PENETAPAN KANDUNGAN SENYAWA FENOLIK TOTAL dan UJI
AKTIVITAS ANTIOKSIDAN FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK
ETANOLIK HERBA SELADA AIR (Nasturtium officinale R.Br.) DENGAN
MENGGUNAKAN METODE DPPH
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Diajukan oleh:
Jap Yulius Billy Soegianto
NIM : 098114069
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2013
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iv
Kupersembahkan karya ini untuk Tuhan Yesus, ibuku, dan semua
pihak yang telah membantuku.
terima Kasih semuanya…….
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
v
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vii
PRAKATA
Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas berkat-
Nya sehingga penulis berhasil menyelesaikan karya tulis “Penetapan Kandungan
Senyawa Fenolik Total dan Uji Aktvitas Antioksidan Fraksi Etil Asetat Ekstrak
Etanolik Herba Selada Air (Nastrurtium officinale R.Br.) Dengan Menggunakan
Metode DPPH ”.
Dalam penulisan skripsi ini penulis banyak mendapatkan bantuan dan
semangat dari berbagai pihak, maka pada kesempatan ini penulis menyampaikan
rasa terima kasih kepada:
1. Bapak Ipang Djunarko, M.Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma
2. Bapak Prof.Dr.C.J.Soegihardjo, Apt selaku Dosen Pembimbing yang
selalu mendampingi dan mengarahkan sehingga penulis dapat
menyelesaikan skripsi dengan baik.
3. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si selaku Dosen Penguji yang memberikan
masukkan dan arahan sehingga dapat menyelesaikan skripsi dengan baik.
4. Bapak Jeffry Julianus, M.Si selaku Dosen Penguji yang memberikan
pengarahan dalam penulisan skrpsi.
5. Semua dosen Fakultas Farmasi Sanata Dharma yang telah memberikan
masukkan, ilmu dan dukungannya kepada penulis.
6. Teman-teman yang telah membantu selama penelitian, Filbert Hita
Kumaro, dan Indah Kertawati yang memberikan bantuan sehingga
penyelesian skripsi ini dapat selesai dengan baik.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
viii
7. Laboran Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia, Biokimia–Anatomi
Manusia Universitas Sanata Dharma,yaitu Mas Kayat dan Mas Wagiran
yang telah membantu dalam penyelesian skripsi ini .
8. Semua pihak yang telah membantu dalam penyelesaian skripsi ini yang
tidak dapat disebutkan satu-persatu
Penulis mengetahui bahwa penulisan skripsi ini masih belum sempurna,
oleh karena itu masukkan, saran dan kritikannya sangat diperlukan untuk
memperbaiki penulisan skripsi ini. Terima kasih.
Penulis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ix
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ................................................................................................ i
PERSETUJUAN PEMBIMBING .......................................................................... iii
PENGESAHAN SKRIPSI .................................................................................... iii
PERSEMBAHAN .................................................................................................. iv
PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ..................... v
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................................ vi
PRAKATA ............................................................................................................ vii
DAFTAR ISI .......................................................................................................... ix
DAFTAR TABEL ................................................................................................ xiii
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xivv
DAFTRA LAMPIRAN.......................................................................................xv
INTISARI ............................................................................................................ xvii
ABSTRACT .......................................................................................................... xvii
BAB I. PENGANTAR ............................................................................................. 1
A. Latar Belakang .................................................................................................... 1
1. Permasalahan................................................................................................... 5
2. Keaslian penelitian........................................................................................... 6
3. Manfaat penelitian........................................................................................... 6
B. Tujuan Penelitian ................................................................................................. 7
BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA..................................................................... 8
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
x
A. Selada Air ........................................................................................................... 8
1. Nama lain selada air.......................................................................................8
2. Morfologi tanaman selada air.......................................................................8
3. Kandungan kimia.........................................................................................9
4. Sistematika selada air.................................................................................10
B. Senyawa Fenolik ............................................................................................... 10
1. Pengertian senyawa fenolik............................................................................ 10
2. Senyawa fenolik dan antioksidan.................................................................... 11
3. Senyawa fenolik pada tanaman....................................................................... 11
4. Kandungan Senyawa Fenolik Total Selada Air...............................................12
C. Metode Folin-Ciocalteu ..................................................................................... 13
D. Antioksidan.......................................................................................................14
1. Pengertian antioksidan................................................................................. 14
2. Sumber antioksidan.......................................................................................15
3. Penggolongan antioksidan.............................................................................17
4. Metode uji aktivitas atioksidan.....................................................................18
E. Radikal Bebas...................................................................................................20
1. Pengertian radikal bebas...............................................................................20
2. Kerusakan sel akibat radikal bebas...............................................................20
3. Pembentukan radikal bebas...........................................................................21
4. Radikal bebas dalam tubuh............................................................................22
F. Metode Ekstraksi...............................................................................................23
G. Landasan Teori.................................................................................................25
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xi
H. Hipotesis............................................................................................................26
BAB III. METODE PENELITIAN........................................................................ 27
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ....................................................................... 27
B. Variabel Penelitian ............................................................................................ 27
C. Definisi Operasional .......................................................................................... 28
D. Bahan dan Alat Penelitian ................................................................................. 29
1. Alat................................................................................................................ 29
2. Bahan...............................................................................................................29
E. Tata Cara Penelitian ........................................................................................... 29
1. Determinasi tanaman..................................................................................... 29
2. Pengumpulan bahan....................................................................................... 29
3. Preparasi sampel..............................................................................................30
4. Penetapan kandungan fenolik total..................................................................30
5.Pembuatan larutan DPPH, pembanding dan uji aktivitas
antioksidan......................................................................................................32
6.Penentuan OT dan panjang gelombang maksimum uji aktivitas
antioksidan......................................................................................................33
7.Uji pendahuluan dan estimasi aktivitas antioksidan pada larutan uji dan
pembanding.....................................................................................................33
F. Analisis Hasil.....................................................................................................34
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN .............................................................. 36
A. Determinasi Tanaman ...................................................................................... 36
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xii
B. Pengumpulan Bahan ......................................................................................... 36
C. Hasil Preparasi Sampel ..................................................................................... 37
1. Pengeringan..................................................................................................37
2. Ekstraksi.......................................................................................................38
3. Fraksinasi.....................................................................................................41
D. Hasil Uji Pendahuluan ..................................................................................... 43
1. Uji pendahuluan kandungan senyawa fenolik total....................................43
2. Uji pendahuluan aktivitas antioksidan.........................................................45
E. Hasil Optimasi Penetapan Knadungan Fenolik Total.......................................46
1. Penetapan Operating Time (OT)...................................................................46
2. Pengukuran panjang gelombang maksimum................................................47
F. Hasil Penetapan Kandungan Fenolik Total.......................................................48
G. Hasil Optimasi Penentuan Aktivitas Antioksidan.............................................52
1. Penentuan Operating Time (OT)...................................................................52
2. Penentuan panjang gelombang maksimum...................................................54
H. Hasil Penentuan Aktivitas Antioksidan.............................................................55
BAB V KESIMPULAN dan SARAN..................................................................63
A. Kesimpulan ....................................................................................................... 63
B. Saran .................................................................................................................. 63
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................ 64
LAMPIRAN ........................................................................................................... 68
BIOGRAFI PENULIS ......................................................................................... 103
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiii
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel I. Penentuan panjang gelombang maksimum asam galat ......................... 48
Tabel II. Persamaan regresi linier dari baku asam galat......................................50
Tabel III. Kandungan senyawa fenolik total fraksi etil asetat ekstrak etanolik
herba selada air ..................................................................................... 51
Tabel IV. Penentuan panjang gelombang maksimum DPPH .............................. 54
Tabel V. Persamaan regresi linier % IC dengan baku rutin..................................59
Tabel VI. Perhitungan persamaan regresi linier % IC dengan baku fraksi etil
asetat ekstrak etanolik herba selada air...............................................59
Tabel VII. Nilai IC50 rutin dan fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada
air........................................................................................................60
Tabel VIII. Tingkat kekuatan antioksidan............................................................61
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiv
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Mekanisme penghambatan radikal bebas oleh senyawa fenolik..........11
Gambar 2. Struktur rutin ....................................................................................... 13
Gambar 3. Reaksi DPPH dengan senyawa antioksidan........................................19
Gambar 4. Uji pendahuluan kandungan senyawa fenolik total............................. 44
Gambar 5. Uji pendahuluan aktivitas antioksidan.................................................46
Gambar 6. Penentuan Operating Time (OT) asam galat replikasi 2 .................. ...47
Gambar 7. Struktur asam galat . ............................................................................ 50
Gambar 8. Operating Time (OT) rutin replikasi 1 ................................................53
Gambar 9. Operating Time (OT) fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air
replikasi 3 .......................................................................................... 53
Gambar 10. Reaksi antara DPPH dengan antioksidan...........................................55
Gambar 11. Struktur kimia rutin.........................................................................56
Gambar 12. Mekanisme penghambatan DPPH oleh rutin..................................57
Gambar 13. Kurva aktivitas antioksidan rutin replikasi 3......................................58
Gambar 14. Kurva aktivitas antioksidan fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba
selada air replikasi 2 ......................................................................... 59
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xv
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Lampiran Surat Determinasi Tanaman..............................................68
Lampiran 2. Gambar Selada Air............................................................................69
Lampiran 3. Perhitungan Rendemen Uji Aktivitas Antioksidan...........................70
Lampiran 4. Data Penimbangan Uji Aktivitas Antioksidan..................................71
Lampiran 5. Data Konsentrasi Uji Aktivitas Antioksidan.....................................72
Lampiran 6. Penentuan Operating Time (OT) Rutin.............................................74
Lampiran 7. Penentuan Operating Time (OT) Fraksi Etil Asetat..........................76
Lampiran 8. Panjang Gelombang Maksimum DPPH............................................78
Lampiran 9. Scanning Penentuan Aktivitas Antioksidan......................................81
Lampiran 10. Perhitungan Nilai % IC Dari Rutin.................................................84
Lampiran 11. Perhitungan % IC Fraksi Etil Asetat..............................................86
Lampiran 12. Perhitungan Nilai IC50 Rutin..........................................................88
Lampiran 13. Perhitungan Nilai IC50 Fraksi Etil Asetat......................................90
Lampiran 14. Penimbangan Untuk Uji Kandungan Fenolik Total......................92
Lampiran 15. Optimasi Penetapan Kandungan Fenolik Total.............................93
Lampiran 16. Panjang Gelombang Maksimum Asam Galat...............................94
Lampiran 17. Scanning Penentuan Kandungan Fenolik Total............................97
Lampiran 18. Penentuan Kandungan Senyawa Fenolik Total.............................100
Lampiran 19. Uji Statistika Dengan Program R..................................................102
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvi
INTISARI
Polusi udara saat ini sudah menjadi salah satu masalah yang serius yang
diakibatkan oleh pencemaran udara yang berasal dari kegiatan industri.
Pencemaran udara memunculkan radikal bebas yang berakibat buruk bagi
kesehatan manusia. Radikal bebas merupakan senyawa yang bersifat sangat
reaktif dan memiliki pasangan elektron bebas, oleh karena itu diperlukan
antioksidan yang bertujuan untuk menangkal aktivitas radikal bebas.Salah satu
tanaman yang berpotensi sebagai antioksidan adalah selada air (Nasturtium
officinale R.Br) yang telah lama dikonsumsi oleh masyarakat. Aktivitas
antioksidan dari herba selada air berasal dari senyawa fenolik yang dapat
menangkal radikal bebas, oleh karena itu dilakukan juga penetapan kandungan
fenolik totalnya. Metode aktvitas antioksidan yang digunakan adalah dengan
metode DPPH dengan prinsipnya adalah terjadi reduksi warna dari ungu menjadi
kuning karena terbentuk senyawa DPPH tereduksi yang berasal dari reaksi radikal
bebas dengan senyawa antioksidan. Aktivitas antioksidan dinyatakan dengan IC50
yaitu kemampuan senyawa yang berpotensi sebagai antioksidan untuk
menurunkan 50% aktivitas dari radikal bebas. Dari hasil penelitian diperoleh
kandungan senyawa fenolik total adalah (6,463 ± 0,066) mg ekivalen asam galat
per gram fraksi etil asetat dan IC50 dari herba selada air adalah ( 434,402 ± 5,945)
µg/ml.
Kata kunci : antioksidan, radikal bebas, Nasturtium officinale R.Br, senyawa
fenolik total, DPPH.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvii
ABSTRACT
It is well known that air polution can be a serious problem to human
health because it will produce a free radical. Free radical is a molecule that has a
free electron chain and is so reactive that we will need antioxidants to reduce
it.Watercress (Nastrutrium officinale R.Br) is one kind of plant that can inhibit
free radical because its polyphenolic contents.We must exact contents of
polyphenolic compunds. DPPH methods are used to determine antioxidant
activity by reducing a colour from purple to yellow. Antioxidant activity is
presented by IC50. IC50 is the ability of antioxidant that can reduce 50% of free
radical activity. According to this research we know that the total phenolic
compounds is (6.463 ± 0.066) mg eqivalent gallic acid each gram fraction and
IC50 is (434.402 ±5.945)µg/ml.
Key words :antioxidant, free radical, Nasturtium officinale R.Br, total phenolic
compunds, DPPH.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1
BAB I
PENGANTAR
A. Latar Belakang
Udara mempunyai arti yang sangat penting di dalam kehidupan makhluk
hidup dan kelangsungan hidup makhluk lainnya,sehingga udara merupakan
sumber daya alam yang harus dilindungi untuk hidup kehidupan manusia dan
makhluk hidup lainnya. Pertumbuhan sektor industri pertahun masih merupakan
sektor yang sangat potensial dalam memacu pertumbuhan ekonomi, namun disisi
lain juga dapat memberikan dampak negatif berupa pencemaran udara baik yang
di dalam ruangan maupun di luar ruangan yang dapat membahayakan manusia
(Anonim, 2002).
Kegiatan industri dapat menimbulkan pencemaran udara antara lain
pabrik pengolahan minyak bumi, pabrik pengolahan logam, pabrik tekstil, pabrik
gula, pabrik pengolahan karet dan pabrik plastik. Pabrik kimia tersebut
menghasilkan semua pencemar ke udara lewat cerobong asap pabrik-pabrik kimia
baik yang berbentuk gas ataupun partikel dan berpengaruh buruk bagi kesehatan (
Sumardjono,2006). Pencemaran udara merupakan masuknya komponen lain ke
dalam lingkungan udara baik oleh kegiatan manusia secara langsung atau tidak
langsung maupun proses alam sehingga kualitas udara turun sampai ke tingkat
tertentu yang dapat menyebabkan lingkungan menjadi kurang baik. Adapun
kriteria pencemaran udara antara lain bila nilai Pb adalah 0,06 ppm dan debu
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2
0,26 ppm (Chandra,2006). Akibatnya adalah muncul radikal bebas di lingkungan
yang tentunya berbahaya bagi kesehatan manusia.
Radikal bebas adalah suatu atom atau molekul yang sangat reaktif
dengan elektron yang tidak memiliki pasangan. Radikal bebas mencari reaksi-
reaksi agar dapat memperoleh kembali elektron pasangannya. Serangkaian reaksi
dapat terjadi, yang menghasilkan serangkaian radikal bebas. Setelah itu radikal
bebas dapat mengalami tubrukan kaya energi dengan molekul lain yang merusak
ikatan di dalam molekul, pada akhirnya radikal bebas dapat merusak membran
sel, retikulum endoplasma, atau DNA sel yang rentan (Corwin, 2008). Radikal
bebas merusak DNA yang dapat mengakibatkan sel kanker (Mazandarani et al,
2012).
Pada dasarnya tubuh manusia memiliki antioksidan untuk membatasi
kerusakan akibat terpapar radikal bebas. Salah satu antioksidan alami yang paling
efektif adalah vitamin E. Vitamin ini larut dalam lemak dan sangat penting karena
sebagian besar kerusakan oleh radikal bebas terjadi pada membran sel dan
lipoprotein berkepadatan rendah. Antioksidan alami tubuh lainnya mencakup
senyawa seperti cystein, glutathion dan D-penicillamin, serta isi darah misalnya
molekul transferin yang mengandung zat besi dan seruloplasmin protein (
Youngson, 2003).
Senyawa antioksidan adalah senyawa pemberi elektron. Secara biologis,
antioksidan adalah senyawa yang mampu menangkal atau meredam dampak
negatif oksidan dalam tubuh. Antioksidan bekerja dengan cara mendonorkan satu
elektronnya kepada senyawa yang bersifat oksidan sehingga aktivitasnya senyawa
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
3
oksidan tersebut bisa dihambat. Keseimbangan oksidan dan antioksidan sangat
penting karena berkaitan dengan berfungsinya sistem imunitas tubuh. Kondisi
seperti ini terutama untuk menjaga integritas dan berfungsinya membran lipid,
protein sel, dan asam nukleat, serta mengontrol transduksi sinyal dan ekspresi gen
dalam sel imun (Winarsih,2007).
