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8/18/2019 TRABAJO DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA N° 1
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UNIVERSIDAD SAN IGNACIO DE LOYOLA
FACULTAD DE INGENIERÍA
PRÁCTICA DE LABORATORIO N° 1
NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE MICROORGANISMOS EN MUESTRAS
NATURALES
BLOQUE
FC-PREIAM05B1M
PROFESORA
GUTIERREZ MORENO, SUSANA MONICA
ALUMNO:
• MARTINEZ PEÑA, Juan Carlos
2016-01
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I. INTRODUCCION
Es muy importante recordar que el trabajo en los laboratorios de microbiología
constituye un riesgo, ya que pueden presentar riesgos de enfermedades
infecciosas para las personas que estén dentro de él. El trabajo en el
laboratorio implica un trabajo de grupo, en donde cada uno de los integrantes
va adquiriendo nuevos conocimientos y desarrollando las distintas técnicas de
trabajo ante las prácticas. Además estas determinan su propia seguridad, así
como la de sus compañeros y la de la colectividad en general.
Es por ello que antes de comenzar con las prácticas en el laboratorio, debemos
conocer cuáles son las normas de seguridad a seguir en el laboratorio y
seguirlas correctamente, de manera que el trabajo se realice con un riesgo
mínimo de eposici!n, tanto para las personas que lo ejecutan como para el
medio ambiente.
El objetivo de este informe, es ofrecerle al estudiante una guía que contribuya
a lograr un ambiente de trabajo adecuado y seguro, durante la ejecuci!n de las
actividades prácticas en el "aboratorio de #icrobiología.
Además en el presente informe se brindara conocimiento de los
microorganismos visibles en preparaci!n en fresco, ya que es muy importante
tener un conocimiento acerca de estos, que nos permita identificarlos en las
muestras observadas. Así finamente poder reconocerlas y ampliar nuestro
conocimiento sobre estos microorganismos. $e trabaj! con las muestras de
agua estancada y yogurt.
.
II. FUNDAMENTO TEORICO
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PRINCIPIOS BÁSICOS DE LA SEGURIDAD BIOLÓGICA.
C!"#$#%!%#&' () *" !+)')" #*&+#%*" */ +/*" () /#)"+*.
El %& ''()*+ clasifica los agentes biol!gicos en cuatro grupos en
funci!n del riesgo de infecci!n
!. Agente biol!gico del grupo - Aquel que resulta poco probable que
cause una enfermedad en el ombre.
. Agente biol!gico del grupo /. Aquél que puede causar una
enfermedad en el ombre y puede suponer un peligro para los
trabajadores, siendo poco probable que se propague a la
colectividad y eistiendo generalmente profilais o tratamiento eficaz.
%. Agente biol!gico del grupo 0. Aquél que puede causar una
enfermedad grave en el ombre y presenta un serio peligro para los
trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad y
eistiendo frente a él generalmente profilais o tratamiento eficaz.
(. Agente biol!gico del grupo (. Aquél que causando una enfermedad
grave en el ombre supone un serio peligro para los trabajadores,
con mucas probabilidades de que se propague a la colectividad y
sin que eista generalmente frente a él profilais o tratamiento
eficaz.
T%'#%!" () !*/!*/#*.
El elemento más importante para contener los riesgos biol!gicos es el
seguimiento estricto de las prácticas y técnicas estándar microbiol!gicas.
E2#* () ")+/#(!( 3!//)/!" /#4!/#!".
$on los dispositivos o aparatos que garantizan la seguridad 1por
ejemplo, las cabinas de seguridad biol!gica2, como las prendas de
protecci!n personal 1guantes, mascarillas, batas, calzado...2.
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D#")6* 7 %*'"/%%#&' () ! #'"!!%#&' 3!//)/!" ")%'(!/#!"
$e incluyen la separaci!n de las zonas donde tiene acceso el
p3blico, la disponibilidad de sistemas de descontaminaci!n 1autoclaves2,
etc.
C!/!%)/8"#%!" () '#9) () %*')'%#&' .
&ebe utilizarse cuando se manipulan agentes biol!gicos del
grupo 0, microorganismos que cursan con patología grave, de
difícil y largo tratamiento, que pueden curar con secuelas y
ocasionalmente producir la muerte.
El mayor y más frecuente peligro que entañan estos es la infecci!n
adquirida a través de aerosoles y por fluidos biol!gicos. 4or ello, las
principales medidas a tomar en este caso son la correcta manipulaci!n y
la utilizaci!n de cabinas de seguridad.
