ejercicio resuelto 3_4
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Ejercicio resuelto
Ejercicio 2. TRABAJO DIRIGIDO Nº 3 (Fisicoquímica II, Curso 200 9-2010 , Grupo B)
La hidrólisis de N-glutaril-L-fenilalanina-p-nitroanilida (GPNA) para dar p-nitroanilina yN-glutaril-L-fenilalanina, está catalizada por la enzima α-quimotripsina. En unasdeterminadas condiciones de pH y temperatura, los datos cinéticos obtenidos han sido lossiguientes:
7.105.903.732.11v / mmol L-1 min-1
15.010.05.002.50[GPNA] / 10-4 M
a) Asumiendo una cinética de tipo Michaelis-Menten, calcúlense gráficamente los valoresde Vmax y KM .b) Determine el valor del nº de recambio (k2) sabiendo que la concentración de enzimaempleada fue de 4.00. 10-6 M.
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� La ecuación de Michalis-Menten es:
v =Vmax $ [S]KM + [S]
Tomando inversos en ambos miembros se obtiene la linealización de Lineweaver-Burk:
1v = 1
Vmax+ KMVmax$1
[S]
que tiene la forma de una línea recta:
y = o.o. + pendiente $ x
de manera que representando 1/v frente a 1/[S] podremos obtener Vmax y KM.
� a) Para ello hacemos la siguiente tabla auxiliar:
0.1410.1690.2630.455( 1v )/(mmol−1L min)
0.6671.002.004.001
[S] /103M−1
A continuación representamos estos datos en papel milimetrado:
Como:
o.o. = 0.0800 mmol−1 L minu 1Vmax
= 0.0800 mmol−1 L min
u Vmax = 12.5 mmol/Lmin
Como:
pendiente = 0.095 $ 10−3 mmol−1 L min MuKMVmax
= 0.095 $ 10−3 mmol−1 L min M
u KM = 0.095 $ 10−3 mmol−1 L min M $ 12.5mmol/Lmin
= 1.19 $ 10−3M
� b) Recordando la definición de k2 y sustituyendo, nos quedaría:
k2 = Vmax[E]0 =12.5
mmol/Lmin
$10−3 mol1 mmol
4.00 $ 10−6 mol/L= 3.1 $ 103 min−1
k2 = 3.1 $ 103 min−1 $1min60 s
= 52 s−1
(este número de recambio significaría que 1 molécula de enzima es capaz dehidrolizar 52 moléculas de sustrato por segundo)
Hoja de problemas nº 1 (continuación)