Macapá,v.7,n.1,p.86-89,2017Disponívelemhttp://periodicos.unifap.br/index.php/biota
Submetidoem14deNovembrode2016/Aceitoem01deMarçode2017
ARTIGO
BiotaAmazôniaISSN2179-5746
OobjetivofoiavaliaropotencialdenoveisoladosdeTrichodermaspp.nobiocontroleinvitrodeRhizoctoniasolani,agenteetiológicodamelaemfeijão-caupi.OpatógenoeoantagonistaforamconfrontadosemplacasdePetri(Ø=90mm)contendoomeiodeculturaBDA.ForammedidosdiariamenteocrescimentomicelialdoantagonistaedopatógenoedeterminadosoÍndicedeVelocidadedeCrescimentoMicelial(IVCM)eoPercentualdeInibiçãodoCrescimentoRadial (PICR)médio e diário da colônia deR. solani,em relação à testemunha.O delineamentoexperimentalfoiinteiramenteaoacaso,comdeztratamentos,incluindoatestemunha,emcincorepetições.Osdadosforamsubmetidosàanálisedevariânciaaplicando-seotesteF(p-valor≤0,05)eotestedeScott-Knott(p-valor≤0,05),utilizando-seoprogramaSISVAR,versão5.6.Os resultadosmostraramque33%dos isoladosdeTrichodermaspp.(T41,T51eT63)apresentarammaiorpotencialdecontroleinvitrodeR.solani,reduzindoem40%o IVCMda colôniadopatógeno.O isoladoT41obtevemaiorPICRmédioeos isoladosT41,T51eT63provocaramomaiorPICRnoprimeirodiadeavaliação.OisoladoT41provocouomenorIVCReomaiorPICRmédioediário,apresentando-sedestaforma,comagentedebiocontrolepotencialdeR.solani.
Palavras-chave:Mela,antagonismo,Trichodermaspp.,Vignaunguiculata.
ThepotentialofnineisolatesofTrichodermaspp.wasevaluatedfortheinvitrobiocontrolofRhizoctoniasolani,theetiologicalagentofthethreadblightincowpea.ThepathogenandtheantagonistswerechallengedinPetridishes(Ø=90mm)containingthePDAculturemedium.ThemycelialgrowthofbothantagonistandpathogenwasmeasureddailyandtheMycelialGrowthRateIndex(MGRI)andtheMeanRadialGrowthInhibitionPercentage(MRGI)ofR.solanicolonywasdeterminedincomparisontothecontroltreatment.Theexperimentaldesignwascompletelyrandomized,with ten treatments, including the control, in five replicates. Datawere submitted to analysis ofvarianceusingtheF-test(p-value≤0.05)andtheScott-Knotttest(p-value≤0.05),usingtheSISVARprogram,version5.6.Theresultsshowedthat33%oftheisolatesofTrichodermaspp.(T41,T51andT63)showedgreaterpotentialforinvitrocontrolofR.solani,reducingtheMGRIofthepathogencolonyby40%.TheisolateT41obtainedahigheraverageofPICRandT41,T51andT63causedthehighestMRGIonthefirstdayofevaluation.TheisolateT41causedthelowestMGRIandthehighestmeanofdailyMGRI,thusconsideredasapotentialbiocontrolagentofR.solani.
Keywords:Webblight;Antagonism;Trichodermaspp.;Vignaunguiculate.
