Download - Biohemijska analiza tekucina
Karakteristike tekućine
•Ima osnovne funkcije:
a)Zaštita fetusa i dozvoljavanje njegove pokretnosti
b)Uloga u različitim biohemijskim procesima
•Po sastavu slična plazma dijalizatu barem na početku
•Kasnija faza-razmjena rastvorenih substanci izmedju fetusa i okruženja (razmjena amnionska tekućina-fetus te amnionska tekućina-plazma majke)
•Kompletna izmjena volumena tekućine svaka 2-3 sata
Volumen tekućine
•25-50 mL pri 12 nedjelja gestacije
•1100-1500 mL 36 nedjelja gestacije
•Povećana količina tekućine (hidroamnio) asocira se padom fetalnog gutanja i indicija kongenitalnog defekta
•Smanjena količina amnionske tekućine-oligohidroamnio se javlja kod Kongenitalnih malformacija
SKUPLJANJE TEKUĆINE
Transabdominalno ili vaginalno u sklopu pregleda ultrazvukom
Preferiran ovaj oblik jer vaginalna je asocirana sa povećanim rizikom za infekciju
Kada raditi amniocentezu!
14-18 nedjelja starost majke 35 godina ili više jedan od roditelja ima poznate hromozomalne abnormalnosti već rođeno dijete sa hromozomalnim nedostacima već rođeno dijete sa defektom neuralne cijevi roditelj nosioc metaboličke mane povećan AFP kod majke
20-42 nedjelje Ispitivanje fetalnog distresa(Rh ili druga izoimunizacija) Infekcija Ispitivanje zrelosti pluća
Način skupljanja:
Aseptična tehnika ,sterilna igla,aseptično procesuiranje
Aspiriranje 10-20 ml amnionske tekućine u sterilne epruvete(obično 3) (Razlog kontaminacija krvlju)
Pakiranje u folijom obložene epruvete (spriječavanje fotooksidacije bilirubina)
Transport uzoraka
Ćelijske kulture, studije na kromozomima-sobna temperaturaAnaliza fosfolipida- +4 stepena,transport na leduOdložen rad-prethodno centrifugiranje uzorakaBrzina: 140 g za ćelije500 g za fosfolipide1500-2000g za spektrofotometriju
Fizikalni pregled tekućine
1.Boja (bezbojna ili blijedo žuta boja)Jaka žuta-bilirubinZelena-mekonij(mukusu sličan materijal koji nastaje kao posljedica progutane amnionske tekućineI intestinalnih sekreta.Biliverdin je odgovoran za ovu boju.
2.Zamućenje
Blago zamućena obično,malo u ranoj trudnoći
HEMIJSKI PREGLED TEKUĆINE
Kod očekivanja prijevremenog porodaIli poželjan je zbog komplikacija trudnoće
Evaluacija funkcionalnog statusa pluća
Najčešće obolenje respiratorni distres sindrom
Neodgovarajuća produkcija surfaktanata na površini alveola kod novorođenčeta
Korelacija između zrelosti pluća i kocentracije fosfolipida u amnionskoj tekućini
3 tipa fosfolipida se testiraju: lecitin(fosfatidilholin) sfingomijelin fosfatidil glicerol
Odnos lecitin/sfingomijelin i fosfatidil glicerol
•Lecitin osnovni surfaktant Sfingomijelin nepoznata uloga
•Do 33 nedjelje fetalni sistem pluća producira podjednake količine i lecitina i Sfingomijelina
34-36 nedjelja gestacije-koncentracija sfingomijelina opada, a lecitina raste
•L/s odnos bitam
L/S manji od 2 –nezrela plućaVeći ili jednak 2 sve u redu
•Fosfatidil glicerol detektabilan iza 35 nedjelje gestacije
