ARL 03.10.2008
Parasites opportunistes?
Marie-Lise Tritten-Arber ARL 3 octobre 2008
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• Dientamoeba fragilis
• Blastocystis hominis
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Dientamoeba fragilis • Microorganisme amiboïde • Sa pathogénicité divise encore le cercle
des cliniciens • Évidences cliniques justifient de
rechercher de signaler et éventuellement de traiter ce parasite
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D. fragilis: historique
• «Amibe» décrite en 1918 par Jepps et Dobell
• Isolée de patients atteints de diarrhées chroniques et de dysentérie
• Pas de phase kystique observée → considérés comme hôtes aberrants
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Pathogénicité? • Pas de modèle animal capable
d’abriter le cycle de vie de ce microorganisme tout en développant des symptômes cliniques
• Études biologiques détaillées manquent • Recours à l’«evidence based medicine»
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Taxonomie • Le nom fait référence à sa forme
typique binucléée et à sa tendance à dégénérer très rapidement après excrétion
• Classé actuellement dans la classe des Trichomonadea (flagellés)
• Une seule espèce du genre Dientamoeba décrite jusqu’ici
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Morphologie • Trophozoïtes de forme arrondie et de
tailles diverses (3-22 µm), pseudopodes hyalin
• Nécessité d’une coloration permanente, hématoxyline ferrique ou éventuellement Giemsa pour visualiser les noyaux
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• Typiquement présence de 2 noyaux à chromatine fragmentée, sans chromatine périphérique
• Présence de plusieurs vacuoles contenant des débris divers
• Pas de forme kystique
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Cycle • Colonise la muqueuse du gros intestin
sans l’envahir • Multiplication par fission binaire dans le
gros intestin • Une fois excrétés les trophozoïtes se
dégradent très rapidement
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Mode de transmission • Peu clair, vu l’absence de phase
kystique certaine jusqu’à présent • Probablement oro-fécale • Transmission possible (?) via des oeufs
d’helminthes (Enterobius vermicularis)
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Cycle
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Clinique de l’infection
Problématique • Souvent associé à d’autres pathogènes • Présent parfois chez des sujets
asymptomatiques
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Symptomatologie • Douleurs abdominales • Diarrhée, souvent chronique ou
intermittentes, pouvant s’étendre sur de longues périodes
• Vomissements • fatigue
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Epidémiologie • Distribution géographique mondiale • Prévalences très variable • Influence probable de la densité de
population et du niveau d’hygiène • Probablement plus fréquent chez les
enfants
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Épidémiologie • Grandes variations entre les diverses
études de la proportion de porteurs asymptomatiques
• Possible de différences de pathogénicité entre les variants génétiques
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Diagnostic • Nécessité d’examiner plus d’un échantillon • Selle très fraîche ou immédiatement fixée au
SAF • Examen direct sans lugol, présence de
formes réfringentes +/- arrondies de taille variable (« artefacts »)
• Trophozoïtes ne sont le plus souvent pas retrouvés à la concentration
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ARL 03.10.2008 Clin.Microbiol.Rev.17:553-570
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Colorations Examen microscopique après
coloration permanente de selles fixées: • Hématoxyline ferrique • Coloration au trichrome • Giemsa après fixation au méthanol (ne
permet pas la détection de la fragmentation typique des noyaux)
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• Présence de trophozoïtes binucléés, chromatine fragmentée
• Vacuoles • Les formes mononuclées juste après la
division peuvent être confondues avec Endolimax nana
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ARL 03.10.2008 UKNEQAS teaching sheet mars 2008
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Problématique générale • Pas de modèle animal pratique • Association fréquente à d’autres
pathogènes • Détection fastidieuse (coloration
permanente) • Symptomatologie commune à
beaucoup d’autres pathogène • Existence de porteurs asymptomatiques
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Biologie moléculaire
• En plein développement
• Utilisable pour le génotypage
• Utilisable pour le diagnostic (PCR en temps réel
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Génotypage
• Existe-t-il des variations génétiques au sein de l’espèce ? (variants pathogènes et non pathogènes)
• Analyse par PCR et ribotyping (rflp) à partir de cultures de Dientamoeba isolés des selles
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Étude anglaise (Johnson J. et al JCM, dec 2000, p 4653-4654)
• Mise en évidence de 2 variants génétiquement différents
• Divergence comparable à celle observée entre E.histolytica et E dispar
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Étude hollandaise (R. Peek et al JCM Feb 2004 631-635),
• Variants de pathogénicité différente? • PCR directe sur les selles, ribotyping,
séquençage • Différents groupes: enfants,adultes,
voyageurs, avec ou sans symptômes • Génotype 1 seul mis en évidence.
Nécessité d’étudier d’éventuelles variation dans d’autres gène potentiellement impliqués dans la pathogénicité
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Étude australienne (D. Stark et al JCM, Jun 2005, P 2718-2723)
• Étude prospective de prévalence génotypage et signification clinique
• Analyse de tous les échantillons reçus pour investigation de diarrhée + un groupe contrôle sans symptômes
• Tous ont le même profil rflp, idem étude hollandaise précédente.
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Etude hollandaise
(Bart A. et al JCM 2008, acepté pour publication),
• Étude d’une région variable du rRNA (région ITS-1/5.8S/ITS-2)
• Mise en évidence de différentes souches de D fragilis
• Cette région variable pourrait servir d’outil épidémiologique pour étudier la transmission,le distribution géographique et d’éventuelles différences de pathogénicité du parasite
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Diagnostic moléculaire • Mise a point d’une PCR en temps réel
sur des extraits de selles fraîchement émises (D Stark et al JCM, Jan 2006,p232-235), méthode rapide, spécifique, plus sensible que la microscopie et que la PCR traditionnelle
• Inconvénient: plus cher que la microscopie
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Importance de la charge parastaire?
• PCR en temps réel semi-quantitative (D.van Middelkoop et al , poster ECCMID 2008) permettra d’étudier l’importance de la charge surtout chez les enfants
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Dans notre laboratoire • Dientamoeba fragilis est le 6 ou 7 ème
parasite en importance de détection selon les années
• Largement derrière B. hominis, E. nana et G. lamblia mais comparable à Entamoeba histolytica/dispar
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Traitement
(Cf Medical Letter) • Iodoquinol = premier choix • Paromomycine • Tetracycline • Metronidazole
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Conclusion • D. fragilis n’est pas un parasite
opportuniste • Pathogénicité encore pas
complètement élucidée et très discutée, recherches en cours
• Vaut la peine d’être signalé
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Recommandation du UKNEQAS
Effectuer une coloration permanente directe de toutes les selles liquides sanguinolentes, ou semi-formées présentant du mucus ou du sang. • Information sur l’exsudat • Confirmation du diagnostic des trophozoïtes • Détection des parasites manqués à l’examen
direct ou absents à la concentration (D. fragilis)
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Blastocystis hominis • Micro-organisme décrit en 1911 par A.
Alexeieff • Classé au cours des années dans les
flagellés, les levures les protozoaires et les stramenopiles
• Parasite intestinal le plus communément observé
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• Existence d’au moins deux groupes (evt. 4) distincts sérologiquement
• Etudes en cours pour savoir s’il s’agit d’espèces différentes et si des différences de pathogénicité existent
• L’étude du génome montre qu’il pourrait y avoir jusqu’à 12 différentes espèces
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Morphologie
• Dans les selles sous sa forme «kystique» avec une «vacuole» centrale
• Taille très variable de 6 à 40µm • Se développe en forme granulaire et
amiboïde
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Cycle
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• Distribution géographique mondiale • Portage asymptomatique fréquent • Incidence élevée dans les selles
envoyées pour une recherche parasitologique
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Clinique • Diarrhées • Douleurs abdominales, crampes,
flatulences • Nausées • Fièvre
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• Symptômes plus prononcés chez les patients affaiblis par d’autres maladies sous-jacentes principalement chez les immunodéprimés
• La forme amiboïde observée en culture semble liée à la pathogénicité
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Diagnostic • Détectables facilement à l’examen
direct et après concentrations avec les méthodes classiques.
• Colorations permanentes • semi quantification souhaitable • Au moins 3 selles devraient être
négatives pour d’autres parasites ou bactéries avant d’attribuer les symptômes à B hominis
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Traitement (Cf Medical Letter) • Controversé • Metronidazole (R existent) • Iodoquinol • Trimethoprime-Sulfamethoxazole • Nitazoxanid
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Conclusion • Parasite fréquent • Probablement opportuniste • A signaler semi-quantitativement
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Merci de votre attention