Cas9タンパク質 トランスフェクション

お試しキャンペーン

キャンペーン期間: ～ 2020年 8月31日 (月)

トランスフェクションで ゲノム編集はさらに身近に

Cas9タンパク質とガイドRNAの導入に最適化された、石原産業のトランスフェクション試薬GenomONE®-GE 1セットを

先着10名様に無償提供します。(3か月以内に製品添付の評価シートをご記入いただくことが条件です)

➊ Cas9タンパク質専用トランスフェクション試薬を 無償提供

GenomONE®-GEとセットで使用でき、免疫細胞のノックアウトの実績もあるニッポンジーンの高濃度Cas9タンパク質

Cas9 Nuclease protein NLS (15μg/μL) サンプル包装(75μg)を先着30名様に無償提供します。

➋ 高濃度Cas9タンパク質を 無償提供

GenomONE®-GEとCas9 Nuclease protein NLS (15μg/μLおよび3μg/μL)を通常の30%OFFでご提供いたします。

無償提供で評価が良かった方も無償提供に間に合わなかった方も是非期間中にお買い求めください。

➌ トランスフェクション試薬&Cas9タンパク質が 30%OFF

CRISPR/Cas9によるゲノム編集では、編集効率が高い、オフターゲット効果が低減される、タンパク質発現までタイムラグがないなどの理由でCas9タンパク質を直接導入する研究者が増えています。しかしCas9タンパク質の導入には、エレクトロポレーターやインジェクターなど特別な装置が必要で、これからCas9タンパク質を使用する研究者には高いハードルでした。また従来のトランスフェクション試薬は免疫細胞など導入が難しい細胞の編集効率に課題がありました。

弊社ではトランスフェクションによるCas9タンパク質導入をより身近にするため、免疫細胞も高効率でノックアウト可能なCas9タンパク質専用トランスフェクション試薬と高濃度Cas9タンパク質を数量限定で無償提供。さらに期間中30%OFFで販売します。

製品概要・キャンペーン対象製品はパンフレット中面、キャンペーン応募用紙はパンフレット裏面をご覧ください。

© NIPPON GENE

製品紹介

15µg/µLの高濃度Cas9タンパク質をラインアップ

Cas9 Nuclease protein NLS

免疫細胞にも適用可能なゲノム編集専用トランスフェクション試薬

GenomONE ®-GE

コードNo. メーカーコード 製品名 容量 希望納入価格(円) キャンペーン価格(円)

384-15261 GG001

GenomONE®-GE

1セット 28,000 19,600

380-15263 GG004 4セット 75,000 52,500

388-15264 GG016 16セット 280,000 196,000

コードNo. 製品名 容量 希望納入価格(円) キャンペーン価格(円)

319-08641 Cas9 Nuclease protein NLS (3µg/µL) 75µg 23,000 16,100

316-08651 Cas9 Nuclease protein NLS (15µg/µL) 300µg 75,000 52,500

Cas9 Nuclease protein NLSは、Streptococcus pyogenes 由来のCas9 ヌクレアーゼを、組換え大腸菌で発現・精製したものです。

核移行シグナルを有しており、ガイドRNAと組み合わせることでゲノム編集に利用することができます。

特に高濃度Cas9タンパク質 (15μg/μL)は、使用の際にグリセロールやバッファー類の持ち込みを最小限に抑えることができます。

実施例: エレクトロポレーションによるヒトiPS細胞の遺伝子ノックイン (データ提供：株式会社 特殊免疫研究所)

ヒトiPS細胞201B7株にCas9 Nuclease protein NLS (15µg/µL)と、150ntのssODN(標的遺伝子XXに存在するHindIIIサイトをEcoRIサイトに置換したノックインドナー)を導入し、ノックイン細胞株を作製した。 ゲノム編集により、標的配列にノックアウトまたはノックインなどの遺伝子変異が生じるとHindIIIでは切断されなくなり、また、ssODNによるノックインに成功するとEcoRIによって切断されるバンドが生じる。

装置 ： 4D-Nucleofector (Lonza)

細胞数 ： 0.5 x 106 cell/EP

使用製品 ： Cas9 Nuclease protein NLS (15µg/µL) 100pmol

セレクション ： 限界希釈・ピックアップ

エレクトロポレーション・限界希釈後のシングルクローン細胞株のスクリーニング ▶ (ホモKIサンプル例)

[結果]

本実験では6、16、21レーンにて両アレルノックイン (ホモKI)候補が得られた。

GenomONE®-GE はセンダイウイルスのゲノムを不活化した粒子(HVJ-E)

であり、簡便な操作でCas9タンパク質およびガイドRNAを動物細胞に導入できるトランスフェクション試薬です。

導入が難しい免疫細胞にも導入可能

試薬の混合と遠心による短時間・簡便な操作

エレクトロポレーションのように特別な装置は不要

バイオセーフティーレベル1の実験室で使用可能

メーカー

コード

使用可能回数 (Wells)

6 wells 24 wells 48 wells 96 wells

GG001 16 65 130 325

GG004 65 260 520 1,300

GG016 260 1,040 2,080 5,200

実施例: Mouse primary T cell の遺伝子ノックアウト

T cellはBALB/cマウスから採取したSplenocyteをPMA/ionomycinで1日間刺激後、カラムを用いて分離した。GenomONE®-GE、他社製品C、他社製品Tを用いてCas9タンパク質およびCyclophilin B標的gRNAを導入した。2日後、T7 Endonuclease I アッセイでゲノム編集効率を検証した。

Mouse primary T cellへのCas9タンパク質および ガイドRNAの導入▶

[結果]

GenomONE®-GEは他社トランスフェクション試薬よりも高いゲノム編集効率が得られた。

石原産業 GenomONE®-GEとニッポンジーン Cas9タンパク質を使用したゲノム編集例

免疫細胞のゲノム編集 (ノックアウト)

