全自動輸血検査装置ECHOにて抗Fyb抗体が検出されなかった一例

山陰労災病院 中央検査部 湯田範規

当院では2013年5月に株式会社ｲﾑｺｱの全自動輸血検査装置ECHOを導入し、抗体ｽｸﾘｰﾆﾝｸﾞ検査の自動化を行っている。

今回、赤血球膜固相法(Capture R Ready Screen：CRRS法)とPEG-IAT法にて乖離した症例を経験し、若干の知見を得たので報告する。

はじめに

CRRS法の測定原理

反応強度 判定

0～4 0

5～9 ？（判定保留）

10～39 1+

40～59 2+

60～93 3+

94～100 4+

機器マニュアルより

イニシャル：HM 年齢：71歳 性別：女性

経過：

2011年6月輸血目的のため抗体スクリーニングが実施されPEG-IAT法にて抗E、抗Fyb抗体が検出される。当該抗原を除いたIr-RCC-LR10単位の輸血が施行された。

2014年6月整形外科手術目的のため抗体スクリーニングが依頼され、CRRS法で陽性となる。PEG-IAT法で同定を行った結果、抗E、抗Fyb抗体が検出されるが、CRRS法とPEG-IAT法の結果に乖離が認められた。

症例

スクリーニング

Hh-Hr Ｋｅｌｌ Ｄｕｆｆｙ

Ｋｉｄｄ Ｌｅｗｉｓ

Ｐ ＭＮ Ｌｕｔｈｅｒａｎ

Ｘｇａ

Ｄｉ CRRS法

Lot.No J054

D C ｃ E ｅ Ｖ Cw

K k Kpa

Kpb

Jsa

Jsb

Fya

Fyb

Jka

Jkb

Lea

Leb

P1 M N S s Lua

Lub

Xga

Dia

Dib

反応 反応強度

1 + + 0 0 + 0 0 0 + 0 + 0 + + + + 0 0 + + + 0 + + 0 + + + + 0 2 2 + 0 + + 0 0 0 0 + 0 + 0 + + + 0 + + 0 + + 0 + + 0 + + 0 + 4+ 100 3 + + 0 0 + 0 0 + 0 0 + 0 + 0 + + 0 0 + + + + 0 + 0 + + 0 + 0 2

陽性コントロール

4+ 95

LISS Lot411 指示血球

Lot185

検査結果

ｽｸﾘｰﾆﾝｸﾞ1 2 3 PC NC

Hh-Hr Ｋｅｌｌ Ｄｕｆｆｙ

Ｋｉｄｄ

Ｘｇａ

Ｌｅｗｉｓ

ＭＮ Ｐ Ｌｕｔｈｅｒａｎ

Ｄｉ 生食法

（RT)

PEGクームス法

ｸｰﾑｽｺﾝﾄﾛ-ﾙ Lot.NoR

A980 D C E ｃ ｅ ｆ

Cw

V Ｋ ｋ Kpa

Kpb

Jsa

Jsb

Fya

Fyb

Jka

Jkb

Xga

Lea

Leb

M N S s P1

Lua

Lub

Dia

Dib

1 + + 0 0 + 0 + 0 0 + 0 + / + + 0 + 0 + 0 + 0 + + + 0 0 + 0 + 0 0 3+

2 + + 0 0 + 0 0 0 + + 0 + 0 + + + + + + + 0 0 + 0 + + 0 + 0 + 0 2+ NT

3 + 0 + + 0 0 0 0 0 + 0 + 0 + 0 + + + + 0 + + + + + 0 0 + 0 + 0 4+ NT

4 + 0 0 + + + 0 0 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 0 0 0 0 + + + + 0 + 0 + 0 3+ NT

5 0 + 0 + + + 0 0 0 + 0 + 0 + 0 + + + + 0 0 0 + 0 + + 0 + 0 + 0 3+ NT

6 0 0 + + + + 0 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + 0 + 0 + + + + + 0 + 0 + 0 3+ NT

7 0 0 0 + + + 0 0 + + 0 + / + 0 + + + + 0 + + 0 + + + 0 + 0 + 0 3+ NT

8 0 0 0 + + + 0 0 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 0 + 0 0 + + 0 + 0 + 0 + 0 0 3+

9 0 0 0 + + + 0 0 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 + 0 0 3+

10 0 0 0 + + + 0 0 0 + 0 + / + + 0 0 + + + 0 + + + + 0 0 + 0 + 0 0 3+

11 + + 0 0 + 0 0 0 + + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 0 + + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 3+ NT

12 + + 0 + + + 0 0 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + + 0 0 3+

自己対照

0 0 3+

同定結果

この結果より、抗E抗体と抗Fyb抗体が強く疑われた。 また、抗K抗体は否定できない。

患者血液型 A型 CCDee Le(a-b+) Jk(a+b-) Fy(a+b-) Di(a-) DAT IgG(-)，C3bd(-)