En los "aboratorios de #icrobiología 5línica los ejemplos más
típicos de este tipo de microorganismos son #. 6uberculosis,
7rucella, 5oiella burneti, 8rancisella tularensis, etc. $!lo pueden ser
procesados apropiadas.
NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD BIOLÓGICA ENEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA.
N*/4!" +)')/!)".
"a peligrosidad de un agente está directamente relacionada con el
tipo de manipulaci!n a la que es sometido. 4or ello es básico
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1. 5onocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que
eisten en el laboratorio.
;. 5onocer la metodología de trabajo de cada secci!n del
laboratorio.
. 5onocer el equipamiento del laboratorio.
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6odas las superficies de trabajo se limpiarán y desinfectarán
diariamente y siempre que se produzca un derrame.
"os residuos y muestras peligrosas que van a ser
incinerados fuera del laboratorio deben ser transportados en
contenedores adecuados siguiendo las normas específicas para
cada tipo de residuo.
El laboratorio debe permanecer limpio y ordenado y no es
aconsejable utilizar los pasillos como almacén.
El transporte de las muestras dentro o entre laboratorios se
realizará de tal manera que, en caso de caída, no se produzcan
salpicaduras. "o recomendable es acerlo en cajas erméticas o
neveras transportables. 7ajo ning3n concepto se pueden
transportar las muestras a mano.
"a ropa protectora, fácilmente ajustable y confortable, así como
guantes, gafas, etc. debe estar disponible en todo momento. "a ropa
protectora de las áreas con nivel de contenci!n 0 1cubrebatas2 nunca
debe ser usada fuera del área de trabajo y si se quita debe de ser
desecada automáticamente en una bolsa de material
contaminado. :amás debe volver a ser usada.
6odo el personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto de
la piel con materiales potencialmente infecciosos. 5on este fin deben
usarse guantes cuando se manipulen muestras o cultivos que
contengan posibles pat!genos. "os guantes siempre serán
desecados antes de salir del área de trabajo. :amás se saldrá
de la misma con los guantes puestos, ni con ellos se cogerá el
teléfono, se tocarán los volantes, etc.
6ras quitarse los guantes, se realizará un lavado de manos.
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$e usarán gafas protectoras y mascarillas faciales si eiste riesgo de
salpicaduras y)o aerosoles.
$e pondrá etremo cuidado en minimizar el riesgo de auto
inoculaci!n y de generaci!n de aerosoles.
"os derrames y accidentes deben ser informados inmediatamente.
Está rigurosamente proibido pipetear con la boca.
9o deberán usarse lentes de contacto.
• N*/4!" () =#+#)')
El personal con el cabello largo debe llevarlo recogido.
5omer, beber, fumar y aplicarse cosméticos esta formalmente
proibido en el área de trabajo del laboratorio, así como el
almacenamiento de comida o bebida.
El personal debe lavarse las manos frecuentemente durante las
actividades rutinarias, tras acabar la jornada laboral y siempre
antes de abandonar el laboratorio 1almorzar2.
"as eridas y cortes en las manos, si se an producido en el
"aboratorio, serán comunicados al responsable.
"as eridas y cortes deben ser convenientemente vendados y
después es imprescindible ponerse guantes.
El personal debe aplicarse soluci!n idroalco!lica en las manos
después del lavado y con las manos secas, sobre todo cuando
vaya a abandonar el área de trabajo.
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M!')>* () *>)*" '?!')" 7 %*/!')".
El uso de agujas ipodérmicas y jeringas debe ser limitado.
9unca se debe volver a poner la capuca a las agujas y éstas
no deben ser torcidas ni separadas de la jeringa.
"as agujas y jeringas usadas, así como los bisturíes, deben ser
desecados s!lo en contenedores especiales rígidos diseñados para
este prop!sito.
MICROORGANISMO
"os microorganismos se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza.
$us abitas naturales etremadamente diversos. 4rácticamente los
encontramos en todas partes en el agua que bebemos, en el aire que
respiramos, en el suelo, en los alimentos que ingerimos, algunos pueden vivir
en el interior de plantas y animales, sobre nuestra piel, y en general sobre
cualquier material que les proporcione El %eino 4rotista, definido en el sistema
de clasificaci!n de ;aec
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protistas. "a mayoría mide entre >,>- y >,>? mm. Aunque la mayoría viven en
lugares 3medos algunos son parásitos que viven en organismos
multicelulares. $e dividen en varias categorías, las cuales incluyen
-. 4ylum $arcomastigopora, que incluye a las amibas, opalinidos y
flagelados.
/. 4ylum Esporozoa, estos organismos son parásitos que carecen de
estructuras locomotrices.
0. 4ylum 5iliopora, son los organismos que presentan cilios.
