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FITOSANIDAD vol. 14, no. 3, septiembre 2010, pp. 171-176

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o EFECTO IN VITRO DEL FUNGICIDA IPRODIONE SOBRE ALTERNARIA SPP.Y PROSPECCIN PARA SU INCLUSIN EN ESTRATEGIASDE MANEJO EN PAPA, TOMATE, AJO Y CEBOLLA

Berta Lina Muio Garca,1 Julia Almndoz Parrado1 y Esther L. Martn Triane2

1 Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5.a B y 5.a F, Playa, Ciudad de La Habana, C.P. 11600, bertam@inisav.cu2 Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Carretera Maleza Km 2, Santa Clara, Villa Clara, Cuba

RESUMENSe comprob la sensibilidad al iprodione de Alternaria solani (Ell andMart) J. and Gr. en dos aislamientos salvajes obtenidos de hojas depapa y tomate con sntomas de la enfermedad, y dos aislamientos deA. porri (Ell) Nierg de ajo y cebolla. Se utiliz el mtodo del creci-miento radial de la colonia, ajustado al medio de cultivo agar-jugo detomate con la adicin del fungicida a concentraciones desde 0,1hasta 100 mg i.a./L. La DL50 y DL95 para A. solani de papa result de0,61 y 3,64 mg i.a./L, y de tomate 0,61 y 3,68 mg i.a./L, respectivamen-te. Para A. porri de ajo los valores de 0,61 y 3,68, mientras que para elaislado de cebolla de 0,48 y 3,12 mg i.a./L. En ensayo de campo seevalu el comportamiento de la enfermedad respecto a tres estrate-gias de control qumico que incluyeron al iprodione solo, en alternan-cia con mancozeb, control con ditiocarbamatos y un testigo sin trata-mientos, en un diseo completamente aleatorizado. En muestreos delas lesiones aparecidas tras los tratamientos se obtuvieron 258 ais-lamientos y se les determin la sensibilidad al iprodione. El nivel decontrol ms alto se observ en la variante de aplicaciones coniprodione, tambin combinado con mancozeb, las que demostrarondiferencias significativas en relacin con los tratamientos deditiocarbamatos y el testigo, con promedios de 20 y 25% de ndice deataque en relacin con el 55 y 70%, respectivamente, al final del ciclodel cultivo. Todos los aislamientos fueron sensibles al iprodione,aunque se recomienda la combinacin iprodione/mancozeb paraevitar desarrollo de resistencia.

Palabras claves: Alternaria spp., iprodione, control qumico

Recibido: 16/12/2008Aceptado: 26/10/2009

ABSTRACTThe sensibility to iprodione of Alternaria solani (Ell and Mart) J. andGr. on two wild isolates obtained from potato and tomato leaves withthe diseases symptoms, and two of A. porri (Ell) Nierg from onion andgarlic, by radial growth of colony test with tomato juice-agar culturemedium, with the addition of the fungicide in concentrations from 0.1to 100 mg a.i./L. The LD50 and LD95 for A. solani of potato were 0.61 and3.64 mg a.i./L, and from tomatoes were 0.61 and 3.68 mg a.i./L,respectively. The values for A. porri in garlic were 0.61 and 3.68 mga.i./L, and for onion were 0.48 and 3.12 mg a.i./L. The behaviour ofdiseases was evaluated in field conditions, with three chemicalstrategies of control that included iprodione alone, iprodione alternatedwith mancozeb, ditiocarbamates and a control without treatment, in acompletely randomized design. Sensibility to iprodione was testedon 258 isolates took up from lesions appeared after each treatment.Higher control level was observed in variant of iprodione and when itwas combined with mancozeb, which showed significant differencesin relation with ditiocarbamates treatments and with the control, withaverage of 20 and 25% of attack index respect to 55 and 70%,respectively, at the end of cultivation cycle. All isolates were sensibleto iprodione, thought it is recommended iprodione/mancozebcombination in order to avoid resistance development.

Key words: Alternaria spp., iprodione, chemical control

INTRODUCCIN

La resistencia a los fungicidas y su manejo es de unagran importancia a todo lo concerniente con la protec-cin de los cultivos. Sin un manejo efectivo eficiente laresistencia se desarrolla rpidamente.El tizn temprano provocado por Alternaria solani enlos cultivos de papa y tomate y la mancha prpuracausada por A. porri en ajo y cebolla representan un

serio problema para estos cultivos desde el punto devista econmico. Por el corto ciclo de vida de estospatgenos, su capacidad de reproduccin y de disper-sin, se requiere necesariamente para su control de tra-tamientos con fungicidas qumicos eficientes, especial-mente en los perodos del cultivo en los cualesmayormente inciden estas patologas.

