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El desafío de identificar correctamente Enterobacterias.
María Emilia Suárez
Bioq.Bacterióloga
CARACTERÍSTICAS
• COCOBACILOS : 0,4-0,6 µm x 2-3 µm
• GRAM NEGATIVOS
• NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS
FACULTATIVOS, MÓVILES O INMÓVILES
• FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA
POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS
TAXONOMÍA
• SECCIÓN 5, 2da EDICIÓN BERGEY
• 41 GÉNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES
• CLASIFICACIÓN POR CRITERIOS BIOQUÍMICOS Y ANTIGÉNICOS
• ACTUALMENTE CRITERIOS GENÉTICOS: HIBRIDACIÓN ADN, SECUENCIACIÓN ADN Y ARNr 16S
Familia Enterobacteriaceae
8 Tribus con los correspondientes géneros en cada una de ellas
Tribu I: ESCHERICHIEAE: Género I: Escherichia / Género II: Shigella
Tribu II: EDWARSIELLEAE : Género I: Edwarsiella
Tribu III: SALMONELLEAE: Género I : Salmonella
Tribu IV: CITROBACTEREAE : Género I : Citrobacter
Tribu V: KLEBSIELLEAE: Género I: Klebsiella / Género II: Enterobacter
Género III: Hafnia/ Género IV: Serratia
Tribu VI: PROTEEAE: Género I: Proteus / Género II: Morganella
Género III: Providencia
Tribu VII: YERSINIEAE : Género I : Yersinia
Tribu VIII: ERWINIEAE : Género I: Erwinia
PODER PATÓGENO
• ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLÍNICA
• CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLÍNICOS
• PATÓGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS
• PATÓGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES
TIPIFICACIÓN
• BIOTIPIFICACIÓN: CARACTERES BIOQUÍMICOS
• SEROTIPIFICACIÓN: ANTÍGENOS O (SOMÁTICOS), K ó Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES)
SEROGRUPOS Y SEROTIPOS
TIPIFICACIÓN
• FAGOTIPIFICACIÓN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli
• PATRÓN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS
• GENOTIPIFICACIÓN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.
Antígenos de Enterobacteriaceae
K Ag
Enterobacterias frecuentes con significación
clínica
Citrobacter freundii, Citrobacter koserí
Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae
Escheríchia coli
Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca
Morganella morganii
Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgarís
Salmonella entérica
Serratia marcescens
Shigella sonnei, Shigella flexneri
Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia
pseudotuberculosis
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN
• MEDIOS COMUNES
• MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES
• INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTÉRICAS
• CITRATO SÓDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN
• MUESTRAS EXTRAINTESTINALES(sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio)
Medios enriquecidos/ CromogénicosAgar Mac Conkey, EMB.
• MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferencialesEnriquecimiento previo
¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?
Oxidasa
¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?
1- Shigella
2- Grupo KES
3- E.coli
TSI
TRIBU I : ESCHERICHIEAE
Mac Conkey Sorbitol Mac Conkey
¿Cómo diferenciamos Shigella de E.coli ?
Pruebas E.coli Shigella
Indol + (96,3) - ó + (37,8)
Lisina decarboxilasa
D (80,6) - (0)
Ornitinadecarbox.
D (57,8) - ó + (20)
Lactosa + (91,6) - (0,3)
Acetato de sodio + (83,3) - (0)
Gas de glucosa + (92) - (2,1)
Motilidad + ó – (62,1) - (0)
RM VP
Diferenciación de Shigella
E.coliShigella
LIATSI
Acetato
ONPGMIO
Clasificación Serológica
Especie Serogrupo Serotipo
S. dysenteriae A 1- 12
S. flexneri B 1- 6
S. boydii C 1- 18
S. sonnei D 1
TRIBU II: EDWARDSIELLEAE
Hombre y animalesHabitad
+Movilidad a 37ºC
-Malonato (utilización)
-/+Arabinosa (fermentación)
-Manitol, sacarosa (ferm)
-Trehalosa (fermentación)
+Indol
+SH2
-Lactosa (fermentación)
E.tardaPrueba bioquímica
TRIBU III:SALMONELLEAE
GÉNERO I: SalmonellaSalmonella entérica
Salmonella bongori
Salmonella enterica subesp. enterica (I)
Prueba bioquímica Sal.subesp.(I)
Lactosa (fermentación)*** -
ONPG -
SH2 +
Glucosa (fermentación)*** +/ con gas
Rojo de Metilo* +
Voges – Proskauer* -
Lisina decarboxilasa** +
Ornitina decarboxilasa** +
Arginina dehidrolasa** +
Urea (hidrólisis)** -
Malonato (utilización)* -
Citrato Simmons** +
*Lectura a los 2días
**Lectura hasta los 4 días
***Lectura hasta los 7 días
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis
Prueba bioquímica Salmonella entérica
subesp.enterica(I)Proteus mirabilis
SH2 + +
Urea (hidrólisis) - +
Fenilalaninadeaminasa - +
Lisina decarboxilasa + -
Ornitina decarboxilasa + +
Lactosa (fermentación) - -
Dulcita (fermentación) + -
ONPG - -
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii
Prueba bioquímica Salm entérica
subesp.enterica(I)Citrobacter freundii
SH2 + +
Urea (hidrólisis) - d
Lisina decarboxilasa + -
Ornitina decarboxilasa + d
Lactosa (fermentación) - d
Sacarosa (fermentación) - d
Dulcita (fermentación) + d
Malonato (utilización) - d
ONPG - +
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Pruebas bioquímicas Salmonella entérica
subesp. enterica(I)E.Tarda E.coli SH2+
Indol - + +
Citrato Simmosns + - -
Lisina decarboxilasa + + +
Arginina dehidrolasa + - -/+
Manita (fermentación) + - +
Dulcita (fermentación) + - +/-
Ramnosa (fermentación) + - +
Xylosa (fermentación) + - +
ONPG - - +
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +
AGAR SS
LIA de Salmonella
TSI de Salmonella
AGAR RAMBACH
S.Paratyphi A
S. Typhi
AGAR XLD
TRIBU IV: CITROBACTEREAE
Citrobacter freundii
Prueba bioquímica Citrobacter spp
Movilidad +
Manitol (fermentación) +
Lisina decarboxilasa -
ONPG +
Citrato de Simmons +
Rojo de Metilo +
Voges- Proskauer -
Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas:
� H2S
� Indol
� Malonato (fermentación)
� ODC
� Adonitol (fermentación)
� Melibiosa (fermentación)
� Sacarosa
� Dulcitol
En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atípicas como:
ONPG: - ( diferenciar con Salmonella)
O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres:
SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos
También hay cepas SH2:- y Citrato: -
TRIBU V: KLEBSIELLEAE
Klebsiella
GRUPO KES
Brock Biología de los Microorganismos 10ª edic.