E@AMEN EN FRESCO 3PREPARACIONES SIN TEIR
5onsiste en observar los microorganismos vivos que puede aber en el
producto eaminado, sin fijaci!n ni tinci!n, en suspensi!n acuosa, pudiendo
objetivar su cantidad, sus características morfol!gicas y su movilidad. Es una
técnica de fácil realizaci!n, en la que el producto a eaminar se sit3a entre
porta y cubre. $i el material procede de una toma en medio s!lido o de una
toma directa, se emulsionará en una gota de agua destilada o soluci!n salina.
$i el material es líquido se depositará directamente entre porta y cubre. El
volumen de la gota debe ser adecuado a las dimensiones del cubreobjetos ya
que, en caso contrario, un eceso de líquido se traducirá en un desbordamiento
de éste bajo los límites del cubre, o un cubre @flotante@ que dificultará nuestra
observaci!n por la formaci!n de corrientes líquidas. $i el producto va a
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permanecer muco tiempo en el portaobjetos, es conveniente prevenir la
desecaci!n mediante la aplicaci!n de parafina en los bordes inferiores del
cubreobjetos.
"a observaci!n se realiza, en general, con objetivo de (> en microscopio de
campo claro. "a microscopía de contraste de fases y de campo oscuro facilita
muco la visi!n en fresco. "os eámenes en fresco permiten, además,
observar la presencia de otros elementos formes, como leucocitos, cristales,
etc., que pueden ser de gran ayuda en la valoraci!n de las muestras
III. OBETIVOS MATERIALES
• 5onocer las normas de trabajo en el laboratorio de microbiología, el
acondicionamiento y manipulaci!n de materiales y el uso de los equipos
básicos.
• Eaminar comparativamente la morfología y movimiento de los
microorganismos presentes en algunas muestras naturales, así como
interiorizar el tamaño de las bacterias.
• uardapolvo blanco y limpio 1a cargo del alumno2.
• "áminas porta y cubre objetos.
• Asa y aguja de BClle.
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• 6ubos de prueba.
• 4lacas 4etri.
• #eceros 7unsen.
• Autoclave.
• Espectrofot!metro.
• Agitadores magnéticos.
• 7alanza analítica.
• #uestras de agua estancada.
• #uestras de lece fermentada 1de /(D(= oras2.
• oteros.
• Agua destilada.
• $oluci!n fisiol!gica 19a5l >.*2.
IV. PROCEDIMIENTO
1. $e procedi! a vaciar las muestras en los tubos de ensayo, para su
posterior análisis microsc!pico.
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;. "uego se prendi! el
mecero 7unsen para
esterilizar la asa en argolla.
. $e añadi! unas gotas de soluci!n fisiol!gica en el portaobjeto bien limpio.
"uego, con la asa en argolla
esterilizada se tom! unpoco de la muestras y se
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emulsion! perfectamente en la gota del portaobjeto y finalmente se
cubri! suavemente con el cubreobjeto sin formar burbujas.
y (>.
RESULTADOS
O")/9!%#*')":
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&escripci!n de las bacterias
"as bacterias son microorganismos u bacterias unicelulares
procari!ticos, los cuales normalmente, poseen una rígida pared celular que les
permite protegerse del eterior. Algunas segregan, eteriormente, una envuelta
denominada cápsula bacteriana.
$on de vida aut!trofa o bien eter!trofa. $e multiplican por divisi!n. $on de
muy pequeño tamaño, el cual oscila entre - y ->> u. y esto ace que solo sea
posible observarlas y estudiarlas con un microscopio electr!nico.
Fbservamos diferentes tipos de microorganismos como
D7A5G"F$ son pequeños bastones de forma alargada.
DHG7%GF$ curvados y aparentemente se asemejan a las comas.
DE$4G%G"F$ cuya forma es elicoidal.
D&G4"F5F5F$ asociados por parejas.
VI.CUESTIONARIO
-. C )" ! (#$)/)'%#! )'/) ! !")/#?!%#&' 7 !
#'(!#?!%#&'I
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PASTEURIZACIÓN TINDALIZACIÓN
• 4roceso de esterilizaci!n con
menor tiempo de duraci!n.
• Elimina microorganismos
pat!genos o no pat!genos, pero
no en su totalidad.
• 9o afecta sus propiedades
organolépticas como su física y
química.
• $u eficacia es menor, ya que no
elimina todos los
microorganismos, y por ende su
corto tiempo de vida 3til.
• 9o es muy usado en la Gndustria
comercial debido al corto tiempo
de vida 3til y proliferaci!n de
bacterias.
• 4roceso de esterilizaci!n con
mayor tiempo de duraci!n y divida
en tres etapas, una etapa diaria.
