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Família Família EnterobacteriaceaeEnterobacteriaceae((EnterobactériasEnterobactérias))
Prof. Adj. Ary Fernandes JuniorDepartamento de Microbiologia e Imunologia
Instituto de Biociências – UNESPTel. 14 [email protected]
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Bactérias Gram negativas
Cocos
Neisseria meningitidis,
N. gonorrhoeae
Cocobacilos
Haemophylus influenza , Pasteurella,
Brucella, Bordetella pertussis.
Bacilos
VíbriosCampylobacter jejuni,
Vibrio cholerae
Lactose +
Rapidos fermentadores da lactose
Klebsiella, E. coli, Enterobacter
Fermentam lactose lentamente
Citrobacter, Serratia, outros
Lactose -
Oxidase -
Oxidase +
Shigella, Salmonella, Proteus, Yersinia e
outros
Pseudomonas, Acinetobacter.
Oxidase -Enterobactérias
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-+
Lactose + Lactose -
-ShigellaSalmonellaProteusProvidênciaMorganellaYersinia
+EscherichiaKlebsiellaEnterobacterSerratia
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Família Enterobacteriaceae
Patógenos primários
Organismos capazes de causar
doenças sempre
Patógenos oportunistas
Organismos que podem causar doenças
em determinadas condições ou em
(mais de 25 gêneros, centenas de espécies e subespécies e milhares de sorotipos)
(Diferenciados por: Propriedades bioquímicas, estruturas antigênicas e hibridização e sequenciamento de ácidos nuclêicos)
Shigella
Salmonella
Yersinia
Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Proteus
Serratia
Enterobacter
Morganella
Providencia
doenças sempre em determinadas condições ou em
alguns hospedeiros
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TESTES\ESPÉCIESEscherichia
coliSalmonella
Shigella
dysenteriae
Shigella
sonnei
Klebsiella
pneumoniae
Klebsiella
rhinoscleromatis
Enterobacter
cloacae
Enterobacter
aerogenes
Hafnia
spp.
Serratia
marcescens
Proteus
vulgaris
Proteus
mirabilis
GLICOSE GÁS + + - - + + + + + d + +
ARABINOSE + + + + + + + - - -
LACTOSE +* D - (+) + - + + - - - -
MALTOSE + + +- +- + + + + + + + -
MANITOL + + - + + + + + + + - -
SORBITOL + + + + + + - - - -
SACAROSE d - - (+) + + + + -x + + (+)
TREALOSE + + + + + + + + (+) +
CITRATO - + - - + - + + + + +- +(+)
MALONATO - D - - + + d + +- - - -
VERMELHO DE METILA + + + + - + - - - - + +
DIFERENCIAÇÃO BIOQUÍMICA DE ENTEROBACTÉRIAS
VOGES-PROSKAUER - - - - + - + + + D d d
REDUÇÃO DE NITRATO + + + + + + + + + + + +
HIDRÓLISE DE GELATINA - D - - (d) (d) (+) ((+)) - + + +
PRODUÇÃO H2S - + - - - - - - - - + +
INDOL + - d - d d - - - - + -
LISINA + + - - - - - + + + d d
UREASE - - - - - - (d) (d) - - + +
FENILALANINA - - - - - - - - - - + +
MOTILIDADE +- + - - - - + + + + + +
D = diferentes reações em diferentes espécies de um gênerod = diferentes reações em diferentes isolados(d) = diferentes reações em diferentes isolados tardiamenteX = reações tardias e irregularmente positivas (mutantes)(+) = reações tardias, mas sempre positivas((+)) = liquefação muito lenta Fonte: Manual BERGEY 8ª edição)
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� Maior (e mais variado) grupo de bacilos Gram negativos
Enterobacteriaceae
� Microbiologia clínica (± 20 espécies � 95% das infecções)(± 20 espécies � 95% das infecções)
35% das septicemias, 70% das ITUs, infecções gastrintestinais, meningite.
� Habitat: São ubiquitários (solo, água, vegetação, microbiota do trato intestinal de animais e homem)
(coliformes termotolerantes)
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Sítios de infecções com membros da família listados em ordem de prevalência
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� Origem das doenças por Enterobactérias
-Reservatório animal (Salmonella, Yersinia)-Carreador humano (Shigella, Salmonella Typhi)-Transmissão endógena (E. coli) (ou veiculada)
Enterobacteriaceae
� Doenças em animais de produção e estimaçãoSepsis, diarréias e meningites em recém nascidos até processos como mastites, abortos, infecções
urogenitais.
