asociación entre polimorfismo de andrógenos y receptores de vitamina d con riesgo de cáncer...

7
Revista de Investigación Clínica / Vol. 59, Núm. 1 / Enero-Febrero, 2007 / pp 25-31 Versión completa de este artículo disponible en internet: www.imbiomed.com.mx Association between polymorphisms of the androgen and vitamin D receptor genes with prostate cancer risk in a Mexican population Brenda Patiño-García,* ,, Carlos Arroyo, , Hector Rangel-Villalobos, § Elena Soto-Vega, || Jose Salvador Velarde-Félix,* Fernando Gabilondo,** Lucila Sandoval-Ramírez,* Luis Eduardo Figuera* , * División de Genética, Centro de Investigación Biomédica de Occidente-Instituto Mexicano del Seguro Social, Guadalajara. Programa de Doctorado en Genética Humana, Centro Universitario de Ciencias de la Salud-Universidad de Guadalajara. Departamento de Cirugía, Hospital Universitario de Puebla, Benemérita Universidad Autónoma de Puebla. § Laboratorio de Genética Molecular, Centro Universitario de la Ciénega (UdeG). || Unidad de Enfermedades Autoinmunes y Sistémicas, Hospital Regional No. 36, Instituto Mexicano del Seguro Social de Puebla. Centro de Medicina Genómica, Servicios de Salud de Sinaloa. ** Departamento de Urología, Instituto Nacional de Ciencias Médicas y Nutrición Salvador Zubirán. ARTÍCULO ORIGINAL Asociación entre polimorfismo de andrógenos y receptores de vitamina D con riesgo de cáncer prostático en una población mexicana RESUMEN Introducción. El cáncer de próstata (PCa) es un problema de salud mundial, tanto por su elevada incidencia como mortali- dad. Su etiología es compleja e incluye factores de riesgo recono- cidos como la edad, estado hormonal, origen étnico y antecedentes familiares de PCa. El fondo genético es un factor de riesgo y existen reportes controversiales de la asociación de PCa y polimorfismos en los genes como son los receptores de vi- tamina D (VDR) y el de andrógenos (AR). Objetivo. Evaluar las repeticiones de tripletes de CAG en el primer exon del AR y poli- morfismos en el sitio de restricción Taq1 en el VDR en mexica- nos con PCa. Material y métodos. Se incluyeron 68 mexicanos con diagnóstico histopatológico de PCa y 48 mexicanos con nive- les normales de antígeno prostático y tacto rectal normal. Se les extrajo 10 mL de sangre periférica para aislar DNA y mediante olígos específicos se evaluaron los polimorfismos mencionados. Resultados. La distribución alélica y genotípica de los polimor- fismos en el AR y VDR fueron consistentes con el equilibrio de Hardy-Weinberg, y no mostraron diferencias significativas entre los casos y controles (p > 0.05). Sin embargo, el número de repe- ticiones de CAG en el AR fueron estadísticamente diferentes en pacientes jóvenes con PCa comparados con los controles (p = 0.045), cuando se comparó el grupo de pacientes de jóvenes con- ABSTRACT Introduction. Prostate cancer (PCa) is a worldwide health issue, because of its high incidence and mortality. Its etiology is complex and includes certain risk factors such as age, hor- monal status, ethnic origin and family history of PCa. Genet- ic predisposition is proposed as a major risk factor and there are several controversial reports on the association of PCa and gene polymorphism such as the receptors of the androgen receptor (AR) and the vitamin D (VDR). Objective. To evalu- ate the CAG triplets repetitions in the first exon of the AR and polymorphisms in the restriction site Taq1 in the VDR in Mexicans with PCa. Material and methods. A total of 68 Mexicans with histopathological diagnosis of PCa and 48 healthy Mexican with normal prostate specific antigen and rectal exam where included. 10ml of peripheral blood were ex- tracted to isolate DNA and the polymorphisms were evaluated with specific primers for the AR and VDR. Results. The allelic and genetic distributions of the AR and VDR polymorphisms were consistent with the Hardy-Weinberg equilibrium, and there were no statistical differences between the PCa patients and controls (p > 0.05). However, there was a statistical dif- ference between the number of CAG repeats in younger pa- tients with PCa compared to controls (p = 0.045) but when the young patient group was compared versus the elder group there was not stadistically difference (p = 0.085), but the re- sults showed a tendency towards less repetitions of CAG in el- der patients. Concerning the VDR, when we analyzed the Both authors participated equally in the work and writing of this paper.

Upload: independent

Post on 22-Nov-2023

2 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

�1���0�� 7+� �%� ����!�������� ��� "������� �������� �������������� ���#� �����$��� ������ ����������� ������� ������� ��� ���� ���4����������� �������� ��������� �� � �� ������ ������� � � �� ��������������� ����� � �� � ������� ���������� ����������������� �������� ���������������������������������

#�����������$�������������������������������������������������������

$������������������%�����&�"������� ����*��$�����+����������������'������ ������������������������,�����"����������-����,������

�����-����$���,����$��#��.�����#���$����"��$�����������-�$�������!���(��������$���$��#��������

E�=�9���F�����3��5���������� ����� ��9��������F��>��45��������D��������2������"��� �6��������!����" �������!��3"���!�M� ���� �� �4�����=���� �������3��5������"4��������� ��G��9� ���� ������������������ !����!"�2G��9� ���������3"���!�M� �

��=�&� ��4���������� "�I������&���!�G��9� ���� �������"��!���>���45 ����G��9� �������"�F��4������"��!������� ��� ������3��5����� �!��"!� ������ ��G��9� ���� ������ !����5����� .G��31

���G�����������'� 4��������"����4"����;�����54���������&���!��������!����+-��������"��� �6��������!����" �������!� ����"��!������� ����� ��������3��F4������� 9�����������!"���������!��

EE�=�&� ��4��������G �!��I��� ������"����������!������������� 5������;��"� ���F����!9��� �8"�� L�

���������� ����

"�������(������������� ����������()���������������� ��������*��������)����+���������+������������������(���!�����

�������

,���������(��� ��� �!����� ��� ��������� �E:��� ��� ��� ������ �� �������� �����'� ������ ���� ��� ������� �������� �� �� �����"���#�$��������8������� �������� ������� ������������������������"����� �� �� ��� ����'� ������� ��� ����'� ������ ������ �������������� �� ������ ��� E:�#� ��� ������ �������� ��� ��� ��������� ������ �� �>����� ��������� �������������� ��� ��� ��������� ��E:�� �� ��� ���� ��� ��� ���� ������ �� �� ���� ���� ����������� ��� "�� ���F��DF��������������������������#����� ��������������������������� ������������:�G��������� ����>���������������" ���� ��� ��� ��� ���� ��� ���������� <� ,� ��� ��� DF�� ��� �>��"��������E:�#��������������������$�� ����������21� �>������������������������������������E:����+1� �>������������"���� ��� ����� ��� ���8����� �����!���� �� ������ ������� ��� ��#�$�� ����>������ ,-� (���� ������� ��������� ����� ������F5�� �� ��������8���� �����8����� ��� ��������� ���� ��� ���� ��� ���������#�����������(��������������������������8������� ������� ��"�� ��� ��� ��� ��� �� DF�� ������� ������������ ���� ��� � ������ ��0����"C������'� �� ��� ��������� ���������� ���������� ������������������������������H�-#-.�#�$��� �����'�����I �����������"������� ��� :�G� ��� ��� ��� ������� �����8���� ����� ���������� ����������� ������� ���� E:�� �� �������� ���� ���� ���������� ��� 7-#-+.�'� ������� ��� �� ����� ��� ��������� ��������� ��� ������� ���"

��������

*��������� � 5������� ������ �5:�#� �� �� �������� ����������(������������������������������������� ��"��������� ��������=��������������������6�������������������(����������������(������������������� ����� ����5:���G������������������ ���������������������6� ����������������� ������� ����������� ������ ��� ���� ���������� ��� 5:������������� ���������������������������������������������������#������������������'��#����������� ������������������:�G����������������������������=������������������� �������� �� ���� �������� ���� ���.� �� ���� '��� �B�=����� ���� 5:���!������ ��� ������ � �� ������ ��&3�B�=������������������������������������5:������,3������ � B�=���� ���� ������ �������� ������� ������� ����������=�����������������./�������������������������=������������������� ������������� ���������������������������������������������������'�������� �� ����������������������������������� �����������'������ ����������� ���������� ���� ���� 2�� �H������ �������(� �����������������������������������������������5:��������������������� ���I�/�/0#��2�����(� ������������������������������� �������� ���� ������ ��� :�G� ������� �� ������ �������������5:������������������������9�/�/,0#������������� ����� ������� ����� ���� �������� ������ ���� ����� ������������� ���� ���������� � ��������� ���9� /�/30#(� ���� ���� ������������������������ �������������������������:�G��������� ��������� :�������� ���� '��(� ����� ��� ���� ;��� ���

���$�%'���%'��&�.��%"#".�%����6����0� "�� %'�����<�������"%"���� � %'"&�.�.���

1���0�� 7+� �%� ����!�������� ��� "������� �������� �������������� ���#� �����$��� ������ ����������� ������� ��� ���� ��� ���� ���4��

�+B%@�D6B�@+

3 ����������� �K36�L����������������������� ���������������� ����'����������������� ����������������� ����������������� ������7�'�;����� ���� �� 7 7� $� � 8��'���� 5�-������ ��� ��8 � ��5�-��'�36�� �$ �������89 9:������������ ��������'������������� ��������������� ����������� �����)������������ ������ ���������� �7� ������8����36������������;�����7'H88������������)'����������� �����$���� ���� ����� � �����#'� ���� �����#� �36�� ��������� ���#���M�;� �B�����#�������������� ��M����� ��� �����'� ���������������#����� #��36� �.������������������$����������� � ��M���� �� ��M�� ��� ����'� ����'� $�#������ �������#'��-�����������#'����������������������#'������������� ���� � ;���� � �� ���� � ���� ��� 36�� �����# .��� ���� ��� �������$ $��������������)�:������36�� ��M������������������������ ��B�M������'���������� ���������$�������#�������$ ������;��������� ��MN��;��� '���� ��� �����������������������������������������������������������������������$ � ���������$ �����36� �>��������� ��������� ���� ���$� �K>%L�������������� ���$� �KT�%L�������������������-�����������������#�;������������ �����������������$ ����� ����M�;�

B���>%������������������������ �����Z'����+��� ������������������� ��������������������������������������-��8'�;��������������;�$�#� $��� �$����F�6>I�����II6��������7R������R�$ ���'�;����������#�� �$�#��������������$�#��#����'� ��$��������# ��B����������������6>I� �$������� �������������������'�������������������������������$�#� �$������� �� �������������� ���� �$�������������#������>%����� �B���6>I� �$����������� ���������� ��������;����C������8������'�;���������� ������ ��B�� ��� ������ ��������������������� �����������������������;���������� �� ���������;������� ��������>%������������������������$ ���������������

$$��������������� � ��M�� �36�'����;���������� ���� �������$���� ����3�� ��&;��� ���� ��� ����� �$ ����������������������������������� ��

B���T�%����������� ���������� ��U��# ���� ����������� � ���$� ������#'�����$��#�������$ ������ ����������$ ���� �������������� ����������� ����������������������� ��������� �����������$��#� $������������T�%��������������� �$ ������������������;����36� �B���� �����������#� �(�� ����������������T�%'�;����������������� ����������$�#� $�������������������������������;������� ��M���36� �B���T�%����������������������-�������������� ���$�#� $������������ ��C������-�H �B�� ��� ������ ��� ��� ������� ��������������$��#� $������ ����� ����� ����� �������� ��� ���� T�%�����;������������F�B�(�'�<���'�>$��'�$�#K>L'����?M� ���%���������������������;���������"#���$��������� ���������������T�%�� �������)���7��������� ������ ��M��������"���3�� ���>���������������������� M� �'�������'��$�#� $���������-��H������������������$ �������$ �$����'��;��� '� ��$������������� ���� �$ ���������T�%������$��#� $���������� ��M���36������ �������� �������������������� �����������$�$� �;�����������������������������>%�����T�%�$�#� $������ ����$ �����36�5�-�����$������������������#�5�-�������� ��

5>B!%�>0.�>+��5!B&@�.

��� ���

G��������������������9C�5�-�����$��������K� ����5�-���� ��5�-�����$� ���������� ����$� ����L;�����#��$���������������������36���#�� ���� ��������$�#'�;������ �����#����� #���36� �B����� ��� �$������������)C�������#�5�-����������� ������97'�;������$ ���������� #���$ �����$�����#������ ������'�;����� ������ ���$ ��������$���������������K����������)���U�0L������ ����������� �������-�������� ���������������������� ��

���� � ������� ������� ��� 2-� �J��� ��� ��� ��������� ��������� ����"�8���� ����� ��������� ��� 7� -#-1.��� ��� � �����'� ��� ���������� ��������� ��� ��� �I ���� ����� ��� ��������� :�G� ��� ��"������� �����������E:�#�E�������������'������ ������DF���������������������E:����� ���������������������������������������"�8��� ����� ���������� ��� ��������� <<� ��� 7� -#-&�#����������%���� 5�������� ����������� �������� ���� ��������� ������ ������ ���� ��������������������DF������'��������������������������������������������������������� �>����������E:�'�������"�� ����#� $�� � �����'� ��� ��������� ����� ��� ������ ��������������������������� ������I ���������������#

��������� ��� �� ������ ��� �!����� ��� ��������#� ��������������������#� ��������� ��� �� ��� F#� G������� ��� �!����� ����������#

������������5:����������������������������������� ������������������������ ������������9�/�/%#����� ����� �J���������� �������� ��� ���������� �������� ���� '��� ���� ��� ������� �������(���������� ������������������������������������������B�=����������������5:�(���������� ��2�����(����������������������������������������������������� �

#�� $��� 5������� ������ �6�� �������� �������� '����������������5���������������������

�1���0�� 7+� �%� ����!�������� ��� "������� �������� �������������� ���#� �����$��� ������ ����������� ������� ������� ��� ���� ���4�

��������������$�#�;���$� � ����;����������������36�������#��������;������ �� �>�������$�������������� ������������ ���� �������������$� �����$����������������#'���� �����������$ ����$ �������#��$$ �����#�����!������6���������������5..<���������%���� ���6����

!�������� "�

�+>��������&�I�������+>�;����-� ������� �8���0���$� �$�� ��������#��������������$����U��� � �

B�������#���6>I� �$����$�#� $���������-��8������>%������;�������#$���������� ������#�6� ��'������ �%���������-�� �������������7��������������+>'�8��$�����������������������$ ���� �K7_�B66�>I>�>B6�BIB�B66�>I>�I6I�BI6��_����7_�6B6�B>6�I>B�III�6BB�III�I>I�>>6��_L'������ 7��������B�(�$�#�� ��� �36%��������������������4��#�������H7�`6�� �)7�������'�4��`6� ����������'�����4�`6�� ���������� �B���������������� ���������������������������$��;� �������������� �� �� ��� � B��� 36%� $ ����� �������� ;� �����#"�������9:�$�#�� #���������� �B�����"���������$�������>%�;����)��$

? �����T�%������B�(8�$��� $����'���4)7��$�+>�� �������;���������������������� ;� ��$ ��� ���������� ��C'�7R�6>I�>I6�>BI�I>6�>II�I>I6>>���R��������� ��� ���$ ��� '�7R�6>6�BB6�I>I�6>6>>I�III�6IB�B>I���R�����-��H �B�� �#��;��#������36%�;� ��$� � ���N�������#���������������H)`6� ����������'�94�`6�� ����������'�����4�`6�� ��������� �B����������������� ����������������-������;� ���� �������� �4���� �B�����$�������$ ����;������������;����� �a0���������"#�����'��� �H��������97`6���������� $� ����������:���� ��������������;�������������� ����'������������"������� DT������ �B���T�%���������;� �����������BB'�B�������'�;�� ���$$� ����������;� ���������� �� �$ ���������������������$ ��������� ��� ����������� �B�����"���������$�������T�%�;���4)���$'�;��������B�������;���$ ��������� ��;��� ��� ��������������$ �������"���;� ����)H7��$�����)7��$N���$� �����������������;�������� ��� �����������$ ������;����$ �������"�����H���$������7��$

������� ����#��

B����� ������� �� ����#$������ ������� �� ���&� �#�G����� ���-$���������;�������M����#��-�������� � >������ � �(�������� ;� �� ���������� �#� ����������������� �I������������ ������������;���� �$�� ���� ��� ��� ;��� ������������ �#� $�� ;���

��$� ������#��-��������� �@���� �����K@%�L�;� ���$������ ��$�������������� �B��������������;�������$$���������$� ������>%�6>I� �$���� �3�������;� ������������������� ���$ ������� �$����� ������������ �����$����������I�������� �'����������� ����� �� ���� ����������������'� ���� ���������9��������� ������9��#�� ���

%!.D0B.

6�����;� ���������#�#���� �K9 H��X�84 C�#�� ���L���$� ���;������� ��K9H H�X�8� 84�#�� ����L����������;� �����������������#������ ��� B������ ����������-$����������#$��� �(��������� �����>%����T�%�$�#� $������;� ������������;��������$ ���������#�����&� �#�G����� ���(����� ���

B������ ����>%�6>I� �$�����;���C 4H�X� 97�� ����36��� �$�����C C�X� �)�� �������� ��� �$';����������.�������;����$$����'����������� ��������#����������������� �����K$�\�� �7L �+����� �;������ ���#� ������������ ����� ����� ;���� 36�� $�������� ;� ���$� ������ ����������� �����$���������I������� �'�;���������� ����������������;����� �$��K4 8X� 74�� �������'�C )9�X��� �������� ���'����C )��X�� 88�� �����; ���$�����#�$���� �L

B���36��$��������;� ������� �$�����$������������ �����������������K����������9��������� L����M�����������$� �������������� ��� �$����������� � ����� 9�� #�� �� �� � G���� ;�� ��$� ��� �������� ���>%�6>I� �$��������;��������#���� ������������������36��������� ��'���� ��;����������������������� �����K$�W�� �)7��6�H7:�S� )9���S� � )L B�� ��;����������������������� ��������;����36�� �$�'�#���� ������9����$� ������������ �����9��K$�W�� �C7��6�H7:�S� 7����S� 7)L'��;��� ����� ���������#���;������������#������;� ���� �����6>I� �$���������������� �36��$���������������������KD�5����G�����#�����'�$�W�� �9�L�KB�����8L �?������#'�;���� ���������.$�� ����� ������������� ��������� ���6>I� �$�����;�������������������������������$�����#�$ ���������36��$�������'�;����� ������������ ����� ���� � &;��� '� ������ �������������������� �����������#�����������������������$�����"����������KB�����L

��� �����,�2�������8����/������3�1�M������ ��� ��� 2���3�������

����� 2� - ������ ���� 2� B �� ��� �9

� ��8≤�("�8� �� $) '�)"( )�!!$ !�(7)

���?� ��8:�("�8� ��D &' )�7$( (�(%# !�%)'

1���0�� 7+� �%� ����!�������� ��� "������� �������� �������������� ���#� �����$��� ������ ����������� ������� ��� ���� ��� ���� ���4��

B���T�%�����������;���������������������� ��������������36��� �$�������� �� �G����36��$���������;� ��� �$������ ����������� �����$������#�I�������� �'���� �������36��$��������;������������� ����$����������$���� ��������������� ����� �������� �����T�%������$�#� $����K$�\�� �7L �&;��� '�36��$��������;����$ �$ �������$ �����������;� �� �(����#���BB�����#$��'��$� �������� ��'����������������� �(�������K$�W�� ���8N�@%� 7'��6�H7:�8 �48H�) 4H)L��������#$������ �������K$�W�� ��44N�@%�� �9)��6�H7:� 8�4�8 �)CL �B����� �������������������������;��8 47�������� ��$ �����������������#$���B�����������36��$��������;����$ �$ ������ ����� ������� �� �@��������� �����'�36��$��������;� ����$�� ������ ����������� �$����������$ �����F� ���$��������;����$ �$ ��������;���������������� �(����#�������BB�����#$��K$�W�� ��'�@%�� �4'��6H7:�8 �9�8� 48L�����������;���������� ����������B������#$��K$�W�� �7'�@%�� �'��6�H7:�� 8��8 �)L��$� ������������ �����$ ������� �$�KB����L � B��� ������ ���$��� �� 36�� $�������� ;���� ������$����������$ ������ �������� ���� �����������$;� ��� ���������� K��W�CL �>�� ���� ����$�����"�;����������������� �� ������� ������������������

��.6D..�@+

36�������; ��;����������������'������#�������������������������������� �����#'������������������$���������� ���������$�����M�;��������������������� ��M����� � �>��������;����M�;�'�36��������������� ���'����;�������� ������������ ��������������������$�������#�����$��������#�����$��������� ������������������'����� ���������-$�� �'����������+>��(������$�#� $������������ �� ��$�������� ���� ��M���3�� �����������$�$� �;�������������;�$���� $����������;� ���$� ��������������������������������;����36�������5�-�����$$������'�;������� �M�;��������������� �������#����5�-���;�������������������$$������������$������� ���

B�������������������������������� ����� ������������������ �������������$���;�#����������N��������;�#�����>%������������������������-��������#������

����� �������$������#���36���������� ������������������ ���� ��������'������������������� �������$���;�#� ���������������;���������� ����������� ��� ���������$����;����6>I�������������$� ��������������������'�;������ ������������������ �� �����6>I���������� ������� �������������������� ���� �$��� ��� 6��"��� ���� %����� �#$�����"����������� ����������� ��������������36�������$�������#��#�����������$� ������ �������#���������$�6>I� ��$���������� ��&;��� '���������������������������;�����$� �$�����������$�#� $����������36���������'���� ����� ���������������������

@� � �������;� ����#��� ������#������������� �������������������6>I� �$����K� ��������������������� �� �����L� ���� 36�� ��M'� ;���� �� ��-����� ������;����������"����������� ������$ ������#���������� � ��������� ��� �$ ������������ ������6>I����������������� ���� ������ ���� �������� �����������$� ��������������������#��������� ���$ �������$���������������������;� ���� ����������;�����$����� �������$���)� �$���������$89���������� ��-$ ��������� � �B����������-$������;������ ������ �$������������#���M�� ����$ ������� ������� ����� ��� ������� ��������������'�������������� �����$ ���� �������������#'�;�������#������������� �������������������� ��@���������'������������������;������������$� �$����$�#� $��������������������;����������������������� ���� ���� �����������������������N��$���������#'������������� ��� ��$���������������� ���#������������� �����#������$� ���������������������������# ���@��������� �����'��;� �6>I� �$������ ������������;������� ������ ��M������������������������$ ��������#$� $�����'�����������������������������;�#����������� ��� ������6���� �����36�'���� ��� ����� ������������;������������ ����$�$� ������������� ��� �'��������� �� ��$ ��������� ���#�$ $ ������ ����������;������������ ���6>I� �$����� K������� ������L����� ��M��3��'������� ������#'������� ��M��� ���������� ������������M���������� ���@��� � ���� ��� ��������������������������������;����6>I����������������� ��������36�� ��M �B������������������� � ������'���;�����;��������������� �(����#������������ ����������������4'�H'�����8�'�;������������ �$ ��������#

��� ����,� ���B9,�2����8���3��I������������5�� ��-1 �� ������� ���������������� ���� �������2�����/����/����� �/���2�� ��� ������8�����M�� ����������

-��8����/���� M�������2����� ����� ������2����� 0 �����2����� 1�������

1�M����� �� )�$!�±�!�%) 7�&(�±�! 7�&#�±�#�$$ 7�!7�±�!�#&**�3��I���8 %" (%�! #%�)N ("�&*� &" #"�& %)�) #'�(�� L $�# )�$ L

�1���0�� 7+� �%� ����!�������� ��� "������� �������� �������������� ���#� �����$��� ������ ����������� ������� ������� ��� ���� ���4�

����������������� ���������;���������;�� �$��K$�W� H8�L'����� ���'�;���������������������������������>%�������� ���� 36�� ��M� ��� 5�-�����'� ;����� ��$����;����$ ������ �$ ���������� ����$$�������

6��� ��������� ��������� �����'�<����������'��������������$ ������������� �� �6>I� �$����;����;� ���&��$�����������$� �������� �;��������'����������������� ��6>I� �$������ ������������;��������� ������ 36�� ��M� ��� &��$����� ��� ��� &;��� '���� � ������������� ������;����� �N�������������$� ��#��-$�������������������&��$�����$$������'�;��� � ���� ��� �� �� ����� �� .$������ ���M�� ���'������������� ������ �������#�����������#������� �����������>�� �������$$�������'�;����� ����������� �$� ��������#����� ������ �<��������������� ���� ���������������� ���� �$�������'������������� ��������������������������������

?�����#'������������������ ���6>I� �$������������������������������ ��� �����KV�9��#�� ����L�����������'�� ;�� ����������� �� ���������$� ���;���� �� ���� ������ ���6>I� �$�������������� ��� ����������������K$�W�� �8�L'�;�������������� ���;���$ ������ �$ �� �B������ ���������������-$��������#���������������� �������#������;����-$��������� ���

%��� ���������� -#���������� ������� �'������;����M�;������$ ��� #���������������������������������� �&;��� '�������������������;������������ ���������������T�%'��������� �� ���� �$������� ���������������������� ���� ���� ���$� �����#'�;����������������������� ������������������ ������$ ���� �������������� �������� ���B���T�%';��������� �"���;�������� �������Z� ���$� '��������8�'7�K@&L���$ ��� ����������� ������������� ���� �$���������#����������� ���������������� �����������'���������������$ �����'���� ��#���$�����"���� ���� $���� $��� ������ � B��� ����� ;���� ����$������������������������ ���������� ������� ����������-$�� ����������������������������#������ ������������;��������36�� ��M ��

B�� ��� ����� �������������������$$ ���������M����;����8'7K@&L�������36���#��� ������������ #�����������36�������'��#�����������������$$�����'� ����� ����� ��������'� ����� �#���� � ���'� � ;������ �'������������������������������������������������� �$������������ ���.'� ������������$ $��������T�%������������������������������� ���36�������� ������ �'������������� ���'�� ����'���������'��� ���'��������

B�� ��� ������ ���������������������� ��� �������������;����������� �����$�#� $��������������RDB%������T�%������� ������;��������� ���� �$��������������#������%+>���������#� ������������� ���$� � ����� ���� �B�� ��� ����� ����������������������� �����

����T�%�����#$����������� ����$$������� �5�������������������������������������'��$�#� $������������������36�� ��������$ ��������#$� $����� ���G�������������������������������� ����������36�����������#�������������������� �������������T�%�������� &;��� '���� ��� ����� �$�$� ��������������#���;���;��M�����������������#��������������������������;�����'��$�#� $���������36�� ��M'��;��� ���� �������� ����������������;��������T�%�����#$����������������������������36������������� ��� � �G���;���� ���������������;��������36��$��������;� ��� �$����� ����������� �����$�����#�I�������� �'����$��������;����$ �$ ������$ �����������;� �� ��(����#���BB�����#$��'�;��������������������������8 47������� ��$ �����������������#$���B�����������36��$��������;����$ �$ ������ ����� ������ ��'���� �� $ � $ ������ $���� �� ;���� �� ����������� �(����#�������BB�����#$� �B������ ������ ��������������N��;��� ������������������M�������������� �� ��� ����5�-�������������������������� �� ������ ����������������

��������$ ���������M������������������������������������������������#��������������������� ��$�������'��������;��$�������36��$����������� �� ������� ����� ����������$ �����'����;��������������������������������� ����$�#� $�����'���������;�#;�������� ��������� ������������� ���� ���� �������#���T���������������� ���� ���$� �$�#� �$�������������5�-�����$$������

6@+60D.�@+.

B���$ ����������#���5�-���������������� �������#������������������ ��������>%�$�#� $�������36��$����������$� �������� ��'������� ������������������;������������������������T�%�������� ��M��36�'�;������� ����;������� ��������������������� ��� � � &;��� '� ;���� ���� ����#$��� ���� �������;� ��� �������;����36��$�����#�$ �����'���� �;���������������������� ��������;����$��������;�����$ �$ �������������� ������� �$$������ �B���������������$ ������#� �$ ���'���� �� �����������$ ����������� ��� � ������������� �$$����������;�����������#��������$���������������������������������������������I�������� �

@� � ���������;��������� ������� ���������T�%��������>%������������������������������$��������$ � ��������36�'��;��� '������ ���������$������ #��$��-������������������������������ ������������������ �B������������� �������#������5�-�����$$������;����36��������������$�#� $�����N��� ��� ����������;������ �� ����$�����"����������������������� ����������� ������

1���0�� 7+� �%� ����!�������� ��� "������� �������� �������������� ���#� �����$��� ������ ����������� ������� ��� ���� ��� ���� ���4��

>6O+@G0!�I!5!+B.

G��� ���� #�� �������;����0�����6� ���>����� '�� 0����5 �'�����0����>�����3��"�%��� ��� ����� ��$ ������������������������� �������������; M

����������

=� ����F�� 3��� �!� ��� �&���4��!��I�� ������ �� �����&���!F����� �����&!������ �!������� �=� W)**0� ???���&���!"����46

) ������ ���� ���::�!����4� ��� � ������� ����� � �&���4��!��;4� ��� 5� ���� )**-#� .1#� +<<20+

+ ���(���=�9��3����������������;����������;� $�� ��� �!���� �2���� ���&�� � ��?�2 ��"!������ ��� & ������� ����� � ?���� &���&�� �2���4������ 4� &��!���� ���������� �� 6� � )**0,� B).+1#� 0*20

0 �"A":�� ��� ���4��� �� ����:�?�� $� ��?� ���4� :� �� '� � & ����2��� ����� � ���� �� ����� � )**7,� -+.)1#� +72/

7 ��:�4�� � �� �������� �� ��� �������!!�� ���� ����������� ��� >�2 ��:� ��� ��� ����� ���&�� � 9� ������ ?���� ��� �� �!"��4���� ����!;����� �&����� 4�;� ������';� "��C"�� �"�&�&"!������� �'� 4��?���� & ������� ����� �� ���������� ���� //B,� +#� 7//2-*<

- ������ ���� 3��� ($�� �"� 3�� ����� H�� =���� ��� ��� �!� ��!;4� 2&���� ��3� ���� 33�� �&���� !������� ��� ���� ��� ����� ���&�� ����� ���� & ������� ����� � ��:#� �� &�&"!�����2������ ����2���� �!��"�;� ��� ������������� ���� )***,� -*#� 72-

B �?�A�?��A� ��� ����9� � �� "�������� �'� ���� ��� ����� ���&2�� � ����� �� &�����!�� �!�� ��� & ������� ����� � 5� � ������� //B,<0.)1#� <+2<

< ������� ����������> �� !�;���� ��9� 4� �������M������� ��� �!$��� &�!;4� &���� �6��� � ��� ����� ���&�� � ��3� �&���� ��4��� ?���� �� &�������!� ���� ����� & ���&�������� ��� & ������� ����� ������� ������� � 5� ���7���� ���� )***,� /#� 0+/20)

/ �� ��2�� �� ��� ��� � 3�� ��"��!� � ��� >� ����� ��� = �!��� ��� ���!� .��31����� ���� 33�� �&����� ��� ���� �"4��� ��� ����� �2��&�� � ����� � �� ���� ����������� ?���� & ������� ����� � ��� � ����23� 4��� &�&"!������ ���� �� ���� 8����� ///,� B#� +7B2-)

* $�;��� $���!� :��������������� ��� &� ��� " �;�3��� ��� �!�@�2��4��� =� ���&�� �� ���2)� &�!;4� &���4�� ���� ��:� �'� & ����������� � ��� 4��� ?���� ������� & ������� �;&� &!����� ������ ���� �)**0,� )7.01#� 00B27

>��� ���� ��� �� =��� ����!� �=� @���4���2=� ���&�� � .@=�1����� .��:2�� $�C2� ���� �&�21� &�!;4� &���4�� ��� ���!��;� ��2��9��"�!�� ' �4� �� ��� ������� &�&"!������ ������ ���� �� ���������� )**7,� -.)1#� 0B27)

) ����� �� >�� ����'� �� ���� � ���� ������� = �� ���� �� ���?���:�� ��� ��� �!� @���4��� =� ���&�� � ����� &�!;4� &���4�� ���& ������� ����� � ��:� �� ������ )**0,� 7/.01#� 0*/2<

+ �� ��2�� �����>� ����������"��!� � ���>���"4����= �!������ ���!� @���4��� =� ���&�� � &�!;4� &���4�� ��� 4� :� �� ��� & ����������� ����� 8����� ///,� *7#� )<2B

0 ������ ��� ��!;�� &�"� ��� ���������� ��� @���4��� =� ���&�� � ����&�!;4� &���4�� ���� ��:� �'� & ������� ����� #� �� 4���2���!;���������� ������� � 5� ���7���� ���� )**+,� ).)1#� +/720*)��

7 ����:�� �� ������ ;�� �������� �"���&����!��;�� �X��C��� ��-*����� & ������� ����� � ��:2� ��� ��� �� ��� �����������T� �� 6� � )**-,B-.)1#� 0+72-

- ���4�� !���� ���� = �9� � �=�� ���'�!�� ��� $��� !������ ���� !�2������� �'� ��3� � ��"�!������� �&����� ��� ���� ��� ����� ���&�� �2�� 4���!� ��4���� �''���� � �������9������ '"������� ��� ��������� ���� //0,� )#� +<2-

B ����A��� 3��� ����� ��� ��#� � ������� ����� � ���� ���� ��� ���� ���&�� � �� ��� � ������� ���� //0,� <-#� <B)2+

< � 9�������� �����("� ������������ ���!!�"&� ��� ��� �!� ����2������� �'� &-*24�������� ������9������ ?���� ��� ������� ��� �2

���� ���&�� � &�!;�!"��4���� !������ ���� � � 8����� )***,� /#)-B2B0

/ ��!���� ���� ������ ��� ��� ����� ���&�� � ��3� �&����� ���& ������� ����� � ��� �� ������� � )**),� 77#� <<+2/*

)* (�����������(���� ����������������� �������� �� ����3� �2&���� !������ ��� ���� ��� ����� ���&�� � ����� ��� ��������� ��� &�2������� ?���� ����&������ �A���&� 4��� 6� �$� ///,� 70#*B<2<

) 8��A4���� �� > "��� �� �� �4���� >�� 3 �4�!!� ��� �"�:� � ��� ���!� $��� ��3� �&���� &�!;4� &���4� ��� ���� ��� ����� ���&�� ����� �''����� ����� ������;� ���� ����� 4�����!��4� ��� ���!��;� 4�2!���� ��� ��� ���� � 92�#:� )**,� 77#� -0/27B

)) ��?�;�� ��� ���!���� ��� ��� ����� ���&�� � &�!;4� &���4�.��3� �&���� !������1� ��� ��� ��������� �!�&������ �� �"���4�� �������� ������������ ����� //<,� +#� /27

)+ 3��9���"���� ��� ���4&'� � ��� ����� ��� � ����9��� ��� 3���� ������ �!� ��3� �&���� ?������ ���� ��� ����� ���&�� � ����� ���� ����2������ �'� �" �� ;� '� � ������� & �������� �;&� &!����� ��� G�� &�;2�������� �� ������ ///,� +/#� +*20

)0 3��9���"���� ��� �!��A� ���� ���4&'� � ��� ����� ��� � ����9��� ����� �!� $��� ��3� �&���� ?������ ���� ��� ����� ���&�� � ����� ���������� & �������� �;&� &!����� 6� �$� ///,� 7+#� )27

)7 ���"4� �� ��� $� ��� ��� D:�� ��� ����?�� $�� D�" �� ��� ��� �!� ��2� ����� ���&�� � ��3� �&���� !������ &�!;4� &���4� ��� ������& �������� �;&� &!����� .>��1#� �� �!������ ?���� �����4�� � �?���� ������ //0,� 0#� )7+27B

)- ����������� ���4�;�$��� ����!� ���������� ��� ����!�= �3������&�!;4� &���4�� ��� ���� ��� ����� ���&�� � ���� �;&�� ��� 7�2 ��"���2��� ������ ��� & ������� ��!� ��4���� �� 6� � )**,� --#� 7-*20

)B >�"��4�� �$�� >"���4�:� �� ��� 9��� ��"?�!������ ���� =�� ";2��� � ��@� ���:����� ��� �!� ��!;4� &���4�� ��� ���� 9���4���=� �2��&�� � ����� ���� ���� ��� ����� ���&�� � ����� ���� ���� ��:� �'������� & �������� �;&� &!����� ���� 6� � )***,� +B#� )+02<

)< ���� ����D��>� ��� �!�� ���� �"�������4� � ������ ���� ���� $��2�����"� ���� ��� �!� ��� ����� ���&�� � ����� &�!;4� &���4�� ������ ������ ��:� �'� " �!����� 4���" ��� �'� ������� & �������� �;&� 2&!����� ��� �� ������� � )**0,� 7/.+1#� )-/2B-

)/ H"������ 9��������("� ����������������A��3�������!��"���&2����!��;� ��� & ������� ����� #� ���� ������� ����?��� �����;&��� ��� ������ ����� ���&�� � ���� & ������2�&���'��� �������� !���� ���������� )***,� -*#� <+/20

+* 3������ ���� ��4� =�� ������ ��� �� �� ��� ��!� � ��� �����!� ��''�2 ������ ��� ��� ����� ���&�� � & ������ �6& ������� ��� 4��� ?����!�����!!;� !���!�A��� & ������� ����� � ��6� � )**+,� B*,� //*2+

+ ("����>�� �M� >��@����!�:��� ����3���� ��=��4������ ��� ��� �� ��3� �&���� !������ ��� ���� ��� ����� ���&�� � ����� ��� ����������?���� 4� �� �� ����9�� '� 4�� �'� � ����� ����� �5������ ������� ���!����� )***,� 7/#� 7+2-

+) @��9�������� ��� ��!A!��"� � ���� >�� 4��� =��� �� ��:!���� �$���''4��� ���� ��� �!� ������������ �4���� ��� � �������� ���� 2��6;!���� &�!;4� &���4�� ��� ����� ���&�� � ����� .��31� �&���!������ ���� & ������� ����� � ��:� �� 6� � )**0,� B.)1#� -7)27

++ >�!��� ��� 3 ���4� �$�� $ �;� � =��� �������� >��� ��!!��:� >��� ���!� ��� ����� ���&�� � !������ &�!;4� &���4� ����������� ?���& ������� ����� � ��:� ��� ���&����� 4��� �� 6� � )**),� -<.71#))072<

+0 8���� H(�� ����!� = �� ��9���� � �� ��!�4��� =� � �!&���� )72���;� �6;9���4��� =+� ��������� & ������� ����� � ��!!� � �?��� �;��� ����2��&������� ���� ��� ����2����&������� 4�������4���� ���� �$� )***,� 0#� )70<27-

+7 � ����=��� � ��:�� ��� ������=�3������� 9� �������� ��� ���� 9���24��� =� ���&�� �� ��� ����� ���&�� � ���� ��A;4��� ����� ��"!������ ����� 4�����!��4� �� 6� � )**0,� B.)� �"&&!1#� 072/

+- 3�" � ��� ��� ������ � ��� �������� � 3�� �����A!� 3�� � �� �� �� ��� �!� @���4��� =� ���&�� � ����� &�!;4� &���4� ���� & ����������� � ��:� �� ������ )**)#� 7.1#� +*20

�1���0�� 7+� �%� ����!�������� ��� "������� �������� �������������� ���#� �����$��� ������ ����������� ������� ������� ��� ���� ���4�

+B ������$��3���?��������"��� ����� ���� ��2�� �������"��!� ������ �!� @���4��� =� ���&�� � &�!;4� &���4�� ���� & ������� ����� ��:� ��� ��� �" �&���� &�&"!������ �� 6� � ///,� -.0�1#� 7-

� ����� ������� ���� �������� ��&����'

������� ������ � ���=�&� �4���� �'� �" �� ;���&���!� G��9� ���� ��� ��� �"��!��

>���45 ���� G��9� ������ �"�F��4�� ��� �"��!�)7� ��������� ;� +� �" ���!� @�!������� �"��!��� �"������� ���� '�6#� 7)� )))� )0+270)�24��!#� M��:S;������4

����(�� � � � ,� ��� ���� � ��� )++,-������� � � � .;� ��� � ���(��� ��� )++,-