РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБАПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ

(51) МПКA61K 31/663 (2006.01)A61P 35/00 (2006.01)C07F 9/40 (2006.01)

(19) RU (11) 2 506 085(13) C1

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

(21)(22) Заявка: 2013103894/04, 30.01.2013

(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 30.01.2013

Приоритет(ы):(22) Дата подачи заявки: 30.01.2013

(45) Опубликовано: 10.02.2014 Бюл. № 4

(56) Список документов, цитированных в отчете опоиске: RU 2358739 C2, 20.06.2009. CN 1475218 A,

18.02.2004. RU 2124019 С1, 27.12.1998.

Адрес для переписки:630559, Новосибирская обл., Новосибирскийр-н, р.п. Кольцово, ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор",зав. патентным отделом Ю.Н.Мистюрину

(72) Автор(ы):Григорьев Игорь Алексеевич (RU),Морозов Денис Александрович (RU),Святченко Виктор Александрович (RU),Киселев Николай Николаевич (RU),Локтев Валерий Борисович (RU),Ворожцов Георгий Николаевич (RU),Лукьянец Евгений Антонович (RU)

(73) Патентообладатель(и):Федеральное бюджетное учреждение науки"Государственный научный центрвирусологии и биотехнологии "Вектор"(ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор") (RU),Федеральное государственное бюджетноеучреждение науки Новосибирский институторганической химии им. Н.Н. ВорожцоваСибирского отделения Российской академиинаук НИОХ СО РАН (RU),Федеральное государственное унитарноепредприятие "Государственный научныйцентр "Научно-исследовательский институторганических полупродуктов и красителей"(ФГУП "ГНЦ "НИОПИК") (RU)

(54) ТЕТРАЭТИЛ-2-(2,2,6,6-ТЕТРАМЕТИЛПИПЕРИДИН-4-ИЛАМИНО)-ЭТИЛЕН-1,1-БИСФОСФОНАТ, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ(57) Реферат:

Изобретение относится кпротивоопухолевому соединению формулы

Предложено новое противоопухолевоесоединение, обладающее высоким индексомселективности по отношению к раковымклеткам в сравнении с клетками нормальногофенотипа и выраженным противоопухолевымдействием в отношении опухолей человека иживотных, которое может применяться вмедицине и ветеринарии для лечения раковыхзаболеваний и профилактикиметастазирования опухолей, в том числе споражением костной ткани. 2 пр., 2 табл.

Ñòð.: 1

ru

RU

2506085

C1

1C

58

06

05

2U

R

RUSSIAN FEDERATION

FEDERAL SERVICE FOR INTELLECTUAL PROPERTY

(51) Int. Cl.A61K 31/663 (2006.01)A61P 35/00 (2006.01)C07F 9/40 (2006.01)

(19) RU (11) 2 506 085(13) C1

(12) ABSTRACT OF INVENTION

(21)(22) Application: 2013103894/04, 30.01.2013

(24) Effective date for property rights: 30.01.2013

Priority:(22) Date of filing: 30.01.2013

(45) Date of publication: 10.02.2014 Bull. 4

Mail address:630559, Novosibirskaja obl., Novosibirskij r-n,r.p. Kol'tsovo, FBUN GNTs VB "Vektor", zav.patentnym otdelom Ju.N.Mistjurinu

(72) Inventor(s): Grigor'ev Igor' Alekseevich (RU),Morozov Denis Aleksandrovich (RU),Svjatchenko Viktor Aleksandrovich (RU),Kiselev Nikolaj Nikolaevich (RU),Loktev Valerij Borisovich (RU),Vorozhtsov Georgij Nikolaevich (RU),Luk'janets Evgenij Antonovich (RU)