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�Bacilos Gram negativos (0,3 a 1 x 1 a 6 µm)
Características Gerais
Escherichia coli. (Ann C. Smith, University of Maryland, College Park, MD)
Klebsiella pneumoniae (Ann C. Smith, University of Maryland, College Park, MD)
�Não esporulados
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�Maioria possui flagelo (peritríquios) (exceções Klebsiella, Shigella, Yersinia e alguns sorotipos de salmonelas
(Salmonella Gallinarum e S. Pullorum)
???
Características Gerais
�Todas reduzem nitratos a nitritosO teste é revelado
através da adição de 3 gotas do reativo de
Griess A com 3 gotas do reativo de Griss B no
caldo nitrato
???
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�São oxidase negativas
?
Características Gerais
Escherichia coli. (Ann C. Smith, University of Maryland, College Park, MD)
Pseudomonas aeruginosa (Ann C. Smith, University of Maryland, College Park, MD)
Oxidação do Citocromo C pelo O2
Para fenilenodiamina é oxidado pela enzima adquirindo cor vermelha
Pseudomonas (+), Enterobactérias (-)
�Catalase positivas
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Características Gerais
�Fermentação Ácida Mista:(Vermelho metila - VM) (Shigella, E. coli)Ácidopirúvico�Ácidos orgânicos (succínico, lático, fórmico, acetato,
etc) (em alguns casos CO2 + H2)
�Todas fermentam glicose (dextrose)
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Características Gerais
�Fermentação Butilenoglicólica:(Voges Proskauer-VP) (Enterobacter,
Klebsiella)Ácido pirúvico� Acetoína �1,3-Butilenoglicol
1
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�Sensíveis a luz solar, dessecação,
�Quimio-organotróficos �FermentacãoRespiracão aeróbia
(Facultativos) Respiracão anaeróbia
Características Gerais
�Sensíveis a luz solar, dessecação, pasteurização e desinfetantes
�Morfologia da colônia no Agar Sangue é de pouco valor pois são colônias muito parecidas
(exceto Klebsiella - Mucóide)
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Klebsiella pneumoniaeAgar Sangue
E. coliAgar Sangue e MacConkey
�Meios diferenciais e seletivos ���� Avaliação inicial(MacConkey, XLD (XILOSE LISINA DESOXICOLATO),
Hoektoen Entérico (HE)
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Lactose (-)
Lactose (-)
(Meio Cromogênico)(E. coli/coliformes em alimentos e
água)
HardyCHROM™ SS, First and Only Chromogenic Media for both Salmonella
and Shigella
Obs. Todos os meios para isolamento de enterobactérias permitem a identificação de Salmonella, Shigella ou ambas.
(Porém normalmente utiliza-se de meios de enriquecimento)
Lactose (-)
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E. coli
(Eosin Methilen Blue - EMB)
Ágar Hoektoen (HE)
E. coliE. coli
Salmonella Enteritidis
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Meio de Salmonella-Shigella ( SS)
Meio de XLD(XILOSE LISINA DESOXICOLATO)
Proteus sp
Salmonella
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Estrutura antigênica das Enterobactérias100 tipos
85 tipos
>170 tipos
Fimbria
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Lipídeo A
Polissacarídeo
(Polissacarídeo O)
(Core)
Bacilo Gramnegativo
Membrana externa com lipopolissacarídeo (LPS)
(Endotoxina-Fator de Virulência das Gram negativas)
Peptideoglicano
Composição de uma unidade de LPS
Lipídeo A (Parte tóxica)
Manifestações sistêmicas das infecções por Gram negativas: Ativa o complemento, liberação de citocinas, leucocitose, trombocitopenia,
coagulação intravascular disseminada (CID), febre, diminuição da circulação periférica, choque e morte.
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-Lipopolissacarídeo (LPS) ���� Produção de febre (resposta pirogênica);alterações vasculares e ação direta nas reações de hipersensibilidade nãoespecífica.
Fatores de Virulência
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Fatores de Virulência
Genes dos fatores de virulência� Plasmídeos ou cromossomos (ilhas de patogenicidade)
-Fímbrias (Adesinas): Variadas (ex. Tipo 1 é a mais comum) e com especificidade para algumas hospedeiros.