Enterobacter aerogenes
Pantoea agglomerans
-+ Arginina dehidrolasa
+-Lisina decarboxilasa
+ +Movilidad
E. aerogenesE. cloacaePrueba bioquímica
Serratia marcescens
D-xylosa(-)
D-manosa (+)
DNAsa
(+)
(-)
-dPigmento rojo
+-Rafinosa (fermentación)
+-Melibiosa (fermentación)
+-Xilosa (fermentación)
+-Arabinosa (fermentación)
Serratia liquefaciensSerratia marcescensPrueba bioquímica
Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atípicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +,
nitrato reductasa -, mucosas y V P -
Hafnia alvei
ONPG:+, Movilidad:- (37ºC) y +(22ºC), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-,
Lactosa :-
Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:-
Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar
con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-
TRIBU VI: PROTEEAE
Proteus
Test Bioquímicos Proteusa Providenciaa Morganellaa
Citrato V + -
Ferm de D- Manosa - + +
Liquefacción de gelatina 22ºC + - -
H2S en TSI + - V
Ferm myo-inositol - V -
Ornitina decarboxilasa V - (+)
Swarmming + - -
Hidrólisis de urea + V +
a reacciones dentro de las 48 hs
+: 90 – 100% de positivo
(+): 75 – 89,9% de positivo
(-) 10,1 a 25 5 de positivo
-: 0 – 10% de positivo
O’Hara y col Clin Microb Rev.2004.534-546
Diferenciación entre los géneros Proteus, Providencia y Morganella
Proteus
TRIBU VI: YERSINIEAEGénero: Yersinia
+VP (22º-25ºC)
-Rammonsa (fermentación a 25ºC)
-Fenil alanita deaminasa
-Lactosa (fermentación)
+Urea (hidrólisis a 35ºC,1-4 días)
K/A sin gas SH2 -TSI
Y.enterocoliticaPrueba bioquímica
Medios cromogénicos- BD CHROMagarOrientation Medium
Grupo KES
Grupo PMP/ Pae
E.coli
CPSID3
E.coli
VITEK
María Emilia Suárez
Bioq.Bacterióloga
El desafío de identificar correctamente Enterobacterias.
María Emilia Suárez
Bioq.Bacterióloga
CARACTERÍSTICAS
• COCOBACILOS : 0,4-0,6 µm x 2-3 µm
• GRAM NEGATIVOS
• NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS
FACULTATIVOS, MÓVILES O INMÓVILES
• FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA
POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS
TAXONOMÍA
• SECCIÓN 5, 2da EDICIÓN BERGEY
• 41 GÉNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES
• CLASIFICACIÓN POR CRITERIOS BIOQUÍMICOS Y ANTIGÉNICOS
• ACTUALMENTE CRITERIOS GENÉTICOS: HIBRIDACIÓN ADN, SECUENCIACIÓN ADN Y ARNr 16S
Familia Enterobacteriaceae
8 Tribus con los correspondientes géneros en cada una de ellas
Tribu I: ESCHERICHIEAE: Género I: Escherichia / Género II: Shigella
Tribu II: EDWARSIELLEAE : Género I: Edwarsiella
Tribu III: SALMONELLEAE: Género I : Salmonella
Tribu IV: CITROBACTEREAE : Género I : Citrobacter
Tribu V: KLEBSIELLEAE: Género I: Klebsiella / Género II: Enterobacter
Género III: Hafnia/ Género IV: Serratia
Tribu VI: PROTEEAE: Género I: Proteus / Género II: Morganella
Género III: Providencia
Tribu VII: YERSINIEAE : Género I : Yersinia
Tribu VIII: ERWINIEAE : Género I: Erwinia
PODER PATÓGENO
• ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLÍNICA
• CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLÍNICOS
• PATÓGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS
• PATÓGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES
TIPIFICACIÓN
• BIOTIPIFICACIÓN: CARACTERES BIOQUÍMICOS
• SEROTIPIFICACIÓN: ANTÍGENOS O (SOMÁTICOS), K ó Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES)
SEROGRUPOS Y SEROTIPOS
TIPIFICACIÓN
• FAGOTIPIFICACIÓN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli
• PATRÓN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS
• GENOTIPIFICACIÓN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.
Antígenos de Enterobacteriaceae
K Ag
Enterobacterias frecuentes con significación
clínica
Citrobacter freundii, Citrobacter koserí
Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae
Escheríchia coli
Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca
Morganella morganii
Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgarís
Salmonella entérica
Serratia marcescens
Shigella sonnei, Shigella flexneri
Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia
pseudotuberculosis
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN
• MEDIOS COMUNES
• MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES
• INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTÉRICAS
• CITRATO SÓDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN
• MUESTRAS EXTRAINTESTINALES(sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio)
Medios enriquecidos/ CromogénicosAgar Mac Conkey, EMB.
• MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferencialesEnriquecimiento previo
¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?
Oxidasa
¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?
1- Shigella
2- Grupo KES
3- E.coli
TSI
TRIBU I : ESCHERICHIEAE
Mac Conkey Sorbitol Mac Conkey
¿Cómo diferenciamos Shigella de E.coli ?
Pruebas E.coli Shigella
Indol + (96,3) - ó + (37,8)
Lisina decarboxilasa
D (80,6) - (0)
Ornitinadecarbox.
D (57,8) - ó + (20)
Lactosa + (91,6) - (0,3)
Acetato de sodio + (83,3) - (0)
Gas de glucosa + (92) - (2,1)
Motilidad + ó – (62,1) - (0)
RM VP
Diferenciación de Shigella
E.coliShigella
LIATSI
Acetato
ONPGMIO
Clasificación Serológica
Especie Serogrupo Serotipo
S. dysenteriae A 1- 12
S. flexneri B 1- 6
S. boydii C 1- 18
S. sonnei D 1
TRIBU II: EDWARDSIELLEAE
Hombre y animalesHabitad
+Movilidad a 37ºC
-Malonato (utilización)
-/+Arabinosa (fermentación)
-Manitol, sacarosa (ferm)
-Trehalosa (fermentación)
+Indol
+SH2
-Lactosa (fermentación)
E.tardaPrueba bioquímica
TRIBU III:SALMONELLEAE
GÉNERO I: SalmonellaSalmonella entérica
Salmonella bongori
Salmonella enterica subesp. enterica (I)
Prueba bioquímica Sal.subesp.(I)
Lactosa (fermentación)*** -
ONPG -
SH2 +
Glucosa (fermentación)*** +/ con gas
Rojo de Metilo* +
Voges – Proskauer* -
Lisina decarboxilasa** +
Ornitina decarboxilasa** +
Arginina dehidrolasa** +
Urea (hidrólisis)** -
Malonato (utilización)* -
Citrato Simmons** +
*Lectura a los 2días
**Lectura hasta los 4 días
***Lectura hasta los 7 días
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis
Prueba bioquímica Salmonella entérica
subesp.enterica(I)Proteus mirabilis
SH2 + +
Urea (hidrólisis) - +
Fenilalaninadeaminasa - +
Lisina decarboxilasa + -
Ornitina decarboxilasa + +
Lactosa (fermentación) - -
Dulcita (fermentación) + -
ONPG - -
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii
Prueba bioquímica Salm entérica
subesp.enterica(I)Citrobacter freundii
SH2 + +
Urea (hidrólisis) - d
Lisina decarboxilasa + -
Ornitina decarboxilasa + d
Lactosa (fermentación) - d
Sacarosa (fermentación) - d
Dulcita (fermentación) + d
Malonato (utilización) - d
ONPG - +
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Pruebas bioquímicas Salmonella entérica
subesp. enterica(I)E.Tarda E.coli SH2+
Indol - + +
Citrato Simmosns + - -
Lisina decarboxilasa + + +
Arginina dehidrolasa + - -/+
Manita (fermentación) + - +
Dulcita (fermentación) + - +/-
Ramnosa (fermentación) + - +
Xylosa (fermentación) + - +
ONPG - - +
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +
AGAR SS
LIA de Salmonella
TSI de Salmonella
AGAR RAMBACH
S.Paratyphi A
S. Typhi
AGAR XLD
TRIBU IV: CITROBACTEREAE
Citrobacter freundii
Prueba bioquímica Citrobacter spp
Movilidad +
Manitol (fermentación) +
Lisina decarboxilasa -
ONPG +
Citrato de Simmons +
Rojo de Metilo +
Voges- Proskauer -
Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas:
� H2S
� Indol
� Malonato (fermentación)
� ODC
� Adonitol (fermentación)
� Melibiosa (fermentación)
� Sacarosa
� Dulcitol
En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atípicas como:
ONPG: - ( diferenciar con Salmonella)
O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres:
SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos
También hay cepas SH2:- y Citrato: -
TRIBU V: KLEBSIELLEAE
Klebsiella
GRUPO KES
Brock Biología de los Microorganismos 10ª edic.
Enterobacter aerogenes
Pantoea agglomerans
-+ Arginina dehidrolasa
+-Lisina decarboxilasa
+ +Movilidad
E. aerogenesE. cloacaePrueba bioquímica
Serratia marcescens
D-xylosa(-)
D-manosa (+)
DNAsa
(+)
(-)
-dPigmento rojo
+-Rafinosa (fermentación)
+-Melibiosa (fermentación)
+-Xilosa (fermentación)
+-Arabinosa (fermentación)
Serratia liquefaciensSerratia marcescensPrueba bioquímica
Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atípicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +,
nitrato reductasa -, mucosas y V P -
Hafnia alvei
ONPG:+, Movilidad:- (37ºC) y +(22ºC), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-,
Lactosa :-
Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:-
Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar
con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-
TRIBU VI: PROTEEAE
Proteus
Test Bioquímicos Proteusa Providenciaa Morganellaa
Citrato V + -
Ferm de D- Manosa - + +
Liquefacción de gelatina 22ºC + - -
H2S en TSI + - V
Ferm myo-inositol - V -
Ornitina decarboxilasa V - (+)
Swarmming + - -
Hidrólisis de urea + V +
a reacciones dentro de las 48 hs
+: 90 – 100% de positivo
(+): 75 – 89,9% de positivo
(-) 10,1 a 25 5 de positivo
-: 0 – 10% de positivo
O’Hara y col Clin Microb Rev.2004.534-546
Diferenciación entre los géneros Proteus, Providencia y Morganella
Proteus
TRIBU VI: YERSINIEAEGénero: Yersinia
+VP (22º-25ºC)
-Rammonsa (fermentación a 25ºC)
-Fenil alanita deaminasa
-Lactosa (fermentación)
+Urea (hidrólisis a 35ºC,1-4 días)
K/A sin gas SH2 -TSI
Y.enterocoliticaPrueba bioquímica
Medios cromogénicos- BD CHROMagarOrientation Medium
Grupo KES
Grupo PMP/ Pae
E.coli
CPSID3
E.coli
VITEK
María Emilia Suárez
Bioq.Bacterióloga
El desafío de identificar correctamente Enterobacterias.
María Emilia Suárez
Bioq.Bacterióloga
CARACTERÍSTICAS
• COCOBACILOS : 0,4-0,6 µm x 2-3 µm
• GRAM NEGATIVOS
• NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS
FACULTATIVOS, MÓVILES O INMÓVILES
• FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA
POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS
TAXONOMÍA
• SECCIÓN 5, 2da EDICIÓN BERGEY
• 41 GÉNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES
• CLASIFICACIÓN POR CRITERIOS BIOQUÍMICOS Y ANTIGÉNICOS
• ACTUALMENTE CRITERIOS GENÉTICOS: HIBRIDACIÓN ADN, SECUENCIACIÓN ADN Y ARNr 16S
Familia Enterobacteriaceae
8 Tribus con los correspondientes géneros en cada una de ellas
Tribu I: ESCHERICHIEAE: Género I: Escherichia / Género II: Shigella
Tribu II: EDWARSIELLEAE : Género I: Edwarsiella
Tribu III: SALMONELLEAE: Género I : Salmonella
Tribu IV: CITROBACTEREAE : Género I : Citrobacter
Tribu V: KLEBSIELLEAE: Género I: Klebsiella / Género II: Enterobacter
Género III: Hafnia/ Género IV: Serratia
Tribu VI: PROTEEAE: Género I: Proteus / Género II: Morganella
Género III: Providencia
Tribu VII: YERSINIEAE : Género I : Yersinia
Tribu VIII: ERWINIEAE : Género I: Erwinia
PODER PATÓGENO
• ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLÍNICA
• CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLÍNICOS
• PATÓGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS
• PATÓGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES
TIPIFICACIÓN
• BIOTIPIFICACIÓN: CARACTERES BIOQUÍMICOS
• SEROTIPIFICACIÓN: ANTÍGENOS O (SOMÁTICOS), K ó Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES)
SEROGRUPOS Y SEROTIPOS
TIPIFICACIÓN
• FAGOTIPIFICACIÓN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli
• PATRÓN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS
• GENOTIPIFICACIÓN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.
Antígenos de Enterobacteriaceae
K Ag
Enterobacterias frecuentes con significación
clínica
Citrobacter freundii, Citrobacter koserí
Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae
Escheríchia coli
Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca
Morganella morganii
Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgarís
Salmonella entérica
Serratia marcescens
Shigella sonnei, Shigella flexneri
Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia
pseudotuberculosis
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN
• MEDIOS COMUNES
• MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES
• INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTÉRICAS
• CITRATO SÓDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN
• MUESTRAS EXTRAINTESTINALES(sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio)
Medios enriquecidos/ CromogénicosAgar Mac Conkey, EMB.
• MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferencialesEnriquecimiento previo
¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?
Oxidasa
¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?
1- Shigella
2- Grupo KES
3- E.coli
TSI
TRIBU I : ESCHERICHIEAE
Mac Conkey Sorbitol Mac Conkey
¿Cómo diferenciamos Shigella de E.coli ?
Pruebas E.coli Shigella
Indol + (96,3) - ó + (37,8)
Lisina decarboxilasa
D (80,6) - (0)
Ornitinadecarbox.
D (57,8) - ó + (20)
Lactosa + (91,6) - (0,3)
Acetato de sodio + (83,3) - (0)
Gas de glucosa + (92) - (2,1)
Motilidad + ó – (62,1) - (0)
RM VP
Diferenciación de Shigella
E.coliShigella
LIATSI
Acetato
ONPGMIO
Clasificación Serológica
Especie Serogrupo Serotipo
S. dysenteriae A 1- 12
S. flexneri B 1- 6
S. boydii C 1- 18
S. sonnei D 1
TRIBU II: EDWARDSIELLEAE
Hombre y animalesHabitad
+Movilidad a 37ºC
-Malonato (utilización)
-/+Arabinosa (fermentación)
-Manitol, sacarosa (ferm)
-Trehalosa (fermentación)
+Indol
+SH2
-Lactosa (fermentación)
E.tardaPrueba bioquímica
TRIBU III:SALMONELLEAE
GÉNERO I: SalmonellaSalmonella entérica
Salmonella bongori
Salmonella enterica subesp. enterica (I)
Prueba bioquímica Sal.subesp.(I)
Lactosa (fermentación)*** -
ONPG -
SH2 +
Glucosa (fermentación)*** +/ con gas
Rojo de Metilo* +
Voges – Proskauer* -
Lisina decarboxilasa** +
Ornitina decarboxilasa** +
Arginina dehidrolasa** +
Urea (hidrólisis)** -
Malonato (utilización)* -
Citrato Simmons** +
*Lectura a los 2días
**Lectura hasta los 4 días
***Lectura hasta los 7 días
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis
Prueba bioquímica Salmonella entérica
subesp.enterica(I)Proteus mirabilis
SH2 + +
Urea (hidrólisis) - +
Fenilalaninadeaminasa - +
Lisina decarboxilasa + -
Ornitina decarboxilasa + +
Lactosa (fermentación) - -
Dulcita (fermentación) + -
ONPG - -
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii
Prueba bioquímica Salm entérica
subesp.enterica(I)Citrobacter freundii
SH2 + +
Urea (hidrólisis) - d
Lisina decarboxilasa + -
Ornitina decarboxilasa + d
Lactosa (fermentación) - d
Sacarosa (fermentación) - d
Dulcita (fermentación) + d
Malonato (utilización) - d
ONPG - +
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Pruebas bioquímicas Salmonella entérica
subesp. enterica(I)E.Tarda E.coli SH2+
Indol - + +
Citrato Simmosns + - -
Lisina decarboxilasa + + +
Arginina dehidrolasa + - -/+
Manita (fermentación) + - +
Dulcita (fermentación) + - +/-
Ramnosa (fermentación) + - +
Xylosa (fermentación) + - +
ONPG - - +
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +
AGAR SS
LIA de Salmonella
TSI de Salmonella
AGAR RAMBACH
S.Paratyphi A
S. Typhi
AGAR XLD
TRIBU IV: CITROBACTEREAE
Citrobacter freundii
Prueba bioquímica Citrobacter spp
Movilidad +
Manitol (fermentación) +
Lisina decarboxilasa -
ONPG +
Citrato de Simmons +
Rojo de Metilo +
Voges- Proskauer -
Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas:
� H2S
� Indol
� Malonato (fermentación)
� ODC
� Adonitol (fermentación)
� Melibiosa (fermentación)
� Sacarosa
� Dulcitol
En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atípicas como:
ONPG: - ( diferenciar con Salmonella)
O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres:
SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos
También hay cepas SH2:- y Citrato: -
TRIBU V: KLEBSIELLEAE
Klebsiella
GRUPO KES
Brock Biología de los Microorganismos 10ª edic.
Enterobacter aerogenes
Pantoea agglomerans
-+ Arginina dehidrolasa
+-Lisina decarboxilasa
+ +Movilidad
E. aerogenesE. cloacaePrueba bioquímica
Serratia marcescens
D-xylosa(-)
D-manosa (+)
DNAsa
(+)
(-)
-dPigmento rojo
+-Rafinosa (fermentación)
+-Melibiosa (fermentación)
+-Xilosa (fermentación)
+-Arabinosa (fermentación)
Serratia liquefaciensSerratia marcescensPrueba bioquímica
Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atípicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +,
nitrato reductasa -, mucosas y V P -
Hafnia alvei
ONPG:+, Movilidad:- (37ºC) y +(22ºC), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-,
Lactosa :-
Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:-
Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar
con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-
TRIBU VI: PROTEEAE
Proteus
Test Bioquímicos Proteusa Providenciaa Morganellaa
Citrato V + -
Ferm de D- Manosa - + +
Liquefacción de gelatina 22ºC + - -
H2S en TSI + - V
Ferm myo-inositol - V -
Ornitina decarboxilasa V - (+)
Swarmming + - -
Hidrólisis de urea + V +
a reacciones dentro de las 48 hs
+: 90 – 100% de positivo
(+): 75 – 89,9% de positivo
(-) 10,1 a 25 5 de positivo
-: 0 – 10% de positivo
O’Hara y col Clin Microb Rev.2004.534-546
Diferenciación entre los géneros Proteus, Providencia y Morganella
Proteus
TRIBU VII: YERSINIEAEGénero: Yersinia
+VP (22º-25ºC)
-Rammonsa (fermentación a 25ºC)
-Fenil alanita deaminasa
-Lactosa (fermentación)
+Urea (hidrólisis a 35ºC,1-4 días)
K/A sin gas SH2 -TSI
Y.enterocoliticaPrueba bioquímica
Medios cromogénicos- BD CHROMagarOrientation Medium
Grupo KES
Grupo PMP/ Pae
E.coli
CPSID3
E.coli
VITEK
María Emilia Suárez
Bioq.Bacterióloga
El desafío de identificar correctamente Enterobacterias.
María Emilia Suárez
Bioq.Bacterióloga
CARACTERÍSTICAS
• COCOBACILOS : 0,4-0,6 µm x 2-3 µm
• GRAM NEGATIVOS
• NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS
FACULTATIVOS, MÓVILES O INMÓVILES
• FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA
POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS
TAXONOMÍA
• SECCIÓN 5, 2da EDICIÓN BERGEY
• 41 GÉNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES
• CLASIFICACIÓN POR CRITERIOS BIOQUÍMICOS Y ANTIGÉNICOS
• ACTUALMENTE CRITERIOS GENÉTICOS: HIBRIDACIÓN ADN, SECUENCIACIÓN ADN Y ARNr 16S
Familia Enterobacteriaceae
8 Tribus con los correspondientes géneros en cada una de ellas
Tribu I: ESCHERICHIEAE: Género I: Escherichia / Género II: Shigella
Tribu II: EDWARSIELLEAE : Género I: Edwarsiella
Tribu III: SALMONELLEAE: Género I : Salmonella
Tribu IV: CITROBACTEREAE : Género I : Citrobacter
Tribu V: KLEBSIELLEAE: Género I: Klebsiella / Género II: Enterobacter
Género III: Hafnia/ Género IV: Serratia
Tribu VI: PROTEEAE: Género I: Proteus / Género II: Morganella
Género III: Providencia
Tribu VII: YERSINIEAE : Género I : Yersinia
Tribu VIII: ERWINIEAE : Género I: Erwinia
PODER PATÓGENO
• ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLÍNICA
• CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLÍNICOS
• PATÓGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS
• PATÓGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES
TIPIFICACIÓN
• BIOTIPIFICACIÓN: CARACTERES BIOQUÍMICOS
• SEROTIPIFICACIÓN: ANTÍGENOS O (SOMÁTICOS), K ó Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES)
SEROGRUPOS Y SEROTIPOS
TIPIFICACIÓN
• FAGOTIPIFICACIÓN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli
• PATRÓN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS
• GENOTIPIFICACIÓN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.
Antígenos de Enterobacteriaceae
K Ag
Enterobacterias frecuentes con significación
clínica
Citrobacter freundii, Citrobacter koserí
Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae
Escheríchia coli
Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca
Morganella morganii
Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgarís
Salmonella entérica
Serratia marcescens
Shigella sonnei, Shigella flexneri
Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia
pseudotuberculosis
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN
• MEDIOS COMUNES
• MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES
• INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTÉRICAS
• CITRATO SÓDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN
• MUESTRAS EXTRAINTESTINALES(sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio)
Medios enriquecidos/ CromogénicosAgar Mac Conkey, EMB.
• MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferencialesEnriquecimiento previo
¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?
Oxidasa
¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?
1- Shigella
2- Grupo KES
3- E.coli
TSI
TRIBU I : ESCHERICHIEAE
Mac Conkey Sorbitol Mac Conkey
¿Cómo diferenciamos Shigella de E.coli ?
Pruebas E.coli Shigella
Indol + (96,3) - ó + (37,8)
Lisina decarboxilasa
D (80,6) - (0)
Ornitinadecarbox.
D (57,8) - ó + (20)
Lactosa + (91,6) - (0,3)
Acetato de sodio + (83,3) - (0)
Gas de glucosa + (92) - (2,1)
Motilidad + ó – (62,1) - (0)
RM VP
Diferenciación de Shigella
E.coliShigella
LIATSI
Acetato
ONPGMIO
Clasificación Serológica
Especie Serogrupo Serotipo
S. dysenteriae A 1- 12
S. flexneri B 1- 6
S. boydii C 1- 18
S. sonnei D 1
TRIBU II: EDWARDSIELLEAE
Hombre y animalesHabitad
+Movilidad a 37ºC
-Malonato (utilización)
-/+Arabinosa (fermentación)
-Manitol, sacarosa (ferm)
-Trehalosa (fermentación)
+Indol
+SH2
-Lactosa (fermentación)
E.tardaPrueba bioquímica
TRIBU III:SALMONELLEAE
GÉNERO I: SalmonellaSalmonella entérica
Salmonella bongori
Salmonella enterica subesp. enterica (I)
Prueba bioquímica Sal.subesp.(I)
Lactosa (fermentación)*** -
ONPG -
SH2 +
Glucosa (fermentación)*** +/ con gas
Rojo de Metilo* +
Voges – Proskauer* -
Lisina decarboxilasa** +
Ornitina decarboxilasa** +
Arginina dehidrolasa** +
Urea (hidrólisis)** -
Malonato (utilización)* -
Citrato Simmons** +
*Lectura a los 2días
**Lectura hasta los 4 días
***Lectura hasta los 7 días
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis
Prueba bioquímica Salmonella entérica
subesp.enterica(I)Proteus mirabilis
SH2 + +
Urea (hidrólisis) - +
Fenilalaninadeaminasa - +
Lisina decarboxilasa + -
Ornitina decarboxilasa + +
Lactosa (fermentación) - -
Dulcita (fermentación) + -
ONPG - -
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii
Prueba bioquímica Salm entérica
subesp.enterica(I)Citrobacter freundii
SH2 + +
Urea (hidrólisis) - d
Lisina decarboxilasa + -
Ornitina decarboxilasa + d
Lactosa (fermentación) - d
Sacarosa (fermentación) - d
Dulcita (fermentación) + d
Malonato (utilización) - d
ONPG - +
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Pruebas bioquímicas Salmonella entérica
subesp. enterica(I)E.Tarda E.coli SH2+
Indol - + +
Citrato Simmosns + - -
Lisina decarboxilasa + + +
Arginina dehidrolasa + - -/+
Manita (fermentación) + - +
Dulcita (fermentación) + - +/-
Ramnosa (fermentación) + - +
Xylosa (fermentación) + - +
ONPG - - +
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +
AGAR SS
LIA de Salmonella
TSI de Salmonella
AGAR RAMBACH
S.Paratyphi A
S. Typhi
AGAR XLD
TRIBU IV: CITROBACTEREAE
Citrobacter freundii
Prueba bioquímica Citrobacter spp
Movilidad +
Manitol (fermentación) +
Lisina decarboxilasa -
ONPG +
Citrato de Simmons +
Rojo de Metilo +
Voges- Proskauer -
Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas:
� H2S
� Indol
� Malonato (fermentación)
� ODC
� Adonitol (fermentación)
� Melibiosa (fermentación)
� Sacarosa
� Dulcitol
En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atípicas como:
ONPG: - ( diferenciar con Salmonella)
O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres:
SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos
También hay cepas SH2:- y Citrato: -
TRIBU V: KLEBSIELLEAE
Klebsiella
GRUPO KES
Brock Biología de los Microorganismos 10ª edic.
Enterobacter aerogenes
Pantoea agglomerans
-+ Arginina dehidrolasa
+-Lisina decarboxilasa
+ +Movilidad
E. aerogenesE. cloacaePrueba bioquímica
Serratia marcescens
D-xylosa(-)
D-manosa (+)
DNAsa
(+)
(-)
-dPigmento rojo
+-Rafinosa (fermentación)
+-Melibiosa (fermentación)
+-Xilosa (fermentación)
+-Arabinosa (fermentación)
Serratia liquefaciensSerratia marcescensPrueba bioquímica
Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atípicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +,
nitrato reductasa -, mucosas y V P -
Hafnia alvei
ONPG:+, Movilidad:- (37ºC) y +(22ºC), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-,
Lactosa :-
Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:-
Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar
con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-
TRIBU VI: PROTEEAE
Proteus
Test Bioquímicos Proteusa Providenciaa Morganellaa
Citrato V + -
Ferm de D- Manosa - + +
Liquefacción de gelatina 22ºC + - -
H2S en TSI + - V
Ferm myo-inositol - V -
Ornitina decarboxilasa V - (+)
Swarmming + - -
Hidrólisis de urea + V +
a reacciones dentro de las 48 hs
+: 90 – 100% de positivo
(+): 75 – 89,9% de positivo
(-) 10,1 a 25 5 de positivo
-: 0 – 10% de positivo
O’Hara y col Clin Microb Rev.2004.534-546
Diferenciación entre los géneros Proteus, Providencia y Morganella
Proteus
TRIBU VII: YERSINIEAEGénero: Yersinia
+VP (22º-25ºC)
-Rammonsa (fermentación a 25ºC)
-Fenil alanita deaminasa
-Lactosa (fermentación)
+Urea (hidrólisis a 35ºC,1-4 días)
K/A sin gas SH2 -TSI
Y.enterocoliticaPrueba bioquímica
Medios cromogénicos- BD CHROMagarOrientation Medium
Grupo KES
Grupo PMP/ Pae
E.coli
CPSID3
E.coli
VITEK
María Emilia Suárez
Bioq.Bacterióloga
El desafío de identificar correctamente Enterobacterias
María Emilia Suárez
Bioq.Bacterióloga
CARACTERÍSTICAS
• COCOBACILOS : 0,4-0,6 µm x 2-3 µm
• GRAM NEGATIVOS
• NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS
FACULTATIVOS, MÓVILES O INMÓVILES
• FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA
POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS
TAXONOMÍA
• SECCIÓN 5, 2da EDICIÓN BERGEY
• 41 GÉNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES
• CLASIFICACIÓN POR CRITERIOS BIOQUÍMICOS Y ANTIGÉNICOS
• ACTUALMENTE CRITERIOS GENÉTICOS: HIBRIDACIÓN ADN, SECUENCIACIÓN ADN Y ARNr 16S
Familia Enterobacteriaceae
8 Tribus con los correspondientes géneros en cada una de ellas
Tribu I: ESCHERICHIEAE: Género I: Escherichia / Género II: Shigella
Tribu II: EDWARSIELLEAE : Género I: Edwarsiella
Tribu III: SALMONELLEAE: Género I : Salmonella
Tribu IV: CITROBACTEREAE : Género I : Citrobacter
Tribu V: KLEBSIELLEAE: Género I: Klebsiella / Género II: Enterobacter
Género III: Hafnia/ Género IV: Serratia
Tribu VI: PROTEEAE: Género I: Proteus / Género II: Morganella
Género III: Providencia
Tribu VII: YERSINIEAE : Género I : Yersinia
Tribu VIII: ERWINIEAE : Género I: Erwinia
PODER PATÓGENO
• ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLÍNICA
• CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLÍNICOS
• PATÓGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS
• PATÓGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES
Enterobacterias frecuentes con significación
clínica
Citrobacter freundii, Citrobacter koserí
Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae
Escheríchia coli
Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca
Morganella morganii
Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgarís
Salmonella entérica
Serratia marcescens
Shigella sonnei, Shigella flexneri
Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia
pseudotuberculosis
TIPIFICACIÓN
• BIOTIPIFICACIÓN: CARACTERES BIOQUÍMICOS
• SEROTIPIFICACIÓN: ANTÍGENOS O (SOMÁTICOS), K ó Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES)
SEROGRUPOS Y SEROTIPOS
TIPIFICACIÓN
• FAGOTIPIFICACIÓN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli
• PATRÓN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS
• GENOTIPIFICACIÓN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.
Antígenos de Enterobacteriaceae
K Ag
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN
• MEDIOS COMUNES
• MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES
• INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTÉRICAS
• CITRATO SÓDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN
• MUESTRAS EXTRAINTESTINALES(sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio)
Medios enriquecidos/ CromogénicosAgar Mac Conkey, EMB.
• MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferencialesEnriquecimiento previo
¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?
Oxidasa
¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?
1- Shigella
2- Grupo KES
3- E.coli
TSI
TRIBU I : ESCHERICHIEAE
Mac Conkey Sorbitol Mac Conkey
¿Cómo diferenciamos Shigella de E.coli ?
Pruebas E.coli Shigella
Indol + (96,3) - ó + (37,8)
Lisina decarboxilasa
D (80,6) - (0)
Ornitina decarbox.