希釈倍数 スクリーニング ×2 ×4 ×8 ×16 ×32 ×64 ×128 ×256 Lot.NoJ054 反応強度

1（E-, Fy ａ＋ｂ＋） 2 2 0 2 2 0 0 0 2（E+, Fy ａ＋ｂ＋） 100 100 100 100 100 95 80 80 3（E-, Fy ａ- ｂ＋） 2 8 1 1 0 0 0 0 陽性ｺﾝﾄﾛｰﾙ 100 100 100 100 100 100 100 100

LISS Lot411 指示血球 Lot196

陰性と判定された46件の反応強度 0 137 /138 1 1 /138 2 0 /138

検体希釈による反応強度の変化

検体をPBS（PH7.0)で倍々希釈し、CRRS法で測定

希釈倍数 ×2 ×4 ×8 ×16 ×32 ×64 ×128 ×256

ＣＲＲＳ法

反応 1+ 2+ 2+ 1+ ＮＴ 0 0 0

反応強度

16 40 45 14 ＮＴ 0 0 0

陽性ｺﾝﾄﾛｰﾙ

4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+

ＰＥＧ法 3+ 3+ 3+ 3+ 2+ 2+ 1+ 0

ﾎﾓ血球とのｸﾛｽﾏｯﾁ E(-)Fy(a-ｂ+）の血球と PBSで倍々希釈した検体を用いて交差適合試験を行った。

LISS Lot411 指示血球 Lot196 DATｺﾝﾄﾛｰﾙ Lot143

ｾﾚｸﾄｽﾄﾘｯﾌﾟ Lot272

別Lotでの比較 CRRS法マスターリスト

スクリーニング

Hh-Hr Ｋｅｌｌ Ｄｕｆｆｙ

Ｋｉｄｄ Ｌｅｗｉｓ

Ｐ ＭＮ Ｌｕｔｈｅｒａｎ

Ｘｇａ

Ｄｉ CRRS法

D C ｃ E ｅ Ｖ Cw

K k Kpa

Kpb

Jsa

Jsb

Fya

Fyb

Jka

Jkb

Lea

Leb

P1 M N S s Lua

Lub

Xga

Dia

Dib

反応 反応強度

1 + + 0 0 + 0 0 0 + 0 + 0 + + + + 0 0 + + + 0 + + 0 + + + + 0 2 2 + 0 + + 0 0 0 0 + 0 + 0 + + + 0 + + 0 + + 0 + + 0 + + 0 + 4+ 100 3 + + 0 0 + 0 0 + 0 0 + 0 + 0 + + 0 0 + + + + 0 + 0 + + 0 + 0 2

陽性コントロール

4+ 95

LISS:Lot411

指示血球:Lot185

ｽﾄﾘｯﾌﾟ：LotJ054

1 + + 0 0 + 0 0 + + 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 0 + + + + + + 0 0 + 4+ 100 2 + 0 + + 0 0 0 0 + 0 + 0 + 0 + + + + 0 + 0 + + + 0 + + 0 + 4+ 100 3 + 0 + + + 0 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + 0 + + + 0 0 + 0 + + + + 4+ 100

陽性コントロール

4+ 100

LISS:Lot411

指示血球:Lot196

ｽﾄﾘｯﾌﾟ：LotJ055

抗血清による反応 抗Fyb血清を2%アルブミン－PBS溶液で2倍～16倍まで希釈し検体とした。 ＬＩＳＳ LotNo.410 指示血球 LotNo.185 ｽﾄﾘｯﾌﾟ LotNo.J054

表 1. 希釈した抗 Fyb 血清の ECHO によるスクリーニングの結果(J054) J054 Cell 1 Cell 2 Cell 3 表現型 Fy(a+b+) Fy(a+b+)- Fy(a-b+)- 判定 4+ 3+ 3+

画像 2 倍希釈

判定 3+ 2+ 3+

画像 4 倍希釈

判定 2+ 2+ ?

画像 8 倍希釈

判定 ? 0 0

画像 16 倍希釈

㈱ｲﾑｺｱﾏｰｹﾃｨﾝｸﾞ部よりの報告

∗ 患者血漿を希釈しても弱いながら反応強度が減弱せず32倍希釈まで維持した。

∗ ストリップを用いずにパネル血球と患者血漿によるマイクロプレート法による交差適合試験を行ったが、16倍までは凝集が認められた。

∗ ストリップ（LotJ054）と市販のFｙｂ血清との反応は希釈倍数8倍まで認められた。

∗ 患者血漿と別のストリップ（LotJ055）では十分な反応強度が得られた。

結果

∗ Fyb抗体はHTLA（high-titer low-avidity）ではないにもかかわらず、希釈しても反応強度が減弱せず32倍まで維持した。また、ストリップ（LotJ054）と市販のFｙｂ血清との反応は希釈倍数8倍まで認められたことより、ストリップにFyb抗原の一部がわずかに固層されていたものと考えられる。

∗ 患者血漿と別のストリップ（LotJ055）では十分な反応強度が得られた事より、Lot間差によるものと思われ、このような事例をメーカー側に伝えることで改善を要望したい。

∗ 自動化しても結果の確認、時系列によるチェックを怠らず、他の方法での再検査、原因の究明が必要であることが示唆された。

考察