•Parametar bitan kod kompliciranih trudnoća(DM)(Trudnice sa DM, LS veći od 2, a nema PGa-značajan broj djece razvije RDS Ako je prisutan,nema rizikaNačini detekcije: Tankoslojna hromatografija
Indeks stabilnosti pjene
•Ispitivanje fizikalnih i funkcionalnih karakteristika tekućine
Ako su surfaktanti prisutni---stvori se pjena nakon miješanja sa Etanolom, formiranje stabilnih mjehurića
•Često se koristi(Miješanje jednakih volumena tečnosti sa različitim volumenima etanola,nakon toga miješanje)•Opseg koncentracija etanola 0,43-0,55
•FSI veći od 0,48 koreliza sa zrelošću pluća
•Mekonij problem kod interpretacije
Test fluorescentne polarizacije
•Mjerenje mikroviskoziteta tekućine Viskoznost proporcionalna količini prisutnih surfaktanata Rezultat u odnosu na albumin
Princip detekcije: Fluorofor se pomiješa sa amnionskom tekućinom i asocira se sa Albuminima i lipozomima surfaktanata(agregati fosfolipida)Fluorofori sa albuminom nemaju takvu sposobnost rotacije kao oni asociranisa lipozomima surfaktanta
Princip testa: Količina emitirane polarizirane fluorescentne svjetlosti je u direktnom odnosuSa sa sastavom surfaktanata prisutnih u amnionskoj tekućini(albumini nepromijenjeni)Albumin interni standard –u trećem trimestru konmstantno prisutan
Mjeri se odnosi surfaktant albuminOpseg: 0-160 mg/g.Vrijednosti ispod 40- nezrela plućaVeće od 70 zrela pluća
Ako je niska razina surfakatnata-visoka fluorescentna polarizacijaDanas najbolja procjena: ispitivanje zrelosti pluća+ gestacioni period za fetus)Koristiti tehnike filtriranja , ne centrifugiranja(uklanja fosfolipide)
Broj lamelarnih tješeca
Skladištenje surfaktanta u lamelarnim tjelešcimaLuče se od 20-24 nedjelje gestacijeTreći trimestar prisutni 50000-200000 po mikrolitru.
Hematološki brojači Količina uzorka 0,5 mL, ne košta puno
Centrifugiran uzorak-LBC 35000 zrelo, korelacija sa L/S veće od 2,prisustvo PGaKada je LBC ispod, kompletan profil se savjetuje
Bilirubin u amnionskoj tekućini
Prisutan kod hemolize
Normalan skan tekućine (350-580 nm),prava linija sa padom absornanceBilirubn max 450 nm
Rast bilrubina, absorbanca na 450 nm rasteViše zonaI-normalni rezultatiII-srednja hemolizaIII-ozbiljna hemoliza
Uzorci kontaminirani sa krvlju nisu akceptabilni zbog interferenci izazvanihabsorpcijom oksihemoglobina na 412 nm i 540 nm.
Veličina kontaminacije utvrdjuje se računanjem razlike u absorpciji na 412 nm.Uzorci sa mekonijumom nisu akceptabilni (apsorbcija 350 i 400nm)Lažno niske vrijednosti za bilirubin
SINOVIJALNA TEKUĆINA
•Predstavlja tekućinu koja ispunjava šupljine izmedju zglobova•Dobiva se artrocentezom-perkutana procedura punkcije koja se koristiza dobivanje sinovijalne tekućine
•Stvara se ultrafiltracijom plazme preko sinovijalnih membrana i putemSekrecije iz sinoviocita
•Sinoviociti su ćelije sinovijalne membrane-dva tipa postoje
•Tip koji fagocitira i tip koji luči hijaluronsku kiselinu
•Koncentracije mokračne kiseline i glukoze identične na razini plazme i sinovijalnetekućine
Karakteristike normalne sinovijalne tekućineFizikalni pregled