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El iprodione, fungicida monositio del grupo de lasdicarboximidas, se ha utilizado extensivamente en elcampo a partir de su introduccin en el mercado en1974 [Lacroix et al., 1974]. Su espectro de accin, aligual que el resto de los representantes del grupo, esamplio, con una actividad esencialmente protectora con-tra representantes de diferentes gneros de hongos ta-les como Botrytis, Sclerotinia, Monilinia, Alternaria,Sclerotium y Phoma [Pommer y Lorenz, 1995].

Las dicarboximidas poseen una resistencia cruzada ge-neral con los hidrocarburos aromticos. Sus efectos msimportantes sobre el metabolismo de las clulasfngicas consisten en que interfieren en la sntesis deDNA que involucra la divisin celular, la sntesis deprotenas y RNA relacionadas con la sntesis de la pa-red celular, as como pueden tambin interferir en elmetabolismo de los esteroles y lpidos [Pommer yLorenz, 1995]. Pertenecen al cdigo E3:MAP/histidinae-kinase en la transduccin de seales osmticas os-1,Daf1, presentan riesgo de resistencia de medio a alto yresistencia cruzada entre todos los miembros del grupo[FRAC, 2010].

Debido a su accin selectiva, en 1979 se comenzaron adetectar casos de resistencia de Botrytis cinerea en condi-ciones de campo en viedos en Francia, Alemaniay Suiza. En Espaa, por el contrario, estos compues-tos se emplean preferentemente en hortalizas, dondeB. cinerea empez a mostrar sntomas de posible resis-tencia en la dcada de los ochenta [Navarro, 1994]. Tam-bin se ha informado resistencia de Fusarium nivales[Chastagner y Vassey, 1982], Sclerotium cepivorum[Littley y Rahe, 1984] y Alternaria alternata [McPhee,1980].

En Cuba el iprodione fue recomendado fundamental-mente para el control de alternariosis [Vela, 1985] conresultados de efectividad satisfactorios, por lo que elobjetivo del presente trabajo consisti en estudiar yestandarizar un mtodo de laboratorio para detectar elposible desarrollo de resistencia en el campo, y realizaruna prospeccin de empleo del iprodione en estrategiasde control de Alternaria spp. en los cultivos de papa,tomate, ajo y cebolla.

MATERIALES Y MTODOS

Se aislaron dos cepas de A. solani de plantas de papa ytomate nunca tratadas con fungicidas y afectadas porla enfermedad. Tambin de ajo y cebolla se obtuvieron

dos aislamientos de A. porri, lo que representa un totalde cuatro cepas salvajes para el estudio, las cuales seconservaron en el laboratorio en medio de cultivo to-mate-agar.

En los ensayos se utiliz el mtodo del crecimiento ra-dial de la colonia [FAO, 1982] ajustado para medio decultivo tomate-agar corregido, con concentraciones de0,5; 1,0; 3,0; 5,0; 10, y 100 mg i.a./L de iprodione, ade-ms de un testigo sin aadir fungicida. El medio deagar preparado se extendi en placas de Petri de 9 cmde dimetro a razn de tres placas por cada concentra-cin y aislamiento.

La siembra de los patgenos se realiz en crculos deinculo de 0,5 cm de dimetro extrados de las coloniascrecidas durante 10 das. La incubacin se realiz a 28Cy la evaluacin a los cinco y siete das de sembradas,mediante la medicin del dimetro de las colonias. A estecontrol se le sustrajo el tamao del inculo inicial paraobtener el crecimiento exacto de la colonia. Se calcul elporciento de mortalidad por la frmula de Abbott [cita-da por Dagnelie, 1984], los valores se transformaron aunidad de Probit [Bliss, 1934] y los datos de concentra-cin a logaritmo de la concentracin. Se ajust una ecua-cin de regresin, y a partir de la lnea de regresin sedetermin la DL50 y DL95. Todo este procedimiento serealiz mediante un programa computarizado.