(73) Proprietor(s): Federal'noe bjudzhetnoe uchrezhdenie nauki"Gosudarstvennyj nauchnyj tsentr virusologii ibiotekhnologii "Vektor" (FBUN GNTs VB"Vektor") (RU),Federal'noe gosudarstvennoe bjudzhetnoeuchrezhdenie nauki Novosibirskij institutorganicheskoj khimii im. N.N. VorozhtsovaSibirskogo otdelenija Rossijskoj akademii naukNIOKh SO RAN (RU),Federal'noe gosudarstvennoe unitarnoepredprijatie "Gosudarstvennyj nauchnyj tsentr"Nauchno-issledovatel'skij institutorganicheskikh poluproduktov i krasitelej" (FGUP"GNTs "NIOPIK") (RU)

(54) TETRAETHYL-2-(2,2,6,6-TETRAMETHYLPIPERIDIN-4-YLAMINO)-ETHYLENE-1,1-BISPHOSPHONATE POSSESSING ANTICANCER ACTIVITY(57) Abstract:

FIELD: medicine, pharmaceutics.SUBSTANCE: invention refers to an anticancer

compound of formula.

EFFECT: what is presented is the new anticancercompound possessing a high selectivity index inrelation to cancer cell as compared to human andanimal normal phenotype cells to be used in medicineand veterinary science for treating cancer andpreventing metastases, including those includingosseous lesion.

2 ex, 2 tbl

Ñòð.: 2

en

RU

2506085

C1

1C

58

06

05

2U

R

RU 2 506 085 C1

Изобретение относится к новым биологически активным химическим соединениям,относящимся к классу бисфосфонатов (полифосфонатам), обладающим высокойпротивоопухолевой активностью, которые могут применяться в медицине иветеринарии для лечения раковых заболеваний и профилактики метастазированияопухолей, в том числе и для опухолей с поражением костной ткани.

Онкологические заболевания являются одними из наиболее тяжелых и опасныхзаболеваний человека, они являются одной из основных причин смерти человека всовременном мире. Для достижения максимального эффекта лечения раковыхзаболеваний используется совокупность различных подходов. Как правило,применяют хирургический метод удаления опухоли с последующим лечениемхимиопрепаратами и лучевой терапией. Однако сложность лечения обусловленабольшим количеством разнообразных опухолей человека, метастазированием иустойчивостью многих опухолей к химиопрепаратам и лучевой терапии. В последниегоды для лечения онкологических заболеваний стали апробировать такие новыеподходы, как фотодинамическая терапия, онколитические вирусы, иммунотерапия спомощью антител и иммунных клеток, генная терапия и вакцинация раковымиантигенами. В экспериментах на животных получены весьма обнадеживающиерезультаты эксперименты, но они также позволили сделать главный вывод - лечениеопухоли должно быть строго индивидуальным, что обусловливает необходимостьподбора конкретного вида(ов) и метода(ов) лечения.

Сегодня известно много различных химиопрепаратов для лечения онкологическихзаболеваний. Однако их количество и главное качество полностью не покрываютпотребности борьбы с раковыми заболеваниями и требуют создания новыхпротивоопухолевых препаратов.

Предшествующий уровень техникиОдним из перспективных противораковых препаратов является золедроновая

кислота, относящаяся к полифосфонатам (В.Г.Иванов, В.Ф.Семиглазов,В.В.Семиглазов, P.M.Палтуев, П.В.Криворотько, А.А.Малодушева, С.С.Гурбанов,Р.В.Донских. Бисфосфонаты в клинической онкологии: использование у больныхсолидными опухолями // Медицинский журнал: Фарматека. - М.: Бионика, 2007. - №18.- С.23-28), широко используемая для лечения онкологических заболеваний костей.Препарат выпускается под наименованиями «Резорба», «Zometa», «Zomera», «Aclasta»,«Reclast». Его противораковая активность достаточно хорошо изучена. Известномедицинское средство на основе бисфосфонатов или аминоглюконатов в виде солейдля предотвращения и лечения остеопороза, остеоартрита, рака, гиперкальцинемии,многократной миеломы (патент Китая № CN 1475218, МПК A61K 31/7008, опубл.18.02.2004). Известно применение бисфосфоната при приготовлении лекарственногосредства для лечения остеобластических метастазов, связанных с ракомпредстательной железы. Вводимый в составе лекарственного средства бисфосфонатиспользуют в дополнение к противоопухолевой терапии.