Sumber antioksidan dapat dibagi menjadi dua kelompok,yaitu antioksidan
sintetik, yaitu antioksidan yang diperoleh dari hasil sintesis reaksi kimia dan
antioksidan alami, yaitu antioksidan yang berasal dar alam (Prabantini, 2010).
Tumbuhan mengandung berbagai jenis senyawa kimia yang berpotensi sebagai
antioksidan, namun yang paling penting adalah vitamin C, vitamin E, senyawa
fenol, dan thiol. Senyawa fenol meliputi flavonoid (turunan inti flavan), cincin
kroman (tokoferol), dan lignan. Sayur-sayuran kaya akan zat gizi (vitamin,
mineral, dan serat pangan) serta berbagai kelompok zat bioaktif lain yang disebut
zat fitokimia. Zat bioaktif ini bekerja secara sinergis, meliputi mekanisme enzim
detoksifikasi, peningkatan sistem kekebalan dan antioksidan (Silalahi, 2006).
Negara Indonesia adalah suatu negara kepulauan yang memiliki hutan
tropika terbesar kedua di dunia, kaya dengan keanekaragaman hayati dan dikenal
sebagai salah satu dari negara megabiodiversity. Sebagai mana telah diketahui
bersama, tumbuh-tumbuhan tersebut memiliki manfaat yang besar bagi
kehidupan manusia antara lain untuk kebutuhan sandang ,papan energi, dan
sumber ekonomi (Ersam, 2004). Tanaman banyak mengandung senyawa aktif
seperti senyawa fenolik yang dapat bertindak sebagai antioksidan. Penggunaan
antioksidan tersebut tentunya dapat menghambat ataupun mencegah kerusakan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
4
DNA pada manusia yang berujung pada timbulnya berbagai penyakit (Ozen.,
2009). Salah satu tanaman tersebut adalah selada air ( Nasturtium officinale R.Br).
Selada air (Nasturtium officinale R.Br) merupakan tanaman dengan
batang menjalar. Batang ini yang diambil untuk dijadikan sayuran. Selada air
dimanfaatkan sebagai mengobati TBC dan rasa panas di paru-paru, mengobati
gangguan dan iritasi pada kulit. Kandungan zat gizi dan fitonutrien yang
terkandung di dalamnya adalah provitamin A (karotenoid) dan vitamin C, minyak
atsiri berupa rapanol dan serat (Wirakusumah, 2004). Adanya kandungan vitamin
C pada selada air dimungkinkan terdapat aktifitas antioksidan karena vitamin C
dapat bertindak sebagai peningkatan sistem kekebalan di dalam tubuh, oleh karena
itu diperlukan suatu keseimbangan antara pembentukan radikal bebas dan proteksi
antioksidan (Silalahi, 2006). Selada air diduga dapat bertindak sebagai antikanker
berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Selain itu, tanaman selada air juga
banyak ditemui sehingga dapat dengan mudah untuk didapatkan dan diteliti
aktivitas antioksidannya.
Pemilihan pelarut ekstraksi dengan menggunakan etanol juga didasarkan
pada penelitian yang telah dilakukan oleh (Ozen,2009 ) yang menyebutkan bahwa
dengan menggunakan pelarut etanol menghasilkan aktifitas antioksidan yang lebih
besar dibandingkan dengan menggunakan pelarut yang lain. Pada penelitian yang
dilakukan oleh (Mazandarani, Momeji, Moghaddam, 2013), menyebutkan bahwa
pada selada air (Nasturtium officinale R) terdapat kandungan senyawa flavonoid
total, yaitu sebesar (26,57±1,16) mg ekivalen dari kuarsetin untuk sampel
vegetatif dan senyawa fenolik sebesar (36,89±2,23) mg untuk sampel vegetatif
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
5
serta memiliki nilai aktifitas antioksidan yang dinyatakan sebagai IC50, Sebesar
1227,5 µg/ml dengan metode TAC .
Pada penelitian ini digunakan metode DPPH untuk menentukan aktivitas
antioksidan fraksi etil asetat ekstrak etanolik karena dengan digunakannya radikal
bebas DPPH dapat digunakan untuk menangkap aktivitas antioksidan dari sampel
yang ditandai dengan nilai IC50. Nilai IC50 adalah nilai yang dibutuhkan oleh
suatu sampel untuk menangkap radikal bebas sebanyak 50%. Pada uji aktivitas
antioksidan dengan menggunakan metode DPPH telah dilakukan untuk
mengukur aktivitas antioksidan telah digunakan untuk pengukuran antioksidan
dari daun dewa dan hasilnya dinyatakan sebagai IC50 (Widyaningsih,2010).
Penelitian ini juga menggunakan metode Folin-Ciocalteu dalam penetapan kadar
senyawa fenolik total dengan prinsip adalah terjadinya reduksi ion fenolat oleh
Folin-Ciocalteu yang kemudian dapat ditetapkan kadarnya dengan menggunakan
spekrtoskopi, metode ini telah digunakan untuk menetapkan senyawa fenolik total
pada sampel kulit buah pinang ( Ismail, Runtuwene, Fatimah, 2010). Oleh karena
itu, penelitian ini menggunakan metode DPPH untuk mengukur aktivitas
antioksidan dan metode Folin-Ciocalteu untuk pengukuran kandungan senyawa
fenolik total.
1. Permasalahan
a. Berapakah nilai aktivitas antioksidan dari fraksi etil asetat ekstrak etanolik
herba selada air dan pembanding rutin dengan metode DPPH yang
dinyatakan sebagai nilai IC50?
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
6
b. Berapakah kandungan senyawa fenolik total dari fraski etil asetat ekstrak
etanolik herba selada air tersebut yang dinyatakan sebagai mg ekivalen
asam galat per gram fraksi?
2. Keaslian penelitian
Sejauh pengamatan yang diketahui oleh peneliti, penelitian ini belum
pernah dilakukan, adapun untuk penelitian serupa yang pernah dilakukan oleh
(Mazandari, et al,2013) dengan judul Evaluation of Phytochemical and
Antioxidant Activities From Different Parts of (Nasturtium officinale R. Br). Pada
penelitian ini sampel herba selada air diambil dari provinsi Mazandaran dan
dilakukan juga penetapan kadar senyawa flavonoid total dengan menggunakan
metode aluminium klorida, dan penentuan aktivitas antioksidan dengan
menggunakan metode TAC dengan pembanding BHA dan BHT ( Ozen, 2009)
dengan judul Investigation Of Antioxidant Properties of (Nasturtium Officinale)
(Watercress) Leaf Extract. Pada penelitian ini sampel herba selada air diperoleh
dari daerah Arhavi-Artvin, Turki, pada periode Juni-Juli (2006). Metode aktivitas
antioksidan pada penelitian ini adalah dengan menggunakan metode besi tiosianat.
Perbedaan penelitian ini dengan penelitian yang pernah dilakukan
sebelumnya adalah tempat diambilnya sampel selada air yang diambil dari daerah
Kaliurang, Indonesia dan metode uji aktivitas antioksidan yang berbeda yaitu
dengan menggunakan metode DPPH dengan pembanding rutin.
3. Manfaat penelitian
a. Manfaat teoretis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi mengenai
kandungan senyawa fenolik total dan mengetahui aktivitas antioksidan fraksi etil
asetat ekstrak etanolik pada herba selada air (Nasturtium officinale R.Br )
menggunakan metode DPPH .
b. Manfaat praktis
Penelitian ini dapat memberikan informasi kepada masyarakat tentang
penggunaan herba selada air sebagai sumber antioksidan alami yang dapat
melawan radikal bebas.
c. Manfaat metodologis
Penelitian ini dapat memberikan informasi mengenai aplikasi
penggunaan metode DPPH sebagai salah satu uji aktivitas antioksidan yang
terdapat pada bahan alam.
B. Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian ini, yaitu untuk mengetahui kandungan senyawa
fenolik total yang dinyatakan sebagai mg ekivalen asam galat per gram fraksi dan
menentukan aktivitas antioksidan fraksi etil asetat ekstrak etanolik dari herba
selada air (Nasturtium officinale R.Br) dan pembanding rutin yang dinyatakan
dengan IC50 menggunakan metode DPPH.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
8
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Selada Air
1. Nama lain selada air
Tanaman selada air (Nasturtium officinale R. Br) termasuk dalam famili
Brasicacea .Tanaman ini memiliki berbagai nama lain sebagai berikut : Pani
(Hindi), selada air (Indonesia), nasturcio , agretto aquatico (Italia), berro de agua
, berro de fuente ( Spanyol), wodjanoj kren, sherucha wodnaja, brunkress (Rusia),
Echte Brunnenkresse, Bachkresse, Waserkresse, Wassersenf, Wiesenkren
(Jerman), Xong (Vietnam).(Seidemann,2005). Nama sinonim dari tanaman ini
adalah Caradaminum nasturtium Moench, Crucifera fontana E.H.L. Krause,
Nasturtium aquaticum Wahlenb, Nasturtium nasturtium Cockerell, Rorippa
nasturtium –aquaticum (L.) Hayek, Sisymbrium nasturtium Thunb (Seidemann,
2005).
2. Morfologi tanaman selada air
Tanaman selada air merupakan tanaman air yang mendapatkan nutrisi
dari langsung dari air dan dapat tumbuh di sungai kecil ataupun tumbuh di
pinggir sungai yang memiliki air yang cukup tinggi. Tanaman selada air memiliki
ciri-ciri batang yang tipis, merambat dan terkadang mengapung di atas air. Setiap
daun terdiri dari 3 sampai 11 anak daun. Bunga berwarna kecil dan berukuran
kecil dengan mahkota berbentuk silang. Bentuk buah siliques berukuran panjang
1,27 sampai 2,54 cm dengan 2 biji pada setiap lokus (Smith, 2007).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
9
3. Kandungan kimia
Senyawa yang terkandung dalam selada air (Nasturtium officinale)
adalah adanya senyawa flavonoid yang terdapat di dalam selada air. Berdasarkan
penelitian yang telah dilakukan oleh (Mazandarani, et al, 2010) menyebutkan
bahwa kandungan flavonoid totalnya sebesar 26,5 mg ekivalen quarsetin pada fase
vegetatif dan 36,89 mg ekivalen kuarsetin pada fase generatif. Kandungan
senyawa lain yang berpotensi sebagai antioksidan dalam spesies Brassica adalah
lutein dan β karoten. Vitamin E dalam bentuk α tokoferol dapat bertindak sebagai
senyawa antioksidan dengan memberikan atom hidrogennya ke senyawa radikal
bebas dan juga terdapat kandungan vitamin C yang dapat bertindak sebagai
antioksidan dengan mekanisme penangkapan radikal hidroksil dan superoksida.
(Pilar, Tamara, Pablo, and Maria, 2011).
4. Sistematika selada air
Tanaman selada air memiliki taksnomi sebagai berikut :
Kingdom : Plantae
Subkingdom : Viridaeplantae
Infrakingdom : Sterptophyta
Divisi : Tracheophyta
Subdivisi : Spermathophyta
Infradivisi : Angiospermae
Class : Magnoliopsida
Superordo : Rosanae
Ordo : Brassicales
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
10
Famili : Brassicaceae
Genus : Nasturtium
Spesies : Nasturtium officinale R. Br.
( Anonim, 2013)
B. Senyawa Fenolik
1. Pengertian senyawa fenolik
Senyawa fenol mempunyai cincin aromatik yang mengandung bermacam
gugus pengganti yang menempel, seperti gugus hidroksil , karboksil , metoksil (-
O-CH3), dan sering juga berstruktur cincin bukan aromatik. Senyawa fenol
berbeda dengan lipid, yaitu lebih larut dalam air dan kurang larut dalam pelarut
organik tak-polar. Beberapa agak larut dalam eter, khususnya jika jika pH cukup
rendah untuk mencegah ionisasi gugus karboksil dan hidroksil yang ada ( Frank.,
1995).
Banyak senyawa fenol juga dihasilkan dari lintasan asam sikimat dan reaksi
berikutnya diantaranya adalah asam sinamat, p-kumarat, kafeat, ferulat, dan gallat.
Gallat akan diubah menjadi galotanin, polimer heterogen yang mengandung
berbagai molekul asam galat yang saling terkait dengan asam galat lain serta
dengan sukrosa dan gula lainnya. Banyak galotanin yang sangat menghambat
pertumbuhan tanaman, dan ketahanan tumbuhan karena galotanin diangkut ke
vakuola dan disitu mereka tidak dapat merombak enzim sitoplasma (Frank.,
1995).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
11
2. Senyawa fenolik dan antioksidan
Dari sekian banyak senyawa fenolik di alam, flavonoid merupakan
golongan terbesar, disusul fenolmonosiklik sederhana, fenilpropanoid, dan kuinon
fenolik. Di alam, senyawa fenolik kerap dijumpai terikat pada protein, alkanoid,
dan terdapat di antara terpenoid. Flavonoid berperan sebagai antioksidan karena
dapat menangkap radikal bebas dengan melepaskan atom hidrogen dari gugus
hidroksilnya. Pemberian atom hidrogen ini akan menyebabkan radikal bebas
menjadi stabil dan berhenti melakukan perusakan terhadap lipida, protein dan
DNA. Flavonoid dapat menghentikan tahap awal rekasi dengan melepaskan satu
atom hidrogen kemudian berikatan dengan satu radikal bebas. Selanjutnya,
dengan mekanisme seperti itu, radikal peroksi dapat dihancurkan atau distabilkan
oleh resonansi dari gugus hidroksil yang membuat energi aktivasinya berkurang
( Ide., 2008).
OH
RH +
O
+ R
O
H
O
H
(Silalahi, 2006).
Gambar 1. Mekanisme penghambatan radikal bebas oleh senyawa fenolik
3.Senyawa fenolik pada tanaman
Senyawa fenolik di dalam tanaman terdiri dari satu atau lebih struktur
cincin aromatik dan terdapat gugus hidroksil. Senyawa ini tersebar secara luas di
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
12
tanaman dan merupakan hasil dari metabolit sekunder. Fungsi senyawa fenolik
pada tanaman adalah sebagai pelindung terhadap sinar UV, parasit, atau terhadap
agen patogen. Senyawa fenolik yang terdapat di dalam tanaman meliputi asam
fenolat, flavonoid dan tanin. Senyawa flavonoid terbagi menjadi 6 sub bagian
tersendiri, yaitu: flavons, flavonols, flavanols, flavanones, isoflavones dan
antosianin ( Dai and Mumper, 2010).
Senyawa fenolik terdapat secara luas di dalam tanaman salah satu
tanaman yang memiliki senyawa polifenol adalah teh hijau (Camellia sinensis)
adalah sebagai berikut epicatechin, epigallocatechin, epicatechin-3-gallate dan
epigallo-catechin-3-gallate.Senyawa fenolik ini terdapat pada daun teh yang
masih segar (Anesini, Ferarro,and Filip, 2008). Senyawa fenolik dapat ditemukan
pada tanaman berkayu. Senyawa fenolik menyebabkan eksplan cepat berubah
warna menjadi coklat dan mengering bahkan sesudah terbentuk kalus. Senyawa
fenol tersebut akan teroksidasi membentuk quinon yang bersifat racun terhadap
sel-sel tanaman ( Hendaryono, dan Wijayani,1994).
4.Kandungan senyawa fenolik pada tanaman selada air (Nasturtium
officinale R.Br).
Kandungan senyawa fenolik yang terdapat pada tanaman selada air
(Nasturtium officinale) antara lain adalah terdapat senyawa flavonoid total pada
tanaman ini yang telah dilakukan penelitian oleh (Mazandarani,et al, 2010).
Senyawa flavonoid merupakan senyawa fenolik yang memiliki aktivitas
antioksidan yang kuat. Kuersetin merupakan salah satu senyawa fenolik yang
poten sebagai antioksidan yand dapat menangkal radikal bebas dengan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
13
mengoksidasi dari reaksi radikal bebas. Pada penelitian ini digunakan standard
antiokisdan rutin karena efek penghambatan flavonoid rutin dan quersetin
terhadap peroksidasi lipid bergantung pada ion Fe dalam lesitin liposom. Senyawa
flavonoid tersebut bekerja dengan cara mengkelat logam, serta menangkap
aktivitas radikal bebas. Dalam hal ini terjadi interaksi rutin dengan ion
superoksida. Rutin secara signifikan lebih efektif menghambat sistem peroksidasi
lipid yang tergantung ion Fe. Pengkelatan ion Fe menyebabkan kompleks ion inert
dan tidak dapat mengawali terjadinya peroksidasi lipid,mekanisme pengkelatan
rutin lebih kuat dibandingkan dengan vitamin C. (Winarsih., 2007).
O
O
OOH
HO
OH
OH
Rhamoglikosida
Gambar 2. Struktur rutin
C. Metode Folin-Ciocalteu
Senyawa fenolik dapat ditetapkan dengan metode Folin-Ciocalteu.
Prinsip kerja dari metode ini adalah reaksi reduksi oksidasi. Reagen Folin–
Ciocalteu merupakan reagen pengoksidasi berupa larutan berwarna kuning.