E.coli � K88-Leitões, K99-Bezerros, CFAI e CFAII-Humanos)
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-Sistemas de secreção de enzimas hidrolíticas e proteínas de patogenicidade (T1SS, T2SS, T3SS, T4SS, T5SS e T6SS)
(Yersinia, Salmonella, Shigella, EPEC)
Obs: São 6 tiposOs tipos I e IV
Bactérias G(+) e G(-)
Fatores de Virulência
Os tipos II, III, V e VI -Bactérias G(-)
Na ausência do T3SSa bactéria perde sua
virulência
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A. Esquema do sistema de secreção tipo III, aqui apresentado com dois anéis atravessando a membrana e a agulhasurgindo da superficie da bactéria. As proteinas efetoras e translocadoras estão estocadas. B. Esquema do SSTTem operação. As proteinas translocadoras formam um poro na membrana da célula alvo e as proteinas efetoras sãotranslocadas para o citosol da célula alvo. C. Microscopia eletrônica da superficie de bactéria com agulhas doSSTT. Baseado, com modificações, em Troisfontaines P. and Cornelis G. R., Physiology, 20:326-339, 2005
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-Sideróforos (ex. enterobactina e aerobactina) e Hemolisinas
Fatores de Virulência
Enterobactina de E. coli
Hemolisinas (α e β)
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Fatores de Virulência
-Variação de fase antigênica: Antígenos capsulares K eflagelares H estão sob controle genético do micro-organismo epodem ser expressos alternadamente (variação de fase)Isto protege a bactéria da morte mediada pelo anticorpo.
-Produção de bacteriocinas �Colicinas, Marcescina.
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-Exotoxinas
Exemplos: Enterotoxinas (LT e ST) de um sorotipo de E.coli
(ETEC): secreção de água e cloretos e inibe reabsorção de sódio � Diarréia aquosa
Fatores de Virulência
Klebsiella pneumoniae – Algumas cepas podem produzir doenças no aparelhos intestinal (enterotoxinas), respiratório e genital em animais) (Ex. Metrites em equinos).
Shigella dysenteriae � Exotoxina � Ação de enterotoxina e neurotoxina.
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Comensal � Comum na microbiota do cólon e importante para funcionamento normal do intestino.
�Espécie mais importante e mais versátilOutras espécies: Escherichia hermannii, E. vulneris,
E. blattae, E. fergusonii.
Escherichia coli (Theodor Von Escherich (1885)Atualmente 200 sorotipos
para funcionamento normal do intestino.
(Presença na água indica contaminação fecal)
Oportunista � Patógeno potencial para humanos (inúmeras doenças) e para quase todas as espécies animais.
Existem tipos de E.coli especializadas � Patotipos
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�CaracterísticasColônia seca, rosa (lactose positiva) com área
rosa ao redor quando crescida em MacConkey
Escherichia coli
E. coli
K. pneumoniae
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TESTES\ESPÉCIESEscherichia
coliSalmonella
Shigella
dysenteriae
Shigella
sonnei
Klebsiella
pneumoniae
Klebsiella
rhinoscleromatis
Enterobacter
cloacae
Enterobacter
aerogenes
Hafnia
spp.
Serratia
marcescens
Proteus
vulgaris
Proteus
mirabilis
GLICOSE GÁS + + - - + + + + + d + +
ARABINOSE + + + + + + + - - -
LACTOSE +* D - (+) + - + + - - - -
MALTOSE + + +- +- + + + + + + + -
MANITOL + + - + + + + + + + - -
SORBITOL + + + + + + - - - -
SACAROSE d - - (+) + + + + -x + + (+)
TREALOSE + + + + + + + + (+) +
CITRATO - + - - + - + + + + +- +(+)
MALONATO - D - - + + d + +- - - -
VERMELHO DE METILA + + + + - + - - - - + +
DIFERENCIAÇÃO BIOQUÍMICA DE ENTEROBACTÉRIAS
IMVIC (+ + - -)
VOGES-PROSKAUER - - - - + - + + + D d d
REDUÇÃO DE NITRATO + + + + + + + + + + + +
HIDRÓLISE DE GELATINA - D - - (d) (d) (+) ((+)) - + + +
PRODUÇÃO H2S - + - - - - - - - - + +
INDOL + - d - d d - - - - + -
LISINA + + - - - - - + + + d d
UREASE - - - - - - (d) (d) - - + +
FENILALANINA - - - - - - - - - - + +
MOTILIDADE +- + - - - - + + + + + +
D = diferentes reações em diferentes espécies de um gênerod = diferentes reações em diferentes isolados(d) = diferentes reações em diferentes isolados tardiamenteX = reações tardias e irregularmente positivas (mutantes)(+) = reações tardias, mas sempre positivas((+)) = liquefação muito lenta Fonte: Manual BERGEY 8ª edição)
IMVIC (+ + - -)
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� Infecções - Série de patogênias (Colibaciloses)
Animais jovens são mais susceptíveis à colibacilose entérica (bezerros com < de 10 dias, cordeiros com < de 2
semanas, leitões neonatos ou logo após o desmame)
Septicemias, Mastite, Abortamentos, Endometrite, Cistite,
Escherichia coli
� Infecções gastrintestinais ���� Diferentes Patotipos
Septicemias, Mastite, Abortamentos, Endometrite, Cistite, Nefrite, Artrite, Osteomielite, Endocardite, Pneumonia,
Conjuntivite, Salpingite em aves,
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(ETEC – Enterotoxigênica E. coli) (UPEC-Uropatogênica E. coli)E. coli comensal
Plasmídeos Ilhas de patogenicidade
Outras E. coli
-APEC-NMEC, -STEC, etc
Ahmed ety al. Nature Reviews Microbiology 6, 387-394 (May 2008)
A absorção de elementos genéticos móveis (fagos, plasmídeos de virulência, ilhas de patogenicidade), e perda de porções de DNA-cromossômico em linhagens distintas de E. coli, possibilitou surgimento de clones
de diferentes patotipos de E. coli associados a sintomas de doenças específicas. LEE - locus of enterocyte effacement; PAIs - pathogenicity island; pEAF - enteropathogenic E. coli adhesion
factor plasmid; pENT- enterotoxin-encoding plasmids; Stx - Shiga-toxin-encoding bacteriophage.
(EIEC – Enteroinvasiva E. coli)(EPEC – Enteropatogênica E. coli)
(EHEC – Enterohemorrágica E. coli)(atualmente quando só phage StxФ é STEC)
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Enterotoxigênica (ETEC) - (diarréia do viajante)Aderem a enterócitos do intestino delgado e induzir diarréia aquosa
pela secreção das enterotoxinas termo-lábeis (LTI e LtII)(imunogênicas e relacionada com a toxina colérica) e termo-estáveis(STa e STb) (não imunogênica).
-desidratação
Obs. ETEC ���� Colibaciloses entérica em bezerros (menos de 1 semana de idade) e leitões;Sorotipos importantes � O8, O9 e O101.
LT ST
-acidose metabólica-morte
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Enteropatogênica (EPEC) - Lactentes e crianças; surtos em berçários de hospitais e creches; fezes com muco mais sem sangue
Aderem aos enterócitos do intestino delgado e destroem a arquitetura das microvilosidades, induzindo a formação de lesões do tipo attaching/effacing. Desarranjos do citoesqueleto
são acompanhados por uma resposta inflamatória e diarréia. 1-Aderência inicial,2-Translocação de proteína utilizando sistema de secreção do tipo III,3-Formação pedestal
EPEC ocorre em bezerros de 2 dias a 4 meses de idade e determinam deficiência na absorção e digestão
Lesões (vilosidades) similares ocorrem em suínos, cordeiros e cães;
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Enteroagregativa (EAEC) - Adere ao epitélio do intestino delgado e grosso em um biofilme espesso e elabora citotoxinas e enterotoxinas secretoras� Diarréia aquosa persistente (por mais de duas semanas).
Não está devidamente esclarecida a importância destes microrganismos nas infecções nos animais;
Duas enterotoxinas termoestável:-EAST-I, semelhante à STa de ETEC, que promoveaumento do GMP cíclico intracelular;
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Enterohemorrágica (EHEC) ����(hoje STEC = Shiga Toxing-producing E. coli) (sorotipo 0157:H7)
Diarréia hemorrágica (cólon����colite) e síndrome hemolítico-urêmica (SHU). Induzem a lesão do tipo attaching and effacing
Toxina de Shiga (Stx) � Absorção sistêmica � complicações fatais
Propagação da doença � Alimentosex. carne moída crua, leite cru, verduras
cruas contaminadas.cruas contaminadas.
-Bovinos perderam o receptor Gb3 para a Stx no endotélio de seus vasos
-Lesão vascular característica da doença edematosa dos suínos (frequentemente fatal em
leitões desmamados)
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Enteroinvasiva (EIEC) - Invade a célula epitelial do cólon (plasmídeoipaH), lisa o fagossomo e se move através das células por nucleaçãomicrofilamentos de actina. Produz disenteria (diarréia aquosa comsangue) devido a invasão e destruição da mucosa intestinalNÃO fermenta a lactose; identificados através de sondas de DNA
São bioquimicamente e sorologicamentesemelhantes à Shigella (que tambémnão fermenta lactose)não fermenta lactose);
Colibacilose dos pintinhos
Causam colite erosiva hemorrágica
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E. coli Diarreiogênicas
• EPEC
• ETEC
– O55:H6, O111:H2, O86:H34
– O6:H16, O128:H7, O149:H10
Categoria Sorotipos
• ETEC
• EIEC
• EHEC
• EAEC
– O6:H16, O128:H7, O149:H10
– O29:H-, O124:H30, O144:H-
– O26:H6, O157:H7, O113:H21
– O44:H18, O111:H12, O127:H2
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Ex. ETECEx. ETEC
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Mastite por E. coli
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COLISEPTICEMIA
-Pode ocorrer em estágios terminais de animais que sofrem
de colibacilose entérica por cepas invasivas;
-Patogênese não elucidada � Endotoxina desempenha um
papel importante;
- Sorotipos em animais são O78:K80 em bovinos, leitões- Sorotipos em animais são O78:K80 em bovinos, leitões
O26 e O165, aves O1, O2 e O78:K80.
Fala-se em APEC (Avian pathogenic E. coli)
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�Salmoneloses em humanos e animais ruminantes - bovinos de 4 a 6 semanas
(Trato gastrintestinal e Sepses)(Doença democrática� Mundo todo)
Salmonella
Lagartos, cobras, aves � comumente infectados
(assintomáticos)
�Codex Alimentarius � Ausência de Salmonella em 25 gr daamostra analisada;
�Os alimentos de origem animal continuam a ser os principaisresponsáveis pela infecção humana, entre eles, a carne deaves, ovos e derivados.
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Nomenclatura do gênero Salmonella
�Genéticamente são duas espécies apenas com
�Grupo grande e complexo de organismos; agrupados por antígenos O, H e Vi (de
virulência)
�Genéticamente são duas espécies apenas com cerca de 2501 sorotipos (sorovares) com
especificidade para alguns animais)
(doenças do tipo gastrintestinais e sepses)
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Nomenclatura do gênero Salmonella
Espécie Sub-Espécie Sorotipo Sorogrupo Enterica Enterica (I) Paratyphi A
A
Typhimurium Paratyphi B Bredeney
B
Choleraesuis Montevideo Oranienburg Paratyphi C
C1
Newport
C2
Typhi Enteritidis Gallinarum
D
(1478)Bovinos,Suínos,Ovinos, Outros
Suínos
Humanos (parece ser
susceptível a todos os sorotipos)
Várias espécies animais
Antigamente:
Salmonella typhi
Salmonella enteritidis
Atualmente:
Salmonella Typhi Gallinarum Pullorum
Dublin
Anatum Butantan
Give
E
Salamae (II) Daressalam
Arizonae (IIIa)
Diarizonae (IIIb)
Houtenae (IV)
Houten
Indica (VI)
Ferlac
Bongori
Bongori Bongor
Fonte. Zuniga (2006)
(498)
(94)
(327)
(71)
(12)
(21)
Bovinos
Aves domésticas
Eqüinos e outros
Répteis e aves
Salmonella TyphiSalmonella Enteritidis
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� Predomina onde há criação intensiva,
� Aproveitamento de restos animais na produção derações (farinhas de peixes, carnes e ossos);
� Rápida disseminação entre animais e ambiente
Epidemiologia das Salmoneloses
� Rápida disseminação entre animais e ambiente(queda da resistência, devido condiçõesestressantes, temperaturas instáveis, confinamentocom superlotação,transporte, privação de água ealimento)
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Salmonella pathogenicity islands (SPIs)
Wester&Hensel. Microbes and infection, v. 3, n. 7, 549-559, 2001.
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� Gastroenterite aguda ou intoxicação alimentar
� Fontes: Animais de estimação, ovos e carne de frango malcozidos, utensílios de cozinha contaminados
� Ocorre 8 a 36 horas após a ingestão
� Requer uma elevada carga microbiana para a infecção
Salmonella
� Auto-limitada em indivíduos saudáveis (antibióticos eagentes anti-diarréicos podem prolongar os sintomas)
� Bovinos: diarréia muco-hemorrágica fétida, anorexia,marcada depressão, febre e choque, e nos casos debacteremia, dispnéia, incoordenação, poliartrite, aborto,queda na produção do leite.
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Fontes de contaminação de Salmonella na Avicultura
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Thiennimitr et al. Salmonella: the host and its microbiota. Current Opinion in Microbiology, v.15, n.02, p.108-114, 2012.
A Salmonella utiliza seus fatores de virulência (flagelos, T3SS-1 e T3SS-2) para invadir o epitélio esobreviver nas células mononucleares. A resposta inflamatória resulta na liberação de umantimicrobiano (lipocalina-2) que sequestra o agente quelante de ferro (enterobactina) produzido pelamicrobiota, mas não inibe o quelante salmoquelina, produzida pela Salmonella. Espécies reativas deoxigênio (ROS) gerados por neutrófilos que migram para o lúmen intestinal oxidam compostos deenxofre produzindo um aceptor de elétrons (tetrationato) para a respiração anaeróbia de Salmonellagarantindo ao patógeno vantagens para a multiplicação e transmissão
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Patogenia
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TESTES\ESPÉCIESEscherichia
coliSalmonella
Shigella
dysenteriae
Shigella
sonnei
Klebsiella
pneumoniae
Klebsiella
rhinoscleromatis
Enterobacter
cloacae
Enterobacter
aerogenes
Hafnia
spp.
Serratia
marcescens
Proteus
vulgaris
Proteus
mirabilis
GLICOSE GÁS + + - - + + + + + d + +
ARABINOSE + + + + + + + - - -
LACTOSE +* D - (+) + - + + - - - -
MALTOSE + + +- +- + + + + + + + -
MANITOL + + - + + + + + + + - -
SORBITOL + + + + + + - - - -
SACAROSE d - - (+) + + + + -x + + (+)
TREALOSE + + + + + + + + (+) +
CITRATO - + - - + - + + + + +- +(+)
MALONATO - D - - + + d + +- - - -
VERMELHO DE METILA + + + + - + - - - - + +
DIFERENCIAÇÃO BIOQUÍMICA DE ENTEROBACTÉRIAS
VOGES-PROSKAUER - - - - + - + + + D d d
REDUÇÃO DE NITRATO + + + + + + + + + + + +
HIDRÓLISE DE GELATINA - D - - (d) (d) (+) ((+)) - + + +
PRODUÇÃO H2S - + - - - - - - - - + +
INDOL + - d - d d - - - - + -
LISINA + + - - - - - + + + d d
UREASE - - - - - - (d) (d) - - + +
FENILALANINA - - - - - - - - - - + +
MOTILIDADE +- + - - - - + + + + + +
D = diferentes reações em diferentes espécies de um gênerod = diferentes reações em diferentes isolados(d) = diferentes reações em diferentes isolados tardiamenteX = reações tardias e irregularmente positivas (mutantes)(+) = reações tardias, mas sempre positivas((+)) = liquefação muito lenta Fonte: Manual BERGEY 8ª edição)
TSI – Triplice acúcar e ferro (0,1% Glicose, 1% Lactose e 1% Sacarose)
A. Salmonella sp.
B. Escherichia coli
C. UnknownD. Proteus mirabilis
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AB C D E Meio de TSI
A- Não inoculado, B- P. aeruginosa, C- E. coli, D- Salmonella Typhimurium, E- Shigella flexneri
Produção de gás por Salmonella ????
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-Febre tifóide (Salmonella Typhi) e outras febresentéricas
febre prolongada
bacteremia
Salmonella
Envolvimento do sistema RE, particularmente dofígado, baço, intestino, mesentério
Há disseminação para vários órgãos
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Estado de portador
Organismos são eliminados junto com as fezes
Vesícula biliar é o local de refúgio dos organismos (remoção de vesícula biliar pode
Salmonella
organismos (remoção de vesícula biliar pode ser a única solução para estado de portador)
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�Causam desinteria bacilar em primatas (fezescom sangue, muco e numerosos leucócitos)
(Protótipo do patógeno entérico invasivo) (≈ EIEC)
�Humanos são os mais importantes reservatóriosconhecidos (intestino grosso)
Shigella sp
�S. dysenteriae (toxina Shiga e pode causar SHU) ,
S. flexneri (doença periodontal), S. boydii,
S. sonnei (mais comum)
�Transmissão fecal-oral e fômites
�Menos de 200 bacilos são necessários para ainfecção em indivíduos saudáveis (elevada virulência)
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Patogenia
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Shigella consegue invadir o epitélio do lúmen intestinal por meio de células-M. Após atingir o epitélio,invade células epiteliais e é fagocitada por macrófagos residentes. A bactéria escapa do fagossomo deambas as células, mas enquanto replica dentro das células epiteliais induz a apoptose em macrófagos,provavelmente, por ativação de caspase-1 (Casp-1). Os macrófagos sofrem lise e liberam as citocinaspró-inflamatórias IL-1β e IL-18. Juntamente, as IL-8 liberadas pelas células epiteliais invadidas sinalizampara PMN (leucócitos polimorfonucleares ou neutrófilos). Estes PMN eventualmente resolvem o processoinfeccioso.
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.• Coleta e Processamento
Se não forem processadas imediatamente, asamostras devem ser colhidas em meios detransporte (Cary-Blair, Amies ou Stuart)
• Isolamento e Identificação
Diagnóstico Laboratorial das Enterobactérias
• Isolamento e Identificação– Local de orígem devem ser considerados, pois
enterobactérias em sítios corporais estéreis sãoaltamente significativos.
– Rotineiramente cultivadas a partir de fezes
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Diagnóstico Laboratorial das Enterobactérias
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Identificação dos gêneros de enterobactérias(importante em microbiologia clínica e epidemiologia; base de muitos sistemas de identificação
comerciais (Enterotube, API-E)
Ver se usa ou não a lactose
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• Meios para isolamento e identificação de enterobactérias
– Agar Sangue e um meio seletivo/diferencial (MacConkey)
– Para fezes, são usados meios altamente seletivos, comoHektoen Entérico (HE), XLD ou SS juntamente comMacConkey.
Diagnóstico Laboratorial das Enterobactérias
MacConkey.
– Sistema de identificação miniaturizado (API) ouautomatizado comercial, em vez de tubos múltiplosinoculados manualmente � Testes Bioquímicos
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Identificação de enterobactérias (Meio de EPM)
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MEIO EPM (Fermentação da glicose, produçãode gás, H2S, uréia, fenilalanina)
�Inocular picando até o fundo e semear na superfície, incubar com a tampa frouxa 24hs/35oC.
Base: Fermentação da glicose: cor amarela.Produção de gás: formação de bolhas ou deslocamento do meio do fundo do tubo.Produção de H2S: Enegrecimento do meio em qualquer intensidadeHidrólise da uréia: Aparecimento da cor azul ou verde-azulada (reação Hidrólise da uréia: Aparecimento da cor azul ou verde-azulada (reação fraca) que se estende para a base do meio, envolvendo-a totalmente ou não.
Superfície: Desaminação do Triptofano: aparecimento de cor verde-garrafa no superfície do meio. Quando a reação é negativa, a superfície do meio adquire cor azul ou, raramente, amarela.
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Identificação de enterobactérias usando MILi
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MEIO MILi (Movimento, Indol e Lisina)� Fazer picada central apenas e incubar 24hrs/35oC
-Motilidade: A bactéria móvel cresce além da picada turvando parcial outotalmente o meio. A bactéria imóvel cresce somente na picada.
-Descarboxilação da Lisina: Quando a lisina é descarboxilada, o meioadquire cor púrpura acentuada ou discreta. Quando o aminoácido não éutilizado, o meio adquire cor amarela nítida nos seus 2/3 inferiores.Considerar o teste positivo sempre que o meio não estiver amareloConsiderar o teste positivo sempre que o meio não estiver amarelo
-Produção de indol: Após a leitura dos testes de motilidade e lisina,adicionar 3 a 4 gotas de reativo de Kovacs a superfície do meio e agitarlevemente. Quando a bactéria produz indol, o reativo adquire cor rosa ouvermelha. Quando não o produz, o reativo mantém a sua cor inalterada.
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Identificação de enterobactérias(citrato de Simmons)
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IMVIC (+ + - -) = E. coli)