En condiciones de campo se desarroll un ensayo en loscultivos de papa, tomate, ajo y cebolla, donde se evaluel comportamiento de la enfermedad en dependenciade tres estrategias de control qumico, las cuales inclu-yeron al iprodione en tratamientos exclusivos, alter-nancia de aplicaciones de iprodione con mancozeb y tra-tamientos solo con ditiocarbamatos. Todas lasaplicaciones se efectuaron a intervalos de siete das y sedej una variante como testigo sin tratamientos.

Se utiliz un diseo completamente aleatorizado, enparcelas de 6,0 m de largo por 4,0 m de ancho, replica-das tres veces. La evolucin de la enfermedad se midipor una escala de seis grados. Los tratamientos se ini-ciaron con los primeros sntomas, y la dosis utilizadade iprodione fue de 1,5 kg i.a./ha, y para los ditio-carbamatos a 2 kg i.a./ha.

Semanalmente se seleccionaron muestras de hojas afec-tadas con lesiones nuevas, de las que se realizaron ais-lamientos puros de los patgenos, y se comprob la sen-sibilidad al iprodione mediante el procedimientodescrito anteriormente.

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Se registraron las condiciones climticas de tempera-tura, humedad relativa y lluvias. Las labores agro-tcnicas, de fertilizacin, riego, etc., se realizaron deacuerdo con los instructivos tcnicos.

RESULTADOS Y DISCUSIN

En la Fig. 1 aparecen los porcentajes de mortalidad enlas diferentes concentraciones de iprodione para los ais-lamientos estudiados. Los valores de sensibilidad ob-tenidos son muy similares para los aislamientos de lasdos especies. En la concentracin de 5 mg i.a./L y en las

superiores probadas en el ensayo, la mortalidad delhongo fue total, es decir, que para este caso se demues-tra que el factor hospedante no ejerce influencia en lasensibilidad del patgeno al fungicida.

Los valores de las dosis letales 50 y 95 (Tabla 1) para elaislado de A. solani de papa son de 0,62 y 3,64 mg i.a./L;y para el de tomate de 0,61 y 3,65. Para A. porri deajo, 0,65 y 3,68, y para el aislamiento de cebolla 0,48 y3,12 mg i.a./L, respectivamente. Los valores del coefi-ciente de determinacin resultaron altamente signifi-cativos, lo que indica la efectividad y confiabilidad delmtodo utilizado.

Figura 1. Sensibilidad in vitro de A. porri y A. solani al iprodione.

Tabla 1. Valores de DL50 y DL95 del iprodione sobre A. solani y A. porri

Aislamiento Ecuacin de regresin

R2 DL50 (mg i.a./L)

DL95 (mg i.a./L)

A. solani (papa) Y = 5,091 + 2,187X 0,99 0,61 3,65 A. solani (tomate) Y = 4,675 + 1,604X 0,91 0,62 3,64 A. porri (ajo) Y = 4,820 + 2,078X 0,98 0,65 3,68 A. porri (cebolla) Y = 5,262 + 1,385X 0,84 0,48 3,12

Los resultados para aislamientos salvajes en el presen-te trabajo concuerdan con los informados interna-cionalmente, pues una vez establecidas las lneas bsi-cas de sensibilidad mediante los procedimientosestandarizados [Russell, 2004] pueden utilizarse comoparmetros comparativos para medir la sensibilidad enpoblaciones de campo.

Por otra parte, en condiciones de campo se ha infor-mado al iprodione como efectivo para el caso de A. malien Carolina del Norte; sin embargo, se ha demostra-

do tolerancia en Japn y otros pases donde la enfer-medad tiene un alto riego epidemiolgico, por lo quese recomienda la utilizacin de fungicidas comomancozeb y captan en las estrategias de control[EPPO, 2006]. Zhonghua y Michailides (2004) reali-zaron estudios de caracterizacin de aislados de cam-po resistentes al iprodione con aislados de campo sen-sibles, as como resistentes obtenidos en condicionesde laboratorio en especies de Alternaria, entre estastenuisima y alternata en el cultivo de pistacho, en

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cuanto a mecanismos de accin, virulencia, entre otros,y demostraron que no existen diferencias entre aisla-

dos resistentes de campo, sensibles de campo y los in-ducidos en laboratorio.

Figura 2. A: Sensibilidad de A. solani al iprodione, B: ndice de ataque en las variantes. Papa.