GenomONE ®-GEはセンダイウイルスのエンベロープ (HVJ-E)を利用したトランスフェクション試薬です。HVJ-EにCas9タンパク質およびガイドRNAを封入し標的細胞と接触させます。膜接触により膜融合が引き起こされ、封入した分子が細胞質へ導入されます。

GenomONE ®-GEを用いることで、従来のトランスフェクション試薬では導入が難しい細胞 (浮遊系免疫細胞)やエレクトロポレーションでは細胞毒性の高いデリケートな細胞 (初代培養細胞)にもCas9タンパク質とガイドRNAを導入できます。

使用した試薬

GenomONE ®-GE [コードNo. 384-15261]

Freeze-dried HVJ-Eに氷冷したBuffer 0.26mLを添加し、泡立たないよう穏やかにピペッティングして均一な懸濁液としてください。懸濁後は活性の低下を防ぐため直ちに氷冷してください。

Cas9 Nuclease protein NLS (15 µg/µL) [コードNo. 316-08651]

Cas9 Nuclease protein NLS (15 µg/µL)は93.75μMのため、PBS(-)で3倍希釈し、31.25μM Cas9溶液を調製してください。

Alt-R ®CRISPR-Cas9 sgRNA [Integrated DNA Technologies, Inc.]

用時調製不要。必要に応じてgRNA溶液をIDTE(1×TE Solution)で希釈。安定性と性能改善のために、化学修飾したsgRNAを使用することで、高いゲノム編集効果が期待できます。

実施例① RAW264.7細胞 (ATCC: TIB-71)

ハウスキーピング遺伝子の１種であるCyclophilin B遺伝子をターゲットとして、Cas9タンパク質とsgRNAをトランスフェクションした。37℃、5%CO2で2日間培養後にノックアウト効果をT7 Endonuclease I アッセイで評価した。

[結果]

GenomONE ®-GEを用いてCas9タンパク質とCyclophilin B 標的sgRNAをRAW264.7細胞に導入したところ、標準的なプロトコルであるProtocol①で76.2 %のゲノム編集が観られた。

[結果]

GenomONE ®-GEを用いてCas9タンパク質とCyclophilin B 標的sgRNAをJurkat細胞に導入したところ、標準的なプロトコルであるProtocol①で70.9 %のゲノム編集が観られた。またReagent Gの使用量を増やしたProtocol③で73.5 %、Cas9タンパク質とsgRNAの使用量を増やしたProtocol④で79.6 ％のゲノム編集効果が観られた。

ハウスキーピング遺伝子の１種であるCyclophilin B遺伝子をターゲットとして、Cas9タンパク質とsgRNAをトランスフェクションした。37℃、5%CO2で2日間培養後にノックアウト効果をT7 Endonuclease I アッセイで評価した。

実施例② Jurkat細胞 (ATCC: TIB-152)

アプリケーションデータ

ガイドRNA (gRNA)の合成キット・合成受託サービスのご紹介

ガイドRNA合成キット

ニッポンジーン CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit (コードNo. 314-08691)

独自開発した改良型 T7 RNA Polymeraseをin vitro 転写反応に用いて、目的のgRNAを正確かつ大量に調製することができます。

ガイドRNA受託合成サービス

TriLink Biotechnologies RNA 受託合成サービス

指定配列のガイドRNA (gRNA)合成が可能です。合成スケール(1μmole~)、修飾塩基、精製方法などをご指定いただけます。

その他変異検出キットやノックイン効率向上の低分子化合物など

弊社ではゲノム編集関連試薬を幅広くラインアップしております。

製品詳細は弊社Webサイトをご参照ください。

ゲノム編集 富士フイルム和光純薬 検索

Cas9タンパク質 トランスフェクション お試しキャンペーン

無償提供申込用紙

● 本文に収載しております試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるもので、「医療品」、「食品」、「生活用品」などとして使用できません。

● 希望納入価格、キャンペーン価格には消費税等が含まれておりません。

● 本キャンペーンは富士フイルム和光純薬㈱の代理店・特約店から購入した場合のみ適用されます。

2063導01J

所属

氏名 販売代理店

E-mail TEL

Step1: ご希望の無償提供製品に✔をつけてください。(両方選択可)

Step2: 注意事項をご確認ください。(以下の事項に同意の上、お申し込みください)

Step4: お客様の情報をご記入ください。

Step5: 本申込用紙をFAX(03-3270-8547)でお送りいただくか、弊社営業もしくは販売代理店にお渡しください。

• 無償提供は1研究室・1グループに1回のみのご提供とさせていただきます。

• 定員に達した場合、申込みされても無償提供できない可能性がございます。(最新の配布状況は弊社Webサイトにてご確認いただけます)

• GenomONE®-GEをお申込みの方は3か月以内に製品添付のアンケートをご記入ください。

GenomONE®-GE 1セット (24ウェルプレート 約65ウェル分)

Cas9 Nuclease protein NLS (15µg/µL) 75μg (GenomONE®-GE 約1セット分)

Step3: アンケートにご回答ください。

各種キャンペーンや新製品をはじめ最新情報満載のメールマガジン配信を希望されますか。 Q3

□ 配信を希望する。 □ 配信を希望しない。 □ 既に登録している。

使用する動物もしくは細胞をお教えください。 Q1

これまでに使用していたCRISPR/Cas9の実験系をお教えください。 Q2

□ プラスミド □ mRNA □ タンパク質 (メーカー: )

(A) Cas9の発現様式

(B) 導入方法

□ インジェクション □ エレクトロポレーション (装置メーカー: )

□ トランスフェクション (メーカー: ) □ その他 ( )