• Elimina microorganismos
pat!genos y no pat!genos en su
totalidad.
• Afecta sus propiedades
organolépticas y demás sustancias
propias de la materia prima.
• $u eficacia es mayor, ya que
elimina los microorganismos en su
totalidad y posee un largo tiempo
de vida 3til.
• Jsado mayormente en la Gndustria
comercial por tener mayor tiempo
de vida 3til y su aplicabilidad en
distintos productos para su
conservaci!n, y posterior venta sin
fronteras.
MTODOS UÍMICOSEstos métodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos.
C*' &H#(* () )#)'*:
Es un agente alquilante que se une a compuestos con idr!genos lábilescomo los que tienen grupos carboilos, amino, sulfidrilos, idroilos, etc.Es utilizado en la esterilizaci!n gaseosa, generalmente en la industriafarmacéutica. &estruye todos los microorganismos incluso virus. $irve paraesterilizar material termo sensibles como el descartable 1goma, plástico,papel, etc.2, equipos electr!nicos, bombas cardiorrespiratorias, metal, etc.Es muy peligroso por ser altamente inflamable y eplosivo, y ademáscancerígeno.
F*/4!()=8(*:
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http://www.monografias.com/trabajos11/grupo/grupo.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos11/grupo/grupo.shtml
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$e utilizan las pastillas de para formaldeido, las cuales pueden disponerseen el fondo de una caja envueltas en gasa o algod!n, que después puedenser epuestos al calor para una rápida esterilizaci!n 1acci!n del gasformaldeído2. 6ambién pueden ser usadas en Estufas de 8ormol, que son
cajas de doble fondo, en donde se colocan las pastillas y se calienta astalos '>K 5 y pueden esterilizar materiales de láte, goma, plásticos, etc."as pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 0' s.Esterilizaci!n por gasDplasma de 4er!ido de ;idr!genoEs proceso de esterilizaci!n a baja temperatura la cual consta en latransmisi!n de per!ido de idr!geno en fase plasma 1estado entre líquidoy gas2, que ejerce la acci!n biosida.
P*")) %*4* 9)'!>!":
• 9o deja ning3n residuo t!ico.
• $e convierte en agua y oígeno al final del proceso.
• El material no precisa aireaci!n.
• El ciclo de esterilizaci!n dura entre ?( y +? minutos.
D)"9)'!>!":
• 9o se pueden esterilizar objetos que contengan celulosa, algod!n,
líquidos, umedad, madera o instrumental con l3menes largos yestrecos.
• Es el método de esterilizaci!n más caro de entre los descritos.
MTODO FÍSICO
C!*/: "a utilizaci!n de este método y su eficacia depende de dos factoresel tiempo de eposici!n y la temperatura.6odos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la acci!ndel calor. El calor provoca desnaturalizaci!n de proteínas, fusi!n ydesorganizaci!n de las membranas y)o proceso oidantes irreversibles enlos microorganismos.
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C!*/ J4)(*: El calor 3medo produce desnaturalizaci!n y coagulaci!nde proteínas. Estos efectos se debe principalmente a dos razonesLEl agua es una especie química muy reactiva y mucas estructurasbiol!gicas son producidas por reacciones que eliminan agua.LEl vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor muco
más elevado que el aire.
;. 4*(* () )")/##?!%#&' )" ) 4" !/*#!(* 7 */ 2
!/! *" 7 $/!"%*" 9!%8*" 7 !/! #)!"K
El método de esterilizaci!n más apropiado es el METODO FISICO.
Gncineraci!n por llama Este método se usa para esterilizar la boca de los
frascos y tubos, ansas, tijeras, pinzas, etc. "as pinzas y tijeras debensumergirse previamente en alcool *' sosteniéndolas acia abajo paraevitar que el alcool impregne los dedos y se incendie al flamear.Este tipo de rutina se utiliza cuando se trabaja cerca del mecero enmicrobiología, evitando cualquier contaminaci!n accidental.
0. #*" () 4#%/**/+!'#"4*" )()' )'%*'/!/") )' )
!+! )"!'%!(!K
PARAMECIO
"os paramecios 1género 4aramecium2 son protozoos ciliados con forma
ovalada, abituales en aguas dulces estancadas con abundante materia
orgánica, como carcos y estanques. $on probablemente los seres
unicelulares mejor conocidos y los protozoos ciliados más estudiados por la
5iencia. El tamaño ordinario de todas las especies de paramecios es de
apenas >.? milímetros.