En cuanto a la efectividad en campo (Figs. 2, 3, 4 y 5), laestrategia de tratamientos exclusivos con iprodione man-tuvo los niveles ms altos de proteccin en todos los en-sayos, con ndices de ataque del 20, 20, 20 y 18%, respec-tivamente, al finalizar el ciclo del cultivo, adems deretardar la aparicin de la enfermedad respecto al testi-go en 14 das para papa, tomate y ajo, y siete para cebo-lla. En total se realiz un promedio de ocho tratamien-

tos con el fungicida en todo el ciclo del cultivo. Por otraparte, el iprodione alternado con mancozeb proporciontambin un control adecuado de la enfermedad, aunquecon ndices de ataque ligeramente superiores a la varian-te anterior (20, 25, 29 y 20%). En ambos casos los re-sultados fueron muy superiores a los obtenidos en laestrategia, donde se hicieron tratamientos con ditiocar-bamatos solamente, as como en el testigo.

Figura 3. A: Sensibilidad de A. solani al iprodione, B: ndice de ataque en las variantes. Tomate.

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Figura 4. A: Sensibilidad de A. porri al iprodione, B: ndice de ataque en las variantes. Cebolla.

Figura 5. Sensibilidad de A. porri al iprodione e ndice de ataque en las variantes. Ajo.

Se obtuvo un total de 258 aislamientos, de los cuales 63fueron en el ensayo de papa, 60 en el de tomate, 60 encebolla y 75 en ajo. Todos los aislamientos resultaronsensibles al iprodione, incluidos los aislados al finalizarel ciclo del cultivo; sin embargo, es importante sealarque donde se realizaron tratamientos exclusivos coniprodione, en algunos aislamientos se observ un de-crecimiento de los valores de la mortalidad a concen-traciones intermedias, entre 1 y 10 mg i.a./L; no obs-tante, a partir de 10 mg i.a./L se observ de manerageneral una mortalidad total, salvo unos pocos aisla-mientos procedentes de los tratamientos con iprodione,donde se detect un crecimiento ligero en 10 mg i.a./L.

En las condiciones del experimento, el nmero de apli-caciones realizadas en un solo ciclo de cada cultivo nofue suficiente como para seleccionar aislamientos o po-blaciones resistentes; no obstante, el iprodione se con-sidera un fungicida monositio [FRAC, 1996, 1997,1998], por lo que se recomienda en situaciones de resis-tencia [FRAC, 1998], su empleo en combinacin confungicidas convencionales como el thiram, en dependen-cia del nivel de severidad para el caso de Botrytis.

Segn Brent (1995), las razas resistentes de diferentesespecies de patgenos como Botrytis, Sclerotinia yMonilinia aparecieron en el campo despus de tres aosde uso intensivo del producto. Los aislamientos de cam-

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po mostraron diferentes grados de resistencia y patoge-nicidad, y otros factores de adaptabilidad declinaroncon el incremento de la resistencia.

Por lo ya expuesto se deriva la importancia de la rea-lizacin del monitoreo de la sensibilidad de las po-blaciones con el objetivo de prevenir problemas decontrol del fungicida debido al desarrollo de resis-tencia, y por tanto desbalance poblacional del pat-geno en el agroecosistema. Por otra parte, permitela proyeccin correcta y toma de decisiones en cuan-to al uso racional de los fungicidas, lo que implicauna reduccin importante del impacto al medio-ambiente.

CONCLUSIONES

Los valores de Dl50 y DL95 del iprodione sobre A. solani(papa) fueron 0,61 y 3,65 mg i.a./L; para A. solani(tomate) fueron 0,62 y 3,64; para A. porri (ajo) 0,65 y3,68 y para A. porri (cebolla) 0,48 y 3,12 mg i.a./L,respectivamente.

El mtodo de laboratorio utilizado se consideraefectivo y confiable para determinar la sensibili-dad de Alternaria spp. al iprodione en poblacionesde campo.

El iprodione en tratamientos exclusivos a dosis de1,5 kg i.a./ha mantuvo los niveles de control ms ele-vados con ndices de ataque del 20, 20, 20 y 18% alfinalizar el ciclo del cultivo, para papa, tomate, ce-bolla y ajo, respectivamente.

El iprodione, en alternancia con mancozeb, ofreciniveles de control satisfactorios con ndices de ata-que del 20, 25, 29 y 20% al finalizar el ciclo del culti-vo para papa, tomate, cebolla y ajo, respectivamen-te, la que se considera la ms promisoria para evitarel desarrollo de resistencia.

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