan Udayana ThUNUD atas Hibah Penelitian Unggulan Udayana Th2017

1/13/2018

7

TERIMA KASIH

Q.

<175

Ereu.

to

c

Qi