Ukupni volumen 0,1-3,5 mlBoja blijedo žutaBistrina bistarViskoznost visoka-formira lance 3 do 6 cm dugačkeNema spontanog stvaranja ugruška
Hemijski pregled:
Glukoza kao plazmaMokračna kisleina kao plazmaUkupni proteini 1-3 g/100 mlLaktata 9-33 mg/100mlHijaluronat 0,3-0,4 g/dl
Zahtjevi za analizu
Fizikalni pregled: oko 1 mLBoja, bistrina, viskoznost
Mikroskopski pregledUkupno 2-5 ml natrijum heparinaCitološke studije: 5-50 ml natrijum heparina
Hemijski pregled: 1.3 mL
Mikrobiološke analize 10 ml
Mikroskopski pregled (normalna tekućina):
Broj eritrocita ispod 2000 ćelija na mikrolitarBroj leukocita ispod 200Monociti i makrofage 60%Limfociti 30%Neutrofili 10%Kristali nisu prisutni
Klasifikacija klasičnih poremećaja:
Artritis-neinflamatorni,inflamatorni,septički, hemoragičkiLab.pokazatelji samo aproksimativniSeptički artritis(prisustvo mikroorganizama)Kristalni sinovitis(prisutni kristali)
Klasifikacija sinovijalne tekućine na osnovu nalaza
Test N NI I S H neinf inf sept hemorag
Volumen <3,5 >3,5 > 3,5 >3,5 >3,5Boja bl žuta žuta bijeložuta žutozelena crvenosmedjaViskoznost visoka visoka niska niska opadaBroj leukocita <200 <3000 3000-50000 >50000 <10000Neutrofili < 25% < 25% >50% >75% >25% Glukoza kao plazma kao plazma manja od plaz manja od pl kao plazmaKultura neg neg neg poz neg
Obolenja - osteoartritis kristalni sinovitis bakt.infekcija trauma osteohondritis giht,pseudogijt gljivice obol.krvi traumatski artrit reumatoidni artritis mikobakterije tumor neuroartropatija sistemski lupus erith
Viskoznost
Visoka u odnosu na vodu zbog visoke koncentracije hijaluronske kiseline
Stanje inflamacije: depolimerizacija pod djelovanjem hijaluronidaze-neutrofili
Kapljica tekućine se posmatra kada se ista izbaci iz epruvete. Stvara se uže 3-6 cm dugačko prije razbijanja
Viskoznost niska kada dođe ranije do cijepanja ili se stvore diskretne kapljice Poput vode.
Stvaranje ugruška
Spontano stvaranje znači prisustvo fibrinogenaPatološki procesi uzrokuju oštećenje na razini sinovijalne membrane,kontaminacija krvljuRiješenje: dio krvi uvijek dodati antikoagulans natrijum heparijn
Mikroskopska ispitivanja-hemacitometar
•Rade se na dobro promiješanoj tekućini
•Zamućena tekućina se mora razrijediti sa fiziološkom tekućinom,nikako sa srćetnom kis. (stvaraju se mucinski ugrušci sa sićetnom kisleinom)
•Uzorci sa visokom viskoznošću-dilucija sa puferom za hijalurinidazu- redukcija viskoznosti
Identifikacija kristala
Natrijum urat monohidrat-gihtni artritisKalcijum pirofosfat dihidrat-pseudogihtHolesterol—hronični reumatoidni artritisHidroksiapatit-artropatije asocirane sa hidroksiapatitomKortikosteroidi-prethodna intraantrikularna injekcija
Hemijski pregled sinovijalne tekućine
•Nekorisna analiza koncentracije mokraćne kiseline
•Korisna glukoza-procesuiranje uzorka odmah
•Proteini-normalan uzorak koncentracije 33% one iz plazme
•Rast proteina posljedica promjene permeabilnosti sinov.membrane ili posljedica povećane sinteze .
•Povećani proteini samo indikacija inflamatornog procesa- Ne rade se rutinski
Laktat ?????