Известны также некоторые другие бисфосфонаты, нашедшие применение вмедицинской практике. Например, такие соединения, как памидроновая,алендроновая, ризедроновая, тилудроновая, клодроновая кислоты и некоторые ихфармацевтически приемлемые соли. Некоторые бисфосфонаты включают такжеимидазольную, оксазольную, изооксазольную, оксадиазольную, тиазольную,тиадиазольную, пиридиновую, 1,2,3-триазольную, 1,2,4-триазольную илибензимидазольную группу и т.д.

Бисфосфонаты также широко используются для подавления активности

Ñòð.: 3

DE

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

RU 2 506 085 C1

остеокласта при различных доброкачественных и злокачественных заболеваниях,которые вызывают чрезмерную или несоответствующую резорбцию кости.Сравнительно недавно их стали использовать для лечения метастазов в костной ткании при множественной миеломе (см. Fleisch H, 1997, Bisphosphonates clinical. InBisphosphonates in Bone Disease. From the Laboratory to the Patient. Eds: The ParthenonPublishing Group, New York/London, pp.68-163).

Наиболее близким аналогом изобретения является фармацевтический продукт наоснове бисфосфонатов, например, в форме готового к использованию растворазоледроновой кислоты (формула I) или ее фармацевтически приемлемой соли (патентРФ №2358739, МПК A61K 31/663, опубл. 20.06.2009 г.).

Однако вышеуказанные аналоги имеют следующие недостатки: часто они имеютсложную многостадийную технологию получения, что в конечном итоге повышаетстоимость препаратов. Кроме того, в инструкциях по применению препаратов наоснове золедровой кислоты содержится предупреждение относительно их почечнойтоксичности. Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственныхпрепаратов (Министерство здравоохранения, США) обязало производителейзоледроновой кислоты писать в аннотации, что этот препарат повышает рискпочечной недостаточности. В соответствии с предупреждением золедроновая кислотатакже может привести к тяжелому обезвоживанию пациентов. Рекомендуетсяпроведение мониторинга уровня креатинина в крови для оценки состояния почекпациента.

Другим важным обстоятельством является то, что опыт использования различныхпротивоопухолевых препаратов показывает: (а) необходимость использованиякомбинации нескольких препаратов для повышения эффективности лечения опухоли;(б) существование опухолей, устойчивых к действию одного препарата, что требуетиспользования нескольких различных химиопрепаратов в зависимости от тактикилечения; (в) индивидуальная переносимость пациентом химиопрепарата также можетварьировать в очень широких пределах. Это является одним из существенныхнедостатков существующих химиопрепаратов. Преодолеть этот недостаток возможнотолько через создание новых высокоэффективных противоопухолевых препаратовдля комплексной химиотерапии раковых заболеваний.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является получение новогохимического соединения, имеющего технологию получения с использованиемдоступных реагентов, обладающего высоким индексом селективности (способностьуничтожать раковые клетки, не затрагивая при этом клетки с нормальнымфенотипом) и выраженным противораковым действием в отношении различных видовопухолей человека и животных.

Технический результат достигается созданием нового биологически активного

Ñòð.: 4

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

RU 2 506 085 C1

органического соединения - тетраэтил-2-(2,2,6,6-тетраметилпиперидин-4-иламино)-этилен-1,1-бисфосфоната, формула II:

проявляющего противоопухолевую активность в отношении различных видовопухолей человека и животных, которое может найти применение в медицинскойпрактике в качестве препарата для лечения онкологических заболеваний.

Соединение II получают взаимодействием 4-амино-2,2,6,6-тетраметилпиперидина стетраэтил-этен-1,1-диилбис(фосфонатом), взятыми в соотношении 1:1, безрастворителя в течение 10 часов по следующей схеме:

Сопоставительный анализ с аналогами показывает, что заявляемое соединениепринципиально отличается от аналога [патент РФ №2358739] тем, что содержит вмолекуле тетраметилпиперидиновую структуру, находящуюся в непосредственнойблизости от бис(фосфонатной) части.

Пример 1. Получение тетраэтил-2-(2,2,6,6-тетраметилпиперидин-4-иламино)-этилен-1,1-бисфосфоната (II). К 180 мг (0,6 ммоль) тетраэтил-этен-1,1-диилбис(фосфоната) прибавляется 94 мг (0,6 ммоль) 4-амино-2,2,6,6-тетраметилпиперидина. Через 12 часов наблюдается полное отсутствие исходныхреагентов (контроль по 1Н ЯМР). Очистка с использованием колоночнойхроматографии (SiO2, CHCl3:МеОН 18:1, Rf=0.8). Жидкость. Выход: 85%. Найдено, %:C 49.75, H 9.36, N 6.10, P 13,38. C1 9H4 2N2O6P2. Вычислено, %: C 49.99, H 9.27, N 6.14, P13.57.

ИК (KBr, см‐1): 975.8, 1024.0, 1099.2, 1164.8, 1249.7, 1392.4, 1444.4, 1479.2, 1643.1,2875.4, 2908.2, 2935.2, 2985.3

1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3, δ м.д.): 0.84 (АВд, 2H, J=11.6 Гц, 12.7 Гц, 2*CH2 акс); 1.10(с, 6H, 2*СН3); 1.18 (с, 6Н, 2*CH3); 1.34 (т, 12Н, J=7 Гц, 4*СН3); 1.82 (АВд, 2Н, J=3.6 Гц,12.7 Гц, 2*CH2, экв); 2.58 (тт, 1H, J=6 Гц, 23.5 Гц, P-CH-P); 2.90 (тт, 1Н, J=3.6 Гц, 11.6 Гц,CH-NH); 3.19 (дт, 2Н, J=6 Гц, 17 Гц, CH2-NH); 4.12-4.22 (м, 8H, 4*СН2). 13С ЯМР (100

Ñòð.: 5

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

RU 2 506 085 C1

МГц, CDCl3, δ м.д.): 16.25 (дд, J=2.4 Гц, 6.3 Гц, 4*CH3, Et); 28.47 (2*CH3); 34.87 (2*CH3);37.71 (т, J=132 Гц, P-CH-P); 42.33 (т, J=4 Гц, NH-CH2); 45.63 (2*CH2); 49.02 (CH-NH); 50.78(2*CMe2); 62.52 (дд, J=6,7 Гц, 33.5 Гц, 4*CH2, Et).

Способ получения заявляемого вещества прост в исполнении (реализуется в однустадию), исходные вещества доступны, выход составляет 85% от теоретическирассчитанного. Предлагаемое соединение устойчиво на воздухе, легко растворимо вхлороформе, диметилформамиде и диметилсульфоксиде, мало растворимо в воде.Хорошо растворяется в воде при небольшом подкислении.

Пример 2. Исследование противоопухолевой активности заявляемого соединения.Использовали культуры опухолевых клеток А431 (клетки эпидермоидной

карциномы человека), SW480 (клетки аденокарциномы толстой кишки человека), RD(рабдомиосаркома человека), Mel-8 (меланома человека) и нормальную диплоиднуюкультуру MRC-5 (клетки легочного эпителия эмбриона человека). Клеткикультивировали в среде Игла ДМЕМ (Gibco BRL), содержащей 5-10% эмбриональнойсыворотки теленка (Gibco BRL), 2 мМ L-глютамина, 80 мкг/мл гентамицина сульфатапри 37°C в культуральных пластиковых флаконах (Costar, США). Для снятия клеток ссубстрата применяли 0.25%-ный раствор трипсина и 0.02-ный раствор версена (ФГУНГНЦ ВБ «Вектор») в соотношении 1:1.

Определение противоопухолевой (цитотоксической) активности соединений in vitro(МТТ-тест). МТТ-тест выполняли по методике, описанной в [Niks M and Otto M. (1990)Towards an optimized MTT assay. J. Immunol. Meth. 130 (1), 149-151]. Клетки А431, SW480,MRC-5 в концентрации 5×104 в 100 мкл среды Игла ДМЕМ, содержащей 10%эмбриональной сыворотки теленка, помещали в лунки 96-луночных культуральныхмикропланшет и инкубировали 24 ч при 37°C в атмосфере, содержащей 5% CO2. Затемв лунки добавляли по 50 мкл растворенных в DMSO исследуемых соединений и ихтрехкратных разведений. В контрольные лунки вносили трехкратныеразведения DMSO на культуральной среде. Каждая экспериментальная точкавыполнялась в трех повторах (три лунки на каждое разведение соответствующегосоединения и контроля). После чего культуральные микропланшеты инкубировали 48ч, 96 ч и 168 ч при вышеуказанных условиях. Затем в соответствующих культуральныхмикропланшетах содержащую исследуемые соединения среду удаляли, в лункидобавляли 200 мкл среды без сыворотки и вносили 10 мкл раствора MTT (исходнаяконцентрация 5 мг/мл в фосфатном буфере) и дополнительно инкубировалимикропланшеты в течение 6 часов. По окончании инкубации среду удаляли идобавляли по 150 мкл DMSO для растворения образовавшихся в результате реакциисиних кристаллов формазана. Оптическую плотность растворенного в DMSOформазана измеряли на микропланшетном спектрофотометре Multiscan при длиневолны 492 нМ. 50% цитотоксическую концентрацию (CC5 0) рассчитывалисогласно [Niks M and Otto M. (1990) Towards an optimized MTT assay. J. Immunol. Meth. 130(1), 149-151].

Противоопухолевая (цитотоксическая) активность в отношении опухолевых инормальных диплоидных клеток человека представлены в таблице 1. Значения CC5 0(мкг/мл) приведены с учетом ориентировочной растворимости исследуемыхсоединений в DMSO. Культуру клеток MRC-5 использовали в качестве контрольныхнормальных клеток с целью определения возможной избирательностицитотоксического воздействия исследуемых соединений в отношении опухолевыхклеток. Степень избирательности цитотоксичности выражали через индексселективности (ИС), представляющий собой отношение CC5 0 исследуемого соединения

Ñòð.: 6

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

RU 2 506 085 C1

для клеток нормального фенотипа к TC5 0 (токсическая концентрация) для опухолевыхклеток. Достаточно высокая противоопухолевая активность показана длязаявляемого соединения (II) и его аналога (I). Цитоксичность этих соединений дляопухолевых культур клеток варьирует в диапазоне значений CC5 0 от 0.4 до 31 мкг/мли сравнима с цитоксической активностью коммерчески выпускаемогопротивоопухолевого препарата эмбихин (CC5 0 для клеток А431-3 мкг/мл.

Для заявляемого соединения (II) обнаружена избирательность цитотоксичностисразу для двух используемых опухолевых клеточных культур А431 и SW-480 синдексом селективности 5,9 и 9,1 соответственно. Индексы селективностииспользуемых в настоящее время противоопухолевых хемотерапевтических средствобычно не превышают 4-8 [Ring C.J. (2002) Cytolytic viruses as potential anti-canceragents. J. of Gen. Virol., 83, 491-502]. Обращает на себя внимание тот факт, чтосоединение (I) (аналог) проявляло свою цитотоксическую активность на более поздниесроки инкубации (96 и 168 ч) только в отношении одного типа клеток А431 приналичии высокого индекса селективности только при инкубации 168 часов, тогда какзаявляемое соединение (II) было эффективно в течение всего периода наблюдения, тоесть проявляло выраженную противопухолевую активность уже через 48 часовинкубирования.

Примечание: Исследуемые соединения (III) и (IV) были синтезированы заявителямии использовались как соединения сравнения, не проявляющие значимойцитотоксичности в отношении исследованных культур клеток (отрицательныйконтроль).

Цитотоксичность соединения (II) дополнительно исследовали с использованиемопухолевых культур человека: MCF-7 (рак молочной железы), RD, Mel-8 и однойкультуры клеток человека нормального фенотипа - MCF-10A. Соединение (II) такжеобладает избирательной цитотоксичностью к опухолевым клеткам RD и Mel-8 поотношению к обеим нормальным клеточным культурам (ИС от 2.2 для MRC5/RDи Mel-8 до 11.1 для MCF-10A/SW480).

Таким образом, технический результат изобретения подтверждается тем, чтозаявляемое соединение, формула II, проявляет высокую противоопухолевуюактивность по отношению к раковым клеткам человека А431, SW-480, RD, Mel-8 прииндексе селективности от 2,2 до 11,1.

Ñòð.: 7

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

RU 2 506 085 C1

Пример 3. Оценка противоопухолевого действия заявляемого препарата (II) длямышей линии C57BL/6 с привитой опухолью мышиной легочной карциномыЛьюиса CRL-1642 LLC.

Исследование проводили согласно методологии, изложенной в работе [Руководствопо экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологическихвеществ. / Под ред Р.У.Хабриева, М.: 2005]. Культуру клеток мышиной легочнойкарциномы Льюиса CRL-1642 LLC культивировали как монослойную в среде ИглаДМЕМ - F12 (Gibco BRL), содержащей 5-10% эмбриональной сывороткителенка (Gibco BRL), 2 мМ L-глютамина, 80 мкг/мл гентамицина сульфата при 37°C вкультуральных пластиковых флаконах (Costar, США). Привитие опухолевых клетокосуществляли посредством подкожного введения 107 клеток CRL-1642 LLC в 0.2 млсреды ДМЕМ - F12 самкам мышей линии C57BL/6 весом 16-18 г. Обработкумышей C57BL/6 исследуемым соединением (II) проводили двукратно посредствомвнутрибрюшинного введения 0.2 мл раствора соединения (II) в физиологическомрастворе: первая инъекция через сутки после введения опухолевых клеток, втораячерез 13 суток. Тетраэтил-2-(2,2,6,6-тетраметилпиперидин-4-иламино)-этилен-1,1-бисфосфонат (II) вводился в дозе 1.0 мг на мышь на инъекцию. Выбор дозысоединения (II) обусловлен его токсичностью для мышей C57BL/6 и был определен впредварительных экспериментах. В качестве препарата сравнения использовалициклофосфамид. Циклофосфамид (аналог) является широко используемымфармакопейным высокоэффективным противоопухолевым препаратом, выпускаемымтакже под торговыми марками Endoxan, Cytoxan, Neosar, Procytox, Revimmune,Циклофосфан (Takimoto C.H., Calvo E. "Principles of Oncologic Pharmacotherapy" in PazdurR., Wagman L.D., Camphausen K.A., Hoskins WJ. (Eds) Cancer Management: AMultidisciplinary Approach. 11 ed. 2008). Препарат в течение длительного временишироко используется для лечения людей. Циклофосфамид обладает широкимспектром противоопухолевой активности против мелкоклеточного рака легкого, ракаяичников, рака молочной железы, рака шейки и тела матки, рака мочевого пузыря,рака предстательной железы, нейробластомы, ретинобластомы, лимфогранулематоза,лимфосаркомы, неходжкинских лимфом, ретикулосаркомы, остеогенной саркомы,множественной миеломы, хронических лимфо- и миелолейкозов, острых лимфо-,миело- и монобластных лейкозов, а также ряда микозов и аутоиммунных заболеваний.

Циклофосфамид вводили по вышеуказанной схеме в дозе 1.0 мг/мышь. Группеконтрольных мышей с привитыми опухолями вводили 0.2 мл PBS на инъекцию.Каждая группа состояла из 10 животных. Прогрессию опухолей оценивали визуальнои посредством измерения на 21 и 32 сутки после привития. Объем опухолей определялиследующим образом: максимальная длина опухоли, умноженная на ее ширину вквадрате, деленная на два. Для каждой группы животных рассчитывали среднююпродолжительность жизни (СПЖ).

Уровень токсичности заявляемого соединения (II) и ффективногохимиотерапевтического противоракового препарата сравнения (циклофосфамид) длямышей определяли при однократном внутрибрюшинном введении. Токсичностьвыражали через ЛД5 0 (50% летальная доза). ЛД5 0 для исследуемых соединенийсоставили:

>5.0 мг/мышь для тетраэтил-2-(2,2,6,6-тетраметилпиперидин-4-иламино)-этилен-1,1-бисфосфоната (заявляемое соединение);

>5.0 мг/мышь для циклофосфамида.Результаты оценки противоопухолевой активности соединения (II) представлены в

Ñòð.: 8

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

RU 2 506 085 C1

таблице 2. Отмечена 100%-ная эффективность привития саркомы Льюиса,сопровождающаяся различной степенью прогрессии привитых опухолей у опытных иконтрольной групп животных. На момент первого измерения объемов опухолей (21сутки после привития опухолей, 20 сутки после первого введения и 7 сутки послевторого введения исследуемых соединений) наблюдался выраженный ингибирующийэффект в группах животных, обработанных циклофосфамидом и тетраэтил-2-(2,2,6,6-тетраметил-пиперидин-4-иламино)-этилен-1,1-бисфосфонатом (II). Причеммаксимальный эффект на этот срок отмечался в группе животных после леченияциклофосфамидом. Так, средний объем опухолей в группе циклофосфамидомсоставил 0.26 мл, а в группе тетраэтил-2-(2,2,6,6-тетраметилпиперидин-4-иламино)-этилен-1,1-бисфосфоната (II) - 0.92 мл и 2.47 мл в контрольной группе. На моментвторого измерения объемов опухолей (32 сутки после привития опухолей, 31 суткипосле первого введения и 18 сутки после второго введения исследуемых соединений)существенное ингибирование прогрессии опухолей отмечено в группах животныхполучивших бисфосфонат (II) и циклофосфамид. У животных после введениязаявляемого соединения (II) на этот срок эффект несколько более выражен, чем уполучавших циклофосфамид: средний объем опухолей 2.70 мл и 3.22 млсоответственно против 6.05 мл в контрольной группе мышей. С этими даннымихорошо согласуются результаты определения средней продолжительности жизни вгруппах животных: увеличение СПЖ по отношению к контрольной группе животныхприблизительно на 25 процентов (8 суток) в группе заявляемого соединения (II) ина 15% (5 суток) в группе животных, получавших циклофосфамид.

Возможно, что изменение схемы терапии с учетом особенностей фармакодинамикии фармакокинетики заявляемого соединения позволит добиться более выраженногоингибирования роста опухолей, что будет сопровождаться существенным увеличениемсредней продолжительности жизни.

На мышиной модели показано, что тетраэтил-2-(2,2,6,6-тетраметилпиперидин-4-иламино)-этилен-1,1-бисфосфонат (II) (заявляемое соединение) обладает выраженнойпротивоопухолевой активностью, которая характеризуется снижением размераопухоли, существенным увеличением средней продолжительности жизни животных.По своей противоопухолевой активности заявляемое соединение превосходитактивность высокоактивного фармакопейного противоракового препаратациклофосфамид.

Таким образом, технический результат изобретения подтверждается тем, чтозаявляемый препарат обладает выраженной противоопухолевой активностью поотношению к различным опухолевым клеточным культурам человека, таким как -А431, SW-480, RD, Mel-8, при индексе селективности от 2,2 до 11,1. Заявляемыйпрепарат способен оказывать значительное противоопухолевое действие при лечениимышей с привитой опухолью мышиной легочной карциномы Льюиса CRL-1642 LLC. Вэкспериментах на животных он обеспечивает снижение размеров опухоли и

Ñòð.: 9

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

RU 2 506 085 C1

существенное увеличение продолжительности жизни животных.

Формула изобретенияТетраэтил-2-(2,2,6,6-тетраметилпиперидин-4-иламино)-этилен-1,1-бисфосфонат

следующей формулы: 

обладающий противоопухолевой активностью по отношению к опухолям человекаи животных in vitro и in vivo.

Ñòð.: 10

CL

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50