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第二十一章 免疫学检测
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第一节 抗原抗体的测定
一、抗原抗体反应的相关理论 抗原具有抗原性(免疫反应性),可与相应的抗体在体外发生特异性结合,并在一定条件下出现可见反应现象。故可用已知的抗原(或抗体)检测未知的抗体(或抗原)。因抗体主要存在与血清中,故又称为血清学反应。
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(一)抗原抗体反应的特点1. 特异性2. 可逆性3. 比例性和结合物的可见性4. 阶段性( 1)特异性结合阶段 ( 2)可见反应阶段
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(二)抗原抗体反应的主要影响因素
1. 抗原、抗体反应的浓度、比例 2. 电解质 3. 温度 4. 酸碱度
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三、血清学反应的种类(一)凝集反应( agglutination ) 1.直接凝集反应( direct agglutination )
是指颗粒性抗原(凝集原)与相应的抗体(凝集素)直接结合所呈现的凝集现象。如红细胞 ABO血型的测定,细菌凝集试验。
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2. 间接凝集反应 ( indirect passive agglutination )
是可溶性抗原或抗体吸附于与免疫无关的微球载体上,形成致敏颗粒,与相应的抗体或抗原在电解质存在的条件下进行反应,出现凝集。
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(二)沉淀反应( precipetation ) 是指可溶性抗原与相应抗体在合适的电解质存在下,出现肉眼可见的沉淀现象。
1. 单向琼脂扩散试验 2. 火箭电泳 3. 双向琼脂扩散试验 4. 对流免疫电泳
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(三)补体结合试验 ( complement fixation
test , CFT) 是在补体参与下,以绵羊红细胞和溶
血素作为指示系统,来检测未知抗原或抗体的试验。
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(四)中和反应( nertralization ) 毒素、酶、激素或病毒等与其相应
的抗体结合后,导致生物活性的丧失。 1. 病毒中和反应 2. 毒素中和反应
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(五)免疫标记技术
1. 免疫酶技术
2. 免疫荧光技术
3. 放射免疫测定
4. 免疫胶体金标记技术
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第二节 免疫细胞的检测一、免疫细胞的分离(一)外周血单个核细胞的分离(二) T 、 B 及其它免疫细胞的纯化(三)免疫磁珠分离法(四)荧光激活细胞分离仪分离法二、免疫细胞的计数(一)花环形成试验(二)荧光抗体染色
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三、免疫细胞功能的检测(一) T 细胞功能的测定 淋巴细胞转化试验 :T 细胞在体外受特异
性抗原或有丝分裂原( PHA 、 ConA等)刺激后,能转化为淋巴母细胞。试验时取外周血,分离淋巴细胞,加入有丝分裂原或特异性抗原,在培养液中培养 72 小时,经涂片染色后镜检计算转化百分率。
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(二) B 细胞功能的检测1. 空斑形成细胞检测( plaque formingcell , PFC ) 是动物体外检测 B 细胞功能的方法。2. 定量溶血分光光度法( QHS ) 又称 B 细胞介导的红细胞定量溶血分光
光度法,反映机体的体液免疫功能。3. 酶联免疫斑点试验
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(三)其他淋巴细胞功能的检测 1.NK 细胞活性测定 ( 1 ) NK 细胞自然杀伤功能的检测 ( 2 ) ADCC 试验 2.LAK 细胞活性测定(四)吞噬细胞功能检测 1. 中性粒细胞吞噬功能的测定 2. 大吞噬细胞的检测
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第三节 细胞因子的检测
一、细胞生物学活性检测法二、免疫学标记技术法三、分子生物学方法
人类干扰素的检测 白细胞介素 -1 ( IL-1 )的检测 肿瘤坏死因子( TNF )的检测
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第四节 分子生物技术在免疫检测中的应用
一、分子杂交技术二、转基因技术三、多聚酶链反应