Download - API Industry General
The Global Reference for Identification
IDENTIFIKASI
Morfologi Pengamatan bentuk koloni dan mikroskopik
Genetik
Biokimia
Teknik biologi molekuler
Reaksi terhadap substrat biokimiawi, termasuk reaksi enzimatik
Serologi
Reaksi antigen dan antibodi spesifik
Sistem identifikasi untuk bakteri dan jamur Dalam 1 strip terdapat 10 atau 20 substrat reaksi biokimiawi Tipe reaksi biokimiawi :
- Enzimatik - Assimilasi- Inhibisi
Total database =± 822 organisme (taksonomi berdasarkan pada International Journal of Systemic Bacteriology)
Microtube berisi substrat kering
Tes enzimatik : menggunakan substrat kromogenik atau fluorogenik, seperti : aminopeptidase (Beta-alanine arylamidase), lipase, esterase, oxidase, ONPG, betaGAL, phosphatase
Tes asimilasi : menggunakan sumber karbon yang unik,
pendeteksian berdasarkan reaksi kekeruhan
seperti : karbohidrat, asam amino, asam organik
Tes inhibisi : menggunakan antibiotik atau substrat toksik, pendeteksian berdasarkan reaksi kekeruhan
range
Jenis strip Gol. Bakteri/jamur InkubasiAPI 20EAPI 20E Gram negative Bacilli 24 jamAPI10E/10SAPI10E/10S Enterobacteria 24 jamRAPID 20ERAPID 20E Enterobacteria 4 jamAPI 20 NEAPI 20 NE Non Enterobacteria 24-48jamAPI StaphAPI Staph Staphylococci 24 jamAPI 20 StrepAPI 20 Strep Streptococci 4-24 jamAPI 20 C AuxAPI 20 C Aux Yeasts 24-48 jamAPI CandidaAPI Candida Yeasts 24 jamAPI 20AAPI 20A Anaerobes 24-48 jam API CampyAPI Campy Campylobacter 24 jamAPI CoryneAPI Coryne Corynebacteria 24 jamAPI NHAPI NH Neisseria/Haemophilus 2 jamAPI ListeriaAPI Listeria Listeria 24 jamAPI 50 CHBAPI 50 CHB Bacillus 24-48 jamAPI 50 CHLAPI 50 CHL Lactobacillus 24-48 jamAPI 50 CHEAPI 50 CHE Enterobacteria 24-48 jam
Gallery
Bagaimana cara memilih strip?
Lakukan tes orientasi :
• Morfologi koloni• Pewarnaan Gram • Tes katalase • Tes oksidase
Kelengkapan
Mineral oilMineral oil
StripStripPSIpettes/ pipet steril
rak
Reagen tambahanReagen tambahanIncubation boxIncubation box
Medium suspensiMedium suspensi
Prosedur Kerja
Suspensi
(McF)
Koloni
Inokulasi
HASILHASIL
Inkubasi
Pembacaan : Penambahan reagent
transfer
Prinsip Inokulasi
GLU
Oil
ADH CIT
« anaerob fakultatif » « anaerobic » « aerobic »
Oil
Pembacaan : Deteksi
Setelah proses inkubasi Reaksi dideteksi dengan cara :
perubahan warna secara spontan atau dengan penambahan reagent tambahan
Penyimpanan Penyimpanan :: 2 - 8°C2 - 8°C
VPB - NIT 2 - XYL - VP2 – HER
Dalam kondisi gelap :Dalam kondisi gelap : bungkus dengan aluminium foil
FB - FVB - ZYM B - NIN – PYZ – James - VP2
2 - 30°C2 - 30°C» VPA - VP1 - NIT 1 - Zn- BCP – TDA - ZYM A
Pembacaan
Reaksi setelah inkubasi
Perubahan warna secara spontan
Perubahan warna dengan penambahan reagent
Pembacaan : Deteksi
Gunakan tabel pembacaan (dalam package insert) dan isi dengan kode ( + ) atau ( - )
Kode tersebut ditransformasikan menjadi profil numerik dengan menggunakan prinsip pengkodean :
setiap tes pada strip dibagi menjadi 3 grup setiap tes bernilai : 1, 2 atau 4
Kertas Kerja
7 angka profile 3604512
Hasil identifikasi dari software
Test tambahan
PROSEDUR
INTERPRETASI
Persentase reaksi positif untuk setiap reaksi dan takson
Taxon = base unit• Species• Biotype• Genus• Species group
bioMérieux Taxonomy = official taxonomy• International Journal of systematic bacteriology
INTERPRETASI
CONTOH :
INTERPRETASI
Identifikasi bakteri berdasarkan pada perbandingan profile terhadap database takson
Perbandingan memperhitungkan profile yang diperoleh dengan cara :
Mencari kesamaan dari berbagai takson yang berbeda dari database
% ID (Persen Identifikasi) Apakah isolat mikroorganisme tersebut berkaitan dengan suatu takson dalam database?Takson yang mana?
Mencari kesamaan dari typical profile dari setiap takson
Typicity index (T Index )Apakah isolat bakteri benar-benar terkait dengan takson tersebut ?
Interpretasi
Taxon xA
B
C
Persen Identifikasi :% ID
• Nilai mendekati 100%• Kedekatan relatif ke berbagai takson dalam database
Typicity index:T
C
the most typical profile
Taxon x
00
• Nilai mendekati 1 • Mendekati typical profile tertentu
Interpretasi
Setiap hasil identifikasi selalu dilengkapi dengan
HARUS DILIHAT PERTAMA KALI: menunjukkan tingkat hasil identifikasi berdasarkan pada % of id, dan index T
excellent identification » % id > 99.9 et T > 0.75 « very good identification » % id > 99 et T > 0.5 « good identification » % id > 90 et T > 0.25 « acceptable Identification » % id > 80 et T > 0
Low discrimination : sistem tidak dapat membedakan 2 takson atau lebih Doubtful profile : terdapat tottaly test againts
INTERPRETASI
Against tests: ?
Partially against tests
• Jika persentase positivitas < 25% dan test +• Jika persentase positivitas >75% dan test -
Totally against tests
• Jika persentase positivitas = 0% dan test +• Jika persentase positivitas 100% dan test –
INTERPRETASI
Low discrimination : lakukan complementary tests Doubtful profile (test totally totally against) cek :
Kontaminasi
A typical organism
Technical errors (mineral oil, reagent, shelf-life …)
Ulang pengerjaan
INTERPRETASI
APIweb
Tes orientasi
Isolat muda
Isolat murni
Media yg standard
Kekeruhan
inokulum
Cara Inokulasi
Inkubasi
Rekomendasi Teknis
Penyimpanan reagent
QUALITY CONTROLWhy ???
Memvalidasi proses transportasi strip API
Kualifikasi teknisi/pengguna
When ???
Setiap nomor lot baru
Setiap ada teknisi baru
How ???
Gunakan strain ATCC yang direkomendasikan oleh bioMérieux
Rekomendasi Teknis