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Enfermedad por el Virus Ébola (EVE): Laboratorio
Paola Pidal M Laboratorio Biomédico Nacional y de
Referencia
• Laboratorio: Diagnóstico y confirmación EVE
• Laboratorio: Manejo general
SOCHINF Dra. Mónica Lafourcade Dra. Patricia García Dr. Francisco Silva Dra. Marcela Cifuentes Dra. Marcela Ferrés Dra. Ana María Guzmán Dra. Beatrice Hervé T.M. Sr. Tomás Sanchez ISP Dra. Verónica Ramírez Dra. Judith Mora Dra. Paola Pidal
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO EVE
La confirmación de infección por virus Ébola solo puede ser realizada en pacientes que ya han desarrollado síntomas y no es posible realizarla durante el periodo de incubación. El virus es generalmente detectable por RT-PCR entre 3-10 días después de la aparición de los síntomas, especialmente fiebre.
DIAGNÓSTICO LABORATORIO EVE : Antecedentes Generales
La confirmación o descarte Centro Colaborador de la OMS establecido para la región.
El ISP PCR para Virus Ébola. Protocolo NML PCR Malaria PCR Dengue
DIAGNÓSTICO DE EVE Y DIFERENCIAL
P.C.R. PUNTO FINAL
DETECCIÓN DE ESPECIES DEL GÉNERO Plasmodium
Primera reacción de P.C.R.: Detección de género Plasmodium
Flujograma Diagnóstico Molecular de Malaria
muestra sangre EDTA- Inactivada Trizol ®
P.C.R. ANIDADA PARA DETECCIÓN DE ESPECIES DEL
GÉNERO Plasmodium
Segunda reacción de P.C.R.: Identificación de especies del género
Plasmodium (vivax, malariae, falciparum y ovale).
Electroforesis de productos de la segunda reacción P.C.R.
• Fotodocumentación de electroforesis
• Interpretación y validación de la corrida
CONTROLES POSITIVOS
Plasmodium malariae: Banda de 145 pb
Plasmodium falciparum: Banda de 206 pb
Plasmodium ovale: Banda de 226 pb
Plasmodium vivax: Banda de 121 pb
Informe de Resultado para Muestra
Tiempo de Respuesta 24 hrs.
Snounou y Singh (2002), Nested PCR analysis of Plasmodium parasites. Methods Mol Med 72: 189–203 Centers for Disease Control and Prevention Malaria Procedures 2013
• RT-PCR en Tiempo Real (qRT-PCR):
– Ébola Zaire (Implementado)
– Ébola Sudán (En Proceso)
• RT-PCR (Confirmatorio):
– Filovirus (Implementado)
• Secuenciamiento
Técnicas disponibles ISP para diagnóstico y confirmación EVE
Diagnóstico y Genotipificación de Ébola : Genes blanco
OH Leader
3’ 5’ NP vp30 vp40 GP vp24 L vp35
sGP
2295
66pb
2361
ZEBOV-NP-FW ZEBOV-NP-RV
17140 17204
ZEBOV-L-FW ZEBOV-L-RV
64pb
RT-PCR
qRT-PCR qRT-PCR
Mix FiloA-Dfw
5’ 3’
- 1
38
54
-
13
87
6
-- 1
32
43
- 1
32
66
RT-PCR
635pb
Mix FiloA-Drv
Frag Polimerasa
Diagnóstico en Centro Colaborador
• Antígenos • AC • RT-PCR • Secuenciamiento
National Microbiology Laboratory Public Health Agency of Canada
Adaptado de: J Infect Dis. (1999) 179 (Supplement 1): S28-S35. doi: 10.1086/514318
J Infect Dis. (2007) 196 (Supplement 2): S142-S147. doi: 10.1086/520545
DIAGNÓSTICO DE ÉBOLA
La confirmación y descarte tiene un componente de laboratorio, epidemiológico y clínico.
La confirmación : Secuenciamiento.
Paciente sospechoso
Muestra de sangre para PCR
Positivo
Secuenciamiento
Positivo
Confirma EVE
Negativo
24 horas
NML Canadá
Negativo
Paciente sospechoso
1
Muestra de sangre para PCR
NML Canadá
Negativo
2
muestra 3
CS 24 hrs
Si 1
muestra > 3 CS Si la primera muestra desde 0-2 CS
Negativo Negativo
3
muestra 4 día CS Negativo Descarta EVE
2 muestras de 5 ml de sangre cada una (2 tubo tapa lila). Para primer envío
DIAGNÓSTICO DE ÉBOLA
La muestra deberá ser tomada por personal de salud solo en los centros de Referencia Ébola definidos por Minsal.
Tomar de muestra el primer día de hospitalización
DONDE
QUE
CUANDO
Extraer las muestras de sangre con sistema al vacío con tubos de plástico . Enviar de inmediato al Instituto de Salud Pública de Chile, en triple embalaje, refrigeradas (en contenedor térmico con Ice Pack).
DIAGNÓSTICO DE ÉBOLA
COMO
Protocolo EPP definidos para la atención clínica
EXÁMENES PARA MANEJO GENERAL DEL PACIENTE NO DIAGNÓSTICO DE ÉBOLA
ASPECTOS GENERALES
Exámenes Bioquímicos: Utilizar point of care en sala de paciente Utilizar point of care o Laboratorio bajo GBS clase II con certificación vigente Utilizar autoanalizadores de química clínica: pretratar los sueros a ser usados con inactivación por calor. Los resultados de las pruebas bioquímicas después de la inactivación del plasma a 60ºC por 60 minutos son aceptables para los siguientes analitos: electrolitos (sodio, potasio y magnesio), función renal (urea, creatinina y urato), bilirrubina, glucosa y proteína C reactiva.
PRECAUCIONES ESPECÍFICAS.
Exámenes hematológicos: Recuento Hematológico y coagulación: Se pueden procesar en autoanalizador hematológico y coagulómetro automatizado respectivamente, siempre que no requiera el retiro de la tapa del tubo que contiene la muestra de sangre.
Exámenes disponibles.
Bacteriología Hemocultivos: Sistemas de hemocultivos automatizados cerrados. Si el hemocultivo es positivo, se debe derivar a Sección Bacteriología del ISP
Actualmente .
Actualmente .
Gracias