Senyawa fenolik dalam sampel akan dioksidasi oleh molybdotungstate yang
merupakan komponen dari Folin–Ciocalteu membentuk senyawa berwarna biru.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
14
Reaksi antara senyawa fenolik dengan Folin–Ciocalteu berjalan lambat pada
suasana asam, sehingga perlu penambahan natrium bikarbonat agar terbentuk
suasana basa dan reaksi dapat berjalan lebih cepat. Penggunaan metode ini telah
digunakan oleh (Agustiningsih, Wildan, dan Mindaningsih, 2010) dalam
menetapkan kandungan senyawa fenolik pada ekstrak daun pandan wangi
( Pandanus amaryllifous Roxb ).
Pengukuran dengan Folin-Ciocalteu digunakan untuk pengukuran
senyawa fenolik total. Prinsipnya berdasarkan pada rekasi oksidasi dari senyawa
fenolik dan reduksi dari senyawa yang memiliki kromofor. Jika dalam sampel
tersebut t terdapat agen pereduksi seperti asam askorbat, asam amino, xantin dan
protein akan mengganggu pada pengukuran ini ( Makar., 2003). Reagen ini
terdiri dari campuran polimer anionik yang akan tereduksi menjadi warna biru.
Struktur dari bentuk kromofor ini tergantung dari sifat fenolik dan panjang
gelombang maksimum pada 760 nm ( Hemingway and Laks,1992).
D. Antioksidan
1. Pengertian antioksidan
Senyawa antioksidan adalah senyawa pemberi elektron. Secara biologis
pengertian antioksidan adalah senyawa yang mampu menangkal atau meredam
dampak dari oksidan dalam tubuh. Antioksidan bekerja dengan cara mendonorkan
satu elektronnya kepada senyawa yang bersifat oksidan sehingga aktivitas
senyawa oksidan teresbut bisa dihambat ( Winarsih, 2007).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
15
2. Sumber antioksidan
a. Antioksidan alami
Tumbuhan mengandung berbagai jenis antioksidan , namun yang paling
penting adalah vitamin C, vitamin E, senyawa fenol (meliputi flavonoid, tokoferol
dan lignin). Khasiat antioksidan untuk mencegah bahaya radikal bebas terdapat
pada tanaman dan buah-buahan yang kaya akan antioksidan. Mekanisme kerja
dari zat tersebut sebagai antiokisdan adalah sebagai berikut.
1) Vitamin E
Vitamin E atau tokoferol adalah inhibitor terhadap lipida peroksidasi.
Terdapat delapan jenis tokoferol alam yang mempunyai aktivitas sebagai
vitamin E, tetapi alfa tokoferol yang paling aktif secara biologis.
Tokoferol suatu antiokisdan yang sangat efektif, yang dengan mudah
menyumbangkan atom hidrogen pada gugus hidroksil (OH) dari struktur
cincin ke radikal bebas sehingga radikal bebas menjadi tidak reaktif.
Dengan menyumbangkan hidrogen, vitamin E sendiri menajdi suatu
radikal , tetapi lebih stabil karena elektron yang tidak berpasangan pada
atom oksigen mengalami delokalisasi ke dalam struktur cincin
aromatik(Silalahi, 2006).
2) Vitamin C
Vitamin C merupakan suatu antioksidan penting yang larut dalam air.
Vitamin C secara efektif menagkap radikal-radikal O2-, OH, peroksil dan
oksigen singlet, dan juga berperan dalam melindungi membrane biologis.
Dengan mengikat radikal peroksil dalam fase berair dari plasma atau
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
16
sitosol, vitamin C dapat melindungi membran biologis dari kerusakan
peroksidatif. Sifat penting dari vitamin C sebagai antioksidan pertama,
karena mempunyai potensial reduksi yang rendah sehingga radikal
askorbil mampu bereaksi dengan radikal biologis dan mereduksi oksidan-
oksidan. Stabilitas dan reaktivitas yang rendah dari radikal askorbil, yang
terbentuk ketika askorbat yang menangkap SOR dan senyawa nitrogen
yang reaktif (Silalahi, 2006).
3) β karoten
Senyawa karotenoid bekerja sebagai antioksidan, yakni penangkap
radikal bebas, terutama radikal peroksil dan hidroksil maupun oksigen
singlet. Sebagai antioksidan, beta karoten memperlambat fase inisiasi.
Senyawa ini lebih efektif sebagai antiokisdan biologis terutama pada
bagian yang memiliki tekanan partial oksigen rendah ( Silalahi, 2006).
b. Antioksidan sintetik
Antioksidan sintetik merupakan antiokisdan yang dibuat di pabrik untuk
tujuan tertentu misalnya untuk mengawetkan makanan. Sebagai contoh dari
senyawa antiokisdan sintetik adalah BHA (Butil Hidroksi Anisol), BHT (Butil
hidroksi toluena) dan TBHQ (Tersier Butil Hidro Quinon ). Namun saat ini
penggunaan dari antiokisdan bautan mulai dibatasi penggunaannya karena dapat
menimbulkan penyakit seperti kanker, asma, urtikaria, dsb ( Race, 2009).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
17
3. Penggolongan antioksidan
Berdasarkan mekanisme kerjanya , antioksidan digolongkan menjadi tiga
kelompok, yaitu antioksidan primer, sekunder, dan tersier.
a. Antioksidan primer
Antioksidan primer meliputi enzim superoksida dismutase (SOD) ,
katalase, dan glutation peroksidase (GSH-Px). Suatu senyawa dikatakan sebagai
antioksidan primer, apabila dapat memberikan atom hydrogen secara tepat kepada
senyawa radikal, kemudian radikal antioksidan yang terbentuk segera berubah
menjadi senyawa yang lebih stabil.sebagai antioksidan, enzim-enzim tersebut
menghambat pembentukan radikal bebas, dengan cara memutus rekasi berantai
polimerisasi), kemudian mengubahnya menjadi produk yang lebih stabil (Winarsi,
2007).
b. Antioksidan sekunder
Antioksidan sekunder disebut juga antioksidan eksogenus atau non
enzimatis. Antioksidan dalam kelompok ini juga disebut sistem pertahanan .
Dalam sistem pertahanan ini, terbentuknya senyawa oksigen reaktif dihambat
dengan cara pengkelatan metal atau dirusak pembentukannya. Pengkelatan metal
terjadi dalam cairan ekstraseluler. Antioksidan non-enzimatis dapat berupa
komponen-nutrisi dan komponen nutrisi dari sayuran dan buah-buahan. Kerja
sistem antioksidan non enzimatik, yaitu dengan cara memotong reaksi oksidasi
berantai dan radikal bebas atau dengan cara menangkapnya. Akibatnya, radikal
bebas tidak akan bereaksi dengan komponen seluler. Antioksidan sekunder
meliputi vitamin E, vitamin C, flavonoid (Winarsi, 2007).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
18
c. Antioksidan tersier
Kelompok antioksidan tersier meliputi enzim DNA repair dan metionin
sulfoksida reduktase. Enzim-enzim ini berfungsi sebagai perbaikan biomolekuler
yang rusak akibat reaktivitas radikal bebas. Kerusakan DNA yang terinduksi
senyawa radikal bebas dicirikan dengan rusaknya single dan double strand, baik
gugus non-basa maupun basa ( Winarsi, 2007).
4. Metode uji aktivitas antiokisdan
a. Metode DPPH
Salah satu metode yang digunakan untuk pengujian aktivitas antioksidan
suatu bahan adalah dengan menggunakan radikal bebas DPPH. DPPH adalah
radikal bebas yang bersifat stabil dan beraktivitas dengan cara mendelokasi
elektron bebas pada suatu molekul, sehingga molekul tersebut tidak aktif
sebagaimana radikal bebas yang lain. Proses delokalisasi ini ditunjukkan dengan
adanya warna ungu (violet) pekat yang dapat dikaraterisasi pada absorbansi
(Molyneux, 2004).
Pengukuran aktivitas antioksidan dengan metode DPPH menggunakan
prinsip spektrofotometer. Senyawa DPPH akan berwarna ungu pada panjang
gelombang 517 nm. Suatu senyawa dapat dikatakan memiliki aktivitas
antioksidan apabila senyawa tersebut mampu mendonorkan atom hidrogennya
untuk berikatan dengan DPPH membentuk DPPH tereduksi,ditandai dengan
semakin hilangnya warna ungu menjadi kuning (Molyneux, 2004). Struktur
DPPH dan DPPH tereduksi hasil reaksi dengan antioksidan adalah sebagai
berikut:
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
19
O2N
NO2
NO2
N N + DH O2N
NO2
NO2
N N + D
H
Gambar 3. Reaksi DPPH dengan senyawa antioksidan
b. Metode CUPPRAC
Metode pengukuran aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode
Cupprac menggunakan bahan bis (neurokoprin) tembaga (II) sebagai pewarna
kromogenik. Pereaksi bis (neurokoprin) tembaga (II) yang berwarna biru akan
mengalami reaksi reduksi setelah senyawa yang berpotensi sebagai antiokisdan
ditambahkan ke dalamnya dan akan mengakibatkan terbentuknya warna kuning
dari hasil reaksi reduksi menjadi bentuk bis (neurokoprin) tembaga (I).
Pengukuran dilakukan pada panjang gelombang 453,4 nm (Widyastuti., 2010).
c. Metode FRAP
Metode pengujian antiokisdan dengan metode FRAP menggunakan
kompleks besi ligan 2,4,6 –tripiridil –triazin sebagai pereaksi. Senyawa kompleks
ini memiliki warna biru akan berfungsi sebagai zat yang melakukan pengoksidasi
dengan adanya senyawa antioksidan dan akan mengalami reaksi reduksi yang
menghasilkan produk yang berwarna kuning pada suasana asam .Pengukuran
kemudian dilakukan pada panjang gelombang 598 nm. Metode pengujian ini
harus dilakukan apabila senyawa antioksidan dapat mereduksi Fe (III) TPTZ pada
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
20
kondisi reaksi secara termodinamika dan memiliki laju reaksi yang cukup cepat
( Widyastuti, 2010).
Dari ketiga metode pengujian antioksidan yang ada, peneliti memilih
menggunakan pengujian dengan metode DPPH karena metode ini lebih praktis
dibandingkan dengan menggunakan pengujian aktivitas antioksidan dengan
menggunakan metode yang lain.
E. Radikal Bebas
1. Pengertian radikal bebas
Radikal bebas merupakan suatu atom ataupun gugus yang memiliki satu
ataupun lebih elektron yang tak berpasangan. Karena jumlah elektron ganjil,
sehingga tidak semua elektron dapat berpasangan. Meskipun suatu radikal bebas
tidak bermuatan positif atau negatif, spesi ini sangat reaktif karena adanya
elektron tidak berpasangan. Suatu radikal bebas biasanya dijumpai sebagai zat
antara yang tak dapat diisolasi usia pendek, sangat reaktif, dan berenergi tinggi
( Fessenden and Fessenden, 1992).
2. Kerusakan sel akibat radikal bebas
Radikal oksigen dan turunannya dapat mematikan sel. Radikal hidroksil
menyebabkan kerusakan oksidatif terhadap protein, DNA, lemak membran yang
mengandung lebih dari satu ikatan rangkap pada rantai hidrokarbon, dan
komponen sel lain. Protein, membran, karbohidrat dan asam nukleat dapat
menjadi rusak karena akibat radikal bebas oksigen. Kerusakan radikal bebas ini
diperkirakan berperan menimbulkan berbagai macam penyakit. Pada protein,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
21
asam amino prolin, hisitidin, arginin, sistein, dan metionin rentan terhadap
serangan radikal hidroksil dan kerusakan oksidatif. Oksidasi asam amino dalam
protein menimbulkan fragmentasi protein, pembentukan ikatan silang dan
agregrasi ( Marks, Momeji, and Moghaddam, 1996).
3. Pembentukan radikal bebas
Proses oksidasi merupakan proses yang meyebabkan atom mengalami
peningkatan jumlah ikatan dengan oksigen atau penurunan jumlah ikatan dengan
hidrogen atau kehilangan elektron. Oksigen merupakan molekul unsur memiliki
konfigurasi elektron dwiradikal. Reaksi terbentuknya radikal bebas terdiri dari 3
tahap yaitu inisiasi, propagasi, dan terminasi(Cairns, 2004).
a. Inisiasi
Pada tahap ini terjadi pembelahan (fisi) homolitik ikatan kovalen di
dalam molekul obat dan menghasilkan radikal bebas. Sumber energi pada proses
ini berasal dari cahaya, baik cahaya ultraviolet maupun cahaya tampak yang
mengenai sampel. Cahaya dengan panjang gelombang ini cukup energetik untuk
memecah pasangan elektron dalam suatu ikatan kovalen dan menghasilkan dua
radikal (Cairns, 2004).
b. Propagasi
Propagasi meruapkan reaksi kimia yang utama. Pada langkah ini
radikal bebas bereaksi bersama-sama dan menghasilkan lebih banyak lagi spesies
yang berekasi. Pada oksidasi, tahap propagasi ini melibatkan pembentukan
peroksida dan hidroperoksida. Hidroperoksida dapat mengalami dekomposisi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
22
lebih lanjut dan menghasilkan aldehid serta keton yang memiliki berat molekul
kecil (Cairns, 2004).
c. Terminasi
Radikal bebas reaktif bergabung bersama membentuk ikatan kovalen,
dan secara efektif proses reaksi rantai dan mengahsilkan senyawa yang stabil
(Cairns, 2004).
4. Radikal bebas dalam tubuh
Radikal bebas juga mucul di dalam proses fungsi normal di dalam sel.
Proses metabolisme memerlukan banyak reaksi kimia yang melibatkan aksi dari
radikal bebas, sebagai contoh adalah penggabungan rantai-rantai asam amino
(polimerisasi) untuk membentuk protein atau polimerisasi dari molekul glukosa
menjadi polisakarida menjadi glikogen,melibatkan aksi radikal bebas. Dalam
proses metabolisme juga diproduksi radikal bebas yang penting dan berpotensi
bahaya seperti radikal peroksida dan hidroksil (Youngson,1998). Bahaya radikal
bebas dalam tubuh telah penelitian yang menggunakan ikan kerapu yang diinduksi
dengan radikal bebas. Radikal bebas juga dapat menyebabkan berbagai macam
penyakit misalnya pada penyakit Parkinson, kerusakan disebabkan akibat
pembentukan radikal bebas oksigen yang berlebihan atau berkurangnya
kemampuan inaktivasi radikal bebas di dalam inti ganglion basal. Karena nukleus
kaudatus striatum tersebut juga berperan dalam fungsi emosi dan kognitif,
defisiensi sintesis neurotransmitter yang disebabkan oleh kerusakan sel yang
dicetuskan oleh radikal oksigen pada nukleus ini (Mark, et al, 1996).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
23
F. Metode Ekstraksi
Ekstraksi merupakan proses pemisahan senyawa kimia yang terdapat
pada tanaman atau hewan ataupun komponen lain dengan menggunakan pelarut
yang sesuai. Senyawa kimia yang didapatkan dari proses ekstraksi merupakan
campuran dari hasil metabolit ataupun senyawa lain yang terdapat pada tanaman.
Pada tanaman merupakan sumber senyawa fenolik yang cukup banyak, proses
ekstraksi untuk mendapatkan senyawa fenolik ini tergantung dari berat molekul,
polaritas konsentrasi, jumlah gugus hidroksil dan cincin aromatik. Di dalam
sampel terdapat berbagai variasi struktur dari senyawa fenolik itu sendiri,
misalnya terdapat flavonoid, asam fenolat, antosianin dan proantosianin, oleh
karena itu diperlukan metode ekstraksi yang tepat (Khoddami, Wilkes,and
Roberts,2013).
Pemilihan pelarut pada proses ekstraksi sangat tergantung dari sifat fisika
kimia bahan aktif yang terdapat dalam sampel tanaman. Pemilihan pelarut yang
baik untuk proses ekstraksi meliputi tidak bersifat toksik, mudah diuapkan pada
suhu yang rendah, dapat mengawetkan hasil ekstraksi, tidak mengakibatkan
kerusakan pada senyawa yang terdapat dalam sampel. Faktor yang cukup penting
untuk pemilihan pelarut adalah jumlah senyawa fitokimia yang dapat diekstrak,
lama proses ekstraksi, keberagaman jumlah senyawa aktif yang dapat diekstraksi,
meskipun dalam proses ekstrkasi terdapat pelarut yang masih sisa, pelarut tersebut
harus tidak toksik dan tidak mengganggu dalam proses pengukuran selanjutnya,
pemilihan pelarut tergantung dari senyawa yang akan diekstrak ( Tiwari, Kumar ,
Kaur, and Kaur, 2011).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
24
Pada penelitian ini metode ekstraksi yang digunakan adalah dengan
menggunakan metode maserasi karena tidak dilakukan pemanasan dengan
maserasi sehingga dapat digunakan untuk mengestraksi senyawa yang bersifat
termostabil. Metode maserasi dilakuakn dengan cara mencampurkan serbuk
dengan pelarut yang sesuai sampai pada waktu beberapa hari dan kemudian
sampai semua senyawa yang dituju dalam sampel dapat terekstraksi. Metode
maserasi yang dilakukan pada penelitian ini menggunakan pelarut etanol 70%
karena dengan konsentrasi etanol 70% dapat mendapatkan senyawa aktif
bioflavonoid yang tinggi dibandingkan dengan menggunakan etanol yang murni.