Kulture ćelija-svježi uzorci
Pleuralna, perikardijalna i peritonealna tekućina
Serozna tekućina-tekućina slična po svom sastavu serumu
Ascites-velika akumulacija serozne tekućine u peitonealnojŠupljini
Efuzija-akumulacija tekućine u tjelesnoj šupljini kao rezultatPatoloških procesa
Eksudat-efuzija izazvana povećanom permeabilnoščuKapilara ili smanjenom limfatičkom apsorbcijomTransudat-tip efzije izazvan rastom hidrostatskog pritiska ili padom plazmaOnhotskog pritiska
Paracenteza- perkutana punkcija koja se koristi za uklanjanjetekućine iz tjelesne šupljine
Organi okruženi adekvatnim šupljinama
Serozne membrane na površini
Prostori između membrana ispunjeni tekućinom
Serozne tekućine stvaraju se ultrafiltracijom plazme u parietalnoj membrani absorpcijom na visceralnoj membrani
Faktori koji utječu na stvaranje tekućine:
1:permeabilnost kapilara2.hidrostatski pritisak u kapilarama3.onhotski pritisak(proteini)4.apsorbcija putem limfe
Hidrostatski pritisak –stvaranje plazma ultrafiltrata u šupljini
Plazma proeini se suprotstavljaju ovome
Regulacija brzine stvaranja ultrafiltrata-permeabilnost endotela kapilara
Uloga limfe-uklanja tekućinu iz šupljine putem apsobcije
Paracenteza=perkutana punkcija tjelesne šupljine koja služi za aspiraciju tekućine
Toracenteza-hirurški zahvat (punkcija u pleuralnu šupljinu-pleuralna tekućina)
Peritoneocenteza(abdominalna paracenteza)-za skupljanje peritonealne i perikardijalne tekućine
ASCITES-efuzija peritonealne šupljine
ANALIZA SEROZNIH TEKUĆINA
Fizikalni pregled: izgled,boja
Mikroskopski: citologija 25-50 ml natrijum heparin 10-20 ml EDTA
Diferencirano brojanje ćelija: 5-8 ml EDTA ili natrij heparin
Hemijski pregled: glukoza (3-5 ml puna krv) proteini,LDH, amilaza, trigliceridi,drugi
pH pleuralne tekućine ( 1-3 ml heparin)
Mikrobiološki: Gram i acd fast sojevi( 10-20 ml natrijum heparina)
KLASIFIKACIJA EFUZIJA
Transudati-izaziva ih obično sistemsko obolenje,neinflamatorni karakter,
Eksudati-posljedica inflamatornog procesa
Parametar Transudati Eksudati
Uzrok rast k-pritiska rast kap.permeab. pad onh.pr pad limfatičke aps.
Fiz.pregled bistar,blijedo žut zamućen,varira
SPONTANO GRUŠANJE NE VARIRA,ČESTO DA
Mikroskopski pregled
Leukociti ispod 1000 pleuralna više od 1000-pleural
ispod 300 peritonealna više od 500 periton dominiraju mononuklearne neutrofili dominirajuHemijski pregled
Glukoza isto kao serum manja ili ista kao seProteini manji od 50% serum veći od 50% serumOdnos ukupni pr/tek:serum manje od 0,5 više od 0,5LDH manje od 60% serum više od 60% serunOdnos enzim tekućina/serum manji od 0,6 veći od 0,6
Light’s Kriteriji za eksudate
Tekućina je eksudat ako zadovoljava jedan od tri kriterija :
1. Pleural tečnost LDH/serum LDH > 0.6
2. Pleuralna tečnost/serum protein > 0.5
3. Pleuralna tečnost LDH > gornji limit normalne serum LDH
Ako su sva tri negativna, tekućina je transudat.