$e trata de un protozoo muy com3n que se encuentra en estanques de agua
dulce, acequias, arroyos, ríos, lagos y embalses. En general su presencia es
abundante en aguas estancadas que contienen materia orgánica en
descomposici!n y que, por tanto, son ricas en sustancias nutritivas.
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AMEBA
Ameba 1o Amiba2 es un protista unicelular del género Amoeba. Es un protozoo
caracterizado por su forma cambiante, puesto que carece de pared celular, y
por su movimiento ameboide a base de pseud!podos, que también usa para
capturar alimentos a través del proceso llamado fagocitosis. "as especies de
este género viven libres en agua o tierra, mientras que las de otros géneros
relacionados parasitan el intestino del ombre o de los animales.
"a ameba se encuentra típicamente en vegetaci!n en descomposici!n. $in
embargo, debido a la facilidad con la que se obtienen, pueden guardarse en
laboratorios, ya que son objeto com3n de estudio.
NEMATODOS
5asi todos los nematodos son gusanos de cuerpo muy pequeño afilado yalargado, pero a pesar de su aparente delicadeza son muy resistentes pues,
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aunque no lo parezca, están vestidos con una coraza fleible, transparente y
casi siempre lisa.
"os nematodos de vida libre se encuentran tanto en agua dulce como salada y
pueden vivir prácticamente a cualquier profundidad, también son frecuentes en
los musgos o entre sustancias en descomposici!n. 5uando las condiciones se
vuelven desfavorables, fundamentalmente en tiempo de sequía, los nematodos
se pueden enquistar y sobrevivir durante largas temporadas asta que lleguen
mejores tiempos.
EUGLENA
"os euglénidos 1Euglenoidea o Euglenopyta2 son uno de los más conocidos
grupos de flagelados, com3nmente presentes en agua dulce, en especial
cuando ésta es rica en materia orgánica. $!lo unos pocos miembros abitan
aguas marinas o son endosimbiontes. #ucos euglénidos poseen cloroplastos
y producen energía mediante fotosíntesis, mientras que otros se alimentan por
fagocitosis o por pinocitosis. $e los ubica dentro de la fila Euglenozoa, y suestructura celular es típica de dico grupo.
AEOLOSOMA
$on pocas las especies de Aeolosoma y pueden vivir tanto en aguas
estancadas de carcos, lagunas... e incluso acuarios, como en las aguascorrientes de ríos y arroyos. "a coloraci!n de sus lunares, así como el n3mero
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de quetas que presenta cada penaco, constituyen dos de los caracteres que
mejor permiten diferenciar a las distintas especies, así, mientras Aeolosoma
empreci presenta estos lunares Dque corresponden a gotas de aceite de
color anaranjado o rojizo, en otra especie muy com3n, Aelosoma variegatum
suelen ser amarillas o azuladas.
(. %'#%!" ") /)!#?!' !/! ) %*'/* () %!#(!( () '!
!*%!9)K
AUTOCLAVE:
PROCEDIMIENTO POR CORRIDA:
1. Eamine récord de 6emperatura y 4resi!n ;. Jtilice Gndicadores de Esterilizaci!n. %écord de uso, feca, temperaturas, presi!n
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• El vapor será saturado y libre de impurezas utilizando agua tratada.
"a pureza del vapor, saturaci!n y la disponibilidad del vapor son
importantes variables del proceso.
•
&e la calidad del vapor depende que la esterilizaci!n sea efectiva ono.
• Estas impurezas pueden oidar el instrumental
;. TIEMPO DE ESTERILIZACIÓN.
• 6iempo de eposici!n del producto o de la cámara a la temperatura
de esterilizaci!n. Es la duraci!n de la fase de esterilizaci!n.
. TEMPERATURA DE ESTERILIZACION
• 6emperatura a la que se mantiene la cámara durante la fase de
esterilizaci!n.
VII. CONCLUSION:
Esta práctica nos permiti! conocer y aplicar de manera favorable, los procesos
básicos para el estudio de microorganismos en el laboratorio, tales como
preparaciones en fresco, análisis microsc!pico e identificaci!n de
microorganismos, etc. "os cuales son la base para realizar los pasos prácticos
posteriores.
6ambién es necesario destacar que pudimos aprender sobre la seguridad en el
laboratorio y las medidas necesarias para evitar riesgos, los cuales son muy
importantes cuando se trabaja en éste, especialmente con microorganismos
pat!genos, ya que una incorrecta manipulaci!n puede llevar a un contagio del
manipulador o de quienes le rodean.
BIBLIOGRAFÍA:
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Jniversidad Aut!noma de :uárez.G$79 *'=D+=(?D0-D+
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Oen líneaP. %ecuperado el >/ de Abril de />-', dettps))microcosmorflores.Qi