Hal ini disebabkan karena etanol 70% terdiri dari 30% kandungan air sehingga
mengakibatkan kepolaran dari pelarut akan meningkat sehingga akan
mempermudah dalam proses ekstraksi, etanol 70% akan mengakibatkan penetrasi
ke dalam membran seluler untuk mengekstraksi bahan material intraseluler.
Alasan lain digunakan pelarut etanol adalah tidak toksik dan lebih aman
dibandingkan dengan pelarut metanol ( Tiwari, et al, 2011) .
Penelitian ini tidak menggunakan penyarian dengan alat Sokletasi karena
teknik ini diperlukan dengan melakukan pemanasan untuk sampel sampai 900C
meskipun untuk melakukannya hanya diperlukan beberapa jam saja dibandingkan
dengan metode maserasi yang memerlukan hingga beberapa hari. Senyawa
fenolik meruapakan senyawa yang bersifat termolabil sehingga bila dilakukan
dengan penyarian dengan alat Sokletasi akan mengakibatkan rusaknya senyawa
fenolik yang menjadi target utama dalam proses ekstraksi ( Khoddami, et al,
2013). Sedangkan bila digunakan dengan metode perkolasi membutuhkan lebih
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
25
banyak cairan pelarut yang digunakan dibandingkan dengan menggunakan
metode maserasi karena pelarut tersebut terus-menerus akan dimasukkan ke dalam
perkolator sampai semua bahan metabolit sekunder tersebut sudah tersari semua
dan juga harus selalu diguankan pelarut yang baru sehingga dirasakan kurang
efisien dibandingkan dengan metode maserasi ( Tiwari,et al, 2011).
G. Landasan Teori
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan dan
kandungan senyawa fenolik total dari herba selada air (Nasturtium officinale R.
Br). Senyawa fenolik total merupakan senyawa golongan flavonoid yang
berpotensi sebagai penangkap radikal bebas dengan melepaskan satu atom
hidrogennya ke molekul radikal bebas sehingga akan mengalami reaksi reduksi.
Radikal bebas merupakan senyawa yang bersifat tidak stabil dan akan berbahaya
bagi kesehatan jika masuk ke dalam tubuh dalam kurun waktu yang cukup lama.
Oleh karena itu, dilakukan penelitian tentang sumber antioksidan yang berasal
dari alam.
Metode pengujian aktivitas antioksidan yang dilakukan adalah dengan
menggunakan radikal DPPH, di mana DPPH akan mengalami proses reduksi
karena adanya senyawa antioksidan yang akan mengakibatkan senyawa radikal itu
akan kehilangan sifat radikalnya. Pengukuran aktivitas antiokisdan dinyatakan
dengan IC50, yaitu besarnya konsentrasi senyawa antioksidan yang mampu
menurunkan aktivitas dari DPPH sebesar 50%. Pengujian senyawa fenolik
dilakukan dengan metode Folin-Ciocalteu yang prinsipnya adalah melakukan
reaksi reduksi ion fenolat oleh reagen Folin-Ciocalteu pada suasana basa,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
26
kemudian untuk hasil senyawa fenolik total dinyatakan sebagai mg ekivalen asam
galat per gram fraksi.
H. Hipotesis
1. Herba selada air (Nasturtium officinale R.Br) mengandung senyawa fenolik.
2. Nilai aktivitas rutin dan fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air dapat
dinyatakan dengan IC50 dengan menggunakan metode DPPH.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
27
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental karena subjek uji
diberi perlakuan selama proses penelitian .
B. Variabel Penelitian
1. Variabel bebas
Variabel bebas pada penelitian ini adalah konsentrasi dari rutin dan fraksi
etil asetat ekstrak etanolik herba selada air .
2. Variabel terikat
Varibel terikat pada penelitian ini adalah nilai % IC.
3. Variabel pengacau terkendali
Varibel pengacau terkendali pada penelitian ini adalah tempat tumbuh
tanaman selada air.
4. Variabel pengacau tak terkendali
Varibel pengacau tak terkendali pada penelitian ini adalah usia tanaman
dan kondisi tanah.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
28
C. Definsi Operasional
1. Herba selada air
Herba selada air diperoleh dari perkebunan di Kaliurang, Yogyakarta.
Sayuran didapatkan dari pemasok sayuran segar yaitu dari depo sayur segar.
Herba selada air yang diguankan dalam penelitian ini adalah keseluruhan herba
selada air yang meliputi daun dan batang kecuali akar.
2. Ekstrak etanolik herba selada air
Ekstrak etanolik herba selada air adalah ekstrak kental yang diperoleh
dari serbuk selada air dengan menggunakan pelarut etanol teknis 70% dengan
metode maserasi. Ekstrak kental didapatkan dengan menggunakan vaccum rotary
evaporator.
3. Fraksi etil asetat dari herba selada air.
Fraksi etil asetat herba selada air adalah ekstrak kental yang diperoleh
dari ekstrak kental etanolik yang sudah melalui proses farksinasi. Ekstrak kental
dari fraksi etil asetat dipekatkan dengan vaccum rotary evaporator .
4. Persen IC.
Persen IC merupakan kemampuan penangkapan fraksi etil asetat untuk
menangkap radikal bebas yang diperoleh dari nilai absorbansi.
5. IC50
IC50 merupakan besarnya konsentasi senyawa sampel yang mampu
menurunkan absorbansi DPPH sebanyak 50%.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
29
D. Alat dan Bahan
Pada penelitian ini alat dan bahan yang digunakan adalah sebagai
berikut:
1. Alat
Alat –alat yang digunakan adalah spektrofotometer UV-1240,
Seperangkat alat –alat gelas dari pyrex, kuvet, vaccum rotary evaporator ( Junke
& Kunkle), neraca analitik (Scaltec SBC 22, BP 160P), waterbath ( labo- tech
,Heraeus), blender, oven, printer.
2. Bahan
Bahan-bahan yang diguankan adalah serbuk herba selada air, etanol
70% kualitas farmasetis, wasbensin, etil asetat dari P.T Brataco, rutin, DPPH,
reagen Folin-Ciocalteu diperoleh dari Sigma.Chem, metanol p.a. diperoleh dari
E. Merck, natrium karbonat, aquadest yang didapat dari laboratorium
Farmakognosi-Fitokimia.
E. Tata Cara Penelitian
1. Determinasi tanaman
Determinasi tanaman pada penelitian ini dilakukan di Laboratorium
Farmakognosi-Fitokimia, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
2. Pengumpulan bahan
Pengumpulan bahan dilakukan di Kaliurang pada pagi hari, kemudian
sampel herba selada air segera dibawa ke laboratorium untuk dikeringkan karena
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
30
jika terlalu lama akan terjadi browning. Pemanenan dilakukan pada bulan Februari
2013.
3. Preparasi sampel
Sampel segar berupa herba selada air sebanyak 4,3 kg dikeringkan
dengan menggunakan oven pada suhu 400C selama 2 hari. Setelah itu herba yang
sudah kering digiling dengan blender sampai terbentuk serbuk yang halus. Serbuk
kemudian dimaserasi dengan menggunakan pelarut etanol 70% selama dua hari .
Setelah itu memisahkan ampas dengan pelarut menggunakan corong Buchner.
Ampas sisa kemudian diremaserasi selama dua hari. Setelah itu dipisahkan antara
pelarut dan ampas dengan menggunakan corong Buchner, kemudian
mencampurkan antara pelarut satu dan dua yang diperoleh dari hasil maserasi
yang pertama dan hasil remasearsi dan dipekatkan menggunakan vaccum rotary
evaporator sampai diperoleh ekstrak kental etanolik. Ekstrak kental etanolik yang
diperoleh kemudian dilarutkan dengan menggunakan aquades hangat sebanyak
300 ml, kemudian dipartisi dengan menggunakan wasbensin, fase wasbensin
dibuang dan diambil fase air. Setelah itu fase air dipartisi lagi dengan
menggunakan etil asetat, sehingga didapatkan fraksi etil asetat. Fraksi etil asetat
yang diperoleh kemudian dipekatkan dengan menggunakan vacum rotary
evaporator sampai diperoleh ekstrak kental fraksi etil asetat. Fraksi inilah yang
akan digunakan untuk penelitian lebih lanjut.
4. Penetapan kandungan fenolik total
Kandungan fenolik total ditentukan dengan menggunakan metode
spektrofotomteri.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
31
a. Pembuatan kurva baku asam galat
Sebanyak 0,5 ml larutan asam galat 50, 75, 100, 125 dan 150 µg/ml
ditambahkan dengan 5 ml larutan reagen Folin- Ciocalteu yang telah diencerkan
dengan menggunakan aquadest dengan perbandingan (1:10) kemudian
ditambahkan dengan 4,0 ml larutan Na2CO3 1M. Setelah 30 menit, absorbansinya
dibaca pada panjang gelombang 760 nm.
b. Optimasi penetapan kandungan fenolik total
1 ) Penentuan OT (Operating Time)
Sebanyak 0,5 ml larutan induk asam galat 50, 100 dan 150 µg/ml
ditambahkan dengan 5,0 ml reagen Folin-Ciocalteu yang telah
diencerkan dengan aquadest (1:10) dan kemudian ditambahkan dengan
4,0 ml larutan Na2CO3 1M. Absorbansi diukur setiap 5 menit pada
panjang gelombang 760 nm selama 40 menit.
2 ) Penentuan panjang gelombang maksimum
Sebanyak 0,5 ml larutan asam galat 50, 100 dan 150 µg/ml ditambahkan
dengan 5,0 ml larutan reagen Folin-Ciocalteu yang telah diencerkan
dengan aquadest dengan perbandingan (1:10) kemudian ditambahkan
dengan 4,0 ml larutan Na2CO3 1 M selanjutnya dilakukan scanning pada
panjang gelombang 600- 800 nm.
c. Estimasi penetapan kadar senyawa fenolik total sampel
Sebanyak 0,5 ml larutan sampel dengan kosentrasi 500 µg/ml
ditambhakan dengan 5,0 ml reagen Folin- Ciocalteu yang telah diencerkan
dengan aquadest dengan perbandingan (1:10) dan kemudian ditambahkan dengan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
32
4,0 ml larutan Na2CO3 1M , diamkan selama 30 menit dan dibaca absorbansinya
pada panjang gelombang maksimum 448,6 nm. Kandungan fenolik total
dinyatakan sebagai massa ekivalen asam galat ( mg ekivalen asam galat per g
fraksi etil asetat).
5. Pembuatan larutan DPPH, pembanding dan uji aktivitas antioksidan
a. Pembuatan larutan DPPH
Sejumlah tertentu DPPH dilarutkan dengan menggunakan metanol p.a.
pada labu ukur 10 ml sehingga didapatkan konsentrasi larutan DPPH sebesar 0,4
mM.
b. Pembuatan larutan pembanding
1) Pembuatan larutan induk rutin
Sebanyak 2,5 mg rutin ditimbang dan kemudian dilarutkan metanol p.a
pada labu ukur 10 ml, sehingga didapatkan konsentrasi larutan induk
sebesar 250 µg/ml.
2) Pembuatan larutan stok
Dari larutan induk diambil sebanyak 0,6 ml, 0,7 ml, 0,8 ml, 0,9 ml dan
1,0 ml dan kemudian dilarutkan dengan metanol p.a. sehingga diperoleh
kadar sebesar 15 µg/ml, 17,5 µg/ml, 20 µg/ml, 22,5 µg/ml dan 25 µg/ml.
c. Pembuatan larutan uji
Ditimbang 20 mg sampel kemudian dilarutkan dengan menggunakan
metanol p.a. dalam labu ukur 10 ml sampai batas tanda. Dari larutan induk
kemudian diambil sebanyak 1,75 ml, 1,875 ml, 2,0 ml, 2,125 ml dan 2,25 ml ,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
33
sehingga didapatkan kadar seri larutan uji sebesar 350 µg/ml, 375 µg/ml , 400
µg/ml, 425 µg/ml, 450 µg/ml.
6. Penentuan Operating Time (OT) dan panjang gelombang maksimum uji
aktivitas antioksidan
a. Penentuan Operating Time (OT)
Penentuan OT dilakukan untuk melihat waktu yang diperlukan oleh
larutin uji dengan DPPH untuk berekasi secara sempurna. Pada penentuan OT ini
untuk larutan pembanding dilakukan pada konsentrasi 15 µg/ml, 20 µg/ml , dan
25 µg/ml. Dilakukan pengukuran absorbansi dari menit ke 5 sampai menit ke 60,
pembacaan absorbansi dilakukan setiap 5 menit. OT ditandai dengan penurunan
absorbansi yang relatif lebih stabil. Dilakukan juga untuk larutan uji sebesar 350
µg/ml, 400 µg/ml dan 450 µg/ml. Dilakukan replikasi sebanyak 3 kali.
b. Pengukuran panjang gelombang maksimum
Pengukuran panjang gelombang maksimum dilakukan pada konsentrasi
DPPH sebesar 0,02 mM, 0,04 mM dan 0,08 mM. Dilakukan scanning pada
panjang gelombang 400-600 nm, kemudian penentuan panjang gelombang
maksimum didapatkan dari hasil ketiga rata-rata pengukuran DPPH dengan tiga
konsentrasi yang berbeda.
7. Uji pendahuluan dan estimasi aktivitas antioksidan pada larutan uji dan
pembanding
a. Uji pendahuluan
Disiapkan 3 buah tabung reaksi. Pada tabung pertama diisi dengan
menggunakan 1 ml metanol p.a. dan 1 ml larutan DPPH 0,4 mM, tabung kedua
dengan 1ml larutan uji rutin sebesar 20 µg/ml dan 1 ml larutan DPPH 0,4 mM,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
34
tabung ketiga dengan 1 ml larutan uji sebesar 400 µg/ml dan 1 ml larutan DPPH
, setelah itu diamkan selama 30 detik dan amati perubahan warna yang terjadi.
b. Estimasi pengukuran aktivitas antioksidan larutan pembanding
Estimasi pengukuran aktivitas antioksidan dari senyawa pembanding
yaitu rutin dilakukan pada seri larutan baku 15 µg/ml, 17,5 µg/ml, 20 µg/ml,
22,5µg/ml dan 25 µg/ml. Setelah itu, direkasikan dengan larutan DPPH 0,4 mM
dan diamkan selama OT, yaitu 30 menit dan pengukuran dilakukan pada panjang
gelombang maksimum, yaitu 515,5 nm. Pengukuran dilakukan dengan replikasi
sebayak 3 kali.
c. Estimasi pengukuran aktivitas antioksidan larutan uji
Estimasi pengukuran aktivitas antioksidan dilakukan pada seri larutan
baku sampel 350 µg/ml, 375 µg/ml, 400 µg/ml, 425 µg/ml dan 450 µg/ml. Setelah
itu direaksikan dengan larutan DPPH 0,4 mM dan diamkan selama OT, yaitu 30
menit dan pengukuran dilakkukan pada panjang gelombang maksimum yaitu
515,5 nm. Pengukuran dilakukan dengan replikasi sebanyak 3 kali.
F. Analisis Hasil
Analsis hasil untuk pengukuran aktivitas antioksidan yang dinyatakan
sebagai % IC dapat dilakukan dengan rumus :
AbsorbansiDPPH – Absorbansi sampel x 100%
Absorbansi DPPH
Kemudian dari data itu dianalisis dan dihitung nilai IC50 yang didapatkan
dari persamaan regresi linear. Persamaan regresi linear diperoleh dengan
memplotkan antara sumbu X sebagai konsentrasi larutan uji/pembanding dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
35
sumbu y adalah nilai % IC dan kemudian dibandingkan terdapat perbedaan yang
bermakna antara nilai IC50 dari sampel dan pembanding.
Penetapan kandungan senyawa fenolik total yang dinyatakan sebagai
mg ekivalen asam galat per gram fraksi etil asetat diperoleh dengan memasukkan
absorbansi dari larutan uji ke dalam persamaan regresi linear dari kurva baku
asam galat.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
36
BAB IV
HASIL dan PEMBAHASAN
A. Determinasi Tanaman
Pada percobaan kali ini, peneliti menggunakan sumber acuan yang sesuai
dan kemudian dicocokkan dan hasilnya menunjukkan bahwa tanaman yang
dimaksud adalah selada air (Nasturtium officinale R. Br) yang digunakan pada
penelitian ini.
B. Pengumpulan Bahan
Pengumpulan bahan dilakukan di Kaliurang, Yogyakarta. Pemanenan
dilakukan pada pagi hari sebelum matahari terbit dan kemudian sesegera mungkin
dibawa ke laboratorium untuk dicuci dan segera dilakukan pengeringan. Pada
penelitian ini sampel tanaman herba selada air diperoleh dari pemasok sayuran
segar di Yogyakarta yaitu Depo Sayur Segar yang berada di Jalan Monjali.