D (57,8) - ó + (20)
Lactosa + (91,6) - (0,3)
Acetato de sodio + (83,3) - (0)
Gas de glucosa + (92) - (2,1)
Motilidad + ó – (62,1) - (0)
RM VP
Diferenciación de Shigella
E.coliShigella
LIATSI
Acetato
ONPGMIO
Clasificación Serológica
Especie Serogrupo Serotipo
S. dysenteriae A 1- 12
S. flexneri B 1- 6
S. boydii C 1- 18
S. sonnei D 1
TRIBU II: EDWARDSIELLEAE
Prueba bioquímica E.tarda
Lactosa (fermentación) -
SH2
+
Indol +
Trehalosa (fermentación) -
Manitol, sacarosa (ferm) -
Arabinosa (fermentación) -/+
Malonato (utilización) -
Movilidad a 37ºC +
Habitad Hombre y animales
TRIBU III:SALMONELLEAE
GÉNERO I: SalmonellaSalmonella entérica
Salmonella bongori
Salmonella enterica subesp. enterica (I)
Prueba bioquímica Sal.subesp.(I)
Lactosa (fermentación)*** -
ONPG -
SH2 +
Glucosa (fermentación)*** +/ con gas
Rojo de Metilo* +
Voges – Proskauer* -
Lisina decarboxilasa** +
Ornitina decarboxilasa** +
Arginina dehidrolasa** +
Urea (hidrólisis)** -
Malonato (utilización)* -
Citrato Simmons** +
*Lectura a los 2días
**Lectura hasta los 4 días
***Lectura hasta los 7 días
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis
Prueba bioquímica Salmonella entérica
subesp.enterica(I)Proteus mirabilis
SH2 + +
Urea (hidrólisis) - +
Fenilalaninadeaminasa - +
Lisina decarboxilasa + -
Ornitina decarboxilasa + +
Lactosa (fermentación) - -
Dulcita (fermentación) + -
ONPG - -
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii
Prueba bioquímica Salm entérica
subesp.enterica(I)Citrobacter freundii
SH2 + +
Urea (hidrólisis) - d
Lisina decarboxilasa + -
Ornitina decarboxilasa + d
Lactosa (fermentación) - d
Sacarosa (fermentación) - d
Dulcita (fermentación) + d
Malonato (utilización) - d
ONPG - +
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Pruebas bioquímicas Salmonella entérica
subesp. enterica(I)E.tarda E.coli SH2+
Indol - + +
Citrato Simmosns + - -
Lisina decarboxilasa + + +
Arginina dehidrolasa + - -/+
Manita (fermentación) + - +
Dulcita (fermentación) + - +/-
Ramnosa (fermentación) + - +
Xylosa (fermentación) + - +
ONPG - - +
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +
AGAR SS
LIA de Salmonella
TSI de Salmonella
AGAR RAMBACH
S.Paratyphi A
ODC + LIA -
S. Typhi
ODC -LIA +
AGAR XLD
TRIBU IV: CITROBACTEREAE
Citrobacter freundii
Prueba bioquímica Citrobacter spp
Movilidad +
Manitol (fermentación) +
Lisina decarboxilasa -
ONPG +
Citrato de Simmons +
Rojo de Metilo +
Voges- Proskauer -
Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas:
� H2S
� Indol
� Malonato (fermentación)
� ODC
� Adonitol (fermentación)
� Melibiosa (fermentación)
� Sacarosa
� Dulcitol
En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atípicas como:
ONPG: - ( diferenciar con Salmonella)
O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres:
SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos
También hay cepas SH2:- y Citrato: -
TRIBU V: KLEBSIELLEAEGéneros: KES y Hafnia
Klebsiella
GRUPO KES
Brock Biología de los Microorganismos 10ª edic.
Enterobacter aerogenes
Pantoea agglomerans
Prueba bioquímica E. cloacae E. aerogenes
Movilidad + +
Lisina decarboxilasa - +
Arginina dehidrolasa + -
Serratia marcescens
D-xylosa(-)
D-manosa (+)
DNAsa
(+)
(-)
Prueba bioquímica Serratia marcescens Serratia liquefaciens
Arabinosa (fermentación) - +
Xilosa (fermentación) - +
Melibiosa (fermentación) - +
Rafinosa (fermentación) - +
Pigmento rojo d -
Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atípicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +,
nitrato reductasa -, mucosas y V P -
Hafnia alvei
ONPG:+, Movilidad:- (37ºC) y +(22ºC), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-,
Lactosa :-
Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:-
Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar
con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-
TRIBU VI: PROTEEAEGéneros: Proteus,
Morganella y Providencia
Proteus
Test Bioquímicos Proteusa Providenciaa Morganellaa
Citrato V + -
Ferm de D- Manosa - + +
Liquefacción de gelatina 22ºC + - -
H2S en TSI + - V
Ferm myo-inositol - V -
Ornitina decarboxilasa V - (+)
Swarmming + - -
Hidrólisis de urea + V +
a reacciones dentro de las 48 hs
+: 90 – 100% de positivo
(+): 75 – 89,9% de positivo
(-) 10,1 a 25 5 de positivo
-: 0 – 10% de positivo
O’Hara y col Clin Microb Rev.2004.534-546
Diferenciación entre los géneros Proteus, Providencia y Morganella
Proteus
TRIBU VII: YERSINIEAEGénero: Yersinia
Prueba bioquímica Y.enterocolitica
TSI K/A sin gas SH2 -
Urea (hidrólisis a 35ºC,1-4 días) +
Lactosa (fermentación) -
Fenil alanita deaminasa -
Rammonsa (fermentación a 25ºC) -
VP (22º-25ºC) +
Medios cromogénicos- BD CHROMagar Orientation Medium
Grupo KES
Grupo PMP/ Pae
E.coli
CPSID3
E.coli
VITEK
María Emilia Suárez
Bioq.Bacterióloga
Para consultas y derivaciones
Laboratorio Central de la Provincia de Córdoba
Tránsito Cáceres de Allende 421- 5000 Córdoba
Te: 0351- 4342452
Biología Molecular
María Emilia Suárez
Cel: 0351-156347704
El desafío de identificar correctamente Enterobacterias
María Emilia Suárez
Bioq.Bacterióloga
CARACTERÍSTICAS
• COCOBACILOS : 0,4-0,6 µm x 2-3 µm
• GRAM NEGATIVOS
• NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS
FACULTATIVOS, MÓVILES O INMÓVILES
• FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA
POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS
TAXONOMÍA
• SECCIÓN 5, 2da EDICIÓN BERGEY
• 41 GÉNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES
• CLASIFICACIÓN POR CRITERIOS BIOQUÍMICOS Y ANTIGÉNICOS
• ACTUALMENTE CRITERIOS GENÉTICOS: HIBRIDACIÓN ADN, SECUENCIACIÓN ADN Y ARNr 16S
Familia Enterobacteriaceae
8 Tribus con los correspondientes géneros en cada una de ellas
Tribu I: ESCHERICHIEAE: Género I: Escherichia / Género II: Shigella
Tribu II: EDWARSIELLEAE : Género I: Edwarsiella
Tribu III: SALMONELLEAE: Género I : Salmonella
Tribu IV: CITROBACTEREAE : Género I : Citrobacter
Tribu V: KLEBSIELLEAE: Género I: Klebsiella / Género II: Enterobacter
Género III: Hafnia/ Género IV: Serratia
Tribu VI: PROTEEAE: Género I: Proteus / Género II: Morganella
Género III: Providencia
Tribu VII: YERSINIEAE : Género I : Yersinia
Tribu VIII: ERWINIEAE : Género I: Erwinia
PODER PATÓGENO
• ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLÍNICA
• CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLÍNICOS
• PATÓGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS
• PATÓGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES
Enterobacterias frecuentes con significación
clínica
Citrobacter freundii, Citrobacter koserí
Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae
Escheríchia coli
Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca
Morganella morganii
Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgarís
Salmonella entérica
Serratia marcescens
Shigella sonnei, Shigella flexneri
Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia
pseudotuberculosis
TIPIFICACIÓN
• BIOTIPIFICACIÓN: CARACTERES BIOQUÍMICOS
• SEROTIPIFICACIÓN: ANTÍGENOS O (SOMÁTICOS), K ó Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES)
SEROGRUPOS Y SEROTIPOS
TIPIFICACIÓN
• FAGOTIPIFICACIÓN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli
• PATRÓN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS
• GENOTIPIFICACIÓN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.
