identification of colon tumour-associated antigens by phage antibody selections on primary...
TRANSCRIPT
����������� � ��� � � ��������� ������� �� ���������� ��������� � ������ ������� ������
���� ����� � �� �� ��� ������ � ���� �� � !" �� �� #��$� ������ ���%��� %����� ��&
���������� ���� ��� ���������� ����������� ����������� ��� ������ ��������������� ���� ��� ���������� ������ ����������� �� �� �� � !" " #$ ����������� ��� ������ ����
�������� '( # �� ')))* �������� �� ������� ��� +, -������ ')))* ������� '. -������ ')))
��������
��� ��������� � ���� � � �� ���� �������� �� ����� �� ��� �� �� ��� �������� � ����� �������� �� ����������� � ������ ����� � ������� %/����� ��� ��/ � � � ������� ��� � �� �������� ��� ���� ��������� � ���� 0�������� ������ ���� ������ � ������� ������ 1���2� /� �������� ����� � �� ���� ������ ��������� � ������� ������� ��� � � � ������ 0/ �������� /��� ��������� ��� ������ /��� ��������� ��������������� ������ ���� �������� /����� ��
���� ������������� ������ /��� ����� ������ 0���� ������� �� � � ��������� �������� � ��/� �� ����� ����� �3��������� � � �� � ��4����� ������� �� � ��4����� ��4��������� ����� �� �� ����� ������� �3������� � ���� ���� ��� 0�� ������� ��������� �� ��� �������������� 1�%�2 �� ��5�������6�� ��� ������� ��� 1���7�2 � ������ ��� ����� ������� ��
��4����� ��� ����� ��� ��������� � � ��������� ������� 1���� �����8 � ���� �'2� 0��� ���� ����������� ������� ��� � ��� ������ � ���� � � � ������� ��� �� ��� � �� ��� ��� ��������� � ���� � � ���� '))+ �������� 7���������� ��� ������ ���������
%��&���' ��� �����* ���� ������* 0 � � ������* ���� ��������
� ���� ������
������� ����� 1���2 �� ��� ����� ��� ������������� �� ��� /������ /���� 0�� �������� �������������� �� � ����� ����� � ��� ������ � � ��� �9 ��� ���������� 1� �������� : ����� �;�< � ���� 1;�=>2 �� � �� ����� 1������ ���2 ���� ��������� ������ ������2 �� �������� �������%/����� ��������� �� ������ ����� � ���������� ������� ���� ������ �������� ��������� � � ��������� ������� �� ����� � �� ��������� ��/ �������� ������ ?+�'@� %/����� ��� ���� ����� ������� ��������� � ��� �� ��� �����1���� ������������� ������ 1���2� ���� �'�0�A,'� �����82 �� � � ��������� �� �� � ���� �3������� � ���� ���� 0��� �� ���� ���� �
�3����� ������� /��� ����� ������� �� ��� � ������� �� ��� �������� � ������� ?B@�0�� ����� �� ��/ ����� ������� �3������� � ���
��� ����� �� ���������� ������� ��� ��� ������ ����� /��� ����� ������ ���� ����� � ������3����� �� ���� ���C ��� ��������� � �������� �� �������� ������� � ��� ����� ���� ?D@� �� ������� � � � ���������� ���� ��������� �� ��� ������ � 0������ ����������� �9� ��������������� ���� � 18%���2����������� �������� ������� ��� ��� ������ ?;@� 8����������� ������� ������� �� ����������� ����� ���� ����� ����� ��� �� ������� /��� ����������������� ?:@ � � ����� �������� ������� � ������� ���������� ?,@ � ��� ������������ ������������� ���� ������ 1�����/�� �� ?(@2 �� �� ����
��� � ���� � C ��6�� ������ �������� ������� �������� ���� ����� � ���� �� ?.�+)@ � 6�/� � � �������� ?++�+'@� 0��� ������� �� �� ��� � �������������� ���� ��� �� ��� � ����� �����E ���� ��������� ���� �� ������ �� ���� � ��� �������� ����������� ����� ���� �� ���� ����� �� �����
).;.�()D.F)+FG � ��� ���� ����� � '))+ �������� 7������ ���� ��� ������ ���������
�� � E 7).;.�()D.1)) 2))DB'�.
� ���� # ��� � ����� B, 1'))+2 ;D'H;D.