Sampel segar yang diperoleh dipanen pada pagi hari sebelum matahari terbit,
tujuannya adalah supaya tidak terjadinya peristiwa browning. Peristiwa Browning
ini dapat terjadi karena proses adaptif dari tanaman karena adanya luka atau
karena proses penuaan. Peristiwa browning dapat disebabkan karena adaanya
pengaruh enzimatik dalam tanaman itu sendiri, yaitu senyawa fenolik yang
terdapat dalam tanaman oleh pengaruh enzim polifenol oksidase dengan bantuan
oksigen akan mengubah gugus monofenol menjadi gugus O- hidroksi fenol yang
selanjutnya diubah lagi menjadi O-kuinon, gugus inilah yang akan memberikan
warna coklat (Thipyapong, Stout, and Attajarusit, 2007).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
37
Pemilihan sayur herba selada air yang digunakan tidak boleh ada yang
berwarna kuning pada daun ataupun batangnya, karena jika sudah terjadi
kekuningan terjadi peristiwa browning yang akan mengakibatkan rusaknya
senyawa fenolik di dalam tanaman karena aktivitas enzim polifenol oksidase
sehingga tidak dipilih sayuran yang sudah berwarna kekuningan, jadi dipilih
sayuran segar yang berwarna hijau. Pemanenan tanaman selada air dilakukan 2
jam setelah matahari terbit karena senyawa polifenol merupakan senyawa yang
bersifat termolabil sehingga bila dilakukan pemanenan pada siang hari akan
mengakibatkan rusaknya senyawa fenolik yang terdapat di dalam tanaman yang
akan dipanen.
C. Hasil Preparasi Sampel
1. Pengeringan
Sampel herba selada air segar sebanyak 4,5 kg kemudian dicuci dengan
air bersih yang mengalir tujuannya adalah untuk menghilangkan partikel-partikel
asing dan kotoran yang terdapat pada selada air dan dikhawatirkan akan
mengganggu dalam proses penelitian ini. Setelah sampel segar dicuci bersih
kemudian dilakukan pemotongan menjadi beberapa bagian yang lebih kecil
adapun tujuannya adalah lebih cepat dalam proses pengeringan karena akan
memperluas luas kontak permukaan dari sampel tersebut setelah dilakukan
pemotongan supaya proses pengeringan dapat berjalan lebih cepat karena air yang
terdapat didalam sampel selada air dapat lebih cepat menguap karena adanya
pemanasan.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
38
Setelah itu sampel yang sudah dipotong-potong dimasukkan ke dalam
oven dengan suhu 400
C selama 2 hari. Penggunaan suhu 40 0
C dilakukan supaya
tidak merusak senyawa fenolik yang berpotensi sebagai antioksidan karena
senyawa fenolik mudah rusak oleh adanya panas.
Tujuan dilakukan pengeringan adalah supaya kandungan air yang
terdapat di dalam sampel dapat diuapkan sehingga mengurangi resiko terjadinya
kontaminasi dari pertumbuhan bakteri, jamur ataupun organisme lain karena air
merupakan salah satu media yang baik untuk pertumbuhan bakteri ataupun
organisme hidup lainnya dan lebih mudah untuk dibuat dalam proses
penyerbukan. Setelah kering herba yang sudah kering kemudian digiling dan
kemudian dijadikan serbuk dan hasil yang didapatkan setelah penyerbukan adalah
151,1 g serbuk kering, jadi rendemennya sebesar 3,513 %.
2. Ekstraksi
Serbuk kemudian ditimbang dan dibagi menjadi tujuh sehingga berat
masing- masing serbuk yang terbagi adalah 21,58 gram. Serbuk kemudian
dilakukan maserasi dengan menggunakan pelarut etanol. Alasan diguanakannya
pelarut etanol adalah sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh (Tevin, 2009)
yang menunjukkan bahwa aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode
DPPH dengan menggunakan pelarut etanol menunjukkan absorbansi yang lebih
rendah dibandingkan dengan menggunakan pelarut air. Selain itu, penggunaan
pelarut etanol bisa digunakan untuk mengambil senyawa polifenol yang terdapat
pada tanaman karena dengan penggunaan cairan etanol pada proses maserasi
dapat mengakibatkan enzim polifenil oksidase menjadi tidak aktif dan kemudian
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
39
senyawa polifenol akan keluar. Penggunaan pelarut etanol 70% yang digunakan
dalam proses ekstraksi dengan menggunakan metode maserasi dikarenakan
pelarut etanol 70% memiliki polaritas yang lebih tinggi dibandingkan dengan
etanol murni yaitu 99- 100 % sehingga senyawa aktif bioflavonoid akan lebih
banyak tertangkap pada konsetrasi etanol 70%. Etanol mudah memasuki ke dalam
membran sel untuk mengekstraksi bahan-bahan intraseluler dari dalam sel seperti
senyawa fenolik dan komponen organik lainnya ( Tiwari,et al, 2007).
Pada penelitian ini metode ekstraksi yang digunakan adalah maserasi
tidak menggunakan metode ekstraksi lain yang menggunakan proses pemanasan
seperti yang dilakukan dengan penyarian dengan alat Sokletasi, karena senyawa
polifenol merupakan senyawa yang bersifat termolabil sehingga bila digunakan
dengan penyarian menggunakan alat Sokletasi akan mengakibatkan rusaknya
senyawa polifenol yang akan didapatkan. Begitu juga dengan menggunakan
metode ekstrkasi dengan cara refluks, dan infundasi karena metode ini juga
menggunakan proses pemanasan. Metode perkolasi tidak digunakan dalam
penelitian ini karena metode ini memerlukan waktu yang cukup lama dan
digunakan cukup banyak pelarut yang akan digunakan, selain itu metode ini juga
hanya mendapatkan komponen yang diinginkan tidak terlalu banyak sehingga
dipilih dengan metode maserasi.
Maserasi dilakukan selama dua hari dan dilakukan pada suhu kamar,
tujuan dilakukannya ekstraksi dengan metode maserasi adalah untuk
mendapatkan senyawa polfenol yang terdapat dalam sel tanaman, metode
maserasi ini mengakibatkan dinding sel tumbuhan tersebut dapat pecah karena
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
40
terdapat gaya tekanan putar sehingga menyebabkan senyawa aktif bioflavonoid
yang merupakan metabolit sekunder dapat keluar dari dalam sel menuju ke cairan
pelarut. Pelarut etanol yang digunakan menyebabkan perbedaan tekanan osmotik
di dalam dan diluar sel sehingga air masuk ke dalam sel tumbuhan dan
menyebabkan zat aktif yang berada di dalam sel tumbuhan akan keluar, peristiwa
tersebut akan terus berulang hingga terjadi keseimbangan antara larutan didalam
sel dan didalam sel. Setelah dua hari perendaman kemudian untuk memisahkan
antara ampas dengan pelarut dengan menggunakan corong Buchner dengan
tujuan untuk memisahkan antara pelarut dengan serbuk, digunakan juga dengan
bantuan pompa vakum untuk mempermudah proses ekstraksi
Sampel diremaserasi kembali dengan menggunakan pelarut etanol 70%
selama dua hari dengan tujuan supaya jika masih ada metabolit sekunder yang
masih belum tersari saat dilakukan maserasi yang pertama diharapakan dapat
tersari pada maserasi yang kedua, kemudian setelah dua hari dipisahkan kembali
antara pelarut dan serbuk dan kemudian dicampur dengan hasil masearsi yang
pertama, selanjutnya untuk mendapatkan ekstrak etanolik yang kental digunakan
vaccum rotary evaporator yang berdasarkan prinsip kerjanya adalah berdasarkan
perbedaan dari titik didih sehingga dapat memisahkan secara baik antara etanol
dan zat filtrat. Selanjutnya, untuk filtrat yang sudah kental dikeringkan dengan
cara dipanaskan di atas penangas uap sekitar suhu 40- 500
C digunakan suhu tidak
terlalu tinggi dengan tujuan supaya tidak merusak senyawa fenolik yang bersifat
termolabil. Ekstrak diuapkan dengan penangas air sampai didapatkan bobot tetap,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
41
dari hasil itu didapatkan berat ekstrak etanolik kental sebesar 30,8629 g dengan
rendemen sebesar 20,425% dihitung dari serbuk kering yang diperoleh.
3. Fraksinasi
Setelah didapatkan ekstrak etanolik yang kental, dilanjutkan dengan
fraksinasi adapun tujuan dilkukannya fraksinasi adalah untuk mendapatkan
komponen senyawa spesifik yang akan dicari. Pada penelitian ini senyawa yang
dicari adalah senyawa fenolik yang terkandung dalam sel tanaman. Pelarut etanol
yang digunakan dalam proses maserasi selain melarutkan senyawa fenolik tetapi
selain itu juga dapat melarutkan senyawa organik lainnya yang tidak dikehendaki
seperti lipid, klorofil dan senyawa organik lainnya, oleh karena itu untuk
mendapatkan senyawa fenolik yang dituju perlu dilakukan fraksinasi.
Proses fraksinasi pada penelitian ini dilakukan dengan melarutkan
sampel dari hasil ekstraksi yang menghasilkan ekstrak kental etanolik dengan
menggunakan 300 ml air hangat dengan tujuan untuk melarutkan ekstrak etanolik
yang sudah didapatkan supaya dapat dilakukan ekstraksi cair-cair. Pada ekstraksi
cair-cair pada prinsipnya menggunakan dua macam pelarut yang berbeda yang
nantinya akan digojog sehingga diharapkan senyawa yang dituju dapat terambil
pada salah satu pelarut yang digunakan selama proses fraksinasi.
Setelah dilarutkan dengan air hangat, kemudian dilakukan fraksinasi
dengan menggunakan pelarut wasbensin yang bersifat non polar. Tujuan
dilakukan partisi dengan wasbensin adalah untuk menghilangkan senyawa non
polar seperti klorofil lipid, asam organik , karotenoid yang secara alami terdapat
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
42
dalam sel tanaman ( Dai, et al, 2010). Selanjutnya campuran antara air dan
wasbensin tersebut digojog dengan menggunakan corong pisah dengan tujuan
supaya senyawa nonpolar dapat tertarik dari ke dalam fase wasbensin. Fraksi
wasbensin berada di atas air hal tersebut disebabkan karena adanya perbedaan
dari berat jenis antara kedua pelarut yang digunakan dalam fraksinasi itu. Adapun
berat jenis untuk air 0,996 sedangkan berat jenis untuk wasbnesin adalah 0,730
(Anonim,1995). Fraksi air yang didapatkan kemudian digunakan kembali untuk
dilakukan fraksinasi lagi dengan menggunakan etil asetat sedangkan fase
wasbenin dibuang.
Proses fraksinasi pada penelitian dilakukan dengan 3 kali pemisahan
yaitu masing-masing 100 ml untuk setiap kali melakukan fraksinasi, hal ini
bertujuan supaya didapatkan hasil fraksinasi yang optimal karena menurut
hukum Nerst koefisen distribusi (KD) merupakan perbandingan antara zat terlarut
di dalam kedua pelarut yang tidak saling campur yang nantinya akan berpindah
karena terjadi kejenuhan dan berdistribusi ke salah satu pelarut karena perbedaan
kepolarannya, sehingga untuk mendapatkan hasil yang baik diperlukan beberapa
kali proses fraksinasi.
Setelah didapatkan fraksi air selanjutnya dilakukan fraksinasi lagi
dengan, menggunakan etil asetat, digunakan etil asetat karena penggunaan etil
asetat dapat adalm proses fraksinasi akan mengakibatkan senyawa –senyawa
aktif yang terdapat dalam sel tanaman dapat berpindah dari fase air menuju ke
faseetil asetat, senyawa aktif yang dapat larut ke dalam fase etil asetat yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
43
memiliki sifat semi-polar. Salah satu senyawa fenolik yang dapat tertarik masuk
ke dalam fraksi etil asetat adalah flavonoid.
Fraksinasi dengan menggunakan fraksi etil asetat juga untuk memisahkan
bentuk glikon (terikat dengan gula) dan aglikonnya (bentuk tidak terikat dengan
gula), sedangkan senyawa lain yang masuk ke dalam fraksi air adalah senyawa
fenolik yang bersifat polar dan dalam bentuk aglikon. Pada penelitian ini yang
diambil adalah fraksi dari etil asetat, dalam corong pisah fraksi etil asetat akan
berada di bagian bawah sedangkan fraksi air akan berada di bagian atas hal ini
disebabkan karena perbedaan dari berat jenis. Berat jenis untuk air adalah 0,996
sedangkan berat jenis untuk etil asetat adalah 0,898 (Anonim, 1995).
Setelah dilakukan pemisahan dengan menggunakan corong pisah
didapatkan fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air kemudian dipekatkan
dengan menggunakan vaccum rotary evaporator, setelah didapatkan ekstrak
kental fraksi etil asetat ekstrak etanolik setelah bobot tetap adalah 1,3043 g,
kemudian ekstrak kental disimpan di dalam desikator dengan ditutup aluminium
foil dengan tujuan supaya terhindar dari cahaya matahari secara langsung yang
dikhawatirkan dapat merusak senyawa fenolik yang berpotensi sebagai
antioksidan sehingga mempengaruhi hasil dalam penelitian.
D. Hasil Uji Pendahuluan
1. Uji pendahuluan kandungan senyawa fenolik total
Uji pendahuluan ini bertujuan untuk melihat ada atau tidaknya
kandungan senyawa fenolik yang terdapat pada fraksi etil asetat ekstrak etanolik
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
44
dari herba selada air. Uji pendahuluan yang digunakan pada penelitian ini
menggunakan metode yang digunakan adalah dengan metode Folin-Ciocalteu.
Metode ini akan mengakibatkan terjadinya reduksi dari ion fenolat dan
senyawa lain yang bisa tereduksi, sehingga akan terjadi perubahan warna menjadi
biru pada susana yang basa.
Pada uji pendahuluan ini untuk melihat adanya kandungan senyawa
fenolik yang terdapatr pada sampel, dilakukan tiga tabung yang berisi kontrol
positif, kontrol negatif dan sampel. Kontrol positif yang berisi reagen Folin-
Ciocalteu, larutan natrium karbonat 1M dan larutan pembanding asam galat
dengan konsentrasi 100 µg/ml, sedangkan kontrol negatif yang berisi reagen
Folin-Ciocalteu dan larutan natrium karbonat dan sampel yang berisi larutan
sampel dengan konsentrasi 500 µg/ml, selanjutnya ditambahkan dengan reagen
kontrol negatif yang berisi reagen Folin-Ciocalteu, larutan Na2CO3 dan larutan
metanol p.a. : air (1:1). Kemudian didiamkan selama 30 detik dan diamati
perubahan warna yang terjadi.
Gambar 4. Uji pendahuluan kandungan senyawa fenolik total
Keterangan : tabung A ( fraksi etil asetat + Folin-Ciocalteu + Na2CO3), tabung B (asam
galat + Folin-Ciocalteu + Na2CO3), tabung C ( Folin-Ciocalteu + Na2CO3)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
45
Setelah dilakukan pengamatan dapat dilihat bahwa terjadi perubahan
warna menjadi biru tua pada kontrol positif dan terjadi pula perubahan warna
menajdi biru yang terdapat pada larutan uji, tetapi tidak terjadi perubahan warna
pada kontrol negatif. Hal ini dapat disimpulkan bahwa sampel uji mengandung
senyawa fenolik yang dibuktikan dengan terajdinya perubahan warna menjadi biru
karena terjadi proses reduksi oleh reagen Folin-Ciocalteu pada suasana yang basa.
2.Uji pendahuluan aktivitas antioksidan
Uji pendahuluan ini bertujuan untuk melihat ada atau tidaknya aktivitas
antioksidan yang terdapat pada fraksi etil asetat ekstrak etanolik dari herba
selada air . Metode uji pendahuluan yang dilakukan pada penelitian ini termasuk
ke dalam metode kualitatif karena hanya dilakukan pengamatan. Uji pendahuluan
antioksidan akan memberika hasil positif yang ditandai dengan berubahnya warna
DPPH dari ungu tua menjadi kekuningan hal ini dapat disebabkan karena terjadi
penguarangan aktivitas dari radikal DPPH karena ditangkap oleh senyawa yang
berpotensi sebagai antioksidan sehingga terbentuk senyawa DPPH yang
tereduksi.
Pada uji ini disiapkan 3 tabung reaksi yang berisi kontrol positif yang
berisi larutan rutin dengan konsentrasi 20 µg/ml dan larutan DPPH dengan
konsentrasi 0,4 mM, kontrol negatif yang kemudian hanya berisi larutan DPPH
0,4 mM tanpa diberi larutan rutin dan sampel dan hanya ditambah dengan pelarut
metanol p.a. Kemudian untuk sampel yang berisi larutan DPPH dengan
konsentrasi 0,4 mM dan fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air
dengan konsentarsi 400 µg/ml.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
46
Gambar 5. Uji pendahuluan aktivitas antioksidan
Keterangan : tabung A ( DPPH + metanol p.a.), tabung B ( fraksi etil asetat
ekstrak etanolik + DPPH + metanol p.a. dan tabung C ( rutin + DPPH + metanol
p.a.)