UZROCI NASTANKA TEKUĆINA
Pleuralni Perikardijalni Peritonelani
Transudati
Pad krv tlaka infekcije pad hidrost.pr Kongestivno obolenje srca infarkt miokarda,aneurizme pad onh.pr
Pad onh.pritiska neoplazme(kancer metastaze) hepatalna cirozaHepatalna ciroza hemoragija.trauma, terpija nefrotski sindrom antikoagulansima
Nefrotski sindrom
EKSUDATI
Pleuralni perikardijalni peritonelani
Povećana permeabilnost sistemska obolenja poveć.kap.permeabInfekcije sistemski lupus infekcijeNeoplazme(pluća, metastatski) reumatoidni artritis neoplazme(jetra)Sistemska oboleja pankreatitiGI obolenja(pankreatit) uremija
Smanjena limfatička apsorbcija smanjena limfatička apsorbcijaNeoplazme(limfom) neoplazme(limfom)Trauma traumahirururški zahvat tuberkuloza
Vrijednost hemijskih testova
Amilaza-amilaza serozne tekućine 1,5-2 puta vća od one seruma je indicijaPatologijeEfuzije-pankreatit, ruptura ezofagusa, metastaska obolenja
Trigliceridi-efuzije sa hilusom –neoplazmePrisutni hilomikroni
pH
Abnormalno niske pH vrijednosti za efuzije parapneumonia
pH 7,3 karakterističan
pH manji od ovog, mora se raditi drenaža uz terapiju antibioticima
Vće od 7,3 samo je dovoljno dati antibiotike
CEA-CEA+citologija-identifikacija malihnih efuzija
CEREBROSPINALNA TEKUĆINA
Kupa mozak i kičmenu moždinu
Selektivna sekrecija iz plazme,nije ultrafiltrat
Ukupni volumen tekućine 85-150 ml
Neonatusi- (10-60ml )
Uloge:štiti mozak i kičmenu moždinu služi za transport i razmjenu hranjljivih sastojaka
Hemijske analize od pomoći: glukoza,proteini, laktat
Uzorak.- Punkcija između trećeg i četvrtog lumbalnog međuprostora
Uz kontrolu pritiska 20 ml se može izvući
Indikacije i kontraindikacije za lumbalnu punkciju
Indikacije
Infekcije-meningitis encefalitis absces mozga
Krvarenja-subarahnoidno intracerebralnoNeurološka oboleja-multipla skleroza Guiilan-Barr sindrom
Maligniteti: Leukemija,limfom.kancer sa metastazamaTumor: mozak,kičmena moždinaTretmani: Hemoterapija, anestetici, radiografski kontrasti, terapija antibioticima
Kontraindikacije: Septicemija, Sstemske infekcije, Lokalizirana lumbalna infekcija
Temperatura procesuiranja.
Hemijski pregled –epruveta 1 -15 do –30 stupnjeva
Mikrobiološke analize –epruveta 2 19-26 stupnjeva
Citologija-epruveta 3 2-8 supnjeva
Fizikalni pregled
Bistra, bezbojna tekućina, slična viskoznost vode
Povećan viskozitet-adenokarcinomi(mucin lučeći tumori)
Stvara ugruške, prisustvo fibrinogena(kompromitovana barijera)
Najčešći uzrok trauma ili rast proteina u likvoru(Froin sindrom)., tuberklozni meningitis
Pleocitoza-rast broja ćelija u likvoruZamućenje likvora:
Leukociti više od 200 ćelija/ulEritrociti više od 400 ćelija/ulMikroorganizmi, rasts proteina-zamućen uzorak
Ksantohromija- asocira se sa bolešću
Žuta boja likvora, ali i ljubičasta,naranđasta,.žutaPink supernanatant-oksHbŽuti-bilirubinNaranđasti-mješavina ova dvaBraun.svaranej methemoglobina
Uzroci ksantohromije:
Hemoragija, subarahnoidna ili intracerebralnaHiperbilirubinmijaVisok karoten ili proteini veći od 150 mg/100 ml uzrok ksantohromijeMeningealni melanomNormalan neonatustrauma
Uzroci pleocitoze
Domintan tip ćelija uzroci infekcije neinfektivni uzroci
Neutrofili meningitis hemoragija bakterijski subarahnoidni rani vrusni,tuberkulozni intracerebralni