BiocontrolPotentialofRhizoctoniasolaniofCowpea
PotencialdeBiocontroledeRhizoctoniasolanidoFeijão-Caupi
1* 2 3 4IêdaAlanaLeitedeSousa ,RuthLindaBenchimol ,CarinaMelodaSilva ,AnaKarolinyAlvesSantos ,CássiaCristina
4 5ChavesPinheiro ,EudesdeArrudaCarvalho
1.AcadêmicadeEngenhariaFlorestal(UniversidadeFederalRuraldaAmazônia,Brasil).2.EngenheiraAgrônoma(FaculdadedeCiênciasAgráriasdoPará).DoutoraemCiênciasBiológicas(UniversidadeFederaldoPará).PesquisadoradaEmpresaBrasileiradePesquisaAgropecuária,Brasil.3.AgrônomaeDoutoraemAgronomia(UniversidadeFederalRuraldaAmazônia,Brasil).4.AcadêmicadeAgronomia(UniversidadeFederalRuraldaAmazônia,Brasil).5.EngenheiroAgrônomoeDoutoremFitopatologia(UniversidadeFederaldeLavras).PesquisadorAdaEmpresaBrasileiradePesquisaAgropecuária,EmbrapaQuarentenaVegetal,Brasil.*Autorparacorrespondência:[email protected]
EstaobraestalicenciadasobumaLicençaCreative Commons Attribution 4.0 Internacional
DOI:http://dx.doi.org/10.18561/2179-5746/biotaamazonia.v7n1p86-89
ABST
RACT
RESUMO
IntroduçãoO feijao-caupi [Vigna unguiculata (L.)Walp] e uma das
culturas agrıcolas mais consumidas nas regioes Norte eNordeste do Brasil e representa uma fonte importante deproteına,energia,fibraseminerais,alemdeconcederempregoerendaparaapopulaçao(NEVESetal.,2011).
NoBrasil,osmaiorescultivosdefeijao-caupiconcentram-senasregioesNorteeNordestedevidoasuaadaptaçaoaosclimas tropical e subtropical do mundo, apresentandopotencial para o desenvolvimento social e economico daspopulaçoesdessasregioes(FREIREFILHOetal.,2005),alemde ser oprincipal produto agrıcola de subsistencia nopaıs(BEZERRA,2010).NaregiaoNorte,ocultivodefeijao-caupitemseexpandidoegarantidoumaareaplantadade30,9milhectares,comprodutividademediade1310kg/hadegraos(CONAB,2016).
Entretanto,aculturadofeijao-caupipodeseratacadaporalgumas doenças, resultando na reduçao da produtividade,comoeocasodamela,tambemconhecidacomoqueimadateiamicelica,cujoagenteetiologicoefungoRhizoctoniasolaniKhun (SARTORATO et al., 2006; NECHET et al., 2009). Ossintomasdamelamanifestam-se,inicialmente,nasfolhaspro-ximasaosolo,commanchasirregulareseposteriornecrose,
podendoocorrer desfolha e a presença de teiamicelica dopatogeno na face abaxial das folhas atacadas, sendo este oprincipalsinaldadoença(NECHET;HALFELD-VIEIRA,2006).
Atualmente,cresceointeressepelobiocontrolededoençasde plantas, por ser uma alternativa ao controle quımico. Ogenero Trichoderma e o mais estudado e utilizado nobiocontrole de diversos patogenos que habitam o solo. Ointeresseporeste fungodeve-seadiversosmecanismosdeaçaonocontroledepatogenos,comoproduçaodeantibioticosvolateisenao-volateis,competiçaoporespaçosenutrientes,atividadeenzimaticahidrolıticaeparasitismo (BRITOetal.,2014).Alemdisso,essesmicro-organismosnaosaotoxicosaohomemeanimais(MERTZetal.,2009).
Segundo Broetto et al. (2014), os compostos volateisproduzidospelasespeciesT.harzianumeT.koningiopsisforamresponsaveis pela inibiçao de 23,1% e 15,4%, respectiva-mente, do crescimento micelial do fungo Macrophominaphaseolina,causadordapodridaodecarvaoemplantasdesoja.Louzada et al. (2009) observaram tres tipos de interaçao(penetraçao, enrolamento e desenvolvimento de hifasparalelas)quecomprovamohiperparasitismodeTrichodermasp. (isolado 50/02) sobre os fungos Fusarium solani eSclerotiniasclerotiorum.
Esse trabalho teve por objetivo avaliar o potencial debiocontrole de R. solani do feijão-caupi por isolados deTrichodermaspp.
MaterialeMétodosOexperimentofoirealizadonoLaboratóriodeFitopatologia
daEmbrapaAmazôniaOriental,emBelém,PA,noperíododemarçoajunhode2016.
ObtençãodosisoladosdeTrichodermaspp.OsisoladosdeTrichodermaspp.utilizadosnoexperimento
foramobtidosdeamostrasdesolocoletadasnaEmpresaSocôcoProdutos Alimentícios S/A e se encontram depositados nacoleçãodemicro-organismosdoLaboratóriodeFitopatologiada EmbrapaAmazôniaOriental. Foram selecionados para ostestesnoveisoladosqueapresentarammelhordesempenhoemtestes preliminares de antagonismo in vitro contra outrosfitopatógenos(SILVA,2016;SOUSAetal.,2015).
ObtençãodoisoladodeRizoctoniasolanidofeijão-caupiOpatógenofoiisoladodefolhascomsintomasdemelaem
plantiodefeijão-caupicultivadoemsistemadeplantiodiretolocalizadonaEmbrapaAmazôniaOriental, emBelém,PA.OmaterialcomsintomasdadoençafoilevadoaoLaboratóriodeFitopatologiadaEmbrapaAmazôniaOrientalparaisolamentoindireto do fungo, segundo Alfenas et al. (2007). As placasforamincubadasemcâmarasdearmazenamentodotipoBOD,à temperatura de 28 ± 2ºC, com fotoperíodo de 12h(claro/escuro),durantesetedias.
AntagonismoinvitrodeTrichodermaspp.contraR.solaniOantagonismodeTrichodermaspp.aR.solanifoiavaliado
pelométododepareamentodecolônias,sendoqueasculturasdopatógenoedosantagonistasforamreativadasemmeiodecultura BDA (Batata-Dextrose-Ágar) sete dias antes dainstalaçãodoexperimento.Osdiscosdeculturadopatógenoedosantagonistas(Ø=5mm)foramcolocadosemladosopostoseequidistantesdeplacasdePetri(5mmdedistânciadaborda)contendo BDA, as quais foram incubadas em BOD, àtemperatura de 28 ± 2ºC, com fotoperíodo de 12 h (claro/escuro).
Aavaliaçãofoiiniciadaapartirde24horasdainstalaçãodoexperimento, medindo-se diariamente o crescimento radial(mm)dascolônias,atéocrescimentocompletodatestemunhana placa. Com os dados obtidos, foi calculado o Índice deVelocidadedeCrescimentoMicelial(IVCM),segundoequaçãoadaptadadeOliveira(1991):
SendoIVCM=ÍndicedeVelocidadedeCrescimentoMicelial,R=Raioatualdacolônia,Ra=RaiodacolônianodiaanterioreN=númerodediasapósoiniciodoexperimento.
Foideterminadaapercentagemdeinibiçãodocrescimentoradialdopatógenonostratamentos,emrelaçãoàtestemunha,deacordocomaequaçãodeEzziyyanietal.(2004):
sendoPICR=%de inibiçãodecrescimentomicelial,R1=RaiodatestemunhaeR2=Raiodotratamento.
AnáliseestatísticaO delineamento experimental foi inteiramente ao acaso,
com dez tratamentos, constituído de nove isolados deantagonistas(T38,T41,T47,T49,T51,T54,T56,T58eT63)eda testemunha, em cinco repetições. Os resultados obtidosapresentaram distribuição normal e foram submetidos àAnálisedeVariância,aplicando-seotesteF(p-valor≤0.05).AsmédiasdeIVCMePICRforamcomparadaspelotestedeScott-Knott(p-valor≤0.05),utilizando-seoprogramaSISVAR,versão5.6(FERREIRA,2011).
ResultadoseDiscussãoConstatou-seque33%dos isoladosdeTrichodermaspp.
apresentarammaiorpotencialdecontroleinvitrodeR.solani.OsisoladosT41,T51eT63reduziramem40%,emmédia,oÍndicedeVelocidadedeCrescimentoMicelial(IVCM)dacolôniadeR.solanie44%dosisoladostestados(T38,T54,T56eT58)reduziram o IVCM em 25%, em média, comparados àtestemunha. O isolado T49 não interferiu no crescimentomicelial do patógeno, não diferindo do crescimento datestemunha(Figura1).
OisoladoqueresultouemmaiorPICRdopatógenofoiT41,com41,64%.ApesardoisoladosT51eT63teremapresentadoumvalorbaixoreferenteaoIVCM,comrelaçãoaoPICRosseusvaloresmédiosdeinibiçãonãodiferiramestatisticamentedosisoladosT58eT56.Contudo,T41apresentoumaiorIVCMePICR,evidenciandooseupotencialparafuturosprogramasdecontrolebiológicodamelaemfeijão-caupi(Tabela1).
0
1
2
3
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5
6IVCM(cm
dia)
Teste T38 T41 T47 T49 T51 T54 T56 T58 T63Tratamentos
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b
a
d
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cc
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87BiotaAmazônia
PotencialdeBiocontroledeRhizoctoniasolanidoFeijão-Caupi
IVCM=ΣR-Ra
N
PICR=(R1-R2)
R1
Figura1. In� dicedeVelocidadedeCrescimentoMicelial (IVCM)deRhizoctoniasolanipareadocomnoveisoladosdeTrichodermaspp.(Letrasdistintasindicamdiferençasigni�icativaparaoTestedeScott-Knott(p≤0,05)./Figure1.RhizoctoniasolaniMycelialGrowthRateIndex(IVCM)whenmatchedwithTrichodermaspp.isolates. (Different letters indicate statistically signi�icant differences (p≤0,05)amongtreatmentsforScott-KnottTest(p≤0,05)).
Tabela 1. Percentual medio de inibiçao do crescimento radial (PICR) deRhizoctoniasolaniporisoladosdeTrichodermaspp.invitro.MediascomletrasiguaisnaodiferemestatisticamentepelotestedeScott-Knott(p≤0,05)./Table1.Inhibitionpercentagemediumcolonyradialgrowth(PICR)of theRhizoctoniasolani for Trichoderma spp. isolates. Different letters indicate statisticallysigni�icantdifferencesamongtreatmentsforScott-KnottTest(p≤0,05)).
)≥Ø°§Ø §• Trichoderma spp. PICR (%)
T41 41,637 a*
T51 34,456 b
T63 33,947 b
T58 31,383 b
T56 29,953 b
T38 23,895 c
T54 22,429 c
T47 15,964 d
T49 15,199 d
EmrelaçãoaoPICRdiário,noprimeirodiadeavaliação,ocrescimentodeR.solanifoimaiornapresençadosisoladosT41, T51 e T63, enquanto que no segundo dia, o maiorpotencialdeinibiçãodopatógenofoiobtidopeloisolado41.Noentanto,doterceiroaoquintodiadeavaliação,omaiorPICR foi constatado nos tratamentos comos isolados T41,T51, T63, T58 e T56 (Figura 2). O isolado T41 foi o queresultounomaiorPICRemtodososdiasdeavaliação.
Resultados similares foram encontrados por Silva et al.(2015) no pareamento entre Sclerotinia sclerotiorum eTrichodermaspp,emqueapresençadopatógenoacelerouocrescimentomicelialdoantagonista,oquepodeserexplicadopelasuahabilidadedesupressão.Mezaetal.(2008)relataramaeficiênciadaespécieTrichodermaharzianumnocontroledeFusarium solani, quando o patógeno apresentou raio decrescimentomicelialmenornapresençadoantagonista.EssaespéciedeTrichodermatambémfoieficientenocontroledeR.solaniisoladodemorangueiro,ondeoantagonistaapresentoucrescimentomicelialmédiode6,8cmeopatógeno,de3,1cm(GUÉDEZetal.,2009).
Alémdomenorcrescimentomicelial,foiencontradoporMezaetal.(2008),também,oPICRdopatógenomaiordoque50% para todos os tratamentos de biocontrole in vitrorealizadoscomT.harzianum,concordandocomoestudofeitopor Reyes et al. (2008) sobre o potencial antagônico deTrichoderma spp. contra Rhizoctonia sp., que observaraminibiçãodocrescimentoradialentre34e83%.
A característica antagônica do gênero Trichoderma spp.pode ser atribuída tantopela competiçãoqueocorre comopatógeno,quantopelaproduçãodeantibióticosinibidoresdecrescimento de outros fungos, como gliotoxina, viridina,trichodermina,suzucacilina,alameticinaedermadina(DENNIS;WEBSTER,1971).Outrapossívelexplicaçãoparasuaatividadeantagônicaéaproduçãodeenzimashidrolíticascomocelulasee hemicelulase, que são responsáveis pela degradação demateriaiscomoligninaeceluloseecausamaquebradaparedecelular de fungos patogênicos (MELO, 1996). No entanto,diferentes isolados de Trichoderma spp. podem apresentardiferentesmecanismosdeação,podendosereficientesounãono biocontrole de fitopatógenos. Louzada et al. (2009)avaliaram 230 isolados monospóricos de Trichoderma spp.ContraS.sclerotiorumeF.solanieconstataramqueapenas10%dos isolados foram eficientes na inibição do crescimentomicelialdopatógeno.Bonettetal.(2013)observaramqueoT.viride resultou em inibição micelial do fungo Colletotrichummusaesuperiora14%doqueoT.harzianum.Ouseja,diferentesisolados de Trichoderma spp. podem apresentar comporta-mentodiferentenobiocontroledefitopatógenos.
ConclusãoOisoladoT41proporcionoumenorÍndicedeVelocidadede
Crescimento Micelial e maior Percentual de Inibição doCrescimentoRadialmédioediáriodeR.solani,apresentando-secompotencialparaobiocontroledoagenteetiológicodameladofeijão-caupi.
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Teste
T41
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T63
T58
T56
T38
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T47
T49
Tratamentos
0
10
20
30
40
50
60
70
PICR(%)
c
aa
a aa
bb
05 .dia
b b
Teste
T41
T51
T63
T58
T56
T38
T54
T47
T49
Tratamentos
0
10
20
30
40
50
60
70
PICR(%)
c
aa a a a
b b
04 .dia
b b
Teste
T41
T51
T63
T58
T56
T38
T54
T47
T49
Tratamentos
0
10
20
30
40
50
60
70
PICR(%)
c
a a aa a
b b
03 .dia
bb
Teste
T41
T51
T63
T58
T56
T38
T54
T47
T49
Tratamentos
0
10
20
30
40
50
60
70PICR(%)
d
a
b b b b b
c
c
c
02 .dia
c
Teste
T41
T51
T63
T58
T56
T38
T54
T47
T49
Tratamentos
0
10
20
30
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PICR(%)
c
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c c
01 .dia
88BiotaAmazônia
IêdaAlanaLeitedeSousa,RuthLindaBenchimol,CarinaMelodaSilva,AnaKarolinyAlvesSantos,CássiaCristinaChavesPinheiro,EudesdeArrudaCarvalho
Figura 2. Percentual de inibiçao do crescimento radial (PICR) diario deRhizoctoniasolanipareadocomnoveisoladosdeTrichodermaspp.(LetrasiguaisnomesmodiadeavaliaçaonaodiferiramestatisticamentepelotestedeScott-Knott(p≤0,05))./Figure2.Inhibitionpercentageofthepathogencolonyradialgrowth (PICR)whenmatchedwithnineTrichoderma spp. Isolates. (Differentlettersindicatestatisticallysigni�icantdifferences(p≤0,05)amongtreatmentsforScott-KnottTest(p≤0,05)).
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89BiotaAmazônia
PotencialdeBiocontroledeRhizoctoniasolanidoFeijão-Caupi