Dari ketiga perlakuan tersebut dibandingkan warna ketiga larutan
tersebut setelah didiamkan selama 30 detik. Dari hasil percobaan didapatkan
bahwa terjadi perubahan warna untuk kontrol positif yaitu dari warna ungu
menjadi kuning begitu juga dengan larutan uji yang berisi sampel dan DPPH akan
tetapi tidak terjadi perubahan warna pada kontrol negatif yang berisi larutan
DPPH dan metanol p.a. kemudian dapat disimpulkan bahwa terdapat aktivitas
antioksidan yang terdapat dalam sampel yang ditunjukkan dengan terjadinya
perubahan warna menjadi kuning seperti yang terjadi pula pada kontrol positif.
E. Hasil Optimasi Penetapan Kandungan Fenolik Total
1. Penetapan Operating Time (OT)
Pada penelitian ini dilakukan Opertaing Time dengan tujuan untuk
mengetahui waktu reaksi yang optimal antara asam galat dengan reagen Folin-
Ciocalteu. Pengukuran OT dilakukan selama 40 menit dengan melakukan
pengukuran absorbansi setiap lima menit sekali. Pada penelitian ini digunakan tiga
konsentrasi dari asam galat yang berbeda, yaitu konsentrasi kecil, sedang dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
47
besar yang digunakan untuk menentukan OT. Pengukuran dilakukan pada panjang
gelombang maksimum,yaitu 760 nm.
Gambar 6. Penentuan Operating Time (OT) asam galat replikasi 2
Dari gambar 6 dapat dilihat bahwa pada menit ke dua puluh lima , semua
asam galat dengan konsentrasi yang berbeda yaitu 50, 75 , dan 100 µg/ml telah
bereaksi sempurna dengan reagen Folin-Ciocalteu pada suasana basa , hal ini
ditandai dengan absorbansi yang sudah mulai stabil pada menit ke 30, sehingga
dari data diatas dapat disimpulkan bahwa operating time untuk penentuan
kandungan asam galat dengan Folin-Ciocalteu adalah 30 menit.
2. Pengukuran panjang gelombang maksimum
Pengukuran panjang gelombang maksimum pada penelitian ini
dimaksudkan untuk menentukan panjang gelombang maksimum yang dapat
digunakan untuk pengukuran. Pengukuran panjang gelombang maksimum
dilakukan dengan melakukan scanning pada panjang gelombang 600- 800 nm.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
48
Dilakukan pada tiga konsentrasi dari asam galat yang berbeda yaitu konsentrasi
kecil, sedang dan tinggi. Pengukuran panjang gelombang maksimum dilakukan
setelah Operating Time (OT) supaya didapatkan serapan yang maksimal.
Tabel I. Penentuan panjang gelombang maksimum asam galat
Konsentrasi asam galat
( µg/ml)
Panjang
gelombang
maximum hasil
scanning
Panjang
gelombang
maximum rata-
rata
Panjang
gelombang
maximum
secara teoritis
50 761
748,6
760 nm 100 742
150 743
Dari tabel diatas setelah dilakukan penentuan panjang gelombang
maksimum dari ketiga konsentrasi dari asam galat, yaitu 50, 100, dan 150 µg/ml
didapatkan rata-rata dari hasil panjang gelombang maksimum yaitu sebesar 748,6
nm.
F. Hasil Penetapan Kandungan Senyawa Fenolik Total
Penetapan kandungan senyawa fenolik total pada penelitian kali ini
menggunakan metode Folin-Ciocalteu, dimana prinsipnya adalah dengan
melakukan reaksi oksidasi dan reduksi. Reagen Folin-Ciocalteu terdiri dari
campuran fosmolibdat dan fosfotungstat yang akan mengalami reaksi reduksi
sehingga akan menghasilkan warna biru yang terbentuk sebagai hasil dari
terbentuknya senyawa komples molybdenum blue. Senyawa fenolik akan
mengalami reaksi oksidasi pada suasana basa yang berasal dari larutan natrium
karbonat sehingga akan menghasilkan ion fenolat yang akan selanjutnya ion inilah
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
49
yang akan diukur sebagai senyawa fenol yang dapat diukur pada panjang
gelombang maksimum yang telah didapatkan, yaitu 748,6 nm.
Penelitian ini dilakukan penetapan kandungan fenolik total pada fraksi
etil asetat ekstrak etanolik karena peneliti ingin mengetahui hubungan aktivitas
antiokisdan dengan kandungan fenolik totalnya. Senyawa fenolik yang terdapat di
dalam tumbuhan termasuk salah satu senyawa golongan flavonoid yang
berpotensi sebagai antioksidan dengan mendonorkan ion hidrogennya pada gugus
hidroksilnya ketika berekasi dengan senyawa radikal melalui mekanisme transfer
elektron sehingga proses oksidasi dapat dihambat dan menyebabkan aktivitas
radikal bebas menjadi menurun.
Penentuan kandungan fenolik total pada sampel fraksi etil asetat ekstrak
etanolik herba selada air dengan metode Folin-Ciocalteu ditujukkan untuk
mengetahui kandungan kandungan fenolik total yang terdapat dalam sampel.
Kandungan fenolik total memiliki korelasi dengan aktivitas antioksidan, semakin
tinggi kandunagn fenolik total maka aktivitas antioksidannya akan semakin
meningkat sedangkan bila kandungan fenolik total dalam sampel rendah maka
aktivitas antiokisdannya akan semakin rendah pula ( Anesini, Ferarro, and Filip,
2008), Oleh karena itu dilakukan penelitian mengenai kandungan fenolik total
dalam sampel fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air.
Senyawa baku yang digunakan untuk menentukan kandungan fenolik
total mg ekivalen asam galat dilakukan dengan cara membuat kurva baku dengan
menggunakan asam galat, digunakan asam galat sebagai baku karena senyawa ini
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
50
merupakan senyawa fenolik yang biasa dipakai sebagai penetapan kandungan
fenolik total dengan metode Folin-Ciocalteu, selain itu asam galat mudah
didapatkan dan memiliki harga yang cukup murah .
COOH
OH
OH
HO
Gambar 7. Struktur asam galat
Tabel II. Tabel persamaan regresi linier dari baku asam galat
Replikasi Konsentrasi asam
galat ( µg/ml)
Absorbansi Persamaan regresi linier
1
50 0,313 A = 0,1096
B = 4,14.10-3
r = 0,9990
y = 4,14.10-3
x + 0,1906
75 0,420
100 0,535
125 0,619
150 0,731
2
49 0,329 A = 0,1038
B = 4,644.10-3
r = 0,9996
y = 4,644.10-3
x +0,1038
74 0,445
99 0,572
124 0,680
149 0,792
3
50 0,305 A = 0,0942
B = 4,268. 10-3
r =0,9995
y = 4,268.10-3
x +0,0942
75 0,412
100 0,528
125 0,631
150 0,729
Penetapan kandungan fenolik total didalam sampel diperoleh dengan
memasukkan absorbansi dari sampel yang kemudian dihitung menggunakan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
51
regresi linier dengan nilai r yang tertinggi yaitu pada replikasi 2 dengan nilai r
0,9996 dan persamaan regresi linier yang didapatkan adalah y = 4,644.10-3
x +
0,1038.
Tabel III. Tabel kandungan senyawa fenolik total fraksi etil asetat ekstrak
etanolik herba selada air
Sampel
(µg/ml)
Absorbansi Kandungan
fenolik
(µg/ml)
Kandungan
fenolik
total (mg
ekivalen
asam galat
per gram
fraksi)
Rata-
rata
( mg
ekivalen
asam
galat
per
gram
fraksi )
SD (%)
( mg
ekivalen
asam
galat
per
gram
fraksi)
500 0,401 63,996 6,390
6,463
0,066 500 0,407 65,288 6,520
510 0,411 66,149 6,480
Berdasarkan tabel dapat dilihat bahwa kandungan fenolik total (mg
ekivalen asam galat per gram fraksi) yang didapatkan dengan memasukkan nilai
absorbansi dari masing-masing sampel ke dalam persamaan regresi linier
didapatkan hasil perhitungan kandungan fenolik total untuk sampel 1 sebesar
6,390, sampel 2 sebesar 6,520 dan sampel 3 sebesar 6,480 dengan rata-rata dari
ketiga sampel tersebut sebesar 6,463 dengan SD sebesar 0,066 sehingga dapat
dapat diketahui bahwa nilai rata-rata untuk kandungan senyawa fenolik total
fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air adalah 6,463 ± 0,066 mg
ekivalen asam galat per gram fraksi .
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
52
G. Hasil Optimasi Penentuan Aktivitas Antioksidan
1. Penentuan Operating Time (OT).
Penentuan Operating Time (OT) bertujuan untuk mengetahui waktu
dimana sudah terjadi reaksi yang optimal antara DPPH dengan rutin ataupun
dengan fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air sehingga dapat
mengurangi kesalahan bias dalam penelitian ini pada saat pembuatan kurva baku .
Penentuan Operating Time (OT) pada penelitian ini ditandai dengan penurunan
absorbansi setiap satuan waktu yang menandakan jumlah DPPH yang tertangkap
oleh senyawa yang berpotensi sebagai antioksidan, jika penurunan dari absorbansi
sudah menunjukkan absorbansi yang cukup stabil menunjukkan bahwa waktu itu
sudah menunjukkan Operating Time (OT).
Penentuan Operating Time (OT) rutin dilakukan dengan cara
mengukur larutan rutin yang sudah direaksikan dengan DPPH dengan
konsentrasi larutan rutin sebesar 15 µg/ml, 20 µg/ml dan 25 µg/ml, begitu juga
dengan larutan uji yang sudah direaksikan dengan DPPH yaitu dengan
konsentarsi larutan farksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air sebesar 350
µg/ml , 400 µg/ml dan 450 µg/ml . Pengukuran Operating Time (OT) dilakukan
selama 60 menit dengan mengukur absorbansi baik dari baku rutin dan dari
sampel setiap 5 menit sekali. Pengukuran Operating Time (OT) menggunakan
panjang gelombang maksimum dari DPPH ,yaitu sebesar 517 nm.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
53
Gambar 8. Operating Time (OT) rutin replikasi 1
Gambar 9. Operating Time fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air
replikasi 3
Dari hasil penentuan Operating Time (OT) dapat ditentukan bahwa pada
menit ke -30 semua reaksi antara fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada
air dan larutan pembanding (rutin) dengan DPPH sudah berjalan dengan
sempurna pada konsentrasi kecil, sedang dan tinggi yang ditandai dengan
abosorbansi yang sudah mulai stabil. Hal ini dapat dilihat pada gambar 9 dan 10 ,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
54
sehingga dapat disimpulkan bahwa pada menit ke 30 merupakan Operating Time
untuk penentuan aktivitas antioksidan rutin dan fraksi etil asetat ekstrak etanolik
herba selada air.
2.Penentuan panjang gelombang maksimum
Penentuan panjang gelombang maksimum bertujuan untuk melihat
panjang gelombang dari larutan DPPH yang dapat memberikan hasil
pengukuran yang maksimal. Hasil dari penentuan panjang gelombang maksimum
digunakan untuk melakukan pengukuran terhadap kurva baku rutin dan sampel
dalam penentuan aktivitas antioksidan .
Pengukuran panjang gelombang maksimum dilakukan terhadap tiga
konsentrasi larutan DPPH yang berbeda, kemudian untuk menentukan panjang
gelombang maksimum dimabil rata-rata dari ketiga konsentrasi larutan DPPH
teresebut. Pengkuran dilakukan dengan melakukan scanning dari panjang
gelombang 400- 600 nm, adapun panjang gelombang maksimum DPPH secara
teoritis adalah 517 nm.
Tabel IV. Penentuan panjang gelombang maksimum DPPH
Konsentrasi larutan
DPPH
Hasil
scannning
pengukuran
panjang
gelombang
max larutan
DPPH
Rata –rata
panjang
gelombang
Panjang
gelombang
secara teoritis
0,02 Mm 515,5 nm
515,5 nm
517 nm 0,04 Mm 515,5 nm
0,08 Mm 515,5 nm
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
55
Dari hasil pengkuran ketiga konsentarsi larutan DPPH diperoleh bahwa
rata-rata panjang gelombang maksimum yang diperoleh adalah 515,5 nm.
H. Hasil Penenetuan Aktivitas Antioksidan
Pada penelitian ini uji aktivitas antioksidan dari senyawa baku rutin dan
fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air menggunakan metode DPPH.
Metode DPPH mengukur kemampuan penangkapan radikal bebas sehubungan
dengan kemampuan komponen senyawa yang menyumbangkan elektron atau
hidrogen. Setiap molekul yang dapat menyumbangkan elektron atau hidrogen
akan bereaksi dan memudarkan warna DPPH. Intensitas warna dari DPPH akan
berubah dari ungu menjadi kuning karena terbentuknya DPPH yang tereduksi oleh
elektron yang berasal dari senyawa yang bertindak sebagai antioksidan. Metode
DPPH dipilih karena metode ini lebih cepat, mudah dan praktis dibandingkan
dengan metode lain sehingga dipilih dengan menggunakan metode DPPH.
Reaksi antara DPPH dengan antioksidan
O2N
NO2
NO2
N N + DH O2N
NO2
NO2
N N + D
H
Gambar 10. Reaksi antara DPPH dengan antioksidan
Dari reaksi yang terjadi antara DPPH dengan senyawa antioksidan yang
dapat melepaskan atom hidrogennya terlihat bahwa bentuk DPPH yang tereduksi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
56
menjadi bentuk yang tidak bersifat radikal, karena elektron bebas yang terikat
pada atom nitrgen telah diambil oleh atom hidrogen yang dilepaskan sehingga
senyawa DPPH menjadi stabil. Senyawa DPPH merupakan senyawa organik
sintesis yang bersifat sangat tidak stabil. Senyawa DPPH telah digunakan sebagai
uji aktivitas antioksidan telah lama digunakan selama lebih dari lima puluh tahun
terakhir. Senyawa DPPH dapat digunakan untuk menangkap berbagai macam
senyawa yang berpotensi sebagai antioksidan yang terdapat di alam sebagai
contoh asam askorbat, asam amino sistein yang mengandung gugus tiol , senyawa
gugus amin aromatik ( p- fenil diamin), dan senyawa polihidroksi aromatik.
(Molyneux, 2004).
Penelitian ini menggunakan senyawa baku pembanding rutin untuk uji
aktivitas antioksidan fraksi etil asetat ekstrak etanolik dari herba selada air.
Digunakan pembanding rutin karena senyawa ini merupakan salah satu senyawa
golongan flavonoid yang dapat bertindak sebagai penanangkap radikal bebas .
Rutin dapat memberikan satu atom hidrogennya ke molekul DPPH yang bersifat
sangat tidak stabil sehingga akan terjadi reduksi dari senyawa DPPH yang akan
berakibat turunnya aktivitas dari senyawa radikal bebas itu sendiri.
O
OH
HO
O
O
Rhamoglikosida
OH
OH
Gambar 11. Struktur kimia rutin
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
57
Mekanisme penghambatan radikal bebas oleh senyawa rutin :
O
OH
HO
O
O
Rhamoglikosida
OH
O H R
O
OH
HO
O
O
Rhamoglikosida
OH
O
+ RH
O
OH
HO
O
O
Rhamoglikosida
OH
O
OH
HO
O
O
Rhamoglikosida
OH
OO
O
OH
HO
O
O
Rhamoglikosida
OH
O
OH
HO
O
O
Rhamoglikosida
OH
OO
(Rollando, 2012).
Gambar 12. Mekanisme penghambatan DPPH oleh rutin
Dari mekanisme reaksi yang terjadi antara rutin dengan DPPH dapat
dilihat bahwa senyawa rutin dengan gugus hidroksinya memberikan atom
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
58
hidrogennya kepada radikal bebas DPPH yang mempunyai satu pasang elektron
bebas, kemudian senyawa rutin akan menerima elektron bebas yang berasal dari
senyawa DPPH yang selanjutnya akan terjadi resonansi elektron pada cincin
benzena rutin, sehingga aktivitas radikal dari DPPH akan menurun yang ditandai
dengan berubahnya warna DPPH dari ungu menjadi kuning.
Aktivitas antioksidan diperoleh dari nilai absorbansi yang selanjutnya
akan digunakan untuk menghitung persentase inhibisi 50% (IC50) yang
menyatakan konsentrasi dari senyawa yang mampu menyebabkan 50% dari
DPPH akan mengalami proses reduksi dilihat dari terjadinya penurunan
absorbansi . Semakin kuat suatu senyawa berpotensi sebagai antioksidan, maka
akan semakin kecil nilai dari IC50 yang akan didapatkan karena semakin kecil pula
konsentarsi yang dibutuhkan untuk menurunkan aktivitas dari DPPH.