Antígenos de Enterobacteriaceae
K Ag
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN
• MEDIOS COMUNES
• MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES
• INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTÉRICAS
• CITRATO SÓDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN
• MUESTRAS EXTRAINTESTINALES(sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio)
Medios enriquecidos/ CromogénicosAgar Mac Conkey, EMB.
• MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferencialesEnriquecimiento previo
¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?
Oxidasa
¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?
1- Shigella
2- Grupo KES
3- E.coli
TSI
TRIBU I : ESCHERICHIEAE
Mac Conkey Sorbitol Mac Conkey
¿Cómo diferenciamos Shigella de E.coli ?
Pruebas E.coli Shigella
Indol + (96,3) - ó + (37,8)
Lisina decarboxilasa
D (80,6) - (0)
Ornitina decarbox.
D (57,8) - ó + (20)
Lactosa + (91,6) - (0,3)
Acetato de sodio + (83,3) - (0)
Gas de glucosa + (92) - (2,1)
Motilidad + ó – (62,1) - (0)
RM VP
Diferenciación de Shigella
E.coliShigella
LIATSI
Acetato
ONPGMIO
Clasificación Serológica
Especie Serogrupo Serotipo
S. dysenteriae A 1- 12
S. flexneri B 1- 6
S. boydii C 1- 18
S. sonnei D 1
TRIBU II: EDWARDSIELLEAE
Prueba bioquímica E.tarda
Lactosa (fermentación) -
SH2
+
Indol +
Trehalosa (fermentación) -
Manitol, sacarosa (ferm) -
Arabinosa (fermentación) -/+
Malonato (utilización) -
Movilidad a 37ºC +
Habitad Hombre y animales
TRIBU III:SALMONELLEAE
GÉNERO I: SalmonellaSalmonella entérica
Salmonella bongori
Salmonella enterica subesp. enterica (I)
Prueba bioquímica Sal.subesp.(I)
Lactosa (fermentación)*** -
ONPG -
SH2 +
Glucosa (fermentación)*** +/ con gas
Rojo de Metilo* +
Voges – Proskauer* -
Lisina decarboxilasa** +
Ornitina decarboxilasa** +
Arginina dehidrolasa** +
Urea (hidrólisis)** -
Malonato (utilización)* -
Citrato Simmons** +
*Lectura a los 2días
**Lectura hasta los 4 días
***Lectura hasta los 7 días
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis
Prueba bioquímica Salmonella entérica
subesp.enterica(I)Proteus mirabilis
SH2 + +
Urea (hidrólisis) - +
Fenilalaninadeaminasa - +
Lisina decarboxilasa + -
Ornitina decarboxilasa + +
Lactosa (fermentación) - -
Dulcita (fermentación) + -
ONPG - -
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii
Prueba bioquímica Salm entérica
subesp.enterica(I)Citrobacter freundii
SH2 + +
Urea (hidrólisis) - d
Lisina decarboxilasa + -
Ornitina decarboxilasa + d
Lactosa (fermentación) - d
Sacarosa (fermentación) - d
Dulcita (fermentación) + d
Malonato (utilización) - d
ONPG - +
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Pruebas bioquímicas Salmonella entérica
subesp. enterica(I)E.tarda E.coli SH2+
Indol - + +
Citrato Simmosns + - -
Lisina decarboxilasa + + +
Arginina dehidrolasa + - -/+
Manita (fermentación) + - +
Dulcita (fermentación) + - +/-
Ramnosa (fermentación) + - +
Xylosa (fermentación) + - +
ONPG - - +
+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones
Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008
Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +
AGAR SS
LIA de Salmonella
TSI de Salmonella
AGAR RAMBACH
S.Paratyphi A
ODC + LIA -
S. Typhi
ODC -LIA +
AGAR XLD
TRIBU IV: CITROBACTEREAE
Citrobacter freundii
Prueba bioquímica Citrobacter spp
Movilidad +
Manitol (fermentación) +
Lisina decarboxilasa -
ONPG +
Citrato de Simmons +
Rojo de Metilo +
Voges- Proskauer -
Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas:
� H2S
� Indol
� Malonato (fermentación)
� ODC
� Adonitol (fermentación)
� Melibiosa (fermentación)
� Sacarosa
� Dulcitol
En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atípicas como:
ONPG: - ( diferenciar con Salmonella)
O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres:
SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos
También hay cepas SH2:- y Citrato: -
TRIBU V: KLEBSIELLEAEGéneros: KES y Hafnia
Klebsiella
GRUPO KES
Brock Biología de los Microorganismos 10ª edic.
Enterobacter aerogenes
Pantoea agglomerans
Prueba bioquímica E. cloacae E. aerogenes
Movilidad + +
Lisina decarboxilasa - +
Arginina dehidrolasa + -
Serratia marcescens
D-xylosa(-)
D-manosa (+)
DNAsa
(+)
(-)
Prueba bioquímica Serratia marcescens Serratia liquefaciens
Arabinosa (fermentación) - +
Xilosa (fermentación) - +
Melibiosa (fermentación) - +
Rafinosa (fermentación) - +
Pigmento rojo d -
Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atípicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +,
nitrato reductasa -, mucosas y V P -
Hafnia alvei
ONPG:+, Movilidad:- (37ºC) y +(22ºC), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-,
Lactosa :-
Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:-
Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar
con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-
TRIBU VI: PROTEEAEGéneros: Proteus,
Morganella y Providencia
Proteus
Test Bioquímicos Proteusa Providenciaa Morganellaa
Citrato V + -
Ferm de D- Manosa - + +
Liquefacción de gelatina 22ºC + - -
H2S en TSI + - V
Ferm myo-inositol - V -
Ornitina decarboxilasa V - (+)
Swarmming + - -
Hidrólisis de urea + V +
a reacciones dentro de las 48 hs
+: 90 – 100% de positivo
(+): 75 – 89,9% de positivo
(-) 10,1 a 25 5 de positivo
-: 0 – 10% de positivo
O’Hara y col Clin Microb Rev.2004.534-546
Diferenciación entre los géneros Proteus, Providencia y Morganella
Proteus
TRIBU VII: YERSINIEAEGénero: Yersinia
Prueba bioquímica Y.enterocolitica
TSI K/A sin gas SH2 -
Urea (hidrólisis a 35ºC,1-4 días) +
Lactosa (fermentación) -
Fenil alanita deaminasa -
Rammonsa (fermentación a 25ºC) -
VP (22º-25ºC) +
Medios cromogénicos- BD CHROMagar Orientation Medium
Grupo KES
Grupo PMP/ Pae
E.coli
CPSID3
E.coli
VITEK
María Emilia Suárez
Bioq.Bacterióloga
Para consultas y derivaciones
Laboratorio Central de la Provincia de Córdoba
Tránsito Cáceres de Allende 421- 5000 Córdoba
Te: 0351- 4342452
Biología Molecular
María Emilia Suárez
Cel: 0351-156347704