cerebralni apsces
Limfociti meningitis multipla skleroza sve vrste zloupotreba lijekova
infekcije parazitima
Plazma ćelije tuberkuloza i sifilisni meningitis isto kao gore
Eozonofili infekcije paraziti,gljivice alergijske reak
Makrofage Tuberkulozni meningitis absces mozga Fungalni kontuzija infarkt kontaminacija krvi nakon punkcije intratekalni lijekovi iradijacija mozga
Maligne ćelije leukemija limfomTumorske ćelije tumori CNS-a meduloblastomi karcinom sa metastazama
HEMIJSKI PREGLED
Proteini
•80 % porijeklo transport plazma proteina kroz endotel kapilaraOstatak-intratekalna sinteza
Koncentriranje likvora pa elektroforeza(80-100puta)
Frakcije: transtiretin(prealbumin), albumin+ transferin Ig također
•Ukupni proteini-starost individue+ mjesto uzimanja uzorka Veće koncentracije iz lumbalng dijelaUkupni proteini-150-450 mg/L
•važni za utvrđivanje Integriteta membrane,indicija patoloških procesa na nivou CNS-a
Rast koncentracije:
1.Kontaminacija uzoraka sa perifernom krvlju u toku punkcije
2.Primjene na nivou razmjene(kapilare)
3.smanjen reapsorbcija u vensku krv
4.povećana sinteza u CNS-u
Pad koncentracije:
1.Povećana reapsorbcija kroz arahnoidne viluse,rast intrakranijalnog tlaka
2.Gubitak tekućine uzrokovan traumom ili invazivnim procedurama
Određivanje: dominiraju turbidimetrijske metode
Albumin
Sav albumin u CSF-u je rezultat prolaska preko km barijereReferentni protein za utvrdjivanje permeabilnosti barijere
CSF/serum albumin indeks= Albumin CSF (mg/100 ml)/ albumin serum g /100 ml)
Odnos manji od 9 je normalan9-14 minimalno oštećenje membrane15 do 100 –srednje do ozbiljno oštećenje barijereVeće od 1oo-slom barijere
IgGNormalno prisutan u malim količinamaPatološka stanja-povećana sinteza u CNSu,povećan transport iz plazmeCSF IgG indeks=IgG CSF(mg/dl) x albumin serum g/dL / I gG serum x albumin CSF
Nefelometrija
Tipična vrijednost za indeks= 0,30-0,70
Veće vrijednosti-veća intratekalna sinteza
Manje vrijednosti-kompromitirana barijera90 % pacijenta sa multiplom sklerozom indeks veći od 0,70-osjetljiv pokazatelj
Druga obolenja mogu takođe uzrokovati promjene ovog indeksa
Rezultati elektroforeze
Transiretin,albumin, 2 zone transferina,blage zone alfa 1 antitripsina i IgG
Drugi transferin tau-beta 2 region,sinteza CNS
Difrencijacija rinoreje od otoreje(ispuštanje likvora kroz nos ili uši)
Detekcija oligoklonalnih zona u gama regiji
Prisustvo u CSF-u, bez prisustva u serumu-indicija MS-aNema korelacije sa fazom bolesti niti progresijom
Druga obolenja: neurosigfilis, bakterijski meningitis,,virusni meningitis
Mijelin bazični protein
Mijelin-okružuje aksone i
30% sastavljeno od proteina,jedan MBP
MS-degradacija mijelnskih nizova, oslobađanje proteina u CSF-RIA
Korsiti se praćenje toka bolesti MS
•Glukoza
CSF plazma glukoza omjer= 0,6
Rast glukoze CSF-nema veći značaj
Pad (ispod 40 mg/dl)-hipoglikemična stanja,meningitis, infiltracija sa metatatskimIli primarnim tumorima
Uzroci:
Defektivan transport duž membrane
Povećana glikoliza u CSF•Laktat
Povećan hipoksija ili smanjena oksigenacija mozga(Hemoragija, hidrocefalus,cerebralna arterioskleroza, traumatsko oštećenje mozga ,Edem, meningitis)
Virusni meningitis-25-30 mg/dl,sve druge forme više of 35 mg/dl