Gambar 13. Kurva aktivitas antioksidan rutin replikasi 3
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
59
Gambar 14. Kurva aktivitas antioksidan fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air
replikasi 2
Tabel V. Perhitungan persamaan regresi linier %IC dengan baku rutin
Replikasi
Konsentrasi
Rutin (
µg/ml)
Absorbansi
Aktivitas
antioksidan (
%IC)
Persamaan Regresi
Linier
1
14,4 0,552 33,413 A = 0,4742
B = 2,2874
r = 0,9994
y = 2,2874x +0,4742
16,9 0,504 39,203
19,4 0,456 44,993
21,9 0,409 50,066
24,4 0,360 56,574
2
15 0,548 33,975 A = 4,3608
B = 1,9903
r = 0,9991
y = 1,9903x+ 4,3608
17,5 0,505 39,156
20 0,460 44,578
22,5 0,420 49,397
25 0,384 53,734
3
15 0,536 35,421 A = 10,9876
B = 1,6337
r = 0,9996
y = 1,6337x+ 10,9876
17,5 0,501 39,638
20 0,466 43,855
22,5 0,436 47,469
25 0,399 51,927
Tabel VI. Perhitungan persamaan regresi linier %IC dengan baku fraksi etil asetat ekstrak
etanolik herba selada air
Replikasi Konsentrasi
Fraksi etil
Asetat
(µg/ml)
Absorbansi Aktivitas
antioksidan
(% IC)
Persamaan regresi linier
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
60
1 344,75 0,551 33,614 A = - 37,312
B = 0,2043
r = 0,9937
y = 0,2043x- 37,312
369,75 0,511 38,433
394,75 0,476 42,650
419,75 0,437 47,349
444,75 0,376 54,698
2 350 0,554 33,172 A = - 34,9576
B = 0,1949
r = 0,9993
y = 0,1949x – 34,9576
375 0,513 38,118
400 0,469 43,425
425 0,435 47,527
450 0,391 52,834
3 350 0,553 33,453 A = - 35,524
B = 0,1959
r = 0,9982
y = 0,1959x- 35,524
375 0,517 37,785
400 0,481 42,117
425 0,432 48,014
450 0,392 52,827
Tabel VII. Tabel nilai IC50 rutin dan fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air
Bahan uji IC50 ( µg/ml) Rata-
Rata
(µg/ml)
SD
(%)
% CV
(%) Rep 1 Rep 2 Rep 3
Rutin 21,651 22,930 23,879 22,820 1,118 4,899
Fraksi etil asetat 427,371 435,903 438,809 434,402 5,945 1,368
Berdasarkan persamaan regresi linier kemudian memasukkan fungsi y
dengan angka 50 kemudian didapatkan nilai IC50 dari aktivitas antioksidan kurva
baku dari rutin dan fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air dengan
metode DPPH, diperoleh nilai IC50 rutin adalah 22,820 ± 1,118 µg/ml sedangkan
untuk fraksi etil asetat diperoleh nilai IC50 sebesar 434,402 ±5,945 µg/ml.
Berdasarkan nilai IC50 yang didapatkan bahwa aktivitas antiokisdan rutin lebih
kuat dibandingkan dengan rutin, kemudian kekuatan aktivitas antioksidan dilihat
nilai IC50 yang diperoleh dapat diketahui bahwa aktivitas antioksidan dari rutin
sangat kuat karena nilai IC50 berada di bawah 50 µg/ml, sedangkan aktivitas
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
61
antioksidan dari fraksi etil asetat adalah kuat karena nilai IC50 berada diantara
kisaran 50- 100 µg/ml.
Tabel VIII. Tingkat kekuatan antioksidan
Sampel
IC50 (
µg/ml)
Tingkat aktivitas antioksidan
Sangat
kuat ( < 50
µg/ml)
Kuat (50-
100
µg/ml)
Sedang
(101- 150
µg/ml)
Lemah (>
150 µg/ml)
Rutin 22,820 V
Fraksi etil
asetat
434,402 V
(Ariyanto, 2006).
Setelah itu dilakukan pengujian statistika dengan Program R untuk uji
normalitas data dari IC50 rutin dengan fraksi etil asetat dengan menggunakan
metode uji Shapiro -Wilk. Pengujian normalitas data diperlukan untuk
menentukan parameterik uji yang akan digunakan selanjutnya, jika hasil statistik
yang diperoleh berdistribusi normal maka uji yang akan dilakukan adalah
parametrik, bila hasil yang diperoleh tidak berdistribusi normal maka dilakukan
uji parametrik. Dari hasil pengujian didapatkan nilai p-value untuk uji normalitas
data IC50 rutin adalah 0,4175 dan fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air
adalah 0,8371, karena nilai p-value IC50 rutin dan fraksi etil asetat ekstrak etanolik
herba selada air diatas 0,05 maka HO diterima sehingga dapat disimpulkan bahwa
data IC50 rutin dan fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air terdistribusi
normal.
Uji selanjutnya adalah dilakukan uji T tidak berpasangan yang
merupakan salah satu uji parametrik. Uji ini dilakukan untuk melihat apakah
terdapat perbedaan antara IC50 rutin dengan fraksi etil asetat, dari hasil pengujian
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
62
Didapatkan nilai p- value lebih kecil dari 0,05. Dengan demikian, kesimpulan
statistika yang dapat diambil adalah Ho ditolak dan H1 diterima sehingga IC50
antara rutin dan fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air adalah berbeda.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
63
BAB V
KESIMPULAN dan SARAN
A. Kesimpulan
1. Kandungan senyawa fenolik total fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada
air adalah (6,463±0,066 ) mg ekivalen asam galat per gram fraksi etil asetat.
2. Hasil aktivitas antioksidan dari rutin yang dinyatakan dengan IC50 adalah
(22,820±1,118)µg/ml dan fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air adalah
(434,402±5,945) µg/ml.
B. Saran
Perlu dilakukan pengukuran aktivitas antioksidan dan penentuan
kandungan senyawa fenolik total dengan menggunakan fraksi air ekstrak etanolik
herba selada air.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
64
DAFTAR PUSTAKA
Anesini, C., Ferarro ,G.E., and Filip, R, 2008, Total Polyphenol Content and
Antioxidant Capacity of Commercially Available Tea (Camellia sinensis)
in Argentina, J. Agric. Food Chem, 56, 9225–9229.
Anonim,2002 ,http://www.hukor.depkes.go.id/up_prod_kepmenkes/KMK%20
No.%201407%20ttg%20Pedoman%20Pengendalian%20Dampak%20Pen
cemaran%20Udara.pdf,hal3,diakses tanggal 11 April 2013.
Anonim, 2013, http://www.itis.gov/ servlet/SingleRpt/SingleRpt?search_
topic=TSN&search_value=23255 , diakses tanggal 4 Agustus 2013.
Agustiningsih., Wildan, A., dan Mindaningsih, 2010, Optimasi Cairan Penyari
Pada Pembuatan Ekstrak Daun Pandan Wangi ( Pandanus amaryllifous
Roxb) Secara Maserasi Terhadap Kadar Fenolik dan Flavonoid Total,
Momentum,6, 36-41.
Ariyanto., 2006, Uji Aktivitas Antioksidan , Penentuan Kandungan Fenolik dan
Fraksi Air Ekstrak Metanolik Pegagan (Centella asiatica L. Urban) ,
Skripsi, 68, Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Cairns, D., 2004, Intisari Kimia Farmasi, 2th
ed, , EGC, Jakarta, pp. 175-176.
Chandra, B., 2006, Ilmu Kedoteran Pencegahan dan Komunitas ,Penerbit buku
kedokteran EGC, Jakarta, pp.78,79 .
Corwin, E. J., 2008, Buku Saku Patofisiologi, 3th
, Penerbit buku kedokteran
EGC, Jakarta, pp. 33.
Dai, J., and Mumper,R.J, 2010, Plant Phenolics: Extraction, Analysis and Their
Antioxidant and Anticancer Properties, Molecules,15, 7314-7335.
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995, Farmakope
Indonesia, jilid IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Ersam, T., 2004, Keunggulan Biodiversitas Hutan Tropika Indonesia Dalam
Merekayasa Model Molekul Alami, Seminar Nasional Kimia VI, Jurusan
Kimia Institut Teknologi Surabaya, Surabaya.
Frank, B,. S dan Cleon W., R., 1995, Fisiologi Tumbuhan , ITB, Bandung, pp.
145.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
65
Fessenden, R. J., and Fessenden,J.S, 1992, Kimia Organik, 3th
ed., Erlangga,
Jakarta , pp. 223- 224.
Harmita., 2004, Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya,
Majalah Ilmu Kefarmasian, 1, 117-135.
Hendaryono, D., dan Wijayani, A, 1994, Teknik Kultur Jaringan, Kanisius,
Yogyakarta, pp. 135.
Hemingway, R.W., and Laks, P.E, 1992, Plant Polyphenols Synthesis, Properties,
Significance, Plenum Press, New York, pp. 264.
Ide, P., 2008, Dark Chocolate Healing, PT Elex Media Komputindo , Jakarta, pp.
105.
Ismail , J., Runtuwene, M.R.J., and Fatimah , F, 2010, Penentuan Total Fenolik
dan Uji Aktivitas Antioksidan Pada Biji dan Kulit Buah Pinang Yaki
( Areca vestiara Giseke),Jurnal Ilmiah Sains ,12 ,84-87.
Khoddami, A., Wilkes, M.A.,and Roberts, T.H, 2013,Technique for Analysis of
PlantPhenolicCompound,Molecules,18, 2328-2375.
Makkar, H. P.S, 2003, Quantification of Tannins in Tree and Shrub Foliage,
Kluwer Academic Publisher, Dordrecht, pp. 4.
Marks, D.B., Marks, A.D., and Smith,C.M,1996, Biokimia Kedokteran
Dasar:Sebuah Pendekatan Klinis, EGC, Jakarta, pp. 325-326.
Mazandarani,M., Momeji, A., and Moghaddam, P.Z, 2012, Evaluation of
phytochemical and antioxidant activities from different parts of
Nasturtium officinale R. Br. in Mazandaran, Iranian Journal of Plant
Physiology , 3 , 659-664.
Molyneux. P., 2004, The Use of The Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl
(DPPH) for Estimating Antioxidant Activity, Songklanakarin J. Sci.
Technol, 2006, 211-219.
Ozen, T., 2009, Investigation of Antioxidant Properties of Nasturtium officinale
(Watercress) Leaf Extracts, Acta Poloniae Pharmaceutica-Drug
Research , 66, 187-193.
Pilar, S., Tamara,S., Pablo,S., and Maria,E.S, 2011, Antioxidant Properties of
Brassica Vegetables, Functional Plant Science and Biotechnology,5, 43-
55.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
66
Prabantini, D., 2010, A to Z Makanan Pendamping ASI, 1 th
ed., Andi,
Yogyakarta, pp. 68.
Race, S., 2009, Antioxidants, Tigmor Books, United Kingdom, pp. 7-10.
Rollando., 2012, Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan Radikal 1,1 –Difenil -
2-Pikril Hidrazil (DPPH) dan Penetapan Kandungan Fenolik Total Fraksi
Air Ekstrak Metanol Daun Sirih ( Piper betle L.), Skripsi,68, Universitas
Sanata Dharma, Yogyakarta.
Seidemann, J ., 2005, World Spice Plants Economic Usage, Botany,Taxonomy,
European Union, Berlin, pp. 250
Silalahi, J., 2006, Makanan Fungsional ,1th
ed.,48-53, Kanisius, Yogyakarta. pp.
48-53.
Smith, E.C., 2007, Watercress (Nasturtium officinale) Production Utilizing Brook
Trout (Salvelinus fontinalis) Flow-through Aquaculture Effluent,Tesis,
14-20, Department of Agriculture Morgantown, West Virginia.
Sumardjono, D., 2006, Pengantar Kimia : Buku Panduan Kuliah Mahasiswa
Kedokteran dan Program Strata 1 Fakultas Bioeksakta, Penerbit buku
kedoteran EGC, Jakarta , pp.614.
Tiwari, P.,Kumar, B., Kaur, M., Kaur,G., and Kaur, H, 2011, Phytochemical
screening and Extraction: A Review, International Pharmaceutica
Sciencia, 1, 98-104.
Thipyapong, P., Stout, M .J., and Attajarusit, J, 2007, Functional Analysis of
Polyphenol Oxidases by Antisense/Sense Technology, Molecules, 12,
1569- 1595.
Widyaningsih,W., 2010, Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak etanol Daun Dewa
( Gynura procumbens) Dengan Menggunakan Metode DPPH ( 1,1 –
difenil-2-pikrilhidrazil), Skripsi, 109-104, Fakultas Farmasi, Universitas
Ahmad Dahlan, Yogyakarta.
Widyastuti, Niken., 2010, Pengukuran Aktivitas Antioksidan Dengan Metode
CUPRAC, DPPH, dan FRAP Serta Korelasinya Dengan Fenol dan
Flavonoid Pada Enam Tanaman, Skripsi, Departemen Kimia IPB, 5-6,
Bogor.
Winarsi, H., 2007, Antioksidan Alami dan Radikal Bebas,1 th
, Kanisius,
Yogyakarta, pp. 77, 79-81,190, 191.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
67
Wirakusumah, E.R., 2007, Jus Buah dan Sayuran, 1th
ed., Penebar Swadaya,
Depok, pp.60.
