Termogenesis no frio e na obesidade
No frio:
• Qual seria a contribuição da SERCA e da UCP para a termogenesis?
• Estariam as duas proteínas se comunicando durante esse processo?
Na obesidade:
1. Poderia em indivíduos obesos o transplante/diferenciação de fibroblastos em BAT reverter este quadro clínico?
Objetivos 11ª Parte:
• In vivo, analisar a resistência ao frio de ratos tratados com RNA de interferência para SERCA 1 ou UCP 1.
• Medir o coeficiente respiratório (R) durante o período do tratamento, afim de saber se houve uma mudança do metabolismo energético.
• Medir o peso magro e conteúdo de gordura nos animais.
2ª parte:
• In vitro, analisar através de RT-PCR a transcrição de mRNA das isoformas de SERCA e UCP em tecido adiposo marron e músculo branco.
• Avaliar a geração de calor, atividade ATPásica e acoplamento do transporte de Ca2+ em vesículas de retículo sarcoplasmático e células de BAT e músculo branco.
• Em mitocôndrias isoladas e células, medir consumo de oxigênio acoplado e desacoplado.
Metodologia
Submetido ao frio durante 10 dias
Submetido ao frio durante 04 dias
Submetido ao frio durante 06 dias
iRNA(SERCA 1 ou UCP 1)
Controle
iRNA(SERCA 1 ou UCP 1)
Submetido ao frio durante 10 dias com período de aclimatação
Adaptado
Não adaptado
MetodologiaIn vivo:
• Medir a perda de temperatura, o rato que tiver sua temperatura diminuída abaixo de 34ºC é sacrificado (caracterização de hipotermia)
•Peso corporal total, massa gorda e massa magra.
•Fazer medidas de glicose, ácidos graxos, corpos cetônicos, lactato através da coleta do sangue do animal.
• Medir hormônios no plasma: hormônios tireôidianos, adrenalina e noraadrenalina, Gh, insulina e glucagon.
•Medir o coeficiente respiratório durante os dias de experimentação, afim de captar alguma mudança no metabolismo energético
Metodologia
Músculo esquelético branco
Tecido adiposo marrom
Preparar vesículas ou células de RS dos 3 grupos
Realizar as medidas de atividade ATPásica, produção de calor e H cal.
Metodologia
Músculo esquelético branco
Tecido adiposo marrom
Preparar homogenadodos 3 grupos
Através de RT-PCR analisar o mRNA das isoformas de SERCA 1, 2B e 3; e UCP 1, 2 e 3.
Metodologia
Músculo esquelético branco
Tecido adiposo marrom
Preparar mitocôndrias intactas ou células dos 3 grupos
Analisar o consumo de oxigênio e o acoplamento da cadeia respiratória
Perspectivas 1
Através destes experimentos visamos esclarecer algum pontos, tais como:
1. Qual é o grau de comunicação entre a SERCA 1 e a UCP 1 durante a produção de calor.
2. Através do coeficiente respiratório e os experimentos in vitru, tentar identificar qual tecido participa mais do processo de produção de calor, o músculo branco ou o tecido adiposo marrom.
3. Identificar possíveis isoformas de SERCA e UCP que através do processo adaptativo ao frio possam participar do processo de termogênesis.
Pergunta:
BAT poderia combater a obesidade?
Objetivo:
Transplantar fibroblastos que over expressa PRDM16-C/EBPβ em animais obesos.
Metodologia
• Induzir animais a uma dieta com alta caloria (high fat) por
• Observar as variações no peso corporal, massa magra, IMC, e % de
• gordura antes da dieta, após a dieta e após o tranplante
• Medir o conteúdo de mRNA para UCP1, Ap2, adiponectina e PPAR e a atividade do BAT nos animais WT e que foram induzidos a obesidade.
• Consumo de O2 do animal e capacidade para realizar exercício físico.
Perpectivas
• Obter uma nova estratégia para tratar obesidade e também diabetes tipo II.