///��9���������
& ����������� ���� 0���E IB+�DB�B(,�D:B)* �3E IB+�DB�B(,�
::+B�
()��� �������' ��J����5���� 1%��� %�����2�
���� � ������ ��� ������ � ����� ?+B@ �� ��� � ������ �3����� � � �� ������ ?+D@� ���� �/� ����� �� �� �� ���� ������� ��� ��������� ��� ��������� �������� ������� /��� ��� ������� ?+;@�0�� � ����� � ���� ����� ������� � ��� ���
������� ���� ���� ��� ���� ������ ������ ��5� ��C ���� �� ����� ���� � ��� �������� ����� ����$� ��� ����� ��� ��������� �� �� � ���� ��������������� � �����3 �������� � �� � ���� � ������ ��/���� /� ����������� ��� �������� ������� ��� ������ � �������� ?+:@� 0���� ����� /��� ��� ������ �������� ������� �� �K����� �������� � /���� � � ������ %���� /� �������� ��� �� � ����� ������� �� ��� �������� � � �� ������ ��������������� /��� ��� ������ � ������ ������ � ����������� ����� ���� ������ ��������� ?+,@ �������� ������ ��� � � � ������ /� ���� � ���������������� ��� �������� �������������� � � � ������� �� ��� �������������� 1�%�2 �������
� ��������� �� ����� �
"*+* ���������� ��� ������
0A+E L+'� �, ��)��-� �.�(� ���� �����F=M����B:����I I� ��/C� ��N�8+;
"*"* 0� ���
0�� ������� ����� ���� ���� ��' /� ��������� ��� ������� 0��� � �� �� �������� 1�0��*� ���� %0 B,2 �� /� � �� ��� �� O �����M� 8������ ����M� 8��� � 1O8�8* O ������ ��- ������� ������ ��� 8��� ��� >7�2 � ���������� /���+)P 1�F�2 ���� ��� ��� � �� ' �8 ���� ������ �����/��� 6��� � B,�� �� � ������� �������� ��������� ;P �Q'�
"*1* ����� ����2�� �� ����� � ������� � ����� ��������
� ����� � ��� � ��� ������ ����� ���� ��������������� ?+,@ /� ��� �� ��������� 0�� ������ /����� �� /��� ������ ���� 8+BL), �� ����� /���� ����� �� ���������� ��� ��� ������� � �� ��� ������� �� ����������� ����� 1��A2 ������������ ��������� �� ?+(@� ����� ��� �������� � ��� ������������ � ������� ����� �������� �������1=�2 ������ /� �� ����������� ����� ��� � ������������� R����� ������� �� ������������� � ���K������������������� � ������ ������ ������� ����� ���� � /�
������ ��� ��� ��������� � ������� 0��� � /�/���� ����� ����� /��� ') �� � ��������� 4��������� 1� 72 1;) �8 ������� � 4�� 1L%'�QDF
-'%�QDE �% ,�D2* +;) �8 -��2� � � �� ���� ������ ���� ������� ������ ���� �� /���� ��� /��� � 7�0��� � ������ /��� ��/�� � ������ �� � 4�� � �������� /� ������� ����� /��� ������� �� ����������� ���� � D�� �� ������ � 4�� 1� 7� �������� +�8 �O0�� + �8 �A0� �� )�; �8 ������������1O002 /��� ������ ��6���� -�3� ��� ����� /��� ��������� �� ������� ���� 1+))�� B ���� D��2� /��������� ����� /��� +) �� � � 7 �� ������� ���� ����� ������� �� �3�� �� ; �� )�';P 1/F�2 ������������� �� � 7 �� ') ��� � D��� ����� /���/���� ����� ����� ��� /��� +) �� � � 7� ��������1+))�� B ���� D��2 �� ��� ������� �� + �� � � 7������ /��� ���6�� �� + � � �� ������� �� �� +�� � DP 1/F�2 8����� 1�6����� ���6 �/���2 �� � 71DP 8� 72� ���� � ��� ���� � ������� �� ��� ������ + +' � � �� ������� �� /��� ������ ��6���� �����/��� /���� ��� ����� /��� ; �� � � 7 �� ������� ����� �� ��� ������� �� ����� /��� �� ��� /��� + ��� +)) �8 ������������� 10��* �%S+'2 �� +) ��� ��� ������� ��� 0�� �� �� /� �� ������� /��� )�;�� + 8 0������ 1�% ,�;2 �� ����� /��� ��/�� ������� �3��������� ��/��� (* � � 0A+ �� ������� ���������� �� ?+(@�
"*3* 0�������������� �� ����� ����2�� �������� 2���# 4������������ ��� ���.��������������
����� ��������� �������������� R������ � �������������� �������� /��� ������� �� �������� ���������� 1���2 ��� ������ ������� ���� ����������� �>��������� 1;���A� AA� 0�� ��� 000��� ��� AA�B�2 �� ���0�0 ��C 1;��000 A0� A0�000 ��� A�� A00 �A0�B�2� 0�� ��������� � �������� ����� �������� ������� 1=�2 ������� /� ��������������� ����� ������� � ����� �������� R����� ������ �� ������������� � ���K����� ���������=������ ������ R������ /��� O-�������������� ���������� �� ?+(@�=� ��� �������������� 1�%�2� ; ���������
���������� � ��4����� ����� � �� ���� ���� ��/��� � � �� � ���� � 7������ ������� 1L��������O ����� 0�� -���������2 ���� ������� 7����� /��� ������������� � �� ������� �� �� ������ /������������ =� ������ �������� ���������� ���������� �� ����������� =� 1��=�2 �� ����� ������� �� ?+.@� %/����� ������ /��� �3�� /��� +P1/F�2 ������������ �� � 7 �� ') ��� � ��������� �� 1������ � /��� �����2 ����� �������/��� ��������� ������ ��������� ���� ���� ���� ���� �� � ������� � �������� ��� /��� ��������� �%� ���� ���������� ���� �� K���� ����������� 1�8��2 �� ��� ������ ��C �� ����������1=���2 /��� � ��������� �� ��=� �� ����� ������� �� ?+.@� =� �������� /��� � ����� �� �������������� ��3��������� ��C ���� �� �������� ��
5*0* 5���� �� � * 6 (.����� 7.��� 0����� 18 ," +- �3"9�3: ;DB
���� � ����� �)����������� ������ ��� ��� �������� ��� ������� ����� ���7+ ?+,@�
"*�* #�� ���� �� �.����)2������ �� ����� ����2���������� 2� ����� ;& ��������
���������� ��/��� ��' ����� /��� �������� �� ���< ���� �� �������F�O0� �������� �� /������� /��� � 7� ����� /��� ������ ��� ��������� � �3��/��� +P 1/F�2 ������������ �� � 7 �� ') ��� ��� ������� ��� 7 ���C ������ ����� /��� /�����/��� /��� 'P 1/F�2 ����� ��� � �� ��� 1 7�2 ��� 7 �� ��C �� � ���3������ ;�+); ����� /������� ��� ��� ����� /��� ������ � �� + � � ��������� �� �� ������ 'P8� 7 �������� )�);P 1/F�2--B 1'P8� 7F-B2 �� ����3�� ������ � �� 'P8� 7�� ��������������3�� ������ ����� /��� /���� �/���/��� )�; �� � ��� ���������� � 4�� ���/��� ����� ��� ����� ����� 7������ /� �������� /��� � ��������������� ������ �������� 1���3������ +))
�82� ��� .�+) ������ 1?')@* ;)P 1�F�2 �������� ������� �� DP 8� 72 �� < ������� ����������� 1=�0�2���9 ���� ����� ����� �� ��� ����� ���� 1O6� A���� �� O����6* 'P 1�F�22� �����/��� ����� ��� ������� �� )�; �� � � 7 �� �������/� ��� ����� �� </ �������� ���� < �������������� ���� ����� 1=��72����� � 1 ���� T O��6������ %���������� A�����2�
� �������
0 �������� ������� ���� ������ ���� ������� ����� /� ��� � � ������ ���� �������� /��� ����������� �� ��� � � � ����� �� ������ ���� ���� =����� ������ ��������� ?+,@ ����� ������� ������� � � ������ =� ������� ������ ��/ � � ������������ ��� � � � � ��4����� ������ /� ��������� �� ����� � �� � ��������* ��������� ���� �� � ����� ��4���� ���/��� ���������� 0��� +
=��� +� ��� ������������ ������� � ���� � ���������� � ��� ������ ���� ��������� =� ������ ��������� �� ������
�������� /��� �������� /��� ��� .�+) ������ ���������� ������������� ������ �� �� ���3������������ ���� �� ��������E 12 �������
����� 1 =� ������ �������� � ���� � �3��2* 1�2 ���� ;* 1�2 ���� (* 1�2 ���� �(�
;DD 5*0* 5���� �� � * 6 (.����� 7.��� 0����� 18 ," +- �3"9�3:
��/� ��� ��� ��� � ���������E ����� /� � ����������� �� ���� ������ � � ���� �� �� �3������ �� �����4������� �� ��� � ���� � ����� ��� �� ���������%/����� ��� ��������� � ����� �������� � ��������� =� ������ ������� ���� �� ���� ���������������� /��� ����� �������� � ��� ������� �/���
� ������ � �������� 10��� +2� ����� � � �� ��� � ���� ��������� ��� ��������� � ��� �������� ���� �������� ���� /� �3����� �� ����� ����� ������������������ ������ 1'; ���� � �� � � �� +, ����� �� ���2 /��� � ���C ����� ������ �� ����� ����������/��� ��� ���� � �� ��� �������������� 1�%�2�
0��� '
Q������/ � R�� O� �� #�������� ��� � �������� ���� ��������
R����� R����� ����� ������ ���� ���� R����� ������� O�������� ��� #�������� ���
<� 1���� ;2 R%B O��,,F$A%+:I O;�; #%D�
<= 1���� ;2 R�B R�FB(6 ��� #�'
<� 1���� (2 R%B R%A�B�,FO��(' O:�'; #%:�
<= 1���� (2 R�' O��',F�'.I ��� ����
<� 1���� �(2 R%B ���(F��B));�B O:�+BFO-+ #%D�
<= 1���� �(2 R�B O��+:FR�B�+ ��� #�'F#�B
���� �� ��������� ����� ���� ��� ��C ���� �������� ���/�� � R����E 1����EFF///�������������� 6F������F����������FO-��
��Q0�����2� ��� ������� � �� �� �� �����������
0��� +
������������� � ���� ������ ��������� �� ��������� � ����� �������� � ��������� ������
7������� � �� ��� � ����� 1�2 Q �� � ����� 12 ��� F� ���������� ����� P � ��������� �����
+ D�'�+)+' '�:�+), :�'�+)�: ��� ����
' '�D�+)+B ;�)�+), '�+�+)�: )�BD ����
B +�(�+)+B B�B�+)( +�(�+)�; (�;, (B
D (�)�+)+' D�.�+), :�+�+)�: )�BD .D
; '�;�+)+B D�+�+)( +�:�+)�; '�:' +))
���� �� ��������* ����� �� ����������� 0����� �� ����� � ����������� ��� 1�� 2F���� ���������� ���� �� ������ �E 1��� F� �������� � �� �I+2F1��� F� �������� � �� �2�
0��� B
�3������� ����� � ������� ��������� �� �������� ���� ������ �������� � ���� � ���� ���� ��
0��� � 7������ �� =� ; 7������ �� =� ( 7������ �� =� �(
���� 8����� � �� ��������� I
� ��������� �����
���� H
��� 8����� � I � ��������� ����� 7��� � ���� ����� ��
��������� ����� �������� I
8����� � I � ��������� �����
��� � 8���� ������ �I
� ��������� ����� ���
H 8����� � �� ���������I
� ��������� ����� ���
L����� Q��� ����� � � �� I
����� �� �H ��3���F����� � � �� I
����� �� �����3 H H H
����� Q��� ���� � ��� ��������I��������� � H ��� � ��� �� ��������� I
� �� ������� � ��� �������� � I H ������� � ��� �������� � I
����� ��� H H H
8 ���� H ��������� ����� �������� I H
Q��� � H H ���� ��������� I
������ �3����� ��� I �������� ��� � ���� �3����� ��� I �������� ��� �76�� H H H
7����� H H H
7����E ��� � 8����� � �� ��������� I
� ��������� �����
R��� ����� I ����� � 8����� � �� ��������� I
� ��������� �����
0����� 1=����2 ���� �������� I 7�� ���� � ���� ����� �������� I 7������ ������ �I/��� ����
����� ���
>��� � � � �������� � � ��� ��� ���� � ��� � � ��� I
I� ��������* �� ��������
5*0* 5���� �� � * 6 (.����� 7.��� 0����� 18 ," +- �3"9�3: ;D;
����� � � � ��� � ���� ��������� � ������� ������� /��� ������� �� ��� ��������� � ��4����� ���������������� �� ���� � �%� ���� ��� � � � ���� �� ��4����� ������� %/����� ���� ��� � ��� ���������� ����� � � +, ��4����� ����/ ����������������� ������� ����� ������� �� �%� 1=��� +2� 0/ ���� �������� �3�� ������ ������ ������� �������������� 1����� ; �� �(2E ��� ������� ������� ������/� ����� ������ �� � � �� ������� ���������1=��� +� �� �2� 0�� �������� ���� 1 (2 ������ ������������ /��� ��������� ������ � � ������� ������ ���������� 1���� ��������* =��� +�2� 0�� R������ � ������������� �������� /��� ��C ����� �� ��/� � �������� ��� ��4������ � � ������ ��� R����� �������10��� '2� <� ����� /��� �� ������� ��� ��� ������1R%B2 ���� ����� �� ����� ���� ����� 1<=2 ����������� ��� 1� �� �2 ������� 1R�' �� B �� R�B�������* 0��� '2� ��� ���� � ��� �������� ��� ��� =� �������� �� (* � � ������� ��� �� ��������� /��� �3������� � ��� �������������� ������������ � ����� �� ���� ����� � ���3������ D;6O� ��� �������� � �� �� � ����� � ��� ��� .)P�� ������� �8�� 1=��� '2� �� ������� =��� ������� � �8���� ����� =� ��/�� ������ ��6 � ����������� ���� �3������ �� ������ � ���3������;) 6O 1=��� '�2� 0�� ����� � � ����� ������ �������� ����� ���/��� :)) �� ()) �� ��� � � �������� �� ���0 ������ ��� ������� ��������� �� ��� ��������
������ �������� � � ����� ��� � � � ������������� �������� � ������ ��4����� ��� � � ��1�S+)2 � ��� � ��4��������� 1O 6��M �H�2 /������� �� �%� ������� ��� ����� ������� /��� �3��������� �� � � �� ������� ������ ��� ��� ������� ������ ���/� �� =��� +� 0 �3���� /������ ��� ����� �������/��� �� �3������� �� ��4����� ���������� ������� ������� � ������� � ��� ������ � �� ������� /� ��������� ���� �( ��/�� ����� ������� � ��������� �� �� � � ��* =� ; ��/������� ��������� �� ����� �� � �� ������� � � /���� ��������� ��� ������� /��� ����� �������� ���� ( ��� ��� ������� ����� �� �� ������ � ��� 0 ���������� ��� ������� � ������ ������3������� ����� � ���� � ��4����� ���� ���� ��/� ���������� �� �%� 10��� B2� ����� ; �� �(�������� ������� �3������� �� ������ ���� ��������E��� ; �� �( ���� /��� ��� � ���� �� � ��� �������������� ���� 1��� �� ��� � �� ���2 �� � ������ �� %/����� ��6�� ��4������� ���/��� ��� ����� ; �� �( /��� �� �������E /����� ������ �(������� ������ ����� �� ��������� ����� �� ��� ���������������� �� ����� �� ��3��� �� ����� � � �� ��6������ ���� ; ��/�� ������ ������� � ��� ������ ������ �� ��� ������ ����� � � �� �� ��� 6����� 10��� B2�= ��������� =� �( ��� �� ���� /��� ����� ��������� �� /����� ���� ; ��/�� ������� ������� � ����
���� �� =������ =� �( � �� � ��� �������� � � ������ ���� � ��� � � ��� �� ��� ��� �� /����� =� ;��� ��� ������� ( ��/�� ��� ���� /�6 ����������/��� ��������� ����� �� � ���� �� ��� �� ����� � ���� ����� �� ��� �� ������� � � ��/������� ������� ������� � ��� ���� �� ������ 10��� B2��� ���� �3�������� � ��������� ��� ���� ��
/����� � ��� ����� �������� � ������ ��������� =������� �������� /��� ��� �� ��� ��������� 0������ �� ������ �3������ ��� ��� ��� ���� ���� ��'/� ������ � �������� ��� �� ���� ����� /��� � ������ =�� -�� � ��� ����� �������� ������ ����������������� ����� ����� ������ �� ���� ����� ��������� ���� ����� �������� �������� ������� ��� ����������� � ���� ���� � ��� ������ 1�� ����/�2� �� ������� ��� ������������ ���� ��� ��� ����� ������ �� �� ��� ��� �� ��� �� �� ��� ������������ � ������� ������ 1�� �� ��/�2� 0����
=��� '� � ������� � ��������� ��������� ������ ���������
������� �������� /��� ��� ��� �� (* � � �� � ����� ��� ���
���������� ���� �� ���� � ���������� ���� �� K���� �����
������ 1�8��2E 12 ��� � � ����� � ����� ����������� ���
������������� 17O7���A�2 � �8���� ����� =�* ������� /���
��� ����� �� ���� � ������ ������ � � �������* 1�2 ��� ���
���� ��C �� ���������� 1=���2 ������ � �8���� ����� =�*
������� 1QO '() ��2 � ��� </���� �� � ��� �� �� /�
��� ��� � � ����� � ��� �������� ����� 8� ��6��* ����00�
������� � �3��* 8$� ���� �� /������
;D: 5*0* 5���� �� � * 6 (.����� 7.��� 0����� 18 ," +- �3"9�3:
��� ��� ��/ ��� ��� ������� ��������� �� ��� ������� �������� � �� /��� �� ��������� � ��������������� � ��� ������ �3������� � ��� ������ ��
���� ������� </ ��������� ������ � ��' ����� ���� =� �������� ; �� �( ��/�� ��� ��������������� /� ������� /��� ����� /��� �� �3�� /��������������� 1=��� B2 � ������ /��� ��� �������� 1O00* �� �� ��/�2� %/����� ��� �������������� ��� ������� ���� ��������������3��/��� ��' ������ ������ ��� ��� ������� ����������� ��� �������� ; �� �( �� ������ ���� ��6����
� ����������
�� ���� ������ /� �������� ��� � ������ � ������ ��������� /��� ���������� �� ������� �3������� �� �������� ������ �� ������ ����� ������ ��������� ������ ������ � ��� � � � ����� ��������� �������������� ���� �� ��������� ; �� �(�������� ��������� ������������ ������� �� ������ ( ������������� ����� /��� ����� ����� �� ���� � �� ���� 0���� ������� �� � ��������� ��� ������ �� �3������� �� ������� � �� 1�S+)2 ���� � �� ������ �� �� ��� � ���� � ���� ������������� ��� 0��� �� �� � � ��������� �� ��� ������ ������� � �� �� �������� � � � ��������� ��������= � �� C �������� �3������� �� ���� �� ������ �� ����� ������ ����� ������� � � � � ��6����0�� �������� ����� ��� �� ���� ������ ������
��� /� �������� � ������ ��� �������� �/��� �������� ���� � ��4����� � � �� �� � ���������� �������� � �������� �������� � ������� ��C � �� ��� � � ���� � ������� 1���� � �� �� ������ ������ 1%��2 ���� ���2� 0�������� �������������� � � � ������ /� ����� � � ������� ���� ������ � � � � ���� ���� �� � � �� ���/��� �� ������ � �������� �� �� ���� � ��4����������� =������ ��� ��������� � �������� �������������� /� �������� � ������� � ���������6��� �������� � � �� ������� ��� ����� ������������ �������� ��/�� ��������� �/��� ��� ����� � � �� ��� ��4����� ������� ������ 1�S+)2� %/�������� � ����� � ����� ��� ��� �� ���� �� �%� 1+D � � +, ��4����� �������� ������ ���� ��� � ��� ���������2 �� ������� ��� � ��� � �������� �������� �� � ���� � ������� /��� ��������� ���������������� �3������� ������ � ����� =�� � � ����� ������������ �� ��� ���� � �/ � ������ � ������ �������� �� �%�� 7���� ��� �������� �� � ������������ ��� �������� � ��� /� ����� ������� �� ��� ������� � ���� � ��� �������� ����� /��� ������� �� ���3������ ��� ��� ��� ������������ �� �� ����������� ������� ����������7�������� /��� �������� � �������������� � � �
������ /���� /� ������ /��� O00 � �3���� � � ������ ��� ��� � �� ����� �3������ �� ����3 ��� � � ����� /��� �3�� /��� ������������ � ��������� ��� ���� � ���� � ���� ��� �������� ����� ���
=��� B� ������ ���� ������� � � ������ ��������� ������ ����
����� ; �� �( � ���������� �� </ ��������� ������ ���� ���
��� ���� ���� ��'� %������ ���� ��/��� ��� � ���� � ����
/��� ����� 1� ���2 � � ����� � ����� < �������� ��������� 1=�+�%2�
����� /��� ������ ����3��� � �3�� /��� +P 1/F�2 ������������
���� � �������� -������ ����� ������� 1� ������ � ��� ������
���� � �3��2 �� ��/� �� �� ����� �� ����� ����E 12 ��� ��� ���
��8 ������ 8Q��B+ 1���� ����2 � ������� �����* 1�2 =� ;
������� � ������� ����� 1���� ����2 �� �3�� ����� 1����6 ����2* 1�2 =�
�( ������� � ������� ����� 1���� ����2 �� �3�� ����� 1����6 ����2�
5*0* 5���� �� � * 6 (.����� 7.��� 0����� 18 ," +- �3"9�3: ;D,
0�������� �� �� � � ������ ��� ��� ������ ����������� �� ����� �������� ������ �������� ������� ��������� � ��� ���� � ����� 0���� ������ ��������� ���������� �� �������� �� ��� � �� �� ����������� � ���� � � �� �� � �� � �� ��� ��������� � ���� �� ���� ������� �� �� ���/���� ������ =� �( 1�� �� ; � (2 ��������� ��� ����������� �� ��������3��� ��K���������� ���� � ��������� /���� �� ������ ��� ��� ����� �� ����������������� 1�� �� ��/�2�0�� �� � ������ �������� ������� /��� � ������
��� � � ������� ��� �� ��� ��� �������� � ��������� ��� ��������� /��� ���� ���� �� � /���������� ��� ��������� � ��� �������� ����� �/��� � ����� ���� ���� �� 10��� B2� 0 ������ ��� ���������/��� � � ��������� �������� �������� ��F�� ������� ��������� �� �� �� ��� ?.�+;�'+@� �� �������� � � �� �3��������� �� �� �� �������� � �� ������ �������� � �������� ������� /��� ������ �������� �� ������ � � ���� � ��4����� �������� ���������� �� �� ���������� ���� ���� ��������� � ����������� ������ � ������� ���������� � ��� �� � ���� ��������� ���� ������ ��������� � ���� � ����������� ������ ������ ��� ����� ���� � ������ ��� ���?''@� = ��������� �� ��� ���� ������ /� ��������� ��?+:@� /� �� ��� � �� ��� ������ ���������� ������ � ������� ���� �� �� ������� ���� ���� � ���� ������� 0�������� /� ��� �� �3����� ���� ��������� ������� �� ��� �������� � �������� � ���� � � �������� %/����� ���� � ������ � ��� ���������� ��� � ���� ����� �������� =� �������/� �������� ��������� ��� ��� �������� ����� �� /��� � K����� �� ��� �������� � ������� ����� 1���� ��/�2� 0��� /� ������ � ��� �� ��� �������� �� � ������ ������� �� ���� � ������������3������� � � � ��������� ������� �� ����
���� � �� � �� �3����� �� ������� /��� ��� ������ �� ��� � ����� �� ��� ������� ?B@� %/����� ��������� ��������� �/������ �3������� �� �������� � �� �� ���� � ������ ?'B�'D@� �� ��� ������������� ���� ������ �� ����� � ������� � ���� �����3����� ������� �� �������������� ���� ���� ������� /��� ��� ������ �� ���� ��� ��� ���� ���� ?';@�0�� ���� ���� �� ��� �� ������� �� �������������3����� �� ��� ����� /��� ������� � ��������1���02 �� ��� ?':@ �� ����� ��� ����� �� 6�����/��� ���9 ���� ������ �� ���� 0�� ��������������� �� �������� ������ ; �� �� ������� ���������� �� ��� � ��� ����� � � �� �� ��� 6������������� ������� ������ � ������� � �� � �3������� �������� %/����� �� � ���� � ������ ��������� �� ��� 6����� /��� ����� ������ � ��� ���������� 1���� ��5� �� �����2 ��� �� �������� �� /����������� �� ������ ������������������� =������ ���� ��� ����� ������� /��� �3������� � ������������ /�������� �� ��� ������ � ������� �� ����� ���
���� �� 0��� ��/� ���� ��� �� ��� �������� ���������� ���� �� �� �� �� ����� �� �� ��� ��� ������ ���������� �������� � ������ ��� �� �������� �������� /��� �������� ���� � ������� ��� �� ��� ���������� � ������Q� ��� ���� � ����� �3������� ������� ��� �������
������� �� ��� �������� ������ �������� ��4�� ������ ����� � � � �� �������� � �� � ��� 6�/���� � � ��������� ���� �' ?',@� ��� ?'(@ � �����8 ?'.@� 0��� /� ������� �� ��5�������6�� ��� �������� ��� 1���7�2 ���� ��� � ����� �������1�� �� ��/�2� $������ ��� �3�� ������ ����������� ��� �������� �������� �� ������ � ���������� ��� �� �� �� �� ��� ���� �������� 0�������� ������ �� �3�� ��� ��� ��� �������� �������� ���������� � ������������� ���������� 1���� 0�A�,'F7�����0� ?B)@2� %/����� ���� ����� ���� ���6��������� ��� ��� ���������� � ��� �������� ��������� �� �� ������� �� �������� /��� ��� ���� ����1�� �� ��/�2� /���� ��� �� 4��� ������������ �� ���� 0� �� ��� ������� ��������� �� ��� ���������������� �� ��� ��6��� ������ � ������� �� ��� ���������� � ��������� ��� �� ��� � ������������� = ����� ������������ � ����� ������� �������������� ������ ���� ��������� �� �3������ ������ ����� ���� �� �� �� � ����� ���������� ���� ���� /� ��� ��/� ��� ���� ������
������ ������� �/��� � ���� � C ��6�� ����������� � � �������� ��� ��/ ������ �������������� /��� ���� ���� �� �� ��� ���� ����� ���� �������� � ����� ������ �� ��� ��������� �����
�������� �������
$� ���6 ������� O� %����� �� O� �� ����� ������� ����� � ���� � �������
����������
+� 7��� 8-� � ��� �=� $������ �%� �� � � � ���� �� ���� �
� ���� ������ ������ +,�+� �� �������������E �����
��� �� ��� ������ ��� 0����� /��.� /��.����� +..)�
��� +(;H+.)�
'� ������ " ���� A� %�5 �� 7�����6 A� �� � � 8����� ������
������ �� �������� O 6��M � ������� �����E ��������� ��
��� � � ��������� �����5�� ����� 7 0 �� ��� +..(� ���
+,((H+,.D�
B� L�3 7#� A��� 8�� 0����� 8� �� � � ���� �� ���� � ����� ��
.)�OQ0������� ���������� �� -���>�+) ������F���������
��� �� ������� /��� �������� ��� ����� 1�� ������ ������2�
0 �� 0����� 5�� ')))� �� D):HD+D�
D� R�����9��� ��� ������ #$� 8��6��6 �0� ��9�� 8� L ������
������� � ��� =0� ����� �������� � ������� ������
��������� ����������� �� ��� ������������ ����5���
� ��� ����� �������� ������������� +.(.� ��� B.,�
;� � 0� ������� � ���� �� % �� � �� ������� ������5��
�� 0 ����������� 7 (�� ��� +..:� � �� ,';H,'.�
;D( 5*0* 5���� �� � * 6 (.����� 7.��� 0����� 18 ," +- �3"9�3:
:� U�� A�� ��� O0� L �� $$� �/� �Q� $����� �#� ���
������ 77% �� �O-� �������� �� ���� ����������� �
��4��������� �3������� ������ �.� ��� #���� 5�� +...� �!� +;+,H
+;'B�
,� ���5��� ��� ����� 8 � O��� ��� �� � � O������� ����� � ��4 ��
���� ����� ������ ��������� �� ���� �3������� ��������
���.�� ')))� �"�� ;)BH;++�
(� %����� %�� �� � !" �� ��� % ��� 7�� %�� �8� ������
#$� ����� ��� ������� ���� ������ �������� �� ���
���������� /��.������ �� +..(� �� +H')�
.� �� L� �� #� 0�������� �� �� �� ��������� 0� ���� ��������
� ���� � ��� ������������ � �� ������ �������� ���
��������� ���� ������ ������� ��� ��� #��� >�� �>#
+..;� ��� B.B(HB.D'�
+)� �� �/�96 $� �� L� �� #� A������ $0R� �� � � 7 ���������
������ � ������������� ����������� �������� � ������
����� ����� �� ���� ����� ������ ��������� ��� ��� #���
>�� �># +..,� ��� B.)BHB.)(�
++� 0����� L�� A������ #� 8��� #�� ������ � �������
����� � � � �������� ��� ����������� ������� ������
>� ����� +..,� �#� ':(7�
+'� 0����� #8� Q����� �A� �������� � � L������ �#�
��� ��� ���� 0-� ������������� ������ �������� � ���
� � ���������� �� ��� ������� � ������� ������
0����� /��.� /��.����� ')))� � � :.+H,)'�
+B� L ���� #8� 0���� -%� L�� -R� �� � � ������ � � ��
� ���������� �������� �� �������� � � ������ ����
������ � ����� ����� 1�� ������ ������2� 0 �� 0����� 5��
+...� #� .';H.B+�
+D� ����/� # � -� �� L��� #�� �� � � ����������� � � ��
�����O;; ����������� =� �� � �������� ������ � ����
������ ���� � �� �� ��� �� ���� ������ 0����� 5�� +...� #��
',+(H','B�
+;� 0����� L�� % �� R�� 8��� #�� A������ #� ������ �
� �� ������� � � � ������� �������� ���� ���� ������
��������� /�� 7 ��� ')))� ��� +(,H+.;�
+:� 8 � ����� �� %����� %�� �� ��� ������ �� �� � !" ��
��� ����� ��� 8��� ������� � �� �� ��� �������� ������
������ ��� � ����� � ���� ������ ��������� � �����3
�������� 7 /��.� ������ +...� ���� :;H(+�
+,� �� %�� %#� �� -��� -� �� �� �� �� � � � ���� ������ �
��5�� � �� =� ������� ���� ������ ��� ������� ���� ���
���� �� 6������ ������ � ���� K���� ��������� 7 �� 0���
+...� �!�� +('+(H+('B)�
+(� 8�6� #O� %����� %�� ����� 0�� 8��4���� #� A����
���� �O� $����� A �������� ��� ��5���* � �� ��������
��� R����� �������� �������� � ����� 7 � �� +..+� ����
;(+H;.,�
+.� ����� ��� %������63 �� %������� $� �� � � %����K����
��������� ���� �������� � ��� ��������� ��6�� ����
������ �����������' �� � � � ��������� �� 7 0����� +..(� ! �
+D),H+D+:�
')� 8 �� 7� ����� %�� �� %��,)���6� ������ �� ��� ��E ��������
/��� ��� ,( 6� �� ������� ���� ������ �� ��� ���� ���
���� ���� ������� ������� 0� +.(:� ��� '.+HB))�
'+� �� V� A��� �� ���������� �������� ��� �����
������� ��� ��5�� /��� ���������� ������ ��� � � ��
�����E �������� � ������� �������� ��� ����������� =� � ���
���� ��������� ��� ��� #��� >�� �># +..;� ��� :;B,H:;D+�
''� 0����� #� �������� �� L���� 0� �9 �� �� ����� �� ����
0� �K����� �������� � ��=� ������ ���� �� ������� � ��
��� �3������� ������� �� ���� � �������� 7 /��.� ������
+..,� ��"� ++H'B�
'B� O� #��� 8$�� L������6 #A$� �� UU� �� � � ����
��� ��������� � � �� ���� ���� � �� ����� 3������� ��
��� � �� �� ���� +++��������� ������ ������ 8Q��B+�
(.� 7 0����� +..B� ���� +((;H+(.)�
'D� ����� �%#� R���� 8#� ������� L�� �� � � ������� �������� �
�K����� � �� �������� ���� � ����������� =� ������
�������� ��� ��������� ������� ��� ��� +..:� �� .,.H.(D�
';� A��K� 0$� ���� � � 7������ 7� �� � � ������ ������� �� �� �
���� ��+++������� ���� ++) ���������������� ������ ����
��� �� ������� /��� ������� ������ 7 0 �� ��� +..+� ��
:B+H:D)�
':� $��� 7� O���� ��� L����� -� �� � � ���� �F�� �� �� � �����
+B+������� ������ ������ �BB �� ������� /��� ������
��� ������ 7 0 �� ��� +..D� ��� +;:+H+;,+�
',� 7�������� ��� 7���� O=� R������� �� �� � � 0�� �� ���
����E � ���� ������� ���� ������� +(;�)))�8� � � � ����
���� ���.�� +.(D� ���� ;+BH;+:�
'(� A� ���� =� �� ������ -� � �6����� A�� �� L����� 7� ����
��� �� ��������5��� � �/ ������� �� ������� /��� �����
��������� ������� �.�.� �� +.(D� #� ''+H'B'�
'.� A�������� %A� = �6� �� #���� #�� A6�� #8� ������ ���� A�
0�� ��������� ���� � ���� ������ +,�+�� ����� �� �������
������� � �� ������E ��� ��������� �� ��� ���� � ������� �
��� �� ��������� �� ��4����� ������ ��������� /�� 7
0����� +.(:� � � D,H;B�
B)� #���� RA� 7���� #� ������ �#� ������ #� 8���� #��
������ O� ������� � � �� � ���������� ����������
10�A�,'2 ��������� �� ������ ������ ,'�B� 0����� 5��
+.(:� ��� (;)H(;,�
5*0* 5���� �� � * 6 (.����� 7.��� 0����� 18 ," +- �3"9�3: ;D.