Youngson, R., 2003, Antioksidan: Manfaat Vitamin C dan E Bagi Kesehatan, 1th,
Penerbit Arcan , Jakarta, pp. 19.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
68
LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Determinasi Tanaman
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
69
Lampiran 2. Gambar Selada Air (Nasturtium officinale R.Br)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
70
Lampiran 3. Perhitungan Rendemen Uji Aktivitas Antioksidan
a. Rendemen ekstrak etanolik
Penimbangan
Cawan 1
(g)
Cawan 2
(g)
Cawan 3
(g)
Cawan 4
(g)
Cawan 5
(g)
Cawan 6
(g)
Bobot
cawan
48,8154 57,3122 59,4113 58,6043 29,7053 40,059
Bobot
cawan +
ekstrak
52,5199 62,7035 65,3319 64,4294 32,9566 44,8291
Bobot
ekstrak
5,7045 5,3913 5,9206 5,8251 3,2513 4,7701
Total
bobot
ekstrak
30,8629 g
Bobot herba selada air segar yang digunakan = 4300 g
Rendemen ekstrak etanol = ( Total berat ekstrak etanolik/Berat herba selada air
segar) x 100%
= (30,8629 g /4300 g) x 100%
= 0,7177 %
b. Rendemen fraksi etil asetat
Penimbangan
Bobot cawan = 59,4113 g
Bobot cawan + fraksi = 60,7156 g
Bobot fraksi = 1,3043 g
Rendemen fraksi etil asetat = (Berat fraksi etil asetat/berat herba) x 100%
= (13043 g/4300 g) x 100%
= 0,0303%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
71
Lampiran 4. Data Penimbangan Uji Aktivitas Antioksidan
a. Penimbangan DPPH
Replikasi 1 (g) Replikasi 2 (g) Replikasi 3 (g)
Berat kertas 0,3113 0,3044 0,3768
Berat kertas + DPPH 0,3130 0,3061 0,3785
Berat kertas + sisa 0,3115 0,3045 0,3629
Berat DPPH 0,0015 0,0016 0,0156
b. Penimbangan rutin
Replikasi 1 (g) Replikasi 2 (g) Replikasi 3 (g)
Berat kertas 0,3250 0,3458 0,3358
Berat kertas + rutin 0,3279 0,3487 0,3387
Berat kertas + sisa 0,3274 0,3483 0,3383
Berat rutin 0,0024 0,0025 0,0025
c. Penimbangan fraksi etil asetat
Replikasi 1 (g) Replikasi 2 (g) Replikasi 3 (g)
Berat cawan 48,8155 57,3136 40,057
Berat cawan +
fraksi
48,8358 57,3339 40,0773
Berat cawan + sisa 48,8352
57,3336 40,077
Berat fraksi 0,0197 0,02 0,02
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
72
Lampiran 5. Data Konsentrasi Uji Aktivitas Antioksidan
a. Konsentrasi larutan DPPH
Rep 1
BM = 394,32
Mol = (massa/BM) = (15,0 mg/394,33) = 0,0380 mmol
M = ( mol/volume) = (0,0380 mmol/0,1 L) = 0,380 mM
Rep 2
BM = 394,32
Mol = (massa/BM) = (16,0 mg/394,32) = 0,0405 mM
M = ( mol/volume) = (0,0405 mmol/0,1L) = 0,405 mM
Rep 3
BM = ( massa/BM) = (15,6 mg/394,32) = 0,0395 mM
M = (mol/volume) = (0,0395 mM/0,1 L) = 0,395 mM
Konsentrasi larutan induk rutin
Replikasi 1 Replikasi 2
(2,4 mg/10 ml) = 240 µg/ml ( 2,5 mg/10 ml) = 250 g/ml
Replikasi 3
( 2,5 mg/10 ml) = 250 µg/ml
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
73
b. Konsentrasi seri baku rutin
Replikasi Konsentrasi (µg/ml)
Seri baku
1
Seri baku
2
Seri baku
3
Seri baku
4
Seri baku
5
1 14,4 16,9 19,4 21,9 24,4
2 15 17,5 20 22,5 25
3 15 17,5 20 22,5 25
c. Konsentrasi larutan induk fraksi etil asetat
Replikasi 1 Replikasi 2
19,7 mg/10 ml = 1970 µg/ml 20 mg/10 ml = 2000 µg/ml
Replikasi 3
20 mg/10 ml = 2000 µg/ml
Konsentrasi seri baku fraksi etil asetat
Replikasi Konsentrasi (µg/ml)
Seri baku
1
Seri baku
2
Seri baku
3
Seri baku
3
Seri baku
4
1 344,75 369.75 394,75 419,75 444,75
2 350 375 400 425 450
3 350 375 400 425 450
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
74
Lampiran 6. Penentuan Operating Time (OT) Rutin
a. Penentuan OT rutin rep 1
Waktu
(menit)
Absorbansi
15 µg/ml 20 µg/ml 25 µg/ml
5 0,626 0,558 0452
10 0,601 0,478 0,387
15 0,580 0,61 0,374
20 0,565 0,456 0,365
25 0,554 0,451 0,363
30 0,545 0,450 0,360
35 0,540 0,446 0,359
40 0,535 0,446 0,360
45 0,530 0,447 0,360
50 0,525 0,447 0,360
55 0,523 0,446 0,360
60 0,519 0,446 0,360
OT yang diperoleh adalah 30 menit
b. Penentuan OT rutin rep 2
Waktu
(menit)
Absorbansi
15 µg/ml 20 µg/ml 25 µg/ml
5 0,653 0,495 0,461
10 0,623 0,435 0,402
15 0,607 0,423 0,383
20 0,599 0,417 0,375
25 0,591 0,415 0,370
30 0,587 0,414 0,365
35 0,583 0,414 0,359
40 0,582 0,414 0,359
45 0,581 0,414 0,359
50 0,579 0,413 0,358
55 0,578 0,412 0,359
60 0,576 0,414 0,358
OT yang diperoleh adalah 30 menit
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
75
c. Penentuan OT rutin rep 3
Waktu (menit) Absorbansi
15 µg/ml 20 µg/ml 25 µg/ml
5 0,618 0,380 0,365
10 0,552 0,366 0,342
15 0,538 0,359 0,329
20 0,531 0,355 0,322
25 0,528 0,353 0,317
30 0,524 0,351 0,314
35 0,521 0,353 0,312
40 0,521 0,353 0,310
45 0,522 0,353 0,310
50 0,522 0,354 0,308
55 0,522 0,353 0,308
60 0,520 0,354 0,308
OT yang diperoleh adalah 30 menit
Jadi dari ke 3 replikasi penentuan OT rutin didapatkan hasil 30 menit.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
76
Lampiran 7. Penentuan Operating Time (OT) Fraksi Etil Asetat
a. Penentuan OT fraksi etil asetat rep 1
Waktu (menit) Absorbansi
350 µg/ml 400 µg/ml 450 µg/ml
5 0655 0,569 0,472
10 0,600 0,521 0,412
15 0,592 0,501 0,386
20 0,583 0,490 0,370
25 0,577 0,480 0,357
30 0,571 0,474 0,347
35 0,568 0,468 0,339
40 0,565 0,464 0,331
45 0,562 0,459 0,325
50 0,561 0,455 0,319
55 0,559 0,452 0,313
60 0,557 0,451 0,308
OT yang diperoleh adalah 30 menit
b. Penentuan OT fraksi etil asetat rep 2
Waktu (menit) Absorbansi
350 µg/ml 400 µg/ml 450 µg/ml
5 0,668 0,583 0,487
10 0,616 0,522 0,407
15 0,599 0,504 0,378
20 0,589 0,493 0,359
25 0,582 0,485 0,345
30 0,575 0,479 0,333
35 0,571 0,479 0,332
40 0,568 0,473 0,331
45 0,566 0,469 0,331
50 0,564 0,465 0,331
55 0,562 0,463 0,330
60 0,561 0,460 0,330
OT yang diperoleh adalah 30 menit
c. Penentuan OT fraksi etil asetat rep 3
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
77
Waktu (menit) Absorbansi
350 µg/ml 400 µg/ml 450 µg/ml
5 0,622 0,535 0,524
10 0,579 0,499 0,416
15 0,562 0,487 0,388
20 0,551 0,482 0,368
25 0,541 0,477 0,353
30 0,534 0,472 0,340
35 0,528 0,471 0,339
40 0,524 0,472 0,339
45 0,517 0,473 0,338
50 0,514 0,471 0,337
55 0,512 0,471 0,337
60 0,509 0,471 0,336
OT yang didapat adalah 30 menit
Dari ke-3 replikasi didapatkan OT fraksi etil asetat adalah 30 menit.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
78
Lampiran 8. Panjang Gelombang Maksimum DPPH
a. DPPH 0,02 mM
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
79
b. DPPH 0,04 mM
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
80
c. DPPH 0,08 mM
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
81
Lampiran 9. Scanning Penentuan Aktivitas Antioksidan
a. Scanning rutin
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
82
b. Scanning fraksi etil asetat ekstrak etanolik selada air
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
83
c. Scanning metanol
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
84
Lampiran 10. Perhitungan Nilai % IC Dari Rutin
Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3
Konsentra
si Rutin
( µg/ml)
Absorbans
i
Konsentra
si Rutin
(µg/ml)
Absorbans
i
Konsentra
si Rutin
( µg/ml)
Abosrbans
i
14,4 0,552 15 0.548 15 0,536
16,9 0,504 17,5 0.505 17,5 0,501
19,4 0,456 20 0.460 20 0,466
21,9 0,409 22,5 0.420 22,5 0,436
24,4 0,360 25 0.384 25 0,399
Persamaan regresi
linier
A = 0,8279
B = -0,01916
r = 0,999984
y = -0,01916x +0,8279
Persamaan regresi linier
A = 0,7938
B = -0,01652
r = 0,9991
y = -0,01652x +0,7938
Persamaan regresi linier
A = 0,7388
B = -0,01356
r = 0,99960
y = -0,01356x +0,7388
Absorbansi
kontrol :
0,829
Absorbansi kontrol :
0,830
Absorbansi kontrol :
0,830
% IC = (Absorbansi DPPH- Absorbansi sampel)/Absorbansi DPPH x 100%
Perhitungan IC rutin rep 1
Persamaan regresi linier
y = 2,2874x +0,4742
konsentrasi 14,4 µg/ml
% IC = ( 0,829 – 0,552)/0,829 x 100%
= 33,413 %
konsentrasi 16,9 µg/ml
% IC = ( 0,829 – 0,504)/0,829 x 100%
= 39,203 %
konsentrasi 19,4 µg/ml
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
85
% IC = (0,829 – 0,456)/0,829 x 100%
= 44,993 %
konsentrasi 21,9 µg/ml
% IC = (0,829 – 0,409)/0,829 x 100%
= 50,663 %
konsentrasi 24,4 µg/ml
% IC = (0,829 – 0,360)/0,829 x 100%
= 56,574 %
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
86
Lampiran 11. Perhitungan % IC Fraksi Etil Asetat
Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3
Konsentrasi
fraksi etil
asetat
( µg/ml)
Absorbansi Konsentrasi
fraksi etil
asetat
(µg/ml)
Absorbansi Konsentrasi
fraksi etil
asetat
(µg/ml)
Absorbansi
344,75 0,551 350 0,554 350 0,553
369,75 0,511 375 0,513 375 0,517
394,75 0,476 400 0,469 400 0,481
419,75 0,437 425 0,435 425 0,432
444,75 0,376 450 0,391 450 0,392
Persamaan regresi linier
A = 1,1396
B = 0,001696
r = 0,9937
y = 0,001696x +1,1369
Persamaan regresi linier
A = 0,9236
B = 0,001128
r = 0,9993
y = 0,001128x +0,9236
Persamaan regresi linier
A = 1,1262
B = 0,001628
r = 0,9982
y = 0,001628x + 1,1262
% IC = (Absorbansi DPPH- Absorbansi sampel)/Absorbansi DPPH x 100%
Perhitungan IC fraksi etil asetat
Persamaan regresi linier
y = 0,1949x – 34,9576
konsentrasi 350 µg/ml
% IC = (0,829 – 0,554)/0,829 x 100%
= 33,172 %
konsentrasi 375 µg/ml
% IC = (0,829 –0,513)/0,829 x 100%
= 38,118 %
konsentrasi 400 µg/ml
% IC = (0,829 –0,469)/0,829 x 100%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
87
= 43,425 %
konsentrasi 425 µg/ml
% IC = (0,829 – 0,435)/0,829 x 100%
= 47,527 %
konsentrasi 450 µg/ml
% IC = (0,829 – 0,391) /0,829 x 100%
= 52,834 %
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
88
Lampiran 12. Perhitungan Nilai IC50 Rutin
Aktivitas antioksidan rutin
Replikasi
Konsentrasi
rutin
( µg/ml)
Absorbansi
Aktivitas
antioksidan
( % IC)
Persamaan regresi
linier
1
14,4 0,552 33,413 A = 0,4742
B = 2,2874
r = 0,9994
y = 2.2874x -0.4742
16,9 0,504 39,203
19,4 0,456 44,993
21,9 0,409 50,066
24,4 0,360 56,574
2
15 0,548 33,975 A = 4,3608
B = 1,9903
r = 0,9991
y = 1,9903x+ 4,3608
17,5 0,505 39,156
20 0,460 44,578
22,5 0,420 49,397
25 0,384 53,734
3
15 0,536 35,421 A = 10,9876
B = 1,6337
r = 0,.9996
y = 1,6337x+
10,9876
17,5 0,501 39,638
20 0,466 43,855
22,5 0,436 47,469
25 0,399 51,927
Pada replikasi 1 didapatkan persamaan regresi linier
y = 2,2874x + 0,4742
50 = 2,2874x + 0,4742
49,5258 = 2,2874x
x = 21,651, sehingga didapatkan IC 50 sebesar 21,651 µg/ml
Pada replikasi 2 didapatkan persamaan regresi linier
y = 1,9903x + 4,3608
50 = 1,9903x + 4,3608
45,6392 = 1,9903x
x = 22,930, sehingga didapatkan IC50 sebesar 22,930 µg/ml
Pada replikasi 3 didapatkan persamaan regresi linier
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
89
y = 1,6337x + 10,9876
50 = 1,6337x + 10,9876
39,0124 = 1,6337x
x = 23,449, sehingga didapatkan nilai IC50 sebesar 23,879 µg/ml
Dari perhitungan ketiga IC50 rutin didapatkan rata-rata sebesar 22,820 µg/ml
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
90
Lampiran 13. Perhitungan Nilai IC50 Fraksi Etil Asetat
Replikasi
Konsentrasi
Fraksi etil
Asetat (µg/ml)
Absorbansi
Aktivitas
antioksidan
(% IC)
Persamaan regresi
linier
1 344,75 0,551 33,614 A = - 37,312
B = 0,2043
r = 0,9937
y = 0,2043x- 37,312
369,75 0,511 38,433
394,75 0,476 42,650
419,75 0,437 47,349
444,75 0,376 54,698
2 350 0,554 33,172 A = - 34,9576
B = 0,1949
r = 0,9993
y = 0,1949x –
34,9576
375 0,513 38,118
400 0,469 43,425
425 0,435 47,527
450 0,391 52,834
3 350 0,553 33,453 A = - 35,524
B = 0,1959
r = 0,9982
y = 0,1959x- 35,524
375 0,517 37,785
400 0,481 42,117
425 0,432 48,014
450 0,392 52,827
Pada replikasi 1 didapatkan persamaan regresi linier
y = 0,2043x – 37,312
50 = 0,2043x – 37,312
87,312 = 0,2043x
x = 427,371, sehingga didapatkan nilai IC50 sebesar 427,371 µg/ml
Pada replikasi 2 didapatkan persmaan regresi linier
y = 0,1949x – 34,9576
50 = 0,1949x -34,9576
84,9576 = 0,1949x
x = 435,903, sehingga didapatkan nilai IC50 sebesar 435,903 µg/ml
Pada replikasi 3 didapatkan persamaan regresi linier
y = 0,1959x – 35,524
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
91
50 = 0,1949x – 35,524
85,524 = 0,1949x
x = 438,809, sehingga didapatkan nilai IC50 sebesar 438,809 µg/ml
Dari ketiga nilai IC50 yang didapatkan nilai rata-rata sebesar 434,402 µg/ml
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
92
Lampiran 14. Penimbangan Untuk Uji Kandungan Fenolik Total
1. Penimbangan asam galat
Replikasi 1 (g) Replikasi 2 (g) Replikasi 3 (g)
Berat kertas 0,3156 0,3345 0,3479
Berat kertas +
asam galat
0,3258 0,3447 0,3581
Berat kertas +
sisa
0,3158 0,3349 0,3481
Berat asam
galat
0,0100 0,0098 0,0100
2. Penimbangan fraksi etil asetat
Replikasi 1 (g) Replikasi 2 (g) Replikasi 3 (g)
Berat cawan 48,658 49,987 58,654
Berat cawan +
fraksi
48,66310 49,992 58,659
Berat fraksi 0,0050 0,0050 0,0051
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
93
Lampiran 15. Optimasi Penetapan Kandungan Fenolik Total
a. Operating Time rep 1
Waktu (menit) Absorbansi
50 µg/ml 100 µg/ml 150 µg/ml
5 0,302 0,443 0,687
10 0,316 0,463 0,724
15 0,326 0,476 0,750
20 0,331 0,484 0,767
25 0,335 0,492 0,777
30 0,335 0,496 0,786
35 0,336 0,499 0,791
40 0,337 0,502 0,796
Operating time yang didapat adalah 30 menit
b. Operating Time rep 2
Waktu (menit) Absorbansi
50 µg/ml 100 µg/ml 150 µg/ml
5 0,261 0,461 0,674
10 0,282 0,487 0,712
15 0,295 0,502 0,737
20 0,305 0,512 0,754
25 0,312 0,520 0,766
30 0,317 0,526 0,775
35 0,321 0,530 0,781
40 0,324 0,533 0,785
Operating time yang didapat adalah 30 menit
c. Operating Time rep 3
Waktu (menit) Absorbansi
50 µg/ml 100 µg/ml 150 µg/ml
5 0,284 0,470 0,693
10 0,300 0,497 0,731
15 0,307 0,512 0,756
20 0,313 0,523 0,772
25 0,319 0,531 0,786
30 0,322 0,537 0,797
35 0,324 0,541 0,807
40 0,326 0,545 0,814
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
94
Lampiran 16. Panjang Gelombang Maksimum Asam Galat
a. Asam galat 50 µg/ml
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
95
b. Asam galat 100 µg/ml
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
96
c. Asam Galat 150 µg/ml
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
97
Lampiran 17. Scanning Penentuan Kandungan Fenolik Total
a.Scanning metanol : air (1:1)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
98
b.Scanning asam galat
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
99
c. Scanning fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
100
Lampiran 18 . Penentuan Kandungan Senyawa Fenolik Total
Persamaan regresi linier yang digunakan
y = 4,644.10-3
x +0,1038
Sampel 1
Berat sampel = 5,0 mg
Absorbansi = 0,401
0,401 = 4,644.10-3
x +0,1038
0,2972 = 4,644.10-3
x
X = 63,996 µg/ml
Kandungan fenolik total
X.( v /m) = 0,0639. (0,5 ml/0,0050 g) = 6,390 mg ekivalen asam galat per
gram fraksi
Sampel 2
Berat sampel = 5,0 mg
Absorbansi = 0,407
0,407 = 4,644.10-3
x +0.1038
0,3032 = 4,644.10-3
x
X = 65,288 µg/ml
Kandungan fenolik total
X. (v/m) = 0,0652.(0,5 ml/0,0050g) = 6,520 mg ekivalen asam galat per
gram fraksi
Sampel 3
Berat sampel = 5,1 mg
Absorbansi = 0,411
0,411 = 4,644.10-3
x +0,1038
0,3072 = 4,644.10-3
x
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
101
X = 66,149 µg/ml
Kandungan fenolik total
X.(v/m) = 0,0661.(0,5 ml/0,0051 g) = 6,480 mg ekivalen asam galat per gram
fraksi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
102
Lampiran 19. Uji Statistika Dengan Program R
a. Uji normalitas data
b.Uji T tidak berpasangan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
103
BIOGRAFI PENULIS
Penulis skripsi berjudul “ Penetapan Kandungan
Fenolik Total dan Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi
Etil Asetat Ekstrak Etanolik Herba Selada Air
(Nasturtium officinale R. Br) Dengan Menggunakan
Metode DPPH” memiliki nama lengkap Jap Yulius
Billy Soegianto ini merupakan anak dari pasangan
Soegianto Karsono dan M.I Lily Budihardja dilahirkan
di Semarang pada tanggal 27 Juli 1991. Pendidikan formal yang penulis jalani
adalah di TK SD Kristen Debora Banjarnegara, pendidikan Sekolah Dasar di SD
Kristen Debora Banjarnegara, pendidikan Sekolah Menengah Pertama di SMP N
1 Banjarnegara dan pendidikan Sekolah Menengah Atas SMA Santo Mikael
Yogyakarta dan pada tahun 2009 penulis melanjutkan pendidikan Perguruan
Tinggi di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakrta. Selama
mengikuti kuliah di fakultas farmasi Universitas Sanata Dharma pernah
mengikuti volunteer dalam pelaksanaan Kampanye Informasi Obat pada bulan
November 2012.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI