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Enfermedad de Chagas
Diagnóstico de Laboratorio
Dr. Guillermo G. NuñezInmunoserología y Autoinmunidad
ESTADIOS EVOLUTIVOST. cruzi
trypomastigote amastigote
epimastigote
Mecanismos de Infección
VECTORIAL
TRANSPLACENTARIA
TRANSFUSIONAL
TRANSPLANTES
Curso clínico
ETAPA AGUDA
Período de incubación: ~7 días Generalmente asintomática Primoinfección en niños de zonas endémicas
Forma sintomáticaSigno de RomañaFiebreHepato/esplenomegaliaEncefalitis
*Alta parasitemia
ETAPA LATENTE
*Período de 30-40 años*Equilibrio entre la patología parasitaria y la respuesta inmune*Asintomático
*Baja parasitemia
*Alta producción de Anticuerpos
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
Infección Aguda Infección Crónica
Inte
nsid
ad d
e re
spue
sta
clínica clínica
Anti-T.cruzi IgM
Anti-T.cruzi IgG
parasitemia
Período incubación
Infección 1-2 semanas 9-10 semanas
Infección Aguda Infección Crónicaclínica
Período incubación
Transmisión congénita
Transmisión vectorial
Infección
Inte
nsid
ad d
e re
spue
sta
TRATAMIENTO ETIOLOGICO
1-2 semanas 8-10 semanas >1 año 3-5 años
Anti-T.cruzi IgG
parasitemia
METODOS PARASITÓLOGICOS
Fase aguda -Reactivaciones
Xenodiagnóstico Microhematocrito
Hemocultivo
Strout
Tripomastigote sanguíneo –(May-Grünwald-Giemsa)
METODOS SEROLÓGICOS
HAI
•Antígenos solubles de membrana y citoplasmáticos
ELISA
•Antígenos recombinantes (SAPA)
IFI
•Epimastigotes enteros
Etapas latente y crónica – Screening bancos de sangre
IgGAM
Hemaglutinación Indirecta (HAI)
Sensibilidad analítica Económico
NO automatizable
IgG IgM
Sensibilidad analítica Económico
Automatizable Reproducible
Enzimoinmunoensayo (ELISA)
IgG IgM
Sensibilidad analítica
Reproducible
Requiere microscopía de fluorescencia
Inmunofluorescencia Indirecta (IFI)
CMIA
•Antígenos recombinantes
Inmunoensayo quimioluminiscente (CMIA)
h.H2O2
Micropartículas-Ags
TcF-FP3FP6-FP10
muestraconjugado
Es la amplificación enzimática de un fragmento de ADN flanqueado por dos secuencias de oligonucleótidos que hibridan en la cadena complementaria de la molécula molde que se va a amplificar (cebadores o “primer”) y que son utilizados por una DNA polimerasa termoresistente para copiar la secuencia de la misma.
desnaturalización hibridización extensión
Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)
kDNA o sDNA
costosa
Sensible y específica
Requiere tecnología y experiencia
No dependientede Estado
Inmunitario
primers
Taq DNA-polimerasaF
R
ADN totalextracción
PCR convencional
PCR En Tiempo Real
nucleótidosdATP, dGTP, dCTP, dTTP
96°C
56°C
72°C
Ciclado (Amplificación)Desnaturalización
Alineamiento
Elongación
Schijman et al.PLoS Negl Trop Dis. 2011 Enero; 5(1): 931
Técnica de diagnóstico
Formas clínicas de la Enfermedad de Chagas
AGUDA LATENTE-CRÓNICA CONGÉNITA
GOTA FRESCA + - +
GOTA GRUESA ++ - ++
MICROCONCENTRACION +++ - +++
STROUT +++ - +++
HEMOCULTIVO +++ -/+ +++
XENODIAGNÓSTICO +++ + +++
PCR ++++ ++ ++++
SEROLOGÍA - (inicio)+ (>20 días)
+++ IgG materna<6 meses
IgM niño
ANTECEDENTE EPIDEMIOLOGICO-Transmisión vectorial-Transfusión sanguínea-Transmisión congénita-Trasplante de órganos
INFECCION POCO PROBABLE
SINTOMÁTICO ASINTOMÁTICO
FORMA AGUDABúsqueda de tripanosomas en sangre---------------------------------------------------Métodos parasitológicos:Xenodiagnóstico-Strout-MicrohematocritoHemocultivo -PCR
FORMA CRONICABúsqueda de Anticuerpos---------------------------------------------------Métodos Serológicos:HAI-ELISA-IFIAcs totales-IgG-IgM
DIAGNOSTICO IMPROBABLE
XenodiagnósticoPCR Seguimiento clínico
DIAGNÓSTICO CONFIRMADO
no
si
(-) (-)
(+) dos tests
(-)
(+)
Algoritmo diagnóstico
GESTANTE CHAGÁSICA
RECIEN NACIDO
BUSQUEDA DEL PARÁSITO-Microconcentración-PCR
BUSQUEDA DE ANTICUERPOS(IgG)-ELISA-IFI (titulación del suero)
CONTROL SEROLÓGICO A LOS3, 6 y 9 meses-ELISA-IFI (titulación del suero)
IgG >basal IgG ≤basal
NO CONFIRMACASO
CONFIRMACASO (tratamiento)
El problema de Inmunorreactividad Cruzada…
Enfermedad de ChagasLeishmaniosis
Trypanosoma cruzi(tripomastigotes)
Leishmania spp(promastigotes)
Familia Trypanosomatidae
ANTÍGENOS COMPARTIDOS
LABORATORIO
CLÍNICA
DIAGNÓSTICO DE CERTEZA
Muchas gracias