diagnóstico de diarreas en corderos lactantes · diarreico del cordero aparece en las tres...

diagnósticode diarreas en corderos lactantes

La diarrea es un síndrome que puede ir acompañado de deshidratación, fiebre, abatimiento y anorexia. El síndrome diarreico del cordero aparece en las tres primeras semanas de vida, siendo una de las principales patologías presentes en las granjas.

Se trata de un proceso multifactorial que no sólo depende de los agentes infecciosos, sino también de otros factores predisponentes (factores dependientes del animal, factores ambientales y agentes etiológicos).

Condiciones desfavorables hacen que el microbioma digestivo normal del animal se desequilibre, proliferen poblaciones bacterianas, favorezcan la aparición de agentes infecciosos y se desencadene la enfermedad.

Es fundamental conocer cada uno de los factores predisponentes para poder implantar las mejores medidas de prevención.

cuadro etiológico

Nombre Agente infeccioso Afecta a Síntomas

Colibacilosis endotóxica

Cepas de Escherichia coli que liberan endotoxinas

Recién nacidos y hasta las 24-48h Boca mojada (salivación)

Colibacilosis enteropatógena

Cepas de Escherichia coli enteropatógenas (gen eae) Primera semana de vida Diarrea amarilla

Colibacilosis por cepas F17

Cepas de Escherichia coli portadoras de la fimbria F17 Lactantes Diarrea

Colibacilosis septicémica

Cepas de Escherichia coli enteroinvasivas 2-6 semanas de vida

Muertes repentinas, sintomatología nerviosa, articular y cerebral

Enterotoxemia hemorrágica Clostridium perfringens A y C 12-72h de vida Diarrea sanguinolenta

Diarrea hemorrágica

Disentería Clostridium perfringens B Segunda semana de vida Diarrea blanca

bacterias

Diarrea vírica Rotavirus/Coronavirus Primera semana Alta morbilidad y baja mortalidad

virus

Cryptosporidiosis Cryptosporidium parvum Inmunosuprimidos o jóvenes estresados Diarrea verde

parásitos

toma de muestras

Las mejores muestras son los paquetes intestinales completos correctamente anudados para evitar que se derrame el contenido. Si se dispone de este tipo de muestra se puede elegir aquellas zonas que presentan lesiones e incluso utilizar diferentes tramos en función del agente que se esté buscando. Además, la muestra de intestino permite realizar el estudio histopatológico que establece el grado de implicación en el proceso de cada uno de los agentes detectados. No se recomienda enviar el animal entero.

Los hisopos rectales con medio de transporte y las heces tomadas directamente del recto son también válidos.

Para asegurar la calidad de los resultados obtenidos es importante hacer una buena selección de los animales que se van a muestrear siendo necesario tomar muestras de aquellos con clínica característica, no tratados (ya que esto podría influir en el aislamiento microbiológico) y que hayan sido sacrificados o muertos recientemente.

Se recomienda muestrear varios animales para obtener un resultado representativo del proceso del grupo.

Por último, la muestras deben llegar refrigeradas y lo antes posible al laboratorio (máximo 24 horas).

técnicas de diagnóstico

cultivo microbiológico

permite la obtención de la cepa para realizar estudios de sensibilidad antibiótica, tipado, autovacunas, etc.

concentración mínima inhibitoria (CMI)

muestra la concentración más pequeña de antibiótico que impide la multiplicación de la bacteria. Nos permite conocer cuál es el antibiótico más efectivo en la dosis adecuada, evitando subdosificar o sobredosificar

antibiograma

realizado mediante la técnica de Kirby Bauer (antibiograma en disco) dónde se indica si una bacteria es sensible, resistente o tiene sensibilidad intermedia frente a un antibiótico

real time PCR

permite confirmar la presencia de virus y bacterias implicadas

histopatología

de gran interés para valorar la importancia de cada uno de los agentes implicados en procesos digestivos

tipado de cepas

se puede realizar el tipado por qPCR tanto de las cepas aisladas como directamente de la muestra obtenida de digestivo. El tipado es de gran interés a la hora de realizar estudios epidemiológicos en la explotación, elección de vacunas o diseños de autovacunas

oferta de diagnóstico

casos clínicos

panel digestivo corderos/cabritos


toxinotipado de Clostridium perfringens

qPCR: Clostridium perfringens toxinas Alpha, Beta, Epsilon, Iota, Enterotoxina, Beta-2

qPCR: Rotavirus tipo A, Cryptosporidium parvum, Eimeria sp., Clostridium perfringens, Escherichia coli, Escherichia coli gen eae, Escherichia coli virulence factor F17

antibiograma de bacterias de interés

caso 2: animales de 2-5 días de vida con diarreas por Escherichia coli enteropatógenas

caso 1: diarreas en corderos lactantes de 48-72 horas por Clostridium perfringens tipo A

caso 3: animales lactantes con diarreas por Cryptosporidum parvum

caso 4: diarreas en animales de 24-48 horas por un proceso de etiología múltiple

datos del caso

muestras recibidas

observaciones macroscópicas

Diarreas y bajas en primeros días de lactación

varias muestras de digestivos de corderos lactantes de 48-72h

Caso 1.1

Digestivo1: ligeramente congestivo.

Digestivo 2 y 3: se observa una intensa congestión en intestino delgado con contenido de coloración rojiza-negruzca

Caso 1.2

Digestivo1, 3 y 4: presentan una intensa congestión en intestino delgado con contenido de color rosáceo

Digestivo 2: moderado estado de autolisis que no permite diferenciar posibles lesiones

diarreas por C. perfringens tipo A positivo a toxina Beta-2caso1

diagnóstico solicitado: panel digestivo corderos/cabritos


comparación fenotópica de cepas de E. coli

crotal crotalidentificación identificación

Caso 1.1

ID1

ID2

ID3

Caso 1.2

ID1

ID2

ID3

ID4

Escherichia coli***Clostridium perfringens***


Escherichia coli**Clostridium perfringens***





La comparativa de cepas de los casos muestra una gran variabilidad de cepas:

Cepa 2: formada por los tres aislamientos del digestivo 4


Cepa 4: formada por los dos aislamientos del digestivo 1.


No se encuentra coincidencias entre las cepas de los Casos 1.1 y 1.2

real time PCR

determinaciones

Rotavirus tipo A

Cryptosporidium parvum

Clostridium perfringens

E. coli gen eae

E. coli F17

E. coli

muestras

1.1 ID 1-3

Neg.

Neg.

Positivo (23,79)

Positivo (36,16)

Positivo (28,95)

Positivo (21,88)

1.2 ID 1-4

Neg.

Neg.

Positivo (24,19)

Neg.

Positivo (28,23)

Positivo (22,38)

toxinotipo de Clostridium perfringens

toxina Alpha

toxina Beta

toxina Epsilon

toxina Iota

Enterotoxina

toxina Beta-2

Positivo (23,79)

Neg.

Neg.

Neg.

Neg.

Neg.

Positivo (24,19)

Neg.

Neg.

Neg.

Neg.

Positivo (24,93)

determinaciones

1.1 ID 1-3 1.2 ID 1-4

muestras

comentario del caso

Los resultados globales del diagnóstico laboratorial

apuntan que Clostridium perfringens tipo A positivo

a toxina Beta-2 es el principal agente implicado en

el proceso diarréico con la posible participación

de Escherichia coli positivo a F17.

histopatologíadiagnóstico emitido por Micros Veterinaria

Caso 1.1:En ambos animales se observa congestión intestinal, tanto de mucosa como de los vasos de la serosa y proliferación de bacilos Gram positivos de tamaño intermedio tanto el contenido como en áreas de la lámina propia en las que se ha desprendido el epitelio. Las lesiones no son muy graves pero indica un proceso digestivo muy posiblemente de origen bacteriano por Clostridium sp. con posible implicación de E. coli.

Caso 1.2:La intensa congestión, el aumento de número de células inflamatorias y la presencia de bacterias Gram positivas adheridas a las vellosidades son significativas de un cuadro de diarreas de origen bacteriano por Clostridium sp.

caso2cultivo microbiológico

crotal

His 1

His 2

His 3

His 4

His 5

identificación

Escherichia coli***

Escherichia coli***

Escherichia coli***

Escherichia coli***

Escherichia coli***

diarreas por Escherichia coli


datos del caso

muestras recibidas

Diarreas en la primera semana de vida. Aplicaban autovacuna de E. coli con buenos resultados pero ha habido un aumento de diarreas en la última paridera.

hisopos rectales de cinco animales de 2-5 días de vida con diarreas

antibiograma: Bacteria y crotal: Escherichia coli aislado en His 4

Antibiótico Resultado Diámetro (mm) Referencia (mm)

D-Amoxicilina Intermedia 17,7 14 21

D-Ampilicina Intermedia 13,6 13 17

D-Cloxacilina Resistente 0 10 13

D-Penicilina Resistente 0 29 29

D-Bacitracina Resistente 0 8 13

D- Trimetoprim/sulfametoxazol Sensible 29,5 10 16

D-Tetraciclina Sensible 22,5 11 15

C-Apramicina Resistente 15,8 19 23

C-Gentamicina Sensible 17,9 12 16

C-Neomicina Intermedia 13,8 12 17

C-Espectinomicina Sensible 21 10 14

C-Estreptomicina Resistente 0 11 15

C-Amoxicilina + ácido clavulánico Sensible 18,6 13 18

C-Florfenicol Sensible 23,7 14 19

C-Tianfenicol Intermedia 13,4 12 18

C-Cefalotina Intermedia 14,1 14 18

C-Clindamicina Resistente 0 14 21

C-Eritromicina Resistente 8,3 13 23

C-Gamitromicina Sensible 15,1 11 15

C-Tilmicosina Resistente 0 10 14

C-Tilosina Resistente 0 22 26

B-Ceftiofur Sensible 24,1 17 21

B-Colistina-sulfato Sensible 14,3 8 11

B-Enrofloxacina Sensible 31,6 16 21

B-Marbofloxacina Sensible 35 14 20

real time PCR

determinaciones

Rotavirus tipo A



E. coli gen eae

E. coli F17

E. coli GAD

muestras

His 1-5

Neg.

Neg.

Positivo (26,68)

Positivo (21,8)

Positivo (19,98)

Positivo (18,3)


Se ha comparado los aislamientos de E. coli obtenidos en este caso con las cepas aisladas en casos previos de la misma explotación. En el caso actual se han encontrado varias cepas que ya habían sido aisladas previamente en casos anteriores: Cepa 1 y Cepa 15.

Las Cepas 4 y 12, no habían sido encontradas previamente en analíticas anteriores.

Cepa 4

Cepa 12

E. coli F17 (16,2)

E. coli gen eae (23,4)

E. coli F17 (17,21)

E. coli gen eae (22,01)

muestras resultado

factores de virulencia de Escherichia coli sobre cepas

comentario del caso

En el caso actual se confirma la presencia de cepas de Escherichia coli patógenas (positivas a gen

eae y F17) como posible causa de las diarreas. Se han encontrado cepas nuevas a las detectadas

previamente en la explotación, lo que puede justificar que haya disminuido la eficacia de la

autovacuna diseñada con las muestras de los primeros casos.

Se incorporaron las nuevas cepas a la autovacuna y se revisaron las medidas de higiene y

bioseguridad.

Puesto que aparecían cepas de E. coli nuevas se procedió a evaluar si se trataban de cepas patógenas.

diarreas por Cryptosporidium parvumcaso3

datos del caso

muestras recibidas

Diarreas verdosas en corderos lactantes

muestras de digestivo de un animal lactante de menos de 15 días



crotal identificación

ID

IG

Escherichia coli***

Escherichia coli***

histopatología

diagnóstico emitido por Micros Veterinaria

Intestino delgadoNo se observan lesiones macroscópicas. Histológicamente se observa un cierto acortamiento y ensanchamiento de las vellosidades, con infiltrado de linfocitos y macrófagos, y una intensa proliferación de criptosporidios que ocupan amplias áreas de la superficie epitelial provocando en algunos casos la alteración en la morfología del epitelio (pérdida de microvellosidades y superficie irregular de las células)

ColonNo se observan alteraciones macroscópicas. A nivel histológico se observa una proliferación de criptosporidios, menos acusada que en el intestino delgado. No se aprecian alteraciones en la mucosa ni proliferación bacteriana.

real time PCR

determinaciones

Rotavirus tipo A



E. coli gen eae

E. coli F17

E. coli GAD

muestras

Dig

Neg.

Positivo (29,32)

Neg.

Positivo (32,31)

Positivo (31,30)

Positivo (23,99)

comentario del caso

Los únicos patógenos detectados han sido E. coli y Cryptosporidium parvum. No se han detectado

agentes víricos y tampoco se observa implicación de clostridios.

Las lesiones histopatológicas observadas se asocian con Cryptosporidium spp., no se observan lesiones

que indiquen la implicación de E. coli.

muestras recibidas

datos del caso

observaciones macroscópicas

cinco paquetes digestivos, cuatro de animales de 24-48 horas de vida y uno de 10 días de vida

Heces líquidas-pastosas amarillo-anaranjadas. En 48 horas los animales presentan un cuadro de diarrea y deshidratación muy marcada, así como depresión manifiesta. En algunos casos boca mojada.

Los animales que sobreviven recaen a los 10 días de edad con una diarrea muy marcada con deshidratación e incluso con síntomas de depresión.

La explotación tiene un historial de varios años con diarreas neonatales, el proceso se controlaba con sueroterapia y antibióticos. Este año la incidencia y la mortalidad han aumentado.

Los digestivos recibidos presentan ligera autolisis. Se observa una fuerte congestión con contenido amarillo-rosáceo.

diarreas por un proceso de etiología múltiplecaso4



crotal

Dig 1

Dig 2

Dig 3

Dig 4

Dig 5

identificación

Escherichia coli***

Escherichia coli***

Escherichia coli***

Escherichia coli***

Escherichia coli***


La comparativa de aislamientos de E. coli muestra la presencia de tres cepas distintas:

Cepa 1: presente en digestivo 2.

Cepa 3: cepa mayoritaria, formada por 9 aislamientos y presente en 4 de las 5 muestras estudiadas.

Cepa 4: presente en el digestivo 5.

real time PCR

determinaciones

Rotavirus tipo A



E. coli gen eae

E. coli F17

E. coli GAD

muestras

Dig 1-5

Neg.

Positivo (23,03)

Positivo (23,51)

Neg.

Positivo (21,27)

Positivo (20,87)

Como la muestra fue positiva a Escherichia coli y Clostridium perfringens se decidió identificar los factores de virulencia y hacer el toxinotipado

factores de virulencia de Escherichia coli sobre cepas

F17

E. coli gen eae

Positivo (18,52)

Neg.

Positivo (19,22)

Neg.

determinaciones

Cepa 1 Cepa 3

muestras

toxinotipo de Clostridium perfringens

toxina Alpha

toxina Beta

toxina Epsilon

toxina Iota

Enterotoxina

toxina Beta-2

Positivo (23,51)

Neg.

Positivo (24,2)

Neg.

Positivo (22,8)

Positivo (24,27)

determinaciones

Dig 1-5

muestras

comentario del caso

En este caso se detectaron diferentes agentes:

Escherichia coli:Se ha aislado una cepa mayoritaria portadora de la fimbria F17 presente en 4 de las 5 muestras estudiadas. Se han detectado así mismo otras dos cepas de E. coli minoritarias.

Clostridium perfringens:Se ha detectado de C. perfringens tipo D mediante qPCR en concentración media-alta. El toxinotipo D se caracteriza por producir toxina alfa y toxina epsilon, esta cepa es además positiva a toxina beta 2 y enterotoxina, adquiriendo patogenicidad.

Cryptosporidium parvum:Se ha detectado en concentración media cuyas manifestaciones clínicas suelen aparecer en torno a los 5-7 días de vida.

Todo ello apunta a un proceso de etiología múltiple. En estos casos se recomendó realizar el estudio histopatológico de las lesiones para valorar la implicación de cada agente en el proceso. También es necesario valorar otros factores no infecciosos que puedan predisponer al proceso (manejo de corderos, instalaciones…).

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diagnóstico de diarreas en corderos lactantes · diarreico del cordero aparece en las tres...

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