APLICACIÓN DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR EN EL
DIAGNÓSTICO ANATOMO-PATOLÓGICO:
EL MODELO DE LOS SARCOMAS HUMANOS Y
OTROS TUMORES PEDIÁTRICOS
DR. SAMUEL NAVARRODEPTO PATOLOGIA, UNIVERSITAT DE VALENCIAHOSPITAL CLINICO UNIVERSITARIO
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
• VALOR DIAGNÓSTICO
• VALOR PRONÓSTICO
• DIANAS TERAPÉUTICAS
APLICACIONES
• Tumor de Ewing/PNET
• Rabdomiosarcoma alveolar
• Tumor desmoplásico de células redondas
• Sarcoma sinovial
• Liposarcoma mixoide/ de células redondas
• Sarcoma de células claras
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
VALOR DIAGNÓSTICO
Ewing/PNET
Ewing
Ewing/PNET
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
PATRON GENETICO-MOLECULAR Ewing/PNET
Translocación Fusión génica
t(11;22)(q24;q12) ______________ FLI-1 (1q 24)EWS (22q12)
t(21;22)(q22;q12) ______________ ERG (21q22)EWS (22q12)
t(7;22)(p22;q12) ______________ ETV1 (7p22)EWS (22q12)
t(17;22)(q22.2;q12) ____________ E1A-F(17q12)EWS (22q12)
11 22 der (11) der (22)
TUMOR DE EWING/PNET
der(11)
der(22)
t(11;22)(q24;q12) EWS-FLI 1
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
t(11;22)(q24;q12)
11
22der 11
der 22
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
Ewing/PNET
TUMOR DE EWING/PNET
EWS_7 Fli1_5
t(11;22)(q24;q12) EWS-FLI 1
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
Rabdomiosarcoma
Rabdomiosarcoma
Rabdomiosarcoma
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
PATRON GENETICO-MOLECULAR
Rabdomiosarcoma Alveolar
Translocación Fusión génica
T(2;13)(q35;q14) _____________ PAX3 (2q35)FKHR (13q14)
T(1;13)(q35;14)_____________ PAX7 (1p36)FKHR (13q14)
RABDOMIOSARCOMA ALVEOLAR
2 der(2) der(13)13
t(2;13)(q35-37;q14) PAX 3-FKHR
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
RABDOMIOSARCOMA ALVEOLAR
Actin
PAX7/FKHR
PAX3/FKHR
M 1 2 3 4 5 6 C
PAX 3 FKHR
PAX 7 FKHR
B
t(2;13)(q35-37;q14) PAX 3-
FKHR
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
TUMOR DESMOPLÁSICO DE CÉLULAS REDONDAS
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
11 22 der (22)der (11)
EWS exon 7 WT1 exon 8
t(11;22)(p13;q12) EWS-WT1
TUMOR DESMOPLÁSICO DE CÉLULAS REDONDAS
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
SARCOMA SINOVIAL
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
X 18 der (X) der (18)
t(X;18)(p11;q11) SYT-SSX1 SYT-SSX2 SYT-SSSX4
der(18)t(X;18)(D18Z1+;wcpX+)
SARCOMA SINOVIAL
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
SYT -SSX
ACTINA(Control)
Control SYT/SSX
01B9679
SYT -SSX
PBGD(Control)
Control SYT/SSX
01B9679
SYT -SSX
Control SYT/SSX
01B9679
SYT -SSX
PBGD(Control)
Control SYT/SSX
01B9679
Tejido crioconservadoTejido crioconservado Tejido en parafinaTejido en parafina
SYT SSX1
t(X;18)(p11;q11) SYT-SSX1 SYT-SSX2 SYT-SSSX4
SARCOMA SINOVIAL
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
LIPOSARCOMA MIXOIDE/DE CELULAS REDONDAS
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
12 16 der (12) der (16)
t(12;16)(q13;p11) CHOP-
TLS
LIPOSARCOMA MIXOIDE/DE CELULAS REDONDAS
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
t(12;16)(q13;p11) CHOP-TLS
LIPOSARCOMA MIXOIDE/DE CELULAS REDONDAS
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
SARCOMA DE CELULAS CLARAS
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
12 22 der (12) der (22)
t(12;22)(q13-14;q12-13) EWS-ATF1
SARCOMA DE CELULAS CLARAS
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
t(12;22)(q13-14;q12-13) EWS-ATF1
SARCOMA DE CELULAS CLARAS
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
• Tumor de Ewing/PNET
• Fusión tipo 1: EWS (exón 7)-FLI 1 (exón 6)
• De Álava E et al. J Clin Oncol 1998;161248-55
• Rabdomiosarcoma alveolar
• t(1;13) y/o fusión PAX 7-FKHR
• Kelly KM et al. J Clin Oncol 1997;151831-36
• Neuroblastoma
• Amplificación de MYCN Deleción 1p36.3
VALOR PRONOSTICO
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
Neuroblastoma
Neuroblastoma
Neuroblastoma
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
PATRON GENETICO-MOLECULAR
NeuroblastomaAmplificación de MYCN (d
mins, HSR)
Del 1p 36
Ganancia 17q
LOH 11q, 14q
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
Neuroblastoma:MYCN
p
q
22
25
24
23
21
16
1514
13
12
11.2
11.111.1
12
21
22
23
24
31
32
11.2
13
14.114.214.3
35
34
33
36
37
HSRsp
q
22
25
24
23
21
16
1514
13
12
11.2
11.111.1
12
21
22
23
24
31
32
11.2
13
14.114.214.3
35
34
33
36
37
dmins
Cromosoma 2
p
q
11.2
12
13
14
23
24.1
15
11.111.1
13
12
21
22
24.2
24.3
p
q
11.2
12
13
14
23
24.1
15
11.111.1
13
12
21
22
24.2
24.3
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
Neuroblastoma:MYCN
p
q
22
25
24
23
21
16
151413
1211.211.111.1
12
21
22
23
24
31
32
11.2
1314.114.214.3
3534
33
36
37
MYCN
Cromosoma 2
2p24
p
q
22
25
24
23
21
16
151413
1211.211.111.1
12
21
22
23
24
31
32
11.2
1314.114.214.3
353433
36
37
Cromosoma 2
Ganancia
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
Neuroblastoma:MYCN
Ganancia de MYCNMYCN no amplificado
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
Neuroblastoma:MYCN
36.336.2
36.1
3534.3
34.133
31.3
21
1211
34.2
32.3
32.132.2
31.2
31.1
22.3
22.122.2
13.3
13.113.2
11
12
21.1
22
23
24
25
31
32.1
41
42.1
4344
21.221.3
32.232.3
42.242.3
3534.3
34.133
31.3
21
1211
34.2
32.3
32.132.2
31.2
31.1
22.3
22.122.2
13.3
13.113.2
11
12
21.1
22
23
24
25
31
32.1
41
42.1
4344
21.221.3
32.232.3
42.242.3
17q 23-qter
1t(1;17)(p35,q23)
del 1 p36.3
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
Neuroblastoma:1p36
No deleción del 1p36 Deleción del 1p36
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
Neuroblastoma: Cr.1p36
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
M 23 25 1524106 IMR32
MycN
LHPCR D1S80
TN TN TN
Valor pronóstico
• Oncogenes: c-kit ras Her2
• GIST: Tratamiento con STI571
• Scappatici FA et al. Cancer Treatment Rew 2001;27:317-26
• Genes supresores/proapoptóticos: p53 Fas/FasL
• Genes reguladores del ciclo celular: p27 mdm2
• Productos de fusión génica: EWS-FLI1 CHOP-TLS
•
DIANAS TERAPEUTICAS
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
HE c-kit
DIANAS TERAPEUTICAS
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
• Fusiones génica nuevas
• Diagnóstico histológico cuestionable Escaso material
• Tumor necrótico RNA degradado
• Irreproductibilidad por diferentes laboratorios
• Diagnóstico histológico cuestionable
• Contaminacion
RESULTADOS NEGATIVOS INESPERADOS
RESULTADOS POSITIVOS INESPERADOS
LIMITACIONES
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
1 32 54 6 987 IMR32
LIMITACIONES
PATOLOGÍA MOLECULAR Y SARCOMAS DE PARTES BLANDAS
NEUROBLASTOMA: MYCN falsos negativos por PCR
CASO CLINICO (1)
Niño de 3 años, presentando una gran masa retroperitoneal ocupando la cavidad abdominal.
Niveles de ácido vanil mandélico y homovanilico
en orina normales.Captación de MIBG-I123.Se remite biopsia a cielo abierto.Tres días después el paciente fallece por
hemorragia abdominal
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
DIAGNOSTICO (1)DIAGNOSTICO (1)
NEUROBLASTOMA POBRE EN ESTROMA, SUBTIPO
INDIFERENCIADO.
VARIANTE: PLEOMORFICO-ANAPLASICO
HISTOPRONOSTICO: DESFAVORABLE
( CLASIFICACION INPC)
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
Niña de 3 años con masa retroperitoneal de rápido crecimientoNo captación de MIBG
SOSPECHA CLINICASarcoma retroperitoneal
PROCEDIMIENTO DIAGNOSTICOBiopsia exéresis
TUMORES DE CELULAS REDONDASCASO CLINICO
(2)
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
N-myc
Rabdomiosarcoma alveolar: Amplificación MYCN
DIAGNOSTICO (2)DIAGNOSTICO (2)
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
DIAGNOSTICO ANATOMO-PATOLOGICOTumor de células redondas con diagnostico diferencial de
Rabdomiosarcoma alveolarNeuroblastoma indiferenciado
ESTUDIO MOLECULARAmplificación MYCN
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
Varón de 24 años con masa abdominal de crecimiento rápido con metástasis pulmonares y mediastinicas.Se practica biopsia a cielo abierto.Tras 12 meses y 2 ciclos de QT el paciente fallece
CASO CLINICO (3)
TUMORES DE CELULAS REDONDAS
Ewing’s/PNET: Fusiones génicas atipicas EWS-FEV
Tumor de Ewing/PNET Atípico PleomorficoCon Feno-Genotipo inusual
DIAGNOSTICO (3)DIAGNOSTICO (3)
TUMORES DE CELULAS REDONDAS