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Instituto de Salud Pública de Chile

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Diagnóstico de laboratorio en Enfermedad Inflamatoria Intestinal

XIV Jornada de la Sociedad Médica de Laboratorio Clínico

22 de noviembre 2016

BQ. Carolina Valenzuela [email protected]

Jefe Sección InmunologíaLaboratorio Nacional y de Referencia InmunologíaSubdepto. Enfermedades No Transmisibles


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Enfermedad inflamatoria intestinal

• Es una alteración inflamatoria, recurrente y crónica del tracto digestivo

• Principales formas de EII son la CU y la EC

• La CU y EC varían en la zona que afectan, la extensión de la inflamación, la lesión tisular resultante y los síntomas asociados


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Inflamación superficial continua y se limita al colon (intestino grueso)

Inflamación transmural (todas las capas del tejido intestinal), irregular (entremezcla con áreas de tejido sano) y se puede presentar en cualquier parte del tracto digestivo (desde la boca hasta el ano)

CU EC


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CUEC

Diarrea


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EII: Colitis ulcerosa y Enfermedad de Crohn

• Alternan brotes con períodos de remisión, lo que implica una sintomatología intermitente a lo largo del tiempo. Retraso en el diagnóstico

• Son de limitada eficacia terapéutica (control de la inflamación y efectos de brotes)

• Deterioro en la calidad de vida del paciente

• Asociada a un aumento de riesgo a cáncer colorrectal


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Patogénesis EII : multifactorial

Susceptibilidad genética del huésped

Factoresambientales

Alteración de la regulación del SI

Disfunción de la barreraintestinal

EII


Bacterias penetran la barrera epitelial

Montaje de respuesta inflamatoria con un deterioro en la limpieza (“clearence”)

Quiebre de la homeostasis


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Susceptibilidad genética del huésped

- Genes asociados a EII, comunes e

individuales a CU y EC.

- Están asociados a la homeostasis

intestinal:

-función de barrera intestinal

-restitución epitelial

-defensa microbiana

-regulación de la inmunidad innata

-generación de ROS

-autofagia

-regulación de la inmunidad adaptativa

-vías metabólicas

- En general el riesgo de las variantes para

desarrollar EII es pequeño

- EII podría ocurrir cuando múltiples variantes

genéticas estén presentes

- EII podría ocurrir cuando se presenten

factores ambientales en individuos

genéticamente susceptibles


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factores ambientales

- Flora comensal (bacterias, virus, hongos)

- Patógenos

- Antibióticos

- Dieta

- Tabaco


alteración de la regulación de la RI


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• Diagnóstico diferencial con otras patologías:infecciones bacterianas, virales, parásitos,e.celíaca, s.intestino irritable, etc

• Evaluar condición del paciente: estadonutricional, anemia, alteraciones de laabsorción, etc

Laboratorio en EII


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Laboratorio en EII

• Orientación diagnóstica hacia CU ó EC:anticuerpos que presentan solapamiento; noson lo suficientemente sensibles y específicosen una u otra condición

• Evaluar proceso inflamatorio

• Evaluar respuesta al tratamiento

ANCA en suero

ASCA en suero

PCR

CALPROTECTINA fecal

LACTOFERRINA fecal


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Anticuerpos dirigidos contra antígenos localizados en el citoplasma de los neutrófilos y monocitos

Anticuerpos anticitoplasma de neutrófilosANCA clase IgG

Granulos específicos:

-Lisozima

-Lactoferrina

Granulos azurofilos:

-Mieloperoxidasa (MPO)

-Proteinasa 3 (PR-3)

-Proteina bactericida incrementadora

de la permeabilidad (BPI)

-Elastasa

-Catepsina G

Citoplasma:

-Calprotectina


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• Vasculitis de vasos pequeños (VAA)

• Enfermedades Inflamatorias Intestinales (Colitis ulcerosa y Enf. de Crohn)

• Hepatitis autoinmune

• Conectivopatías

ANCA clase IgG

relación con patologías


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ANCA clase IgG

relación con patologías


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C.Ulcerosa: 40 - 80%

E.Crohn : 5 - 42%

Anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos ANCA clase IgG

Métodos: IFI en neutrófilos humanos (etanol-formalina)ELISA placa recubierta con proteínas específicas de neutrófilos


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c-ANCA

Resultan del artefacto de la fijación con etanol:

El patron p-anca ocurre solo cuando los neutrofilos sonfijados en etanol, el cual permeabiliza la membrana delos granulos citoplasmáticos y permite que lamieloperoxidasa (ag. principal del p-anca; altamentecatiónica) se una a la membrana nuclear la cual tienecarga negativa por el DNA.

p-ANCA

Reumatol Clin. 2010;6(3):173–177

ANCA clase IgGIFI : placa neutrófilos fijados en etanol


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• Cuando los neutrófilos son fijados en formalina, el patrón p-anca se observa como c-anca, ya que éste reduce la atracción de la mieloperoxidasa hacia el DNA, con lo que permanece en el citoplasma.

Reumatol Clin. 2010;6(3):173–177

ANCA clase IgGIFI : confirmación de p-ANCA en placa formalina


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Formato “panel ANCA” (detección de IgG anti-…)

1. PROTEINASA 3

2. LACTOFERRINA

3. MIELOPEROXIDASA

4. ELASTASA

5. CATEPSINA G

6. BPI (Proteina bactericida incrementadora de la permeabilidad)

ELISAespecificidades ANCA clase IgG


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• A fines de los años 80 se describe el hallazgo de anticuerpos contra S.cerevisiae en el suero de pacientes con EC

• El método ELISA, considera Acs. dirigidos contra el manano (tipo de carbohidrato derivado de la pared celular)

• Aproximadamente 2/3 de los pacientes EC con ASCA IgG+, también lo son para ASCA IgA

• Sólo hasta un 19% de los pacientes EC son ASCA IgA+

Anticuerpos anti Saccharomyces cerevisiae

ASCA clase IgG-IgA


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Anticuerpos anti Saccharomyces cerevisiae

ASCA clase IgG-IgA

E.Crohn : 29 - 80%

C.Ulcerosa: 0 – 29%

Método : ELISA placa recubierta con mananos de S.cerevisiae


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• Proteína ubicada en el citoplasma principalmente en neutrófilos, con propiedades antimicrobianas, estable, resistente a la proteólisis bacteriana

• De secreción extracelular en células estimuladas ó liberada cuando hay daño o muerte celular inflamación en el intestino

• Se detecta en heces

• El nivel de cuantificación se correlaciona directamente con la intensidad de la reacción inflamatoria

Calprotectina fecal


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• Almacenamiento muestra

• Mantener la muestra recolectada no más de 5 días a 2-8 ° CAlternativamente, almacenar a -20 °C

• Extracción muestra (sistema estandarizado)

• Obtención sobrenadante

• Ensayar calprotectina inmediatamente

• Almacenar a 2-8 ° C hasta 5 días ó a -20 ° C hasta 4 meses.

Calprotectina fecal


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• Detección por método ELISA.

• Es inespecífica. Puede estar aumentada en muchassituaciones: EII, gastroenteritis infecciosa, enterocolitisnecrosante, carcinoma colo-rectal.

• En desordenes funcionales como SII donde no hay daño enmucosa, pero sí presenta diarrea y dolor abdominal, su niveles normal

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• En pacientes diagnosticados EII, es útil para evaluar la respuesta al tratamiento

